七年制七年制 200603200603 班吴垣辕班吴垣辕

BCABCA 法测定蛋白质浓度法测定蛋白质浓度

BCA ( bicinchoninic acidBCA ( bicinchoninic acid ，二辛可酸 ，二辛可酸 ) )

: : 让我们来告诉你提纲吧！让我们来告诉你提纲吧！

一.实验目的 二.实验原理 三.实验器材与试剂

四.实验步骤 五.注意事项

一一 .. 【实验目的】【实验目的】

学习掌握学习掌握 BCABCA 法测定蛋法测定蛋 白质浓度的基本原理。 白质浓度的基本原理。

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二二 .. 【实验原【实验原理】理】

在碱性条件下蛋白质与二价铜离子在碱性条件下蛋白质与二价铜离子 Cu2+Cu2+ 络络合，并将其还原成一价铜离子合，并将其还原成一价铜离子 Cu1+Cu1+ 。 。 CuCu1+1+ 和和 BCABCA 试剂反应试剂反应 , , 形成稳定的紫蓝色复形成稳定的紫蓝色复合物。合物。

反应所生成的复合物，在反应所生成的复合物，在 562 nm562 nm 处有强处有强烈的光吸收，且吸光值和蛋白质浓度在广烈的光吸收，且吸光值和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系，可用于蛋白泛范围内有良好的线性关系，可用于蛋白质浓度的测定。 质浓度的测定。

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三三 .. 【【实验器材与试剂】实验器材与试剂】 11 ．器材．器材

22 ．试剂．试剂

11 ．器材．器材（ 1 ）仪器：分光光度计；恒温水浴箱；枪式移液管。

（ 2 ）玻璃仪器：试管 13 支，吸管 2ml 1 支、O.1ml 3 支。

22 ．试剂．试剂 （ 1 ）试剂 A ： 1 ％ BCA 二钠盐 2 ％无水碳酸钠 0.16% 酒石酸钠 0.4 ％氢氧化钠 0.95 ％碳酸氢钠 混合，调 pH 值至 11.25 。

（ 2 ）试剂 B ： 40/L 硫酸铜。

（ 3 ） BCA 工作液：试剂 A 100ml ＋ 试剂B 2ml ，混合即成。市面有 BCA 法试剂盒销售。

（ 4 ）蛋白质标准液：用结晶牛血清白蛋白，根据其纯度用生理盐水配制成 1.5mg/ml 的蛋白质标准液。（纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定）

（ 5 ）待测样品。

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四四 .. 【实验步【实验步骤】骤】

1. 1. 配备样品配备样品

2.2. 绘制标准曲线绘制标准曲线 3.3. 计算待测血清蛋白质的含量计算待测血清蛋白质的含量4.4. 求待测血清的蛋白质浓度求待测血清的蛋白质浓度

1. 1. 配备样品配备样品

取试管 13 支，编号（除空白管只做 1管外，其它各号测定管均重复做两管），按表操作并记录：

管号试剂 (μl)

空白管

标准管

测定管×2

1×2 2×2 3×2 4×2 5×2

蛋白质标准液(1.5mg/ml) — 20 40 60 80 100 —

双蒸水 100 80 60 40 20 — —

待测样品 — — — — — — 100

BCA工作液 (ml) 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0

混匀， 37℃保温 30min，比色测定

光吸收值(λ=562nm)

2.2. 绘制标准曲线绘制标准曲线

以蛋白质含量为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制标准曲线。

3.3. 计算待测血清蛋白质的含量计算待测血清蛋白质的含量

用测定管平均光吸收值在标准曲线上查出相应的蛋白质含量，计算求出该待测血清蛋白质的含量 (g/L) 。

4.4. 求待测血清的蛋白质浓度求待测血清的蛋白质浓度

从标准管中选择一管与测定管光吸收值相接近者，按比色法计算公式计算求出该待测血清的蛋白质浓度 (g/L) 。

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五五 . . 注意事项注意事项

1. BCA1. BCA 法测定蛋白质浓度的范围：法测定蛋白质浓度的范围： 20μg/ml~200μg/ml;

2. 2. 微量微量 BCABCA 测定范围： 测定范围： 0.50.5μg/ml ~10μg/ml 。

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谢

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