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ASOCIACIÓN ENTRE MUTACIONES SOMÁTICAS EN EL GEN PTEN E HIPERMETILACIÓN DE LOS GENES
hMLH1, hMSH2 y hMSH6 EN CARCINOMA DE ENDOMETRIO
Amores Martín, M.A.; Cieza Borrella, Clara; González Valero, J.M.; Núñez Lozano M ; Sancho de Salas M ; García Hernández J L ;Núñez Lozano, M.; Sancho de Salas, M.; García Hernández, J.L.; García Iglesias, A.; Rodríguez Sánchez, C.A.; González Sarmiento, R.; Cruz Hernández, J.J.
Introducción
‐ 15‐20 casos por cada 100.000 mujeres/año.
Tumor de endometrio
‐ 75% de los casos en mujeres postmenopaúsicas.
‐ Buen pronóstico por detección precoz (80% en
estadío I).Endometrioide Seroso Células claras
‐ 95% esporádicos Clasificación clínico‐patológicaTipo I Tipo II
Incidencia 80% >20%
Edad Pre‐postmenopáusica >60 años
Histología Endometrioide Serosos, células claras
Diferenciación Bajo grado Alto grado
Lesión precursora Hiperplasia Atrofia
Estimulación estrogénica Alta Ausente
Comportamiento clínico Indolente Agresivo
IntroducciónClasificación molecular
Tipo I Tipo IIPTEN
Mutaciones somáticas PTEN, KRAS, CTNNB1 p53, CDH1, p16
Otras alteraciones MSI, alteraciones en MMR LOH
IntroducciónMMR
hMLH1
hMSH2hMSH2
hMSH6
MutSα: MSH2-MSH6
MutSβ: MSH2-MSH3
MutLα: MLH1-PMS2
Objetivosj
‐ Analizar la organización del gen PTEN.Analizar la organización del gen PTEN.
‐ Estudiar patrones de metilación alterados enlos promotores de los genes hMLH1, hMSH6 yhMSH2.
Pacientes y Métodos 28 endometrioidesy‐ 42 muestras de carcinoma endometrial esporádico(69±10 años). 11 muestras de sangre periférica.
5 serosos
1 células claras( ) g p
2 mixtos
6 sarcomas‐ Extracción de DNA, RNA y proteínas.
PCR y electroforesis
CSGE‐Heterodúplex
Control sin digestión de HhaI
‐ Análisis de mutacionesSecuenciación directa
Pertenencia alélica PolyPhen PSIPRED
Control con digestión de HhaI
en PTEN Pérdida de heterocigosidad
Expresión de proteínas
PolyPhenSNPS3DPmutSIFT
PSIPREDmicroRNAESEfinder
Paciente sin digestión de HhaI
Análisis de la metilación de hMLH1 hMSH6 y hMSH2
Estudios “in sílico”
MS MLPA
Panther Paciente con digestión de HhaIMethylation
‐ Análisis de la metilación de hMLH1, hMSH6 y hMSH2 MS‐MLPA
ResultadosPTEN
‐22 casos con mutaciones patogénicas, todas ellas exónicas (52.38% de los casos).
‐Todas en pacientes con tumores con componente tipo I (endometrioides, mixtos y
)
PTENMMR
Con mutaciónpatogénica
Sin mutaciónpatogénica
Ausencia decarcinosarcomas) y en el sarcoma del estroma .
‐Dentro de los endometrioides la incidencia de mutaciones en el gen PTEN aumenta a un
67 8%
Ausencia de hipermetilación
9 14
Hipermetilación en 1 componente
6 267.8%.
MMR
1 componente
Hipermetilación en 2 componentes
3 2
‐ 38 1% de los casos con hipermetilación de hMLH1 21 4% en hMSH2 y 26 2% en hMSH6
‐ 23 casos sin hipermetilación.Hipermetilación en 3 componentes
4 2
38.1% de los casos con hipermetilación de hMLH1, 21.4% en hMSH2 y 26.2% en hMSH6.
‐ 6 casos con hipermetilación de los 3, 3 casos con hipermetilación de hMLH1 y hMSH2 y
2 casos con hipermetilación en hMLH1 y hMSH62 casos con hipermetilación en hMLH1 y hMSH6.
Conclusión
Mutaciones en el gen PTEN se asocian sobre todo con hipermetilación gde los promotores (no con mutaciones en genes reparadores de DNA
o inestabilidad de microsatélites).
M i á i d l L hi il ió d lMutaciones somáticas de los genes reparadores se producirían de manera simultánea a las mutaciones en otros genes como el gen PTEN
La hipermetilación de los promotores de genes reparadores favorecería las mutaciones secundarias en otros loci, principalmente en el gen PTENgenes como el gen PTEN. principalmente en el gen PTEN.
¡Muchas Gracias!¡Muchas Gracias!
Cl Ci B ll l b@ lClara Cieza Borrella: [email protected] de Medicina Molecular, Departamento de Medicina
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