Dr Luis Javier Paniagua Santurtún

R3 Neumología

MECANISMOS DE PATOGÉNESIS Las bacterias tiene características genéticas que les permite

invadir, adherirse o colonizar un nicho y escapar a las respuesta protectoras del húesped. Factores de virulencia. La cepa y tamaño del inóculo bacteriano determinan si se va a

producir la enfermedad. Deben cruzar los mecanismos y barreras de defensa naturales

Muchos de los productos derivados de estas, provocan daños y problemas en el huésped, dando pérdida de la función del tejido o del desarrollo de la respuesta inflamatoria.

MECANISMOS DE PATOGÉNESIS El cuerpo humano se encuentra colonizado; se produce

enfermedad si entran a zonas estériles.

Las bacterias oportunistas solo producen enfermedad en individuos con patologías previas que aumentan su susceptibilidad.

Tracto respiratorio superior, oídos, ojos, ano y tracto urogenital son sitios protegidos por defensas naturales:

Moco, epitelio ciliar, secreciones antibacteriales.

MECANISMOS DE ADHERENCIA Pueden utilizar mecanismos para adherirse y colonizar las

diferentes superficies corporales; entre estos se encuentran:

Adhesinas: Se unen a receptores específicos en la superficie tisular

Fimbrias.

Biopelículas: Membrana viscosa de polisacáridos que mantiene unidas a las bacterias entre sí y la superficie

Facilita colonización de dispositivos.

Protege a las bacterias de las defensas del huésped y los antibióticos.

Islas de patogenicidad.

ACCIONES PATÓGENAS Destrucción tisular: Por derivados del crecimiento bacteriano

Estreptolisina S y O, hialurodinasa y estreptocinasa.

Toximas:

Endotoxinas y otros componentes de la pared celular:

Gram +: Péptidoglucanos, ácidos teicoicos y lipoproteicos

Gram -: Lipopolisacárido

Estimula la producción y liberación de citocinas de fase aguda

Su sintomatología depende de su concentración.

Exotoxinas: Proteinas formadas por enzimas citolíticas

Superantígenos

Sx Choque tóxico ; enterotoxinas estafilocócicas y toxina eritrogénica A o C.

MECANISMOS DE EVACIÓN Cápsula (Ag K):

Polisacáridos poco inmunógenos

Protege de funciones inmunes y fagocíticas

Crecimiento intracelular

Destrucción de fagocitos y bloqueo de la fusión del fagolisosoma

Pared celular (Ag O)

Mimetismo y enmascaramiento antigénico.

Producción de proteasas antiglobulinas.

Inhibición de la quimiotaxis y fagocitosis.

ESTUDIO DE LAS BACTERIASExamen directo

KOH al 10%, disuelve material protéico y facilita la detección de elementos fúngicos

Tinta china: Criptococo.

Yodo de Lugol: Refuerza el contraste de las estructuras internas de las amibas.

ESTUDIO DE LAS BACTERIASTinciones diferenciales:

Tinción de Gram: Identifica los principales tipos de bacterias:

Bacterias fijadas por calor, se tiñen con cristal violeta; se realiza un lavado decolorante de acetona y alcohol y se añade un contracolorante:

Bacterias gram positivas: se tiñen de color púrpura

Bacterias gram se tiñen del contracolorante (rojo).

Las bacterias que no pueden diferenciarse son micobacterias y micoplasmas.

ESTUDIO DE LAS BACTERIASTinciones diferenciales:

Hematoxilina férrica y tricrómica: Protozoarios.

Plata metanamina: Elementos fúngicos en tejidos.

Azul de toluidina: Peumosistis en muestras respiratorias

Wright-Giemsa: Parásitos sanguíneos, cuerpos de inclusión de virus, clamidias, levaduras intracelulares y especies de pneumosistis.

ESTUDIO DE LAS BACTERIASTinciones flourescentes:

Naranja de acridina: detecta bacterias y hongos; se intercala en el ácido nucleico

Banca de calcofluor: detecta elementos fúngicos y especies de pneumosistis; la tinción se une a la celulosa y quitina de las paredes celulares.

Ac fluorescentes

Estreptococos, legionella, chlamydia, V. influenza, etc.

ESTUDIO DE LAS BACTERIASTinciones acidoresistentes

ZIHL-NEELSEN: Micobacterias

Tinción Kinyoung: tinción ácido resistente en frío.

Auramina-rodamina: igual que las anteriores salvo que usa pigmentos fluorescentes.

CLASIFICACIÓN FENOTÍPICA Por tinción de gram.

Morfología

Aspecto macroscópico (hemolítico, catalasa, coagulasa, pigmentación, tamaño y forma de las colonias)

Biotipificación.

Serotipificación (por antígenos en su superficie).

Aerobios AnaerobiosG

ram

+

Co

cos Catalasa + Staphylococo.

- Enterococo y Estreptococo

Bac

ilo

s

Actino-micetoscon ÁcMicólico

+ Corynebacterium, Nocardia, Mycobacterium

-

Otros Listeria actinomyces, clostridium, lactobacilus.

Gra

m-

Cocos y/o bacilos

Moraxella y Neisseria.

Bacilos Entero-bacteriacea

Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, Shigella, Yersinia.

Vibrio, Aeromonas, Champylobacter, Helicobacter, Pseudomonas, Pasteurellacae (haemophilus).

Otros géneros

acinobacter, bordetela, brusella, legionella

bacteroides, fusobacterium.

MEDIOS DE CULTIVOSEGÚN SU ESTADO FÍSICO (CONSISTENCIA).

Medios líquidos: o caldos. Se utiliza cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración.

Medios sólidos:

Gelatina: Derivado de proteinas. Es hidrolizada por muchas bacterias, y su punto de fusión es bajo

Agar-agar: Polímero de azúcares obtenido de algas marinas; soluble en agua caliente y se funde con 90ºC.

Medios semisólidos: Movilidad de las bacterias

MEDIOS DE CULTIVOSEGÚN SU UTILIZACIÓN.

Comunes: Para bacterias que no necesiten requerimientos especiales.

Enriquecimiento: Incorporan factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes

Selectivos: Favorece el crecimiento nutricionalmente de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana.

Inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una población microbiana.

MEDIOS DE CULTIVOSEGÚN SU UTILIZACIÓN. Diferenciales: Pone en evidencia características bioquímicas que

ayuden a diferenciar géneros o especies. De bacterias MacConkey, C.L.E.D., agar sangre .

Identificación: Comprueban alguna cualidad específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Agar Kligler, el medio de Simmons, medios CPS ID3 o Uriline ID.

Multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de células a partir de un microorganismo ya aislado.

Conservación: Se utilizan para conservar una cepa. Transporte: Cuando no pueden sembrarse inmediatamente.

MEDIOS DE CULTIVO Agar nutritivo: Para gérmenes que no presentan exigencias. Agar sangre: Para estreptococos; diversos tipos de hemólisis Agar chocolate: Para aislamiento de Neisserias y Haemophilus,. Agar Tripticase de soja: Gérmenes exigentes: Brucella,

Neisseria o Streptococcus.. Agar Chapman: Medio selectivo para aislar estafilococos Agar Baird-Parker: Para de estafilococos coagulasa +. Medio de Loeffler: Corynebacterium difteriae.

MEDIOS DE CULTIVO King: Permiten el crecimiento de Pseudomonas.

Schaedler: Es un medio con sangre y vit K; para anaerobios.

Caldo tioglicolato con resazurina: Aerobios, anaerobios y microaerófilos.

Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract): Legionella

Löwenstein-Jensen: Mycobacterium

CLED; DCLS; SS; Hektoen; Kligler; CPS, ID3: Enterococo

Agar MacConkey: Enterobacterias.

Agar Mueller-Hinton: Para antibiogramas.

MÉTODOS ESPECIALES PARA TOMA DE MUESTRAS Y TRANSPORTE El diagnóstico de las enfermedades infecciosas se basa en el

estudio de los síntomas y signos clínicos, así como en la demostración de la presencia de su agente productor.

Un mismo microorganismo puede dar una gran variedad de cuadros clínicos, en una o varias localizaciones

Toda la información diagnóstica que el laboratorio de microbiología puede proporcionar, depende de la calidad de la muestra recibida.

NORMAS BÁSICAS GENERALES

Recogida de la muestra.

Cada tipo de muestra requiere un material estéril para recogida.

Transporte.

Todas las muestras deberán ser enviadas lo más rápidamente posible al laboratorio y procesadas dentro de las primeras 2 hrs.

La mayoría de las bacterias resisten bien las temperaturas bajas, por lo que los productos pueden mantenerse en la nevera unas horas,

LCR , exudados, heces y anaerobios deben ser estar a >8ºC.

HEMOCULTIVOOBTENCION DE LA MUESTRA.

Localizar por palpación la vena que se va a puncionar, distinta en c/extracción.

Desinfectar con alcohol y luego con Yodo una zona de piel de unos 10 cm de diámetro en forma centrífuga, dejando secar 1 minuto.

Extraer la sangre sin tocar en ningún momento el campo desinfectado.

Introducir la sangre en los frascos evitando que entre aire en el frasco para cultivo en anaerobiosis.

Mover los frascos para que la sangre y el medio de cultivo se mezclen. Introducir los frascos a 37ºC.

La cantidad de sangre es de 15-20 ml (sangre: cultivo de 1:10).

HEMOCULTIVO 3 HC por paciente, previos al tratamiento antimicrobiano.

Intervalo >1hr entre extracciones

15 minutos en urgencias

Sepsis y endocarditis subaguda: Se reparten en 24 horas

HC (-): 3 muestras más al día siguiente.

Hasta su envío mantener a 35-37ºC; Nunca debe refrigerarse.

No son adecuadas las muestras procedentes de catéter, solamente en caso de que se sospeche infección de este

Se recomienda tomas del brazo opuesto y otras del brazo del catéter.

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIORFARINGO-AMIGDALINO.

Bajo visión directa, tocar con la torunda en todas las partes con exudado, membranas o inflamación.

Frotar las criptas tonsilares y la faringe posterior.

No tocar nunca la mucosa oral, lengua o úvula.

Investigar de forma rutinaria Streptococcus hemolítico gpo A

Difteria: Mandar porciones de membrana, una torunda faríngea y una nasofaríngea.

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIORNASOFARINGE.

Muestra indicada para la investigación de Bordetella pertussis.

Frotis: Pasar la torunda a través de la nariz, hasta la nasofaringe.

Mantener cerca del septum y suelo de la fosa. Rotar la torunda y extraerla.

Aspirado: Por tubo de teflón o un catéter conectado a una jeringa vía pernasal.

Las muestras deben procesarse antes de 2 horas.

Los cultivos de exudados nasales no sirven para el diagnóstico etiológicos de la sinusitis.

TRACTO RESPIRATORIO SUPERIORSENOS PARANASALES.

Desinfectar el lugar de la punción con Povidona.

Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior, o en el seno frontal por debajo del marco supraorbital del ojo.

Aspirar el líquido del seno.

Cuando no se obtenga líquido, instalar 1 ml de suero salino estéril y aspirarlo nuevamente.

Inyectar una parte de la muestra en un medio de tranporte para anaerobios; obtener al menos 1 ml de muestra.

TRACTO RESPIRATORIO INFERIORESPUTO, ESPUTO INDUCIDO.

No es una muestra representativa por su mezcla con secreciones.

Método fácil y rápido; su funcionalidad depende de su correcta obtención,

Método:

Enjuagar la boca con solución salina.

Obtener el esputo tras una expectoración profunda. Mínimo de 2 a 10 ml.

Se puede inducir con nebulizaciones de solución estéril y drenaje postural .

Envío inmediato al laboratorio (<2 hrs); si no , mantener a 4ºC.

No es útil para anaerobios.

La expectoración debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (>25 PMN y de 10 células epiteliales por campo 100x).

TRACTO RESPIRATORIO INFERIORASPIRADO TRAQUEOBRONQUIAL SIMPLE.

De valor análogo al esputo; no emplear anestésicos .

PUNCION TRANSTRAQUEAL.

Introducción del catéter a través de membrana cricotiroidea, inyectar solución salina y aspirar.

Si no hay cultivo, mantener a temperatura ambiente.

Útil en el diagnóstico de anaerobios o en graves que no expectoran o lo hacen con esputos de calidad insuficiente.

Neumonías que responden mal al tratamiento empírico y nosocomial.

TRACTO RESPIRATORIO INFERIORMUESTRAS OBTENIDAS POR FIBROBRONCOSCOPIA.

Salvo el cepillado bronquial, son contaminadas con flora orofaríngea.

Enviar inmediatamente al laboratorio; si no, conservar en 4ºC.

Es aconsejable recoger 3 esputos en días consecutivos a la FBC.

Métodos de obtención:

Broncoaspirado.

Cepillado bronquial por catéter telescopado cbct.

Lavado broncoalveolar lab: En procesos pulmonares intersticiales.

Biopsia transbronquial btb.

TRACTO RESPIRATORIO INFERIORMUESTRAS OBTENIDAS POR ABORDAJE PERCUTÁNEO.

Sólo deben emplearse cuando fracasen otros métodos menos invasivos o cuando la situación del enfermo haga imprescindible conocer el

diagnóstico etiológico. Aspiración: la mayor cantidad posible y depositar en tubo esteril

Biopsia, mínimo una cuña de 3ml; se divide en 2: uno se envía para estudio anatomo-patológico, y el otro, destinado a ser cultivado

TRACTO RESPIRATORIO INFERIORTÉCNICA OBTENCION DEL PRODUCTO.

Funcion Pulmonar Aspirativa (Ppa) Transtorácica.

Puncion Biópsica Pulmonar.

Biopsia Pulmonar Con Toracoscopio.

Biopsia Pulmonar Por Toracotomía Bpt.

Transtorácica.

Punción biopsia pulmonar.

Biopsia pulmonar con toracoscopio.

Biopsia pulmonar por torarocotomía (BPT).

Muestras extrapulmonares.

Líquido pleural.

Biopsia pleural.