BIOENSAYO DE TOXICIDAD EN ARTEMIA SALINA

BIOENSAYO DE TOXICIDAD EN ARTEMIA SALINA Equipo 7Bazn S. Tania BereniceGonzlez A. Adriana Ortega G. Cynthia Torres C. Gerardo Antonio

INTRODUCCINLos estudios de toxicidad constituyen hoy da una parte muy importante dentro del desarrollo de un nuevo frmaco y se extienden prcticamente a lo largo de todo el mismo. El objetivo de los mismos es evaluar el riesgo o peligro potencial que un agente qumico o fsico puede ocasionar sobre la salud humana cuando es objeto de exposiciones agudas o crnicas".

Y no se limitan slo a los frmacos sino que la mayor parte de las sustancias qumicas industriales (pesticidas, agroqumicos, cosmticos, plsticos, etc.) son objeto de estudios de toxicidad iguales o ms complejos que los realizados con los nuevos frmacos.

El presente trabajo se llevo a cabo para determinar experimentalmente la dosis letal media en algunos microorganismos mediante un bioensayo de toxicidad.

Ecotoxicologa Ciencia que estudia los efectos de las sustanciastxicas sobre los organismoscombinando las tcnicas ecolgicas y tcnicas.

La toxicidad directa sobre los organismos Las alteraciones del medio ambiente en el cual viven los organismos

Qu es un bioensayo de toxicidad?Prueba para establecer la naturaleza y la magnitud del efecto que producir un agente dado cuando los organismos o sistemas biolgicos son expuestos a l.

Toxicidad aguda Toxicidad crnica

Para qu nos sirven ?Para evaluar los efectos nocivos que producen sobre los seres vivos diferentes tipos de agentes externos que estn presentes en el ambiente.

Si la contaminacin es capaz de producir un dao a los seres vivos que estn en contacto.Toxicidad aguda De 48 96 horas Mide los efectos de sustancias en la supervivencia de la especie.CE50Toxicidad crnica De acuerdo a la vida de la especie utilizada.Mide el desarrollo o crecimiento y el xito o falla de la reproduccin.

Artemia salina Crustceo perteneciente a la Subclase Branchiopoda.Orden Anostraca.Cuerpo delgado, alargado y est cubierto por un caparazn blando.CabezaTrax AbdomenSu longitud y aspectoTamao oscila entre 7 y 12 mm de longitud.distribucin amplia (excepto Antrtida)Capacidad de adaptacin y tolerancia a diversas situaciones.Aguas salinas amplio rango trmico

CARACTERSTICAS DE LOS ANIMALES PARA UTILIZARSE EN BIOENSAYOSDe amplia distribucin en el pas o de importancia comercial

Disponibilidad

Tamao suficientemente pequeo

De fcil cultivo

Susceptibilidad a exposiciones con sustancias xenobiticas.

ADAPTABILIDAD DE LOS ORGANISMOS COMO ESPECIES PARA BIOENSAYOS Organismos Adaptabilidad del organismoComnmente utilizadoCultivo de laboratorioRecoleccin de campoAlgasExcelenteMuy difcil de recolectar cultivo puroSiProtozoosExcelenteMuy difcil de recolectar cultivo puroMuy limitadoCoppodosMedianoAlta tasa de mortandad despus de la recoleccin de campoLimitado CamaronesBuenoBuenoSi AnlidosMedianoMedianoLimitado InsectosBajoMedianoSi MoluscosBuenoMedianoSi CrustceosBajoMediano PecesExcelenteAlta tasa de mortandad despus de la recoleccin de campoSiPROCEDIMIENTO

INCUBACION DE LOS HUEVECILLOS:

Armar el dispositivo de incubacin. Preparar 40 ml de agua de mar artificial, pesando 12.2 g de sal marina y disolver en 400 ml , adicionar una gota de anticloro y dejar reposar 1 min .Tomar 300 ml del agua de mar artificial y colocar en la pecera de incubacin. Colocar agua de la llave en la pecera mayor a una temp. aprox. de 26-28C .Conectar los dispositivos de luz y aireacin.Adicionar los huevecillos en la pecera de incubacin (aprox. 10 g de huevecillos) colocar en la zona obscura y dejar incubar durante 24 h. SOLUCIONESCLORURO DE MERCURIO (II) CH2Cl2

Puede afectar al pasar a travs de la piel causando quemaduras e inhalndolo causando irritacin en los pulmones provocando tos o falta de aire. Es un gas sumamente inflamable.NITRATO DE PLATA AgNO3

Provoca irritacin en la piel. Es venenoso, provocando quemaduras en la boca, salivacin, ennegrecimiento de la piel y membranas mucosas de la garganta y abdomen.

Es corrosivo y peligroso para el medio ambiente.DICROMATO DE POTASIO K2Cr2O7

Irrita la piel,ojos, membranas mucosas y tracto respiratorio. Provocando sensacin de quemadura, tos respiraciones cortas, dolor de cabeza, nuseas, vmito.

LDLo(oral en humanos): 26mg/KgLD50(oral en ratones): 190mg/Kg

TIOCIANATO DE POTASIO Nocivo por inhalacin, por ingestin y en contacto con la piel.

LD50(oral rata): 854 mg/KgLDLo(oral hombre): 80 mg/kg

SOLUCIONES NICOTINA C1OH14N2

Colicos abdominales, respiracin rpida, paro respiratorio, sensacin de ardor en la boca, inquietud, convulsiones, desmayo, etc.

ACETATO DE PLOMO Pb(C2H3O2)2. 3H2O

Inhalacin:Causa irritacin de pulmones, dolor abdominal. Ingestin:Provoca dolor y espasmos abdominales, nuseas, vomito, dolor de cabeza.Ojos:Irritacin local o abrasin.LD50: 4665 mg/Kg

ETANOL AL 42%Inhalacin: Los efectos no son serios siempre que se use de manera razonable. Una ihnalacin prolongada de concentraciones altas (mayores de 5000 ppm) produce irritacin de ojos y tracto respiratorio superior, nuseas, vomito, dolor de cabeza, adormecimiento y otros efectos narcticos.Piel: Puede afectar produciendo dermatitis (resequedad y agrietamiento)Ingestion: La ingestin constante de grandes cantidades de etanol provoca dao en el cerebro, hgado y riones que conducen a la muerte.LD50(oral ratas): 13 ml/kg

REALIZACIN DEL BIOENSAYO:

Se colocarn 10 organismos en cada uno de los tubos de ensaye.Se observar el movimiento de los organismos por un periodos de 120 min.Al trmino del periodo de observacin se contarn las artemias que sobrevivieron:Las artemias que presentan movimiento Vivas Las artemias que permanecen inmviles MuertasConcentracin de la sustancia o dosisNmero de individuos (n)Nmero de organismo muertos o afectados (r)Porcentaje de efecto (p)

Para el calculo de CL50, CE50 generalmente se usa el anlisis Probit, se deben de tener:Anlisis Probit

Para establecer una relacin lineal entre el estimulo y su efecto, es necesario transformar :Dosis a su logaritmoMortalidad a valores probit Ya que si graficamos los porcentajes de mortalidad contra logaritmo de la dosis, obtenemos una curva sigmoidea. En cambio cuando graficamos logaritmos dosis contra unidades probit, obtenemos una lnea recta.

Mtodo grficoRealizar la curva dosis-respuesta cuantal.Porcentaje de individuos que presentan la respuesta contra logaritmo de la dosis (concentracin del compuesto en este caso).

Clculo de DL 50 o DE 50 Realizar la grfica de Unidades Probit Vs Log dosis

Muestra Volumen de la disolucin de HgCl2 o Ag2SO4 (mL)Volumen del agua de mar artificial (mL)102.020.21.830.41.640.61.450.81.261.01.071.20.881.40.691.60.4101.80.2112.001. Las muestras se preparan de acuerdo con las siguiente tabla.Ejemplo Sustancia: Cloruro de mercurio (ll), Dicromato de potasio , etc.Dosis (mg)kg) Nmero de artemias utilizadas (n)Nmero de artemias que murieron (r)p=r/n%E =p*1000.0702610.16160.0948620.33330.1547630.5500.1764640.66660.1907650.83830.222661100ln Co %E-2.65716-2.35633-1.86650-1.73566-1.65783-1.505100Curva dosis-respuesta cuantal en artemias salinas con HgCl250%-1.8623

ln Co Unidad Probit-2.6574.01-2.3564.56-1.8665-1.7355.41-1.6575.95-1.5058.09Analisis Probit en artemias salinas con HgCl2 Ecuacin de la rectaY= mx + b Y= 2.66 x + 10.72

Donde :m es b es Es ladosis nica, de una sustancia que produce la muerte del 50% de la poblacin .Ecuacin de la rectaY= mx + b Y= 2.66 x + 10.72

Referencias. Daz M, Bustos M, Espinoza A. Pruebas de toxicidad acutica: fundamentos y mtodos. Bogot: Universidad Nacional de Colombia; 2004.Mendoza N. Farmacologa Mdica. Mxico: Editorial Medica Panamericana; 2008.http://www.cm.colpos.mx/moodle/file.php/13/BIOENSAYO/EL_BIOENSAYO_EN_ENTOMOLOGIA.pdf Katzung, Farmacologa bsica y clnica, 10 Edicin, Editorial Manual Moderno, 2007