BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar BelakangKehidupan manusia tidak mungkin terlepas dari mikroorganisme. Mikroorganisme terdapat di hampir semua tempat yang sering dijamah oleh makluk hidup termasuk manusia. Mikroorganisme, dalam hal ini bakteri, terdapat pada udara, tanah, makanan, minuman, bahkan pada tubuh manusia itu sendiri. Terdapat berbagai macam bakteri, ada berguna (sebagai flora normal, tidak patogen) dan ada yang dapat menimbulkan penyakit (patogen). Salmonella merupakan salah satu bakteri penyebab penyakit pada manusia.

Apabila bakteri Salmonella sampai ke usus manusia, dapat menyebabkan kram, mual, muntah, dan diare, dimana penyakit yang disebabkan oleh bakteri ini disebut Salmonellosis. Maka dari itu, pemeriksaan dari Salmonella merupakan salah satu pemeriksaan yang penting di bidang bakteriologi.

Salmonella dapat ditemukan di tanah, air, makanan mentah, dan kotoran beberapa hewan, termasuk reptil seperti kura-kura dan ular. Umumnya, bakteri tersebut dapat masuk ke dalam tubuh manusia melalui kontaminasi pada kulit, minuman, dan makanan. Tidak menutup kemungkinan, setelah Salmonella masuk ke dalam tubuh, maka Salmonella akan masuk ke organ ekskresi manusia seperti misalnya saluran kencing sehingga dapat menyebabkan Infeksi Saluran Kencing (ISK). Maka dari itu, pemeriksaan Salmonella tidak hanya dilakukan pada makanan/minuman, melainkan juga pada urine, karena dengan dilakukannya pemeriksaan pada urine, dapat diketahui jenis bakteri yang terdapat pada saluran ekskresi tersebut sehingga dapat diketahui tingkat kebersihan dan kesehatan dari seseorang.

1.2.Rumusan Masalah1.2.1.Apa yang dimaksud dengan bakteri Salmonella?

1.2.2.Media pertumbuhan apa saja yang dapat digunakan untuk identifikasi bakteri Salmonella dan bagaimana bentuk koloni yang tumbuh?

1.2.3.Bagaimana cara pemeriksaan/identifikasi bakteri Salmonella dengan sampel makanan dan urine?

1.2.4.Apakah sampel makanan yang diperiksa memenuhi ketentuan layak konsumsi?

1.2.5.Bagaimana kondisi sampel urine yang diperiksa?

1.3.Tujuan1.3.1.Mahasiswa mengetahui apa yang dimaksud dengan bakteri Salmonella.

1.3.2.Mahasiswa mengetahui macam-macam media pertumbuhan yang dapat digunakan untuk identifikasi bakteri Salmonella serta bentuk koloni yang tumbuh.

1.3.3.Mahasiswa mengetahui cara pemeriksaan/identifikasi Salmonella dengan sampel makanan dan urine.

1.3.4.Mahasiswa mengetahui kualitas dari sampel makanan yang diperiksa.

1.3.5.Mahasiswa mengetahui kondisi sampel urine yang diperiksa.

1.4.Manfaat1.4.1.Manfaat Teoritis

Hasil penulisan laporan ini dapat menambah wawasan dan pengetahuan penulis dalam bidang bakteriologi khususnya mengenai bakteri Salmonella. Laporan ini juga dapat dijadikan pembelajaran untuk menulis karya tulis ilmiah pada akhir perkuliahan.

1.4.2.Manfaat Praktis

Penulis mengetahui mengenai cara pemeriksaan/identifikasi dari salah satu bakteri patogen yaitu Salmonella, serta mengetahui bagaimana ciri-ciri dari koloni bakteri tersebut, sehingga penulis dapat menginterpretasikan hasil yang didapat. Selain itu, penulis juga dapat mengetahui kualitas ataupun kondisi dari sampel-sampel yang diperiksa. Laporan ini juga dapat digunakan sebagai salah satu refrensi bagi kepentingan keilmuan di bidang mikrobiologi.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKABakteri merupakan mikroba prokariotik uniselular yang berkembang biak secara aseksual dengan pembelahan sel. Bakteri tidak berklorofil kecuali beberapa yang bersifat fotosintetik. Bakteri ada yang dapat hidup bebas, parasit, saprofit, patogen pada manusia, hewan dan tumbuhan. Bakteri tersebar luas di alam, dalam tanah, atmosfer (sampai + 10 km diatas bumi), di dalam lumpur, dan di laut. Bakteri mempunyai bentuk bulat, batang, dan lengkung, namun bentuk bakteri juga dapat dipengaruhi oleh umur. Bakteri dapat mengalami perubahan bentuk yang disebabkan faktor makanan, suhu, dan lingkungan, juga dapat mengalami pleomorfi, yaitu bentuk yang bermacam-macam dan teratur walaupun ditumbuhkan pada syarat pertumbuhan yang sesuai.

Umumnya bakteri berukuran 0,5-10 . Bakteri diklasifikasikan berdasarkan deskripsi sifat morfologi dan fisiologi. Bakteri dibagi menjadi 1 kelompok (grup), dengan Cyanobacteria pada grup 20. Pembagian ini berdasarkan bentuk, sifat gram, kebutuhan oksigen, dan apabila tidak dapat dibedakan menurut ketiganya maka dimasukkan ke dalam kelompok khusus.(Nophi, 2013)

1. Tinjauan Bakteri SalmonellaSalmonella adalah penyebab utama dari penyakit yang disebarkan melalui makanan (foodborne diseases). Pada umumnya, serotipe Salmonella menyebabkan penyakit pada organ pencernaan. Penyakit yang disebabkan oleh Salmonella disebut salmonellosis. Ciri-ciri orang yang mengalami salmonellosis adalah diare, keram perut, dan demam dalam waktu 8-72 jam setelah memakan makanan yang terkontaminasi oleh Salmonella. Gejala lainnya adalah demam, sakit kepala, mual dan muntah-muntah. Tiga serotipe utama dari jenis S. enterica adalah S. typhi, S. typhimurium, dan S. enteritidis. S. typhi menyebabkan penyakit demam tifus (Typhoid fever), karena invasi bakteri ke dalam pembuluh darah dan gastroenteritis, yang disebabkan oleh keracunan makanan/intoksikasi. Gejala demam tifus meliputi demam, mual-mual, muntah dan kematian. S. typhi memiliki keunikan hanya menyerang manusia, dan tidak ada inang lain. Infeksi Salmonella dapat berakibat fatal kepada bayi, balita, ibu hamil dan kandungannya serta orang lanjut usia. Hal ini disebabkan karena kekebalan tubuh mereka yang menurun. Kontaminasi Salmonella dapat dicegah dengan mencuci tangan dan menjaga kebersihan makanan yang dikonsumsi.

Kerajaan :Bakteria

Filum :Proteobakteria

Kelas :Gamma Proteobakteria

Ordo :Enterobakteriales

Famili :Enterobakteriakceae

Genus :Salmonella

Klasifikasi ilmiah

1.1 Morfologi dan Fisiologis1. Bentuk batang,2. Gram negatif fakultatif aerob 3. Bergerak dengan flagel peritrich, 4. Mudah tumbuh pada perbenihan biasa dan tumbuh baik pada perbenihan yang mengandung empedu.5. Sebagian besar salmonella bersifat patogen pada binatang dan merupakan sumber infeksi pada manusia. Binatang-binatang itu antara lain tikus, unggas, ternak, anjing dan kucing.6. Di alam bebes salmonella dapat tahan hidup lama dalam air, tanah atau bahan makanan. 7. Dalam feces di luar tubuh manusia tahan hidup 1 - 2 bulan. 8. Dalam air susu dapat berkembang biak da hidup lebih lama sehingga sering merupakan batu loncatan untuk penularan penyakit lainya.

Salmonella tumbuh pada suasana aerob dan fakultatif anaerob, pada suhu 15 - 41o C (suhu pertumbuhan optimum 37o C) dan pH pertumbuhan 6 - 8. Pada umumnya isolat kuman Salmonella dikenal dengan sifat-sifat, gerak positif, reaksi fermentasi terhadap manitol dan sorbitol positif dan memberikan hasil negatif pada reaksi indol, laktosa, Voges Praskauer dan Sebagian besar isolat Salmonella yang berasal dari bahan klinik menghasilkan H2S. Samonella thypi hanya membentuk sedikit H2S dan tidak membentuk gas pada fermentase glukosa. Pada agar SS,Endo, EMB dan MacConkey koloni kuman berbentuk bulat, kecil dan tidak berwana, pada agar Wilson Blair koloni kuman berwarna hitam berkilat logam akibat pembentukan H2S.1.2 Struktur Antigen Seperti Enterobacteriaceae lain, salmonella memiliki beberapa antigen O (dari keseluruhan yang berjumlah lebih dari 60) dan antigen H yang berbeda pada salah satuatau kedua fase. Beberapa salmonella mempunyai antigen simpai (K), yang disebut Vi,yang dapat mengganggu aglutinasi melalui antiserum O. Antigen ini dihubungkan dengan sifat invasif yang dimilikinya. Tes aglutinasi dengan antiserum serapan untuk O dan Hyang berbeda merupakan dasar untuk klasifikasi salmonella secara serologi.

1.3 Patogenitas dan Gambaran Klinis Salmonella adalah penyebab utama dari penyakit yang disebarkan melalui makanan (foodborne diseases). Pada umumnya, serotipe Salmonella menyebabkan penyakit pada organ pencernaan. Penyakit yang disebabkan oleh Salmonella disebut salmonellosis. Ciri-ciri orang yang mengalami salmonellosis adalah diare, keram perut, dan demam dalam waktu 8-72 jam setelah memakan makanan yang terkontaminasi oleh Salmonella. Gejala lainnya adalah demam, sakit kepala, mual dan muntah-muntah. Tiga serotipe utama dari jenis S. enterica adalah S. typhi, S. typhimurium, dan S. Enteritidis. S.typhi menyebabkan penyakit demam tifus (Typhoid fever), karena invasi bakteri ke dalam pembuluh darah dan gastroenteritis, yang disebabkan oleh keracunan makanan / intoksikasi. Gejala demam tifus meliputi demam, mual-mual, muntah dan kematian. S. typhi memiliki keunikan hanya menyerang manusia, dan tidak ada inang lain. Infeksi Salmonella dapat berakibat fatal kepada bayi, balita, ibu hamil dan kandungannya serta orang lanjut usia. Hal ini disebabkan karena kekebalan tubuh mereka yang menurun. Kontaminasi Salmonella dapat dicegah dengan mencuci tangan dan menjaga kebersihan makanan yang dikonsumsi.

Patogenitas Salmonella bersifat invasif yakni menyerang bagian epithelium dari ileum. Salmonella menghasilkan enterotoksin yang menyebabkan diare berair. Bila selaput lendir menjadi rusak, diare yang terjadi disertai darah. Ada 2000 serotipe Salmonella dan 6-10 di antaranya diketahui menimbulkan gastroenteritis. Diare yang ditimbulkan biasanya disertai dengan gejala-gejala mual, demam dan nyeri perut. Di samping menyebabkan diare berair, Salmonella juga menyebabkan mencret (exudative diarrhoea) yang ditandai oleh hadirnya leukosit di dalam feses. Di beberapa negara telah ditemukan strain Salmonella yang resisten terhadap ampisilin, khloramfenikol, dan sulfametoxazol-trimet (Anonim, 2007). Penyakit penyakit yang disebabkan oleh Salmonella secara umum dikenal dengan Salmonellosis. Secara klinik ada 3 bentuk Salmonellosi. Secara klinik ada 3 bentuk Salmonellosis yang bias timbul pada manusia yaitu:

Enteric fever Mencakup demam tifoid dan demam paratifoid. Deman tifoid atau tifus abdominalis disebabkan oleh Salmonella typhi. Salmonella typhi tertelan bersama makanan atau terkontaminasi dan bersarang di jaringan limfoid pada dinding usus . Aliran limfa membawa organisme ini kedalam duktus torak kemudian kedalam darah. Sedangkan demam paratifoid adalah penyakit yang disebabkan oleh salmonella enteristidis ( Tambayong, J, 2000).

Demam paratifoid disebabkan oleh Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Salmonella paratyphi C, gejala kliniknya biasanya lebih ringan dan mempunyai masa inkubasi lebih pendek 1 10 hari, demam diasa berlangsung selama 1 3 minggu, rose spots jarang ditemukan.

SeptikemiaDisebabkan oleh Salmonella choleraesus, infeksi terjadi melalui rute oral dan akhirnya masuk kedalam sirkulasi darah dan berkembang biak. Salmonella tersebar luas dalam tubuh dan cenderung menyebabkan supurasi local, abses, meningitis,pneumonia dan endokartidis terutama pada orang orang yang fisiknya dalam keadaan lemah, tetapi manifestasi pada saluran usus sering tidak ada. Septikemia ini ditandai dengan demam tinggi yang turun naik, kultur darah positif. Gastroenteritis/enterokolitisMerupakan manifestasi infeksi Salmonella yang wajar, timbul sesudah makan makanan yang tercemari bakteri penyakit Salmonella, spesies Salmonella yang lazim menyebabkan penyakit ini adalah Salmonella typhimurium dan Salmonella enteridis, bakteri tersebut masuk kedalam sirkulasi darah. Gejala gejalanya timbul dalam waktu 8 49 jam sesudah makan makanan yang tercemar Salmonella tersebut. Diare disertai demam berlangsung selama 1 4 hari. Kultur darah biasanya negative tetapi kultur tinja positif untuk Salmonella.

1.4 Epidemologi Di banyak negara berkembang, diare akut yang disebabkan oleh Salmonella tidak begitu besar. Terutama di daerah urban diare pada anak-anak yang disebabkan oleh infeksi Salmonella sekitar 10%. Transmisi kuman terjadi secara meat-borne, yaitu melalui makanan yang berasal dari hewan seperti daging, unggas, telur, susu; tetapi dapat pula terjadi secara water-borne.2. Tinjauan bakteri shigellaShigella adalah genus dari Gram-negatif, non-motil, bakteri endospor berbentuk-tongkat yang berhubungan dekat dengan Escherichia coli dan Salmonella. Shigella merupakan penyebab dari penyakit shigellosis pada manusia, selain itu, Shigella juga menyebabkan penyakit pada primata lainnya, tetapi tidak pada mamalia lainnya. Shigella adalah bakteri yang dapat menginfeksi saluran pencernaan dan menyebabkan gejala mulai dari diare, nyeri perut, muntah, dan mual, sampai komplikasi yang lebih serius. Infeksi ini disebut Shigellosis, terkadang dapat menghilang dalam perjalanan penyakitnya, antibiotik dapat mempersingkat perjalanan penyakit. Shigellosis, yang paling umum terjadi dalam musim panas, umumnya mengenai anak-anak usia 2-4 tahun, dan jarang menginfeksi bayi kurang dari 6 bulan. 2.1 Klasifikasi kingdom Shigella Kerajaan : BakteriaFilum : ProteobakteriaKelas : Gamma ProteobakteriaOrdo : EnterobakterialesFamili : EnterobakteriaceaeGenus : Shigella2.2 Morfologi dan Fisiologi Shigella adaiah bakteri bentuk batang, tidak bergerak , Gram ngatif, bersifat aerobik tetapi bisa fakultatif anaerob, tidak meragikan laktosa tetapi meragikan karbihidrat lainnya, menghasilkan asam tetapi tidak menghasilkan gas. Habitat alamiah Shigella terbatas pada saluran pencemaan manusia dan primata lainnya dimana spesiesnya bisa menimbulkan disentri basiler. Spesies patogen Shigella yaitu: Shigella dysentriae, Shigella flexneri, Shigella boydii, Shigella sonnei yang dapat dibedakan secara serologi spesifik untuk Shigella dari hasil kultur atau pembiakan.2.3 Patogenesis dan Gejala Klinis Disentri basiler atau shigellosis adalah infeksi usus akut yang dapat sembuh sendiri yang disebabkan oleh Shigella. Shigellosis dapat menyebabkan 3 bentuk diare yaitu disentri dengan tinja lembek, disertai darah, mucus dan pus, waterdiarrhea yaitu tinja yang berbentuk cair, dan kombinasi keduanya yaitu tinja berbentuk cair disertai darah, mucus dan pus.

Masa inkubasi adalah 2 4 hari atau bias lebih lama sampai 1 minggu. Pada ornag yang sehat diperlukan 200 kuman untuk menyebabkan sakit (Anonim,1993)

Setelah masa inkubasi, secara mendadak timbul nyeri perut, demam dan tinja encer. Satu hari atau beberapa hari kemudain jumlah tinja meningkat karena infeksi meliputi ileum dan kolon, melekat pada permukaan mukosa dan menembus lapisan epitel dan berkembang biak ke dalam lapisan mukosa. Lalu terjadi reaksi hebat yang menyebabkan terlepasnya sel sel dan timbulnya luka pada permukaan mukosa usus. Tinja ini berkurang encernya tetapi mengandung lender dan darah. Tiap gerakan usus disertai dengan tenensmus yang menyebabkan nyeri perut bagian bawah.

Demam dan diare ini sembuh secara spontan dalam 2 5 hari pada lebih dari setengah kasus otang dewasa. Namun pada anak anak dan orang tua, enyakit ni berlangsung lama. Kehilangan cairan dan elektrolit dapat menyebakan dehidrasi,asidosis, bahkan kematian.

Setelah sembuh, kebanyakan orang mengeluarkan bakteri disentri dalam waktu yang singkat, namun beberapa diantaranya menjadi pembawa yang kronis yang dapat mengalami serangan penyakit berulang ulang (Jawetz, 2005).

Infeksi ini sangat menular dan dapat dicegah dengan cuci tangan yang baik. Tanda dan Gejala Bakteri Shigella menghasilkan racun yang dapat menyerang permukaan usus besar, menyebabkan pembengkakan, luka pada dinding usus, dan diare berdarah. Keparahan diare pada Shigellosis berbeda dari diare biasa. Pada anak-anak dengan Shigellosis, pertama kali buang air besar besar sering dan berair. Kemudian buang air besar mungkin lebih sedikit, tetapi terdapat darah dan lendir di dalamnya. Dalam kasus Shigellosis yang sangat parah, seseorang mungkin mengalami kejang, kaku kuduk, sakit kepala, kelelahan, dan kebingungan. Shigellosis juga dapat menyebabkan dehidrasi dan komplikasi lain yang jarang terjadi, seperti radang sendi, ruam kulit, dan gagal ginjal. Beberapa anak dengan kasus Shigellosis yang berat mungkin perlu dirawat di rumah sakit. Shigellosis sangat menular. Seseorang dapat terinfeksi melalui kontak dengan sesuatu yang terkontaminasi oleh tinja dari orang yang terinfeksi. Ini termasuk mainan, permukaan di toilet, dan bahkan makanan yang disiapkan oleh seseorang yang terinfeksi. Misalnya, anak-anak yang menyentuh permukaan yang terkontaminasi oleh shigella seperti toilet atau mainan dan kemudian memasukkan jari-jari mereka di mulut maka mereka bisa menjadi terinfeksi. Shigella bahkan dapat dibawa dan disebarkan oleh lalat yang kontak dengan tinja yang terinfeksi.

Karena tidak membutuhkan banyak bakteri Shigella untuk menyebabkan infeksi maka penyakit dapat menyebar dengan mudah dalam keluarga dan penampungan anak. Bakteri mungkin juga tersebar di sumber air di daerahdengan sanitasi yang buruk. Shigella masih dapat disebarkan dalam 4 minggu setelah gejala penyakit selesai (walaupun pengobatan antibiotik dapat mengurangi pengeluaran bakteri Shigella di tinja). Cara terbaik untuk mencegah penyebaran Shigella adalah dengan sering mencuci tangan yang bersih dengan sabun, terutama setelah menggunakan toilet dan sebelum mereka makan. Hal ini terutama penting dalam perawatan anak.

2.4 Diagnosa Laboratorium Bahan pemeriksaan dapat berupa feces, urine, rectal swab, makanan, minuman, dan air. Dari bahan tersebut kemudian dilakukan pewarnaan gram, perbenihan MacConkey, EMBA, Endo, SSA, HEA, XLD agar dan diinkubasi pada suhu 370 C. Selanjutnya koloni yang tumbuh dilakukan pewarnaan gram kembali, tes biokimia, dan penentuan tipe bakteriofag.(Ahmada, 2011)

3. Tinjauan BahanSalmonella dan Shigella adalah penyebab utama dari penyakit yang disebarkan melalui makanan (foodborne diseases). Penyebaran bakteri ini sangat erat kaitannya dengan kondisi fisik makanan yang akan dikonsumsi oleh manusia. Beberapa makanan yang bisa dicemari oleh bakteri ini salah satunya adalah jajanan pasar yang disebut dengan kue basah. Contoh dari kue basah adalah kue bika ambon, ote-ote dan kue lapis. Selain dalam makanan bakteri Salmonella dan Shigella dapat juga ditemukan dalam urine.3.1 Kue bika ambon

Bika ambon adalah sejenis penganan asal Indonesia. Terbuat dari bahan-bahan seperti telur, gula, dan santan, bika ambon umumnya dijual dengan rasa pandan, meskipun kini juga tersedia rasa-rasa lainnya seperti durian, keju, dan cokelat. Bika ambon biasanya dapat bertahan dalam kondisi terbaik selama sekitar empat hari karena setelah itu kue tersebut mulai mengeras. Bika ambon ini sendiri terbuat dari beberapa bahan utama yaitu seperti gula, santan, serta telur dengan tambahan rasa pandan ataupun rasa lainnya seperti rasa keju ataupun durian. Menurut penjelasan M Muhar Omtatok, seorang seorang budayawan dan sejarawan, Kue Bika Ambon terilhami dari Kue khas Melayu yaitu Bika atau Bingka. Selanjutnya dimodifikasi dengan bahan pengembang berupa Nira/Tuak Enau hingga berongga & berbeda dari kue Bika atau Bingka khas Melayu itu. Selanjutnya M Muhar Omtatok menyebutkan bahwa kue ini disebut Bika Ambon karena pertama sekali dijual & popular di simpang Jl Ambon Sei Kera Medan. (Anonim1, 2013) 3.2 Kue Lapis

Kue lapis adalah makanan khas Indonesia. Kue ini biasanya terdiri dari dua warna yang berlapis-lapis, ini yang memberi nama kue ini. Kue ini dibuat dari tepung beras, tepung kanji, santan, gula pasir, garam dan pewarna. Kue ini dikukus setiap lapisannya sebelum kemudian lapisan di atasnya ditambahkan. Kue ini banyak ditemui di daerah-daerah di Indonesia. Pewarna yang digunakan untuk kue lapis bisa terdiri dari pewarna makanan buatan atau pewarna alami. Pewarna yang sering digunakan adalah pandan (hijau) dan sirup bunga mawar (merah). (Anonim2, 2013)

3.3 Ote-ote

Ote-ote adalah jenis makanan berupa gorengan yang terbuat dari campuran tepung dengan beberapa jenis sayuran dan terkadang diberi tambahan udang. Gorengan ini sering dimakan bersama dengan saus berupa petis. Tidak susah sebenarnya membuat weci ini, yang butuh sedikit kesabaran dan kecermatan adalah saat mencetaknya menggunakan sendok sayur, karena makanan ini memiliki bentuk yang bulat pipih (dari cetakan sendok sayur tadi).(hidayah, 2012). 3.4 Urine Identifikasi bakteri dalam urin biasanya digunakan untuk mengetahui ada atau tidaknya bakteri yang sering menyebabkan infeksi saluran kemih bakteri penyebab infeksi saluran kemih adalah jenis bakteri aerob. Pada kondisi normal, saluran kemih tidak dihuni oleh bakteri atau mikroba lain, tetapi uretra bagian bawah terutama pada wanita dapat dihuni oleh bakteri yang jumlahnya makin berkurang pada bagian yang mendekati kandung kemih. Infeksi saluran kemih sebagian disebabkan oleh bakteri, namun tidak tertutup kemungkinan infeksi dapat terjadi karena jamur dan virus. Infeksi oleh bakteri gram positif lebih jarang terjadi jika dibandingkan dengan infeksi gram negatif. Lemahnya pertahanan tubuh telah menyebabkan bakteri dari vagina, perineum(daerah sekitar vagina), rektum (dubur) atau dari pasangan (akibat hubungan seksual), masuk ke dalam saluran kemih. Bakteri itu kemudian berkembang biak di saluran kemih sampai kekandung kemih, bahkan bisa sampai ke ginjal.Bakteri yang dapat menyebabkan infeksi saluran kemih salah satunya adalah golongan Enterobacteriaceae . Enterobacteriaceae adalah kuman yang hidup diusus besar manusia dan hewan,tanah, air dan dapat pula ditemukan pada komposisi material. Sebagian kuman enterik initidak menimbulkan penyakit pada host (tuan rumah) bila kuman tetap berada di dalam usus besar, tetapi pada keadaan-keadaan dimana terjadi perubahan pada host atau bila adakesempatan memasuki bagian tubuh yang lain, banyak diantara kuman ini mampumenimbulkan penyakit pada tiap jaringan tubuh manusia. Organisme-organisme di dalam famili ini pada kenyataannya mempunyai peranan penting di dalam infeksi nosokomial misalnya sebagai penyebab infeksi saluran kemih, infeksi pada luka, dan infeksi lainnya. Contoh dari bakteri Enterobacteriaceae adalah Escherichia coli, Klebsiella pneumonia , Enterobacter aerogenes, Proteus, Providencia, Citrobacter, Salmonella dan Shigella.

(Novita. 2013)4. PEMERIKSAAN SALMONELLA DAN SHIGELLAMetode analisa merupakan proses pembuktian atau konfirmasi pengujian secara obyektif di laboratorium yang telah memenuhi persyaratan yang telah ditentukan dan sesuai dengan tujuan penggunaannya. Dalam pengujian mutu suatu bahan pangan diperlukan berbagai uji yang mencakup uji fisik, uji kimia, uji mikrobiologi, dan uji organoleptik.

Uji mikrobiologi merupakan salah satu uji yang penting, karena selain dapat menduga daya tahan simpan suatu makanan, juga dapat digunakan sebagai indikator sanitasi makanan atau indikator keamanan makanan. Pengujian mikrobiologi diantaranya meliputi uji kuantitatif untuk menentukan mutu dan daya tahan suatu makanan, dan uji kualitatif bakteri patogen untuk menentukan tingkat keamanannya, serta uji bakteri indikator untuk mengetahui tingkat sanitasimakanan tersebut (Fardiaz, 1993).

Dalam hal ini, metode analisa yang digunakan untuk mengidentifikasi adanya bakteri Salmonella dan Shigella adalah metode analisa secara kualitatif yakni bertujuan untuk mengetahui ada tidaknya suatu bakteri Salmonella dan Shigella dalam suatu makanan (Sugianto, 2012).

Pada pengujian identifikasi bakteri Salmonella dan Shigella metode yang digunakan adalah metode analisa secara kualitatif. Pada metode analisa kualitatif ini memiliki tahapan tahapan tertentu dengan tujuan untuk mengetahui ada tidaknya suatu mikroorganisme dalam makanan(Sugianto,2012).

Tujuan dari pengidentifikasian dalam uji suatu bakteri (Salmonella) pada metode ini adalah untuk mengetahui mutu ataupun kualitas dari suatu produk berdasarkan kemasan atau sifat mikrobiologinya. Pengujian mikrobiologi pada sampel makanan akan selalu mengacu kepada persyaratanmakanan yang sudah ditetapkan. Sebagai contoh sampel pada makanan yakni Parameter uji mikrobiologi pada mayonnaise yang dipersyaratkan sesuai Standar Nasional Indonesia dalam pengujian Salmonella dan Shigella (Sugianto, 2012).

Prinsip pengujian deteksi Salmonella menurut Metode AnalisisMikrobiologi (MA PPOM 74/MIK/06) yaitu ada empat tahap untuk mendeteksi adanya Salmonella(Sugianto, 2012) :

1. Pra. Pengkayaan dalam media cair non selektif yang diinkubasi pada371C selama 18+2jam.

2. Pengkayaan dalam media cair selektif yang diinkubasi pada 41,5 + 1 Cselama 24 3 jam dalam RVS cair dan 371 C selama 243 jam MKTTncair.

3. Inokulasi & identifikasi dalam 2 media padat selektif, media selektif pertama diinkubasi pada 371 C selama 243 jam dan dengan media yang digunakan.

4. Konfirmasi terhadap identitas Salmonella dengan uji biokimia dan serologi.Pada pengujan deteksi Salmonella diguanakan Buffered PeptoneWater (BPW) sebagai media cair non selektif, Muller Kaufimann Tetrathionate Novobiocin Broth (MKTTn) dan Rappaport Vassiliadis Medium + Soya (RVS)sebagai media cair selektif, Bismuth Green Agar (BGA) dan Xylose LysineDeoxycholate (XLD) media padat selektif untuk mengisolasi Salmonella(Sugianto, 2012).4.1 Media

Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat hara (nutrient) yang berguna untuk membiakkan mikroba. Dengan mempergunakan bermacam-macam media dapat dilakukan isolasi, perbanyakan, pengujian sifat-sifat fisiologis dan perhitungan jumlah mikroba (Sutedjo,1991).

Untuk menstimulir pertumbuhan mikroba, media harus memiliki komponen-komponen yang di butuhkan mikroba seperti air, karbon, energi, nitrogen, mineral dan faktor pertumbuhan lain seperti vitamin dan asam amino. Mikroba juga mempunya pH maksimum dan optimum untuk pertumbuhannya, oleh karena itu dalam persiapan media perlu dilakukan pengaturn pH sehingga tercapai pH optimum untuk pertumbuhan mikroba yang diinginkan (Mulyana 1992).

4.1.1 Media Selenite cystine brothMedia Selenite Cystine Broth ini merupakan salah satu media yang berdasarkan fungsinya merupakan media encrichment yaitu media yang dapat menunjang pertumbuhan bakteri yang tidak dapat tumbuh pada media biasa karena memerlukan beberapa nutrisi pengaya yang dapat menyokong pertumbuhannya. Media ini tergolong enrichment eksklusif media yaitu media penyubur eksklusif untuk bakteri gram negatif seperti Salmonella sp. Media Selenite cystine broth termasuk ke dalam media cair hal ini karena tidak terdapat kandungan agar dalam komposisi media .Hasil positif pada media ini ditandai dengan adanya kekeruhan dan terjadinya gelembung pada permukaan media.(Arnita, 2013).

4.1.2 Media Mac Conkey Agar

Mac Conkey Agar adalah salah satu jenis media yang digunakan untuk identifikasi mikroorganisme. Mac Conkey agar termasuk dalam media selektif dan diferensial bagi mikroba. Jenis mikroba tertentu akan membentuk koloni dengan ciri tertentu yang khas apabila ditumbuhkan pada media ini.

Persenyawaan utama dalam media ini adalah laktosa, garam empedu, dan merah netral sebagai indikator warna. Media ini akan menghambat pertumbuhan bakteri gram positif dengan adanya garam empedu yang akan membentuk kristal violet. Bakteri gram negatifyang tumbuh dapat dibedakan dalam kemampuannya memfermentasikan laktosa. Koloni bakteri yang memfermentasikan laktosa berwarna merah bata dan dapat dikelilingi oleh endapan garam empedu. Endapan ini disebabkan oleh penguraian laktosa menjadi asam yang akan bereaksi dengan garam empedu.Bakteri yang tidak memfermentasikan laktosa biasanya bersifat patogen. Golongan bakteri ini tidak memperlihatkan perubahan pada media. Ini berarti warna koloninya sama dengan warna media. Warna koloni dapat dilihat pada bagian koloni yang terpisah.

Beberapa contoh pertumbuhan koloni pada Mac Conkey Agar:

Salmonella dan Shigella: serupa media

Escherichia coli: merah dikelilingin zona keruh

Enterobacter dan Klebsiella: merah muda dan mukoid

Enterococcus dan Staphylococcus: kecil dan tidak terang tembus

(Anonim3, 2013) 4.1.3 Media Salmonella dan Shigella Agar

SSA digunakan untuk menyeleksi salmonella dan beberapa strains shigella dari specimen tinja (stool). SSA juga membedakan bakteri yang menghasilkan koloni yang karakteristik pada medium. SSA mengandung garam empedu, Na-sitrat, dan brilliant green yang menghambat pertumbuhan gram (+) dan beberapa gram (-) LF normal yang ada di tinja. Laktosa merupakan sumber karbohidrat , sedangkan indicator yang dipakai adalah neutral red. Jika bakteri tumbuh dan memefermentasi laktosa maka akan menghasilkan asam dan mengubah indikator menjadi pink-merah. Na-tiosulfit sebagai sumber sulfur untuk produk H2S. jika H2S diproduksi maka akan bereaksi dengan FeCl3 yang terdapat dalam medium. (Intan, 2011 )

5. Teknik Penanaman

Isolasi suatu mikrobia ialah memisahkan mikrobia tersebut dari lingkungannya di alam dan menumbuhkannya sebagai biakan murni dalam medium buatan. Isolasi harus diketahui cara-cara menanam dan menumbuhkan mikrobia pada medium biakan serta syarat-syarat lain untuk pertumbuhannya (Jutono, 1980). Memindahkan bakteri dari medium lama kedalam medium yang baru diperlukan ketelitian dan pengsterilan alat-alat yang digunakan, supaya dapat dihindari terjadinya kontaminasi. Pada pemindahan bakteri dicawan petri setelah agar baru, maka cawan petri tersebut harus dibalik, hal ini berfungsi untuk menghindari adanya tetesan air yang mungkin melekat pada dinding tutup cawan petri (Dwijoseputro, 1987).

Mikrobia yang hidup di alam terdapat sebagai populasi campuran dari bebagai jenis mikrobia yang berbeda prinsip dari isolasi mikrobia dalam memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya dari lingkungannya dialam dan ditumbuhkan dalam medium buatan. Pertumbuhan mikroba dapat dilakukan dalam medium padat, karena dalam medium padat sel-sel mikroba akan terbentuk suatu koloni sel yang tetap pada tempatnya (Sutejo dkk, 1991).Menurut Pradhika (2008), ada beberapa teknik isolasi mikrobia, yaitu :

1. Teknik penanaman dari suspensi

Teknik penanaman ini merupakan lajutan dari pengenceran bertingkat. Pengambilan suspensi dapat diambil dari pengenceran mana saja tapi biasanya untuk tujuan isolasi (mendapatkan koloni tunggal) diambil beberapa tabung pengenceran terakhir.

2. Spread plate(agar tabur ulas)

Spread plateadalah teknik menanam dengan menyebarkan suspensi bakteri di permukaan agar, agar diperoleh kultur murni. Prosedur kerjanya adalah suspensi cairan diambil sebanyak 0,1 ml dengan mikropipet kemudian teteskan diatas permukaan agar yang telah memadat. Trigalski kemudian dibakar diatas bunsen dan didinginkan beberapa detik. Kemudian suspensi diratakan dengan menggosokannya pada permukaan agar , penyebaran akan lebih efektif bila cawan ikut diputar. 3. Pour plate(agar tuang)

Teknik ini memerlukan agar yang belum padat dan dituang bersama suspensi bakteri ke dalam cawan petri dan dihomogenkan lalu dibiarkan memadat. Hal ini akan menyebabkan sel-sel bakteri tidak hanya terdapat pada permukaan agar saja tapi juga di dalam atau dasar agar sehingga bisa diketahui sel yang dapat tumbuh dipermukaan agar yang kaya O2dan di dalam agar yang tidak banyak begitu banyak mengandung O2. Prosedur kerjanya adalah petridish, tabung pengenceran yang akan ditanam dan media padat yang masih cair disiapkan. Kemudian 1 ml suspensi bakteri diteteskan secara aseptis ke dalam cawan kosongLalu medium yang masih cair dituang ke dalam petridish lalu petridish di putar membentuk angka 8 agar suspensi bakteri dan media homogen, kemudian diinkubasi.

Pada spread plate diteteskannya bakteri sebanyak 0,1 ml dan pada pour plate diteteskan sebanyak 1 ml karena spread plate bertujuan untuk menumbuhkan dipermukaanya saja, sedangkanpour platemembutuhkan ruang yang lebih luas untuk penyebarannya sehingga diberikan lebih banyak dari padaspread plate.

4. Teknik Penanaman dengan Goresan (Streak)

Bertujuan untuk mengisolasi mikroorganisme dari campurannya atau meremajakan kultur ke dalam medium baru.

a) Goresan Sinambung

Prosedur kerjanya adalah inokulum loop (ose) disentuhkan pada koloni bakteri dan gores secara kontinyu sampai setengah permukaan agar. Lalu petridish diputar 180o dan dilanjutkan goresan sampai habis. Goresan sinambung umumnya digunakan bukan untuk mendapatkan koloni tunggal, melainkan untuk peremajaan ke cawan atau medium baru. b) Goresan T

Prosedur kerjanya adalah petridish dibagi menjadi 3 bagian menggunakan spidol dan daerah tersebut diinokulasi dengan streak zig-zag. Ose dipanaskan dan didinginkan, lalu distreak zig-zag pada daerah berikutnya.

c) Goresan d) Kuadran (Streakquadrant)

Hampir sama dengan goresan T, namun berpola goresan yang berbeda yaitu dibagi empat. Daerah 1 merupakan goresan awal sehingga masih mengandung banyak sel mikroorganisma. Goresan selanjutnya dipotongkan atau disilangkan dari goresan pertama sehingga jumlah semakin sedikit dan akhirnya terpisah-pisah menjadi koloni tunggal.

Menurut Pradhika (2008), untuk memperkecil atau mengurangi jumlah mikroba yang tersuspensi dalam cairan dapat dilakukan pengenceran. Dengan pengenceran, koloni akan lebih mudah diamati. Penentuan besarnya atau banyaknya tingkat pengenceran tergantung kepada perkiraan jumlah mikroba dalam sampel. Digunakan perbandingan 1 : 9 untuk sampel dan pengenceran pertama dan selanjutnya, sehingga pengenceran berikutnya mengandung 1/10 sel mikroorganisme dari pengenceran sebelumnya.4.3 Preparasi Sampel

Sampel yang telah diambil kemudian disuspensikan dalam akuades steril. Tujuan dari teknik ini pada prinsipnya adalah melarutkan atau melepaskan mikroba dari substratnya ke dalam air sehingga lebih mudah penanganannya. Macam-macam preparsi bergantung kepada bentuk sampel : a. Swab (ulas)

Swab (ulas), dilakukan menggunakan cotton bud steril pada sampel yang memiliki permukaan luas dan pada umumnya sulit dipindahkan atau sesuatu pada benda tersebut. Contohnya adalah meja, batu, batang kayu dll. Caranya dengan mengusapkan cotton bud memutar sehingga seluruh permukaan kapas dari cotton bud kontak dengan permukaan sampel. Swab akan lebih baik jika cotton bud dicelupkan terlebih dahulu ke dalam larutan atraktan semisal pepton water.

b. Rinse (bilas)Rinse (bilas) ditujukan untuk melarutkan sel-sel mikroba yang menempel pada permukaan substrat yang luas tapi relatif berukuran kecil, misalnya daun bunga dll. Rinse merupakan prosedur kerja dengan mencelupkan sampel ke dalam akuades dengan perbandingan 1 : 9 (w/v). Contohnya sampel daun diambil dan ditimbang 5 g kemudian dibilas dengan akuades 45 ml yang terdapat dalam beaker glass.

c. Maseration (pengancuran)

d. Sampel cair

Sampel yang telah diambil kemudian disuspensikan dalam akuades steril. Tujuan dari teknik ini pada prinsipnya adalah melarutkan atau melepaskan mikroba dari substratnya ke dalam air sehingga lebih mudah penanganannya

(Anonim4, 2011)

BAB III

METODOLOGI PERCOBAAN3.1.Hari, Tanggal

Selasa, 10 Desember 2013

3.2.Pukul

11.30-14.50 wita3.3.Tempat

Laboratorium Bakteriologi Analis Kesehatan Poltekkes Denpasar

3.4.Alat yang Digunakan

1.Gelas ukur8.Inkubator

2.Petridish (steril)9.Spidol

3.Tabung reaksi (steril)10.Ballpipet

4.Kapas berlemak11.Botol semprot

5.Lampu bunsen12.Ose

6.Pipet ukur (steril)13.Gelas beaker

7.Mortas & Pestle

3.5.Media/Reagen1.Media Selenite Cystine Broth (SCB)

2.Salmonella dan Shigella Agar (SSA)

3.Mac Conkey Agar (MCA)

4.Aquades steril

5.Alkohol

3.6.Bahan/Spesimen1.Urine

2.Kue lapis

3.Kue bikang ambon

4.Ote-ote

3.7.Cara Kerja3.7.1.Persiapan Sampel

a.Sampel Padat

1.Spesimen dihancurkan dengan mortal & pestle yang telah disteril dengan alkohol 70%.

2.Dimasukkan 10 g sampel tadi ke dalam labu erlenmeyer.

3.Dituangkan 90 ml aquades steril.

4.Bahan siap diperiksa.

b.Sampel Cair

1.Dimasukkan 10 ml spesimen ke dalam labu erlenmeyer.

2.Dituangkan 10 ml aquades steril.

3.Dikocok hingga homogen.

4.Bahan siap diperiksa.

3.7.2.Pengayaan (Enrichment)

1.Dipipet 10 ml sampel ke dalam media SCB.

2.Diinkubasi pada suhu 37oC selama 1x24 jam.

3.7.3.Penanaman pada Media Selektif

1.Dipindahkan biakan pengayaan dengan cara menggoreskan dengan jarum ose ke dalam cawan petri yang masing-masing berisi media MCA dan SSA.

2.Diinkubasi pada suhu 37oC selama 1x24jam.

3.Setelah 1x24 jam, diamati ciri-ciri koloni yang tumbuh pada masing-masing media.

4.Dilaporkan hasil yang didapat.Hasil ngoresan

Proses penggoresan

Hasil goresan

Tempat goresan

Proses penggoresan

Hasil goresan

Proses penggoresan

Pemeriksaan Salmonella-Shigella | 29