ANEXO 4

PROYECTO AQUAtox©

JUVENTUD, CIENCIA, AMBIENTE Y SALUD

Herramientas relacionadas con el Componente Científico

ANEXO 4

PROYECTO AQUAtox©

JUVENTUD, CIENCIA, AMBIENTE Y SALUD

Herramientas relacionadas con el Componente Científico

4.1 Batería de pruebas En la dirección electrónica http://www.bvsde.paho.org/aquatox/, en el ícono: Libro de actividades se muestra dos cuadernos de actividades, uno para profesores y otro para los niños y jóvenes. Estos cuadernos contienen en forma detallada la información pedagógica y científica necesaria, para llevar a cabo cada uno de las pruebas de laboratorio que se propone en el Proyecto AQUAtox©. También cubre otros tópicos, incluyendo el agua y tu salud, el proceso científico, cómo recolectar las muestras y cómo utilizar Internet para reportar los resultados experimentales. Si se requiere mayor información científica acerca de las pruebas ver el libro “Ensayos toxicológicos y métodos de evaluación de calidad de agua. Estandardización, intercalibración, resultados y aplicaciones”. IDRC (Canadá) – IMTA (México). pp. 187. Castillo G. 2004. A continuación se presenta un resumen de cada uno de los ensayos que conforman la batería de pruebas propuestas en el proyecto AQUAtox© : A. Crecimiento de la raíz de bulbos de cebolla Este ensayo se realiza con bulbos de cebolla común, Allium cepa. Se prepara una serie de seis tubos de ensayo que contienen la muestra a ser evaluada. Asimismo se prepara otra serie con agua pura de botella (agua envasada o embotellada), esta serie es el control o blanco de la prueba y, una tercera serie con agua embotellada con cloruro de sodio, este es el control positivo. En cada uno de los tubos se coloca un bulbo de cebolla. Los bulbos se retiran de la boca de los tubos de ensayo después de 72 horas, y se mide la longitud de sus raíces con una regla. La longitud promedio de las raíces de la muestra problema se compara a la de la muestra de control. Un cambio en el crecimiento normal de las raíces se usa como índice de toxicidad. B. Germinación de semillas de lechuga Este ensayo se realiza con semillas de lechuga, Lactuca sativa L. Se preparan cuatro placas Petri, los fondos de las placas Petri se cubren con papel absorbente (tales como toallas de papel, filtros de papel, etc.), y se humedecen con agua de la muestra que se desea evaluar. En una placa se coloca agua pura de botella (agua envasada o embotellada), esta es la placa control o blanco de la prueba, en otra placa se coloca agua embotellada con cloruro de sodio, este es el control positivo y, en las dos placas restantes se coloca en cada un de ellas una muestra de agua. En cada recipiente se depositan 20 semillas de lechuga. Las semillas germinarán luego de 48 a 72 horas. Se abren los recipientes y se mide la raíz que ha crecido de cada semilla, utilizando una regla métrica. Se calcula la longitud promedio de las raíces y se compara con la longitud promedio del control. Un cambio en el crecimiento normal de las raíces se utiliza como índice de toxicidad. Este ensayo es similar al de los bulbos de cebolla, pero los dos ensayos darán resultados diferentes para varios compuestos tóxicos.

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C. Efecto tóxico en las hidras de agua dulce Este bioensayo utiliza, como índice de la contaminación del agua, la reacción de la hidra de agua dulce (Hydra sp) a los compuestos tóxicos. Los cultivos de hidras son fáciles de mantener. Las hidras se colocan en grupos de tres, dentro de pequeños recipientes de plástico (placas con pozos, ver en la Guía de la Web de AQUAtox© las características de las placas) donde se ha colocado la muestra de agua , la muestra se siembra en tres pozos. Como control o blanco se prepara una serie (tres pozos) con agua pura de botella (agua envasada) y otra serie (tres pozos) con agua embotellada con cloruro de sodio este es el control positivo. Se observan los cambios morfológicos que experimentan cada día , durante cuatro días, las hidras toman formas altamente específicas, en respuesta a la presencia de substancias tóxicas, proporcionando un índice de toxicidad fácil de evaluar, la información completa acerca de estos cambios se presenta en el cuaderno de actividades que figura en la página Web antes mencionada.

Los tres bioensayos de toxicidad antes mencionados se complementan con el la prueba de sulfuro de hidrógeno (H2S), para evaluar la contaminación microbiológica:

D. Prueba de sulfuro de hidrógeno (H2S).

La contaminación microbiológica se evalúa mediante la prueba del sulfuro de hidrógeno, que identifica a las bacterias de origen intestinal que se encuentran normalmente presentes en el tracto digestivo de los animales y de los seres humanos. Para poder verificar la presencia de estas bacterias indicadoras, la muestra de agua se pone en contacto con una tira de papel absorbente impregnada con una sustancia nutritiva y con un indicador que ante la presencia del sulfuro de hidrógeno se vuelve de color negro. Este ensayo se realiza en un tubo de ensayo de vidrio esterilizado.

La muestra de agua (10 ml) se introduce en el tubo preparado con la tira de papel antes mencionada, y luego se incuba por hasta tres días en un incubador casero a 27 - 37°C, para permitir que las bacterias (de estar presentes) crezcan y tiñan el agua de un color negro. Asimismo, se prepara un tubo estéril con la tira de papel y se añade 10 ml de agua pura de botella (agua envasada o embotellada) este tubo es el control o blanco de la prueba.

4.2 Materiales e insumos A. Relación de materiales que componen el kit experimental Material de uso general: 1 probeta plástica de 100 ml. 1 rollo de cinta adhesiva. 1 regla. 1 tijera. 1 caja de cintas para medir pH.

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4 Cucharitas plásticas. 1 termómetro ambiental. 1 marcador de tinta indeleble. 1 incubadora casera de cartón. 1 rollo de papel de estaño. 3 envases plásticos multiuso. 1 Paquete de paños absorbentes. 1 pinza simple, punta roma Ensayo de H2S 6 tubos de vidrio con tapa rosca de 25x150 mm. Tiras de papel con medio de cultivo. 1 Gradilla plastificada. 1 escobilla para limpiar tubos. Bioensayo de semillas de lechuga Semillas de lechuga 4 placas Petri plásticas de 100x15 mm. 4 pipetas plásticas de 10 ml. de transferencia. 2 cajas de papel filtro # 2 . 1 caja de mondadientes. Bioensayo de las hidras 6 placas plásticas de 6 micropozos c/u. 1 bolsa de placas petri de 60x15mm. 8 pipetas plásticas Pasteur. 1 lupa. Bioensayo de bulbos de cebolla 1 vaso plástico de 500 ml. 3 cuchillos plásticos. 4 pipetas plásticas de 10 ml. 1 propipeta. 3 plantillas para medición de raíces. 24 tubos plásticos de ensayo. 2 gradillas plastificadas.

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B. Reactivos para la pruebas la del hidrógeno sulfurado y el bioensayo con hydra

a. Para la prueba del hidrogeno sulfurado

1. Citrato férrico amoniacal p.a. (Catálogo SIGMA F5879) 2. Fosfato dipotásico p.a. (K2HPO4). (Catálogo P3786). 3. Peptona o Triptona para microbiología. MERCK. 4. Dodecil sulfato de sodio (Catálogo SIGMA 4509). 5. Tiosulfato de sodio pentahidratado p.a. (Na2S2O3 ⋅ 5H2O). (Catálogo SIGMA 8503) . b. Para cultivo de Hydra 1. Cloruro de calcio dihidratado (Catálogo SIGMA C 3881). 2. N-tris (hydroximetil 1-2 aminoetanosulfonico, Buffer TES (Catálogo SIGMA 1375) 3. Cloruro de sódio (Catálogo SIGMA 7353). C. Material para el cultivo de Hydra

Material Observaciones

Hidras de agua dulce (*) Artemia salina (quistes) Para alimento de las hidras Medio de cultivo para hidras Ver fórmula en el libro de referencia

“Ensayos Toxicológicos y Métodos de Evaluación de calidad de aguas” que figura en la WEB del proyecto

Tazones circulares de vidrio de 20 cm (4) Tubería plástica Dos cedazos (tamices o coladores) Aro de soporte para el tamiz

Tamíz de 35 mallas Tamíz de 125 mallas

Tabletas de yodo (hidroperioduro de tetraglicina)

Tabletas de yodo (hidroperioduro de tetraglicina) o IODINE

Aireadores y difusores con motor

Sal (Cloruro de sodio)

Vaso de vidrio de 500 ml 2 unidades

Tela para cubrir el envase de cría Un cubículo con un fluorescente y un timer

Una balanza para pesar la sal

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Material Observaciones

Recipientes de plástico con tapa y caño de 10 litros

Para el medio de Hydra

Recipiente de plástico con tapa. De 5 litros.

Para el medio de Artemia

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