thème : les caractéristiques du cancer

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La migration des La migration des cellules cellules

cancéreusescancéreuses

BLACHE Kévin, ARMOIRY Manon, CHWIEJ Karen, EMOND Amandine, POURROY RoxanneLycée Aristide Briand GAP 05

Problématique :

Comment les cellules cancéreuses parviennent-elles à envahir les tissus

voisins ?

• La modification d’un gène peut-il avoir une incidence sur la migration des cellules ?

• Que produisent les cellules pour traverser la matrice extracellulaire ?

Hypothèse 1 : La modification du gène Cdx1 a une incidence sur la migration des cellules ?

Cellules témoins

Cellules CDX1

Mise en évidence de la migration des cellules par blessure/cicatrisation

Monocouche cellulaire

Expérience 1 : Test de blessure-cicatrisation

• Incubation des plaques pendant 6h à 37°C.

Milieu nutritif + Antiprolifératif : mitomycine (surnageant )

Cellules

Blessure puis 5 lavages PBS

Blessure, lavages puis incubation

Résultat du test de migration

Grossissement x40

CAT: cellules contrôles

Cellules CDX 1

6h

6h

Incubation de 6h

Incubation de 6h

Cellules témoins

Cellules CDX1

Morphologie des cellules avant et après migration.

Vitesses de migration des cellules

Cellules CDX1 1.5 fois plus rapides que les cellules contrôles !

µm/min

• Hypothèse 2 : c’est grâce à des enzymes libérées par les cellules qu’elles traversent la matrice extracellulaire.

• Expérience 2 : Zymographie1. Séparation des protéines en fonction des masses molaires2. Mise en évidence de l’activité enzymatique

Mise en évidence d’enzymes permettant la migration

Préparation des gels de concentration et de séparation

Gel de concentration

Gel de séparation

Gel de concentration : AcrylamideGel de séparation : Acrylamide et gélatine

Légende : 1. Marqueurs masse molaire.2. Test positif MMP-2.3. Test négatif milieu seul. 4. Sn cellules non tumorales.5. Sn cellules tumorales invasives.6. Sn cellules CDX1.7. Surnageant (sn) cellules contrôles.

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Gel de concentration

Gel de séparation

Électrophorèse

Traitement des gels

• Séparation des gels de concentration et de séparation .

• Lavages du gel de séparation avec une solution de triton/CaCl2.

• Incubation 18h à 37°C avec une solution de travail dont la concentration en triton est inférieure à la première.

• Coloration des gels pour observer la gélatine consommée par les enzymes (noir amido et rouge ponceau).

Résultat après coloration

1. Marqueurs masse molaire.2. Test + MMP-2.3. Test - milieu seul. 4. Sn cellules non tumorales.5. Sn cellules tumorales invasives.6. Sn cellules CDX1.7. Sn cellules contrôles.

1 2 3 4 5 6 7

Interprétation des résultats

• Apparition d’une décoloration pour l’enzyme MMP-2 => Dégradation de la gélatine.

• Apparition de deux taches blanches pour les cellules tumorales => Deux enzymes différentes

• Cellules CDX1, absence de trace => Quantité d’enzymes insuffisante.

Conclusion

1. Sous l’influence d’un gène modifié => accélération de la migration.

2. Production de différentes enzymes pour dégrader la matrice extracellulaire dans les cellules tumorales invasives (mais pas de mise en évidence pour les CDX1).

3. Perspectives : pourrions nous supprimer ces enzymes pour limiter l’invasion des cellules cancéreuses ? Comment le mettre en œuvre ?