análise do efeito antimicrobiano do tratamento em contínuo
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Instituto de Higiene e AmbienteInstitut für Hygiene und Umwelt IHUInh. Dr. J. Prucha Steinstraße 10 35457 Lollar Tel. 06406-75032 Fax 06406-75033Relatório nº. G03-0102.DOC de 18.03.2003
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Análise do efeito antimicrobiano
do tratamento em contínuo com o “Wellan” –
sistema de tratamento de água, em alguns
microorganismos seleccionados
Ensaio II
pedido por:IAB, Klaus Wagner
Instituto de Bioenergética Aplicadaem Bietigheim-Bissingen
pedido a: 10.02.2003
Ensaio nº. G03-0102.docLollar, 18.03.2003
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Introdução
As primeiras experiências efectuadas para a análise do efeito antimicrobiano
do “Wellan” – sistema de tratamento da água, encontram-se descritas no
ensaio G03-0076.doc de 12.02.2003.
No presente ensaio, instalou-se um anel “Wellan” na canalização principal do
Institut für Hygiene und Umwelt (IHU) - Instituto de higiene e ambiente, em
Lollar na rua Steinstraße 10. Posteriormente, foram pesquisados na água,
microorganismos específicos e determinada a sua concentração ao longo do
tempo. Como ensaio de referência, recolheu-se água de um local bastante
distanciado do IHU em Lollar, água essa que foi igualmente submetida à
mesma análise ao longo do tempo.
Nesta primeira análise do efeito antimicrobiano do “Wellan” – sistema de
tratamento da água, verificou-se uma diminuição das concentrações dos
microorganismos E. coli e Estreptococos fecais ao longo do tempo. Nos
microorganismos Pseudonoma aerugirosa e Legionella pneumophilc, não foi
possível tirar conclusões do efeito “Wellan” – sistema de tratamento de água.
Por essa razão, efectuou-se outro ensaio, colocando-se o anel “Wellan” a
actuar na água contaminada pelos microorganismos. Os resultados destas
análises estão apresentados nas páginas seguintes.
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microorganismos testados
Para analisar o efeito antimicrobiano do anel “Wellan” foram pesquisados os
microorganismos.
- E.coli e
- Pseudonoma aerugirosa
Concentração dos microorganismos testadosOs microorganismos testados foram introduzidos nos ensaios em diferentes
concentrações, desde
- 100 UFC/100 ml até
- 1.000 UFC/100 ml.
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desenvolvimento das análises
Para as experiências com o tratamento contínuo do sistema “Wellan”, foi
enchido um crióstato no IHU, com 5 litros de água.
Como é demonstrado na fig. 1, o anel “Wellan” foi instalado numa pequena
tubagem à qual se encontram ligadas duas mangueiras em PVC, de entrada e
saída do crióstato. Após a contaminação da água canalizada com os
respectivos microorganismos, esta foi bombeada continuamente, mais de 24
horas, e analisada em intervalos de tempo de:
E.coli Pseudonoma aerugirosa
- 0 horas, - 0 horas,
- 1 hora, - 1 hora,
- 2 horas, - 2 horas,
- 4 horas, - 4 horas,
- 7 horas, - 7 horas,
- 24 horas, - 24 horas,
Em cada intervalo de tempo foi retirado 100ml amostra de água e efectuada a
quantificação destes microorganismos.
Para ensaio de referência, foi instalado um segundo crióstato numa firma a 2
km de distância do IHU (fig. 2). Nesta instalação não se colocou nenhum anel
“Wellan” entre a entrada e a saída do crióstato, igualmente enchido com 5 litros
de água canalizada e contaminada com microorganismos. A água, foi
bombeada em contínuo, à semelhança do ensaio montado no IHU e com os
mesmos intervalos de tempo do ensaio anterior foram utilizadas amostras e
efectuada a quantificação dos microorganismos.
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fig. 1: montagem com anel “Wellan” nas instalações do Institut für Hygiene und Umwelt em Lollar
fig. 2: montagem sem anel “Wellan” na outra firma, em Lollar, a 2 km do IHU.
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Adicionalmente, na outra firma, montou-se um outro ensaio de referência sem
bombeamento de água contaminada e, consequentemente sem acção do anel
“Wellan”. Além disso, encheu-se também uma garrafa de vidro com 5 litros de
água canalizada desse mesmo local. Contaminou-se a água com os
microorganismos e deixou-se ficar durante 24 horas. À semelhança das
experiências com água bombeada, também neste caso foram retiradas
amostras para a determinação da concentração de microorganismos.
Para determinar a concentração dos microorganismos nas diferentes amostras,
filtraram-se 100ml de amostra recolhida através de uma membrana estéril,
colocando-a, posteriormente, no meio de cultura específico.
Para a pesquisa de E. coli foi utilizado Endo-Agar e para Pseudonoma
aerugirosa utilizou-se Cetrimid-Agar. Depois de um tempo de incubação de 48
horas a 36ºC quantificou-se o número de colónias no meio de cultura. Na
pesquisa de Pseudonoma aerugirosa, efectuou-se adicionalmente inoculação
em Malachitgrün-Bouillon, introduziu-se 100 ml de amostra de cada ensaio em
100 ml de concentração dupla de Malachitgrün-Bouillon, incubando-se
igualmente 48 horas em 36ºC.
Os resultados das análises estão apresentados nas páginas seguintes.
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Resultados das análises
Tabela 1: - Número de colónias de E. coli em 100ml de amostra, nos ensaios
de bombeamento do crióstato, com e sem anel “Wellan”.
duração
do ensaio
[h]
concentração de
E. coli no ensaio
do crióstato com
anel “Wellan”
(IHU)
[UFC/100ml]
Ensaio de
referência:
concentração E.
coli no ensaio do
crióstato sem
anel “Wellan”
(na outra firma)
[UFC/100ml]
Ensaio de
referência:
concentração de
E. coli no teste
standart no
crióstato sem
anel “Wellan”
(na outra firma)
[UFC/100ml]
0 72 ca.1000 ca.10001 0 ca.1000 ca.10002 0 ca.1000 ca.10004 0 ca.1000 ca.10007 0 ca.1000 ca.100024 0 ca.1000 ca.1000
O número de colónias de E. coli em 100ml de amostra, ao longo do tempo,
estão representados graficamente na figua 3.
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fig.3: representação gráfica da variação da concentração de E. coli ao longo do
tempo, nos ensaios do crióstato, com e sem anel “Wellan”
vermelho(■): ensaio do crióstato com anel “Wellan” (realizado no IHU)
azul (▲): ensaio do crióstato sem anel “Wellan” (realizado na outra firma)
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IHU IHU
E. coli no início E. coli – 1 hora
fig. 4 determinação da concentração de E.coli no ensaio do crióstato com anel
“Wellan”
Filtraram-se 100 ml de amostra em membrana estéril. Esta foi depois colocada em Endo-Agar e
incubado 48 horas em 36 ºC.
esquerda: 72 UFC/100 ml concentração de E. coli no início do tratamento com o anel “Wellan”
direita: não eram visíveis colónias de E. coli após 1 hora de bombeamento
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Tabela 2: - Número de colónias de Pseudonoma aerugirosa em 100 ml de
amostra, nos ensaios de bombeamento do crióstato, com e sem anel “Wellan”
duração
do ensaio
[h]
concentração de
Ps. aerugirosa no
ensaio do
crióstato com
anel “Wellan”
(IHU)
[KBE/100ml]
Ensaio de
referência
Ps. aerugirosa no
ensaio do
crióstato sem
anel “Wellan”
(na outra firma)
[KBE/100ml]
0 78 971 28 952 4 874 0 886 0 11024 0 95
A variação da concentração de Pseudonoma aerugirosa ao longo do tempo
está representada graficamente na fig. 4
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fig.5: representação gráfica da variação da concentração de Pseudonoma
aerugirosa ao longo do tempo, nos ensaios com bombeamento do crióstato,
com e sem anel “Wellan” vermelho(■): ensaio do crióstato com anel “Wellan” (realizado no IHU)
azul (▲): ensaio do crióstato sem anel “Wellan” (realizado na outra firma)
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fig.4: determinação da concentração de Pseudonoma aerugirosa, nos ensaios
do crióstato, com e sem anel “Wellan”
Filtraram-se 100 ml de amostra em membrana estéril. Esta foi depois colocada em Cetrimid-
Agar e incubado 48 horas em 36 ºC
A cor amarelada demonstra Pseudonoma aerugirosa.
em cima: ensaio do crióstato sem anel “Wellan”, na outra firma em Lollar
em baixo: ensaio do crióstato com anel “Wellan”, no IHU, Lollar
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fig. 5: confirmação de Pseudonoma aerugirosa em Malachitgrün-Bouillon, nos
ensaios do crióstato, com e sem anel “Wellan”.
100 ml de amostra de cada ensaio foram inoculados em Malachitgrün-bouillon, incubando-se
48 horas em 36 ºC.
Turvação demonstra um indício de Pseudonoma aerugirosa
direita: ensaio do crióstato sem anel “Wellan”, após 24 horas de ensaio, na outra firma em
Lollar
esquerda: ensaio do crióstato com anel “Wellan”, após 24 horas de ensaio no IHU, Lollar
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página 14Sumário
Nas experiências acima apresentadas foi analisado o efeito do “Wellan” nos
microorganismos E. coli e Pseudonoma aerugirosa. Foram efectuados testes
com concentrações entre 10 e 1000 UFC/100 ml.
Preparou-se num crióstato um banho-maria de água canalizada juntamente
com microorganismos que se pretendiam testar. Através de uma bomba,
bombeou-se água contaminada por uma tubagem em PVC. Na montagem no
Instituto foi aplicado na tubagem um pedaço de cano galvanizado, no qual foi
instalado o anel “Wellan” n.º2. Paralelamente, foi instalado como ensaio de
referência numa outra firma em Lollar (cerca de 2km distante), o mesmo
sistema, mas sem anel “Wellan”. A água para o ensaio foi igualmente recolhida
no local da experiência e os microorganismos igualmente adicionados.
Após 1, 2, 4, 7 e 24 horas recolheram-se amostras e analisaram-se
microbiologicamente, sendo nitidamente visível a ausência de E. coli após 1
hora de ensaio, na montagem com o anel “Wellan”, ou seja, os
microorganismos foram mortos. Pelo contrário, na outra firma, a concentração
de E. coli no ensaio de referência manteve-se continuamente inalterada, na
amostra Standhard de 24 horas. Os resultados foram registados
fotograficamente e os dados apresentados graficamente.
No segundo ensaio, foram introduzidos 100 UFC/100 ml de Pseudonoma
aerugirosa nos dois lugares mencionados. Foi claramente notório, que a
Pseudonoma revela uma maior resistência, atendendo que apenas ao fim de 4
horas foi comprovada a total destruição dos microorganismos. Ao fim de 2
averiguou-se uma destruição em mais de 90%. Na figura 4 estão apresentados
os resultados obtidos na filtração de 100 ml de amostra.
A inserção do tratamento “Wellan”, induz a diminuição da concentração de
Pseudonoma (na imagem, uma diminuição da cor típica amarelo – esverdeado
fluoreszierende), enquanto que no ensaio de referência fica largamente
inalterado.
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Após 2 horas, ainda se identificaram Pseudonomas e mesmo após 6 horas,
estas ainda se apresentavam em concentração elevada.
Analisaram-se também os resultados da pesquisa adicional à Pseudonoma
aerugirosa em Malachitgrün-Bouillon.
Após o ensaio de 24 horas, analisou-se a água com tratamento “Wellan” e a
amostra do ensaio de referência. O resultado destas análises mostra, que a
água com o “Wellan” 100% livre de Pseudonoma aerugirosa. Em contrapartida,
a água da amostra do ensaio de referência revela um crescimento de
Pseudonoma, uma vez que após a incubação, o frasco apresentava-se
colorado turvo. A restante identificação microbiana mostra, que no aumento
dos microorganismos, parte se trata de Pseudonoma aerugirosa.
Conclusão
No âmbito desta segunda série de experiências foi analisado o efeito do anel
“Wellan” sobre E. coli e Pseudonoma aerugirosa. Promoveu-se o contacto da
água com anel Wellan” através do seu bombeamento, isto é, submeteu-se os
microorganismos ao efeito do anel durante 24 horas.
E. coli foi destruída no espaço de uma hora, enquanto que a Pseudonoma
aerugirosa demonstra maior resistência. Estes microorganismos foram
totalmente destruídos após 6 horas.