andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková i. · komplexné andrologicko-genetické...
TRANSCRIPT
![Page 1: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/1.jpg)
Komplexné andrologicko-genetické
vyšetrenie spermií
v manažmente liečby mužskej infertility
Černáková I.
ReproGen, s.r.o., Bratislava 26.4.2017
![Page 2: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/2.jpg)
PRÍČINY MUŽSKEJ NEPLODNOSTI
Frekvencia infertility vo svete celkovo 15 – 20%
Samotné gynekologické príčiny 40 %
Samotný andrologický faktor 40 %
Idiopatická neplodnosť 20 %
![Page 3: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/3.jpg)
WHO DOPORUČENIE
A
VÝVOJ KVALITY SPERMIÍ
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
1951 1964 1987 2023
2010
15 mil/ml
![Page 4: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/4.jpg)
HISTORICKÝ VÝVOJ NÁZOROV
A PRÍSTUPOV K VYŠETRENIAM SPERMIÍ
Genetické metódy v asistovanej reprodukcii
- testy zamerané na genetický obsah a integritu DNA
spermií
Štandardné vyšetrenie SPG
Pokročilé metódy – funkčné testy
/väzba a penetrácia spermie cez ZP, fúzia s oocytom/
80. roky
Éra IVF
90. roky
Éra ICSI
Minimalizácia významu klasických a funkčných testov
- nezávislosť ICSI na základných parametroch SPG
a integrite funkcií spermie
21. storočie
Éra genetiky
v AR
![Page 5: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/5.jpg)
PRÍČINY PORÚCH MUŽSKEJ PLODNOSTI
Endogénne faktory
poruchy tvorby spermií
poruchy priechodnosti semenotvorných kanálikov
genetické faktory (translokácie, numerické CHA, Y-delécie, mutácie
CFTR, mutácie v iných génoch, fragmentácia DNA, poruchy reparácie)
iné (anatomické, hormonálne ...)
Exogénne faktory
exhaláty
chemizácia - herbicídy, pesticídy, insekticídy
rádioaktívne žiarenie, mikrovlnové žiarenie, mobily
priemyselná záťaž - ťažké kovy, teplárne
životný štýl - nikotín, alkohol, drogy, obezita, sauna/termálne kúpele
zápalové ochorenia, rádio-/chemoterapia
![Page 6: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/6.jpg)
Spermatogenéza
![Page 7: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/7.jpg)
7
Basal lamina
Sertolli cell
![Page 8: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/8.jpg)
Poškodenie spermií
Vrodené – paternálny imprinting
Chromozómová aneupoidia
Poruchy morfológie
Poruchy vitality
(nedostatok mitochondrií)
Zvyšky cytoplazmy
Protamínová insuficiencia
![Page 9: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/9.jpg)
Anatómia spermie
![Page 10: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/10.jpg)
Zvýšená
teplota
v semenníkoch
Zriedkavá
ejakulácia Vek
Stres
Alkohol
Lieky a
rekreačné
drogy
Nádorové
choroby
Vysoká
konzumácia
kofeínu
Znečistenie
prostredia
a radiácia
Fajčenie
Varikokéla
Obezita
a nesprávne
stravovanie
Infekcia mužských
pohlavných
orgánov
POŠKODENIE DNA
SPERMIE
Zvýšená
teplota
v semenníkoch
![Page 11: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/11.jpg)
MUŽSKÉ ZÁRODOČNÉ BUNKY
Charakteristika
Nízka kvalita prejavujúca sa patologickými zmenami morfológie
Znížená pohyblivosť
Znížená celistvosť chromatínu v jadrách
Zvýšený výskyt DNA fragmentácie
Znížená schopnosť rozpoznať oocyt a fúzovať s ním
Mutácie súvisiace s rôznymi ochoreniami u ľudí
Infertilita Dominantné monogénové choroby
Detské onkologické ochorenia
Ciliopatie, respiračné choroby
![Page 12: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/12.jpg)
Laboratórne vyšetrenia mužov s poruchami plodnosti
Vyšetrenie krvi
• Hladina hormónov – testosterón, LH, FSH, prolaktín, SHBG, estrogény
• Onkomarkery – PSA, fPSA, alfaFP, betaHCG, LD ...
• Genetické vyšetrenie – karyotyp, mutácie v géne CFTR, mikrodelécie Y
- FSHB/FSHR genotyp, LHCGR mutácie,
• Vyšetrenie imunologických markerov – bunková, humorálna imunita
Vyšetrenie ejakulátu
• Spermiogram
• Komplexné vyšetrenie spermií – DNA fragmentácie, chromozómové
aneuploidie, protamíny, voľné kyslíkové radikály
Vyšetrenie moča
• Vylúčenie infekcie - PCR /ureaplazma, mycoplazma, chlamýdie
![Page 13: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/13.jpg)
Vyšetrenie ejakulátu
• Vyšetrenie spermiogramu - stanovenie koncentrácie spermií
- vyšetrenie pohyblivosti spermií
- vyšetrenie morfológie spermií
• Stanovenie koncentrácie leukocytov v ejakuláte
• Pomer živých/mŕtvych buniek
• Prítomnosť protilátok proti spermiám v ejakuláte
• Overenie integrity akrozómu spermií
• Stanovenie počtu spermií s insuficienciou protamínov
• Stanovenie počtu spermií s fragmentovanou DNA
• Vyšetrenie voľných kyslíkových radikálov
• Vyšetrenie aneuploidie chromozómov v spermiách
Biochemická analýza – kyselina citrónová, fruktóza
![Page 14: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/14.jpg)
SPERMIOGRAM
(WHO 2010)
Objem > 1,5 ml
Počet > 15 mil/ml
Pohyblivosť > 40 %
Progresívna pohyblivosť > 32 %
Morfológia > 4% normálnych spermií
pH ≥ 7,2
Liquifikácia do 30 min
Čistota < 1 mil/ml Leu
![Page 15: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/15.jpg)
![Page 16: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/16.jpg)
LeucoTest
Vyšetrenie leukocytov v ejakuláte
Malé okrúhle bunky
> 1 mil/ml
Epitelové bunky Leu > 1 mil/ml
Urologické vyšetrenie
![Page 17: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/17.jpg)
VitalSperm
vyšetrenie vitality
spermií
![Page 18: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/18.jpg)
VitalSperm Stanovenie vitality spermií - Motilita < 40%
Norma: Najmenej 58% živých spermií
Živé nemotilné spermie Mŕtve spermie - nekrozoospermia
Patológia epididymu Štruktúrne defekty bičíka
+
Defekty/znížený počet mitochondrií
Urológ
darcovstvo spermií
DNA fragmentácia
Antioxidanty + ICSI
DNA diagnostika MMAF
+ genet. konzultácia
+ IVF-ICSI + MACS
![Page 19: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/19.jpg)
Protamíny
- Proteíny špecifické pre zrelé spermie
(vs. históny v oocytoch a somatických b.)
- Proteíny spermie: 85% protamíny
15% históny
- počas spermatogenézy:
tranzícia z histónov – transitné proteíny –
- protamíny P1 a P2
Funkcie:
- Celistvosť chromatínu v hlavičke spermií
- Ochrana genómu spermií
- DNA reparačný mechanizmus
- Účasť v procesoch imprintingu
![Page 20: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/20.jpg)
PROTAMÍNY
Ak nie sú vlákna DNA dostatočne
pevne „zbalené“, sú náchylnejšie
na poškodenie
DNA fragmentácia
Infertilita
Infertilní muži:
– vyšší pomer históny/protamíny
- nedostatok P2
![Page 21: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/21.jpg)
ProtamineSperm Vyšetrenie obsahu protamínov v jadre spermií
– Morfológia: teratozoospermia
– Idiopatická neplodnosť
Norma: 15% spermií neobsahujúcich protamíny
![Page 22: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/22.jpg)
Integrita akrozómu Normálny akrozóm Patologický akrozóm
Malý akrozóm Chýbajúci akrozóm
Intaktný akrozóm Intermediárne poškodenie Úplné poškodenie
![Page 23: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/23.jpg)
Akrozóm
a mitochondriálny membránový potenciál
A. Intaktná plazmatická a akrozómová
membrána, vysoký mitochondriálny
potenciál
B. Intaktná plazmatická membrána,
poškodený akrozóm, vysoký
mitochondriálny potenciál
C. Poškodená plazmatická membrána,
intaktný akrozóm, vysoký
mitochondriálny potenciál
D. Poškodená plazmatická membrána,
poškodený akrozóm, nízky
mitochondriálny potenciál
E. Poškodená plazmatická a akrozómová
membrána, vysoký
mitochondriálny potenciál
F. Poškodená plazmatická a akrozómová
membrána, nízky
mitochondriálny potenciál
A B C
D E F
![Page 24: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/24.jpg)
FragmentSperm
Priame hodnotenie poškodenia
ssDNA a dsDNA
TUNEL - fluorescenčná mikroskopia
NEZÁVISLÝ PROGNOSTICKÝ
FAKTOR pre meranie kvality
spermií vo vzťahu k MUŽSKEJ
FERTILITE
Vyšetrenie fragmentácie DNA
![Page 25: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/25.jpg)
Do 15 % - normálna hladina
> 15 % - IUI
> 20 % - IVF/ICSI
> 30 % - malá pravdepodobnosť
spontánnych gravidít
![Page 26: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/26.jpg)
AneuSperm
FISH vyšetrenie aneuploidie chromozómov
Hodnotenie hladiny aneuploidie
v spermiách - 13, 18, 21, X a Y
- Normálna hladina chr. aneuploidie:
0,2 % /chromozóm
![Page 27: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/27.jpg)
Genetika a neplodnosť- dialóg medzi odbormi
Klinický genetik
- fyzické vyšetrenie
- rodokmeň
- konzultácia pred testom
- indikácia gen. lab. vyšetrenia
- konzultácia po teste
Genetické laboratórium
- molekulárna cytogenetika
Genetické laboratórium
- cytogenetika
Urológia
Gynekológia
Genetické laboratórium
- Preimplantačná genetická diagnostika
Endokrinológia
IVF klinika
Genetické lab.
- DNA diagnostika
![Page 28: andrologicko-genetické vyšetrenie spermií ernáková I. · Komplexné andrologicko-genetické vyšetrenie spermií v manažmente liečby mužskej infertility ernáková I. ReproGen,](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022041611/5e37ae302e02c9453d6081d3/html5/thumbnails/28.jpg)
Ďakujeme za pozornosť
Genetické laboratórium ReproGen
Tel: 0948 230 661
www.reprogen.sk