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Avaliação da Resposta Imune Humoral
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Considerações gerais
Quem representa a Imunidade Humoral?
O que deve enfocar a avaliação da Imunidade Humoral?
Concentração de Ig séricaNíveis séricos das sub-classesProdução do anticorpoQuantificação de LB
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Desenvolvimento Imunológico da Criança
IMUNOGLOBULINAS
0 sem.10 20 30
Nasc.3 6 9
1 ano3 6 9 12
0
20
4060
80
100120
Níveis deimunoglobulinas
em adultos normais
IgGmaterna
IgGfetal
IgM
IgA
Figura cedida pelo Laboratório de Investigação Médica da LIM 56-Faculdade de Medicina da USP
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Cinética da Resposta de Anticorpo
T-dependent Ag; Resposta Secundária
* Specificity
• Lag phase• Log phase• Plateau phase• Decline phase
1o Ag 2o Ag
D a y s A f t e r I m m u n i z a t i o n
A b
T i
t e r
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Mudanças qualitativa da Resposta 1o and 2o
• Class variation– 1o - IgM
– 2o - IgG, IgA or IgE 1o Ag 2o Ag
Total Ab
IgM Ab
IgG Ab
D a y s A f t e r I m m u n i z a t i o n
A b
T i
t e r
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Mudanças qualitativa da Resposta 1o and 2o Responses
• Class variation• Affinity
– Affinity Maturation
1o Ag
D a y s A f t e r I m m u n i z a t i o n
A f
f I n
I t y
2o Ag
IgG AbIgM Ab
High Dose
Low Dose
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Eventos Celulares na Resposta 1a. T-dependent Ags
Lag Clonal selection
Log IgM Class switching
Stationary Decline Memory Cell
Pool
IgM
Memory Cells
IgG
1o Ag
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Eventos Celulares na Resposta 2a. T-dependent Ags
Lag phase Virgin cells Memory cells
Log phase Pool size IgG, IgA or IgE
Stationary Decline
Sustained production
IgM
Memory Cells
IgG
IgG
Memory Cells
Memory Pool
Virgin B cell
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Cinética da Resposta de Anticorpo T-independent Ags
4 Phases IgM
antibody No
secondary response
1o Ag 2o Ag
D a y s A f t e r I m m u n i z a t i o n
A b
T i
t e r
IgM Ab
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Concentração de Ig sérica
Quais Imunoglobulina são pesquisadas? Quais métodos são utilizados?
Imunodifusão radial simplesNefelometriaELISAImunoeletroforese
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Imunidade HumoralEletroforese de Proteínas
Figura cedida pelo Laboratório de Investigação Médica da LIM 56-Faculdade de Medicina da USP
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Imunidade HumoralELISA
Figura cedida pelo Laboratório de Investigação Médica da LIM 56-Faculdade de Medicina da USP
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Dosagem das sub-classes de IgG
Porque pesquisar?
Quais as proporções normais? IgG1(70%), IgG2 (20%), IgG3 (7%), IgG4 (3%)
Quais os métodos utilizados? ELISA RIA
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Subclasses de IgG
0 6m 1 1 4 6 8 100
20
40
60
80
100
% a
dulto
idade (anos)
IgG1IgG2IgG3IgG4
Oxelius VA, 1974
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Avaliação da produção de anticorpos
Objetivo Verificar a funcionabilidade dos
anticorpos produzidos Métodos
Títulos de iso-hemaglutininas Titulação de anticorpos para recall
antigens -adultos Titulação de anticorpos para antígenos
de desafio -crianças
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Avaliação da produção de anticorpos
Antígenos empregados no desafio:
Polissacarídeo de S. pneumoniae Polissacarídeo de H. influenzae Vacina SALK Vacina tetânica Obs: soro coletado antes e depois do
desafio
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Imunoglobulinas policlonais
Relacionado com os estados das doenças O aumento no soro pode resultar do
decréscimo do catabolismo e aumento da síntese.
Ensaios: Eletroforese da proteína do soro Imunoeletroforese Determinação das imunoglobulinas individuais
ou das cadeias leves das imunoglobulinas
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O aumento de IgG tende a predominar nas respostas crônicas e nas doenças hepáticas;
Aumentos de IgA tendem a predominar nas infecções de peles, aparelhos respiratório, intestinal e renal.
A IgM está relacionada às fases agudas das infecções primárias e às infecções intra-uterinas. Na cirrose biliar primária, a IgM está marcadamente elevada, e algumas vezes de forma conjunta com a IgG.
A IgE normalmente encontra-se elevada na asma e em outros quadros alérgicos, especialmente nas crianças.
As infecções bacterianas crônicas cursam com o aumento de todas as imunoglobulinas.
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Imunoglobulinas Monoclonais
produto de um único clone de células plasmáticas, produzindo imunoglobulinas de estrutura idêntica.
são chamadas de paraproteínas e podem ser polímeros, monômeros ou fragmentos da molécula de imunoglobulina.
Mieloma múltiplo (neoplasia dos plasmócitos).
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Quantificação dos LB
CD19
CD20
CD21
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TECNOLOGIA QUE MEDE MÚLTIPLAS CARACTERÍSTICAS EM UMA CÉLULA QUE MIGRA EM FLUXO.
TAMANHO COMPLEXIDADE OU GRANULOSIDADE FLUORESCÊNCIAS
CITOMETRIA DE FLUXO
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Forward Angle Light Scatter
FALS Sensor
Laser
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90 Degree Light Scatter
FALS Sensor
90LS Sensor
Laser
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Laser
Fluorescence Detectors
Freq
Fluorescence
FALS Sensor
Fluorescence detector(PMT3, PMT4 etc.)
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CD3+CD8+CD3+CD8-
CD3-CD8+
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Ensaios de linfoproliferação com: IL-4 IL-2 POKEWEED PROTEÍNA ESTAFILOCÓCICA
Outros Ensaios
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QUANTIFICAÇÃO DAS IMUNOGLOBULINAS
RESPOSTA Ag ESPECÍFICA
QUANTIFICAÇÃO DAS SUBCLASSES DE IgG
RESPOSTA ANTI-PROTEÍNAS: DIFTERIA, TÉTANO
RESPOSTA ANTI-CARBOHIDRATOS: PNEUMOCOCOS, ISOHEMAGLUTININAS
RESPOSTA CONTRA NEOANTÍGENOS
Resumindo..........