aplicación práctica en avicultura · 2018. 12. 19. · pruebas de sensibilidad a los...

©2018 Elanco or its affiliates©2018 Elanco or its affiliates

aplicación práctica en avicultura

ESLAYAVP00035

Felix Ponsa

Technical Consultant Iberia

Elanco Animal Health

,

©2018 Elanco or its affiliates©2018 Elanco or its affiliates

¿Qué es AviPro® PLATE ?

2

Es un test de microdilución para determinar la sensibilidad bacteriana a los antibióticos y para identificar las cepas vacunales de AviPro®

SALMONELLA VAC E, VAC T y DUO

Es un método estándar recomendado para las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos (OIE)

Ha sido desarrollado por Lohmann - Elanco en cooperación con Merlin Diagnostika GmbH y veterinarios avícolas

ESLAYAVP00035

©2018 Elanco or its affiliates©2018 Elanco or its affiliates 4

Diseño de la Placa

ESLAYAVP00035


Panel de agentes antimicrobianos en cada placa

AviPro® PLATE

No Class of antibiotics Agent Abbreviation Remarks

1 β- lactam antibiotics Amoxicillin AMX

2 “ Oxacillin OXA

3 “ Penicillin G PEN

4 “ Ceftiofur CET

5 “ Cefpodoxime-Proxetil CPP

6 “ Cefotaxime CTX

7 Polypeptide antibiotics Colistin COL

8 Fluoroquinolones Enrofloxacin ENR

9 Macrolides Erythromycin ERY

10 “ ErythromycinD ERYD Marcador de Vacuna

11 “ Tilmicosin TILM

12 “ Tylosin TLS

13 Lincosamides Lincomycin LIN

14 Aminoglycosides Neomycin NEO

15 “ Streptomycin STR Marcador de Vacuna

16 Lincosamides/Aminocyclitoles Lincomycin-Spectinomycin LIS

17 Ansamycins Rifampicin RAM Marcador de Vacuna

18 Aminocyclitols Spectinomycin SPT

19 Tetracyclines Tetracycline / Doxycycline TET / DOX Clase representativa

para chlortetracycline,

oxytetracycline,

doxycycline.

20 Pleuromutilins Tiamulin TIA

21 Folate pathway inhibitors Trimethoprim-sulfamethoxazole T/S

ESLAYAVP00035


Contexto

En la Unión Europea, la legislación de zoonosis considera la vacunación de las aves de corral contra Salmonella como una medida complementaria a las buenas prácticas de manejo e higiene

La legislación europea señala la necesidad de diferenciar bacteriológicamente las cepas de campo de Salmonella de las cepas vacunales

Lohmann - Elanco desarrolló AviPro®PLATE para proporcionar un métodoestandarizado que permite el cumplimientode la normativa de la UE

ESLAYAVP00035

https://www.salmonella360.com/cms3/assets/fullsize/2272

http://eur-lex.europa.eu/legal-content/EN/TXT/PDF/?uri=CELEX:32006R1177&from=en

http://eur-lex.europa.eu/legal-content/EN/TXT/PDF/?uri=CELEX:32006R1177&from=en


AviPro® SALMONELLA VAC E

AviPro® SALMONELLA VAC T

AviPro® SALMONELLA DUO

Marcador de superficie

• Sensibilidad aumentada a los antibióticos (Ssq)

• Marcador anti-epidémico (Rtt, macrólidos)

• Sensibilidad a la Eritromicina (VAC E y VAC T)

Marcador de atenuación

• Tiempo prolongado de generación

• Mutación por deriva metabólica (resistenciaantibiótica cromosómica)

• Resistencia a Rifampicina (VAC E y VAC T)

• Resistencia a Estreptomicina (VAC E)

• Resistencia a Ácido nalidíxico (VAC T)

AviPro® Salmonella Vac E (Rif 12/Sm 24/Ssq)

AviPro® Salmonella Vac T (Rif 9/Nal 2/Rtt)

ESLAYAVP00035


Determinación de las cepas vacunales segúnel principio de resistencia a los antibióticos

Concentración Salmonella

Vac E

Salmonella

Vac T

SE o ST Cepa

de campo

Rifampicina 200 µg/ml Resistente Resistente Sensible

Estreptomicina 200 µg/ml Resistente Sensible Sensible

Ac. Nalidíxico 20 µg/ml Sensible Resistente Sensible

Eritromicina 15-30 µg/ml Sensible Sensible Resistente

SALMONELLA DUO

Ficha Técnica AviPro ® SALMONELLA DUO

ESLAYAVP00035


Test para la identificación de Cepas Vacunales

Diferenciación optimizada de cepas de Salmonella de

campo y cepas de Salmonella de vacunas AviPro®:

– AviPro® Salmonella Vac E

– AviPro® Salmonella Vac T

– AviPro® Salmonella DUO

Control de la toma vacunal

ESLAYAVP00035


Durante la vacunación

1-2 días post

vacunación

3-4 días post

vacunación

5 dias post vacunación

Observación visualMuestras de agua

CalzasHisopos cloacales

HígadoBazo

CiegosContenido cecal

Programa de muestreo para verificar la toma de vacunas vivas de Salmonella de Elanco

ESLAYAVP00035


Diseño de la Placa – Antibióticos marcadores de vacuna AviPro®

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

T

E

A PEN

2

AMX

16

ENR

2

CET

2

TET

8

TILM

16

LIS

8/32

OXA

2

ERY

4

DOX

2

DOX

4

DOX

8

S

T

B PEN

0.5

AMX

8

ENR

1

CPP

4

TET

4

TILM

8

T/S

2/38

OXA

0,25

ERY

1

TIA

16

ERYD

30

STRE

200

C PEN

0.25

AMX

4

ENR

0.5

CTX

1

TET

2

NEO

16

T/S

1/19

COL

4

ERY

0.5

TIA

8

ERYD

20

RAM

50

1 D PEN

0.125

AMX

2

ENR

0.25

TLS

0.5

TLS

1.0

NEO

8

T/S

0.5/9.5

COL

2

ERY

0.25

LIN

4

ERYD

10

Growth

Control

T

E

E PEN

2

AMX

16

ENR

2

CET

2

TET

8

TILM

16

LIS

8/32

OXA

2

ERY

4

DOX

2

DOX

4

DOX

8

S

T

F PEN

0.5

AMX

8

ENR

1

CPP

4

TET

4

TILM

8

T/S

2/38

OXA

0,25

ERY

1

TIA

16

ERYD

30

STRE

200

G PEN

0.25

AMX

4

ENR

0.5

CTX

1

TET

2

NEO

16

T/S

1/19

COL

4

ERY

0.5

TIA

8

ERYD

20

RAM

50

2 H PEN

0.125

AMX

2

ENR

0.25

TLS

0.5

TLS

1.0

NEO

8

T/S

0.5/9.5

COL

2

ERY

0.25

LIN

4

ERYD

10

Growth

Control

Los pocillos que contienen los antibióticos marcadores de las cepas vacunales Elanco se

resaltan con el color Amarillo:

• Sensibilidad: Erythromycin (ERYD)

• Resistencia: Streptomycin (STRE) / Rifampicin (RAM)

ESLAYAVP00035


MIC breakpoints de antibióticos marcadores para las

cepas vacunales AviPro®

Antimicrobial agent1

(Strain)

Agent

abbreviation

Breakpoint (µg/mL)

LB MIC range

Erythromycin

Chicken

S.E. Sm24/Rif12/Ssq (vaccine strain)

S.E. Leipzig (field strain)

S.Tm. Nal2/Rif9/Rtt (vaccine strain)

S.Tm. Moskau 415 (field strain)

ERD

10

10

10

10

< 20

≥ 30

< 20

≥ 30

Rifampicin

Chicken



S.Tm. Nal 2/Rif9/Rtt (vaccine strain)

S.Tm. Moskau 415 (field strain)

RAM

50

50

50

50

> 50

< 50

> 50

< 50

Streptomycin

Chicken



STR

200

200

> 200

< 200

Para cada marcador, se muestra la concentración minima inhibitoria (MIC)

para el breakpoint inferior (LB) en combinación con el rango MIC.

ESLAYAVP00035


AviPro® Salmonella Vac E AviPro® Salmonella Vac T

Cepa de Campo S. E. Cepa de Campo S. T.

STRE

200

RAM

50

ERYD

20

ERYD

30

Sensibles a antibióticos, i.e. No crecimiento bacteriano

Resistente a antibióticos, i.e. Crecimiento bacteriano

ERYD

10

STRE

200

Resultados: Identificación de cepas vacunales

AviPro® SALMONELLA Vac E, Vac T y DUO

ESLAYAVP00035


SE

vac

cin

e st

rain

Rif

12/S

m 2

4/S

sqProcedimiento del TestAviPro® PLATE → Lectura visual

ST

vac

cin

e st

rain

Rif

9/N

al2/

Rtt

SE

vac

cin

e st

rain

Rif

12/S

m 2

4/S

sq

ST

vac

cin

e st

rain

Rif

9/N

al2/

Rtt

Estreptomicina es el marcador clave para la

diferenciación entre ambas cepas vacunales

SE → Resistante

(crecimiento)

ST → Sensible

(no crecimiento)

ESLAYAVP00035


Test de Sensibilidad Antimicrobiana - Antibiograma

– Valoración cuantitativa de la sensibilidad in vitro

de bacterias gram-positivas y gram–negativas a

los antibióticos

– Guía para una intervención terapéutica

– Detección de la resistencia antimicrobiana en

las manadas de aves de corral:

Cambios en la prevalencia de resistencia

antimicrobiana (“monitoreo”)

Aparición de resistencias antimicrobianas

(“vigilancia”)

ESLAYAVP00035


– Test de sensibilidad a los antimicrobianos

muy común

– Valoraciones cualitativas (S, I, R)

– Falta de valores “breakpoints” veterinarios

específicos (MICs)

– Variedad de normas nacionales, p. e. DIN

58940, NCCLS, BSAC, CA-SFM, WRG

– Pobre correlación entre métodos

– Método poco robusto

Método de difusión en agar (discos)

Test de Sensibilidad Antimicrobiana - Antibiograma

ESLAYAVP00035


Protocolo del ensayo

– Descrito en el Manual AviPro® Plate

– Procedimiento de acuerdo a:

– NCCLS: Document M31-A2, Vol. 22,

No. 6, 2002, Wayne, PA, USA

– CLSI: Document M31-A3, Vol. 28,

No. 8, 2008, Wayne, PA, USA

– Atención: Versión del Manual y

Referencia del Lote

ESLAYAVP00035


Toma de muestras

Hisopos

cloacales Heces

Hisopos

visceralesVísceras

Qué podemos esperar?

E. coliSalmonella (cepas de campo

y/o cepas vacunales)

Campylobacter

Pseudomonas

StaphylococcusStreptococcus

etc.

ESLAYAVP00035


Muestra

Aislamiento e Identificación

Cultivo puro

Procedimiento del Test

AviPro® PLATE → Partir de un cultivo puro

ESLAYAVP00035


Procedimiento del test

Colonia de cultivo puro en NaCl 0,9%

(0.5 McFarland standard)

Bacterias

Gram-negativas

Bacterias

Exigentes (i.e. Haempnhilus)

Bacterias

Gram-positivas

Inocular 50 µl en 10-11 ml caldo Mueller Hinton

o

Inocular 50 µl en 10-11 ml caldo ISO-Sensitest

Inocular 100 µl en 10-11 ml caldo Mueller Hinton

o

Inocular 100 µl en 10-11 ml caldo ISO-Sensitest

Inocular 200 µl en 10-11 ml H-broth

ESLAYAVP00035


Dispensar en Placa

ESLAYAVP00035


Caldo inoculado

Dispensar 100 µl en cada pocillo de la placa AviPro® PLATE y sellar la

parte superior de la placa

Incubar a 35 - 37 °C

18 - 24 hours

Lectura de placas visualmente o con espectrofotómetro

Procedimiento del Test

ESLAYAVP00035


Resultados

– Medición automática o visual del crecimiento bacteriano

– Determinación de la concentracíon mínima inhibitoria

(MIC) basado en valores “breakpoints” definidos

– Interpretación:

• Sensible (S)

• Intermedio (I)

• Resistente (R)

ESLAYAVP00035


• Espectrofotómetro para garantizar una interpretación de resultados objetiva y sin sesgos

• MICRONAUT Software Program

Lectura Automática

ESLAYAVP00035


Lectura Visual

ESLAYAVP00035


Interpretación del “breakpoint” de un agente antimicrobiano

MIC: minimum inhibitory concentration

CMI: concentración mínima inhibitoria

ESLAYAVP00035


MICbreakpointsy normas

interpretativasde agentes

antimicrobianos

ESLAYAVP00035


Interpretación de Resultados: S, I, R

Verde: Crecimiento / Rojo: No crecimiento

ESLAYAVP00035


Características del producto

– 100 placas por paquete con selladores

de placa adhesivos

– Análisis de 2 muestras diferentes por

placa

– 21 agentes antimicrobianos

– 3 marcadores de vacuna

– Almacenar a 15 ºC – 25 ºC

– Almacenamiento de las placas a

temperatura ambiente hasta 24 meses

– Transporte normal

ESLAYAVP00035


Resumen

– Método fiable de diferenciación de las cepas vacunales de Salmonella

de Elanco y las cepas de Salmonella de campo

– Control de la toma vacunal

– Test in-vitro para la determinación de la sensibilidad de bacterias gram-

positivas y gram-negativas a los antibióticos

– Guía para la intervención terapéutica

– Análisis cuantitativos objetivos e interpretación de la concentración

mínima inhibitoria (MIC) basado en valores “breakpoint” definidos

– Procesamiento de gran número de muestras mediante automatización

– Método de laboratorio robusto

ESLAYAVP00035


Referencias

1. AviPro® PLATE Instruction Manual

2. Commission Regulation (EC) No 1177/2006

3. ISO 6579:2002/DAmd 1. International standard for detection of

Salmonella spp

4. Summary of product characteristics AviPro® Salmonella DUO

ESLAYAVP00035


Muchas gracias

por su atención

Elanco Animal Health

ESLAYAVP00035

aplicación práctica en avicultura · 2018. 12. 19. · pruebas de sensibilidad a los...

Documents