penentuan morfin dalam urin dengan metode chromatography gc
Post on 20-Feb-2018
273 Views
Preview:
TRANSCRIPT
-
7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC
1/14
Penentuan Morfin dalam Urin dengan Metode Chromatography yaitu
Metode GC-MS dan Metode HPLC.
A. Pengertian Morfin
Morfin adalah candu analgesik obat psikoaktif kuat (Gambar. 1). Ini
adalah analgesik opioid kuat. Dalam pengobatan klinis, morfin dianggap
sebagai standar emas analgesik. Hal ini digunakan untuk pengobatan jangka
pendek neri pasca operasi dan dalam jangka panjang untuk menghilangkan
rasa sakit pasien kanker.
Morfin juga merupakan !at ang berpotensi sangat adiktif. Hal ini dapatmenebabkan ketergantungan psikologis dan ketergantungan fisik serta
toleransi. "leh karena itu, penggunaan ekstensif dari morfin sebagai analgesik
serta penalahgunaan luas obat ini diperlukan pengembangan metode
sederhana, cepat dan dapat diandalkan untuk mendeteksi obat ini pada sampel
biologis.
#anak metode ang telah dikembangkan untuk penentuan morfin dalam
cairan biologis. Ini termasuk metode berdasarkan kinerja tinggi massa
kromatografi cair spektrometri (H$%&'M), kinerja tinggi kromatografi cair
tandem mass spectrometr (H$%&'M M), ultra'tinggi'tekanan cairan
kromatografi'tandem mass spectrometr (H$%&'M' M) dan kromatografi
gas spektrometri massa (G&M). *amun, fase terbalik kromatografi cair
kinerja tinggi (+$'H$%&) dengan detektor - sering digunakan untuk
analisis morfin sejak spektrometri massa kromatografi gas (G&M) tetap
standar emas untuk obat skrining penalahgunaan konfirmasi dalam cairan
biologis (/hang, 012)
Morfin merupakan agonis reseptor opioid, dengan efek utama mengikat
dan mengakti3asi reseptor-opioidpada sistem saraf pusat. 4kti3asi reseptor
ini terkait dengan analgesia, sedasi, euforia,
physicaldependencedanrespiratory depression. Morfin juga bertindaksebagai agonis reseptor 5'opioid ang terkait dengan analgesia spinal dan
miosis.
Di dalam tubuh, morfin terutama dimetabolisme menjadi morphine-3-
glucuronidedan morphine-6-glucuronide(M6G). $ada he7an pengerat, M6G
tampak memiliki efek analgesia lebih potensial ketimbang morfin sendiri.
edang pada manusia M6G juga tampak sebagai analgesia. $erihal
signifikansi pembentukan M6G terhadap efek ang diamati dari suatu dosis
morfin, masih jadi perdebatan diantara ahli farmakologi ("morgui, 1889).
http://en.wikipedia.org/wiki/Opioidhttp://en.wikipedia.org/wiki/Dependencehttp://en.wikipedia.org/wiki/Dependencehttp://en.wikipedia.org/wiki/Respiratory_depressionhttp://en.wikipedia.org/wiki/Respiratory_depressionhttp://en.wikipedia.org/wiki/Morphine-6-glucuronidehttp://en.wikipedia.org/wiki/Morphine-6-glucuronidehttp://en.wikipedia.org/wiki/Dependencehttp://en.wikipedia.org/wiki/Respiratory_depressionhttp://en.wikipedia.org/wiki/Morphine-6-glucuronidehttp://en.wikipedia.org/wiki/Opioid -
7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC
2/14
B. Pengertian Metode GC-MS dan HPLC
1. Pengertian Metode GC-MS:romatografi gas'spektrometer massa (G&'M) adalah metode
ang mengkombinasikan kromatografi gas dan spektrometri massa untuk
mengidentifikasi sena7a ang berbeda dalam analisis sampel.
:romatografi gas dan spketometer masa memilki keunikan masing'
masing dimana keduana memiliki kelebihan dan kekurangan. Dengan
menggambungkan kedua teknik tersebut diharapkan mampu meningkatkan
kemampuan dalam menganalisis sampel dengan mengambil kelebihan
masing'masing teknik dan meminimalisir kekuranganna (Douglas, 1886).
2. Prinip !er"a Metode GC-MS$rinsip :erja G&'M adalah terdiri dari dua blok bangunan utama;
kromatografi gas dan spektrometer massa . :romatografi gas
menggunakan kolom kapiler ang tergantung pada dimensi kolom itu
(panjang, diameter, ketebalan film) serta sifat fase (misalna
-
7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC
3/14
campuran.ampel ang akan dianalisis dijadikan dalam 3olume ang kecil
dari fase bergerak dan diubah melalui reaksi kimia oleh fase diam ketika
sampel melalui sepanjang kolom. ?ujuan penggunaan alat ini adalah
mengetahui kadar asam organic (#asset, 1889).
$. Prinip !er"a Metode HPLC
$rinsip kerja dari alat H$%& adalah ketika suatu sampel ang akan
diuji diinjeksikan ke dalam kolom maka sampel tersebut kemudian akan
terurai dan terpisah menjadi sena7a'sena7a kimia ( analit ) sesuai
dengan perbedaan afinitasna. Hasil pemisahan tersebut kemudian akan
dideteksi oleh detector (spektrofotometer -, fluorometer atau indeks
bias) pada panjang gelombang tertentu, hasil ang muncul dari detektor
tersebut selanjutna dicatat oleh recorder ang biasana dapat ditampilkan
menggunakan integrator atau menggunakan personal computer ($&) ang
terhubung online dengan alat H$%& tersebut (#asset, 1889).
C. !euntungan dan !erugian Metode GC-MS dan Metode HPLC
1. Metode GC-MS
!eunggulan dari metode ini adalah e%agai %eri&ut '
a) @fisien, resolusi tinggi sehingga dapat digunakan untuk menganalisa
partikel berukuran sangat kecil seperti polutan dalam udara
b) 4liran fasa bergerak (gas) sangat terkontrol dan kecepatanna tetap.
c) $emisahan fisik terjadi didalam kolom ang jenisna banak sekali,
panjang dan temperaturna dapat diatur.
d) #anak sekali macam detektor ang dapat dipakai pada kromatografi gas
(saat ini dikenal 12 macam detektor) dan respons detektor adalah
proporsional dengan jumlah tiap komponen ang keluar dari kolom.
e) angat mudah terjadi pencampuran uap sampel kedalam fasa bergerak.
f) :romatograf sangat mudah digabung dengan instrumen fisika'kimia ang
lainna, contohna G&A?'I+M.g) 4nalisis cepat, biasana hana dalam hitungan menit.
h) ?idak merusak sampel.
i) ensiti3itas tinggi sehingga dapat memisahkan berbagai sena7a ang
saling bercampur dan mampu menganalisa berbagai sena7a meskipun
dalam kadarkonsentrasi rendah. eperti dalam udara, terdapat berbagai
macam sena7a ang saling bercampur dan dengan ukuran
partikelmolekul ang sangat kecil.
!e&urangan dari metode ini adalah e%agai %eri&ut '
a) ?eknik :romatografi gas terbatas untuk !at ang mudah menguap
-
7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC
4/14
b) :romatografi gas tidak mudah dipakai untuk memisahkan campuran
dalam jumlah besar. $emisahan pada tingkat mg mudah dilakukan,
pemisahan pada tingkat gram mungkin dilakukan, tetapi pemisahan dalam
tingkat pon atau ton sukar dilakukan kecuali jika ada metode lain.
c) Aase gas dibandingkan sebagian besar fase cair tidak bersifat reaktif
terhadap fase diam dan !at terlarut.
2. Metode HPLC
!eunggulan dari metode HPLC '
a) %ebih teliti
b) udah digital sehingga penggunaanna cepat dan lebih praktis
c) mampu memisahkan molekul'molekul dari suatu campuran
d) mudah melaksanakanna
e) kecepatan analisis dan kepekaan ang tinggi
f) dapat dihindari terjadina dekomposisi kerusakan bahan ang
dianalisis
g) +esolusi ang baik
h) dapat digunakan bermacam'macam detector
i) :olom dapat digunakan kembali
j) mudah melakukan sample reco3er
!erugian dari metode HPLC '
a) %arutan harus dicari fase diamna terlebih dulub) Hana bisa digunakan untuk asam organic
c) Harus mengetahui kombinasi ang optimum antara pelarut, analit, dan
gradien elusi
d) Hargana mahal sehingga penggunaanna dalam lingkup penelitian
ang terbatas
(. Proe Analii Morfin (engan Metode GC-MS dan Metode HPLC
1. Metode GC-MS
a. Persiapan sampel.
olusi saham standar primer morfin (1 ug m%) dan kodein (1
ug m%) secara terpisah disiapkan dalam 1 ml labu 3olumetrik
dengan urineB 1= *a"H ditambahkan tetes demi tetes sampai pH
8,'8,0 tercapai, dan 1.m% larutan boraks penangga ditambahkan.
ntuk ini, 2ml pelarut ekstraksi (etil asetat) ditambahkan dan 3orteC
dicampur pada 3orteCer untuk 0, menit, diikuti dengan sentrifugasi
pada 2 r min untuk
-
7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC
5/14
propionat dan 0 u% piridin. emua reagen ang 3orteC'campuran,
maka pemanasan untuk 2 menit di & dan dikeringkan di ba7ah
streamat udara 6 &. +esidu kering dilarutkan dalam
-
7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC
6/14
-
7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC
7/14
e. Prosedur Validasi
:ur3a kalibrasi urin disiapkan dan diuji dalam rangkap tiga
hari ang berbeda untuk mengamati linearitas, presisi, akurasi,pemulihan, batas kuantitasi (%"F), batas deteksi (%"D),
selekti3itas dan stabilitas. $erbandingan luas puncak kromatografi
morfin untuk codeine digunakan dalam kuantifikasi tersebut.
). Hail Analii Morfin (engan Metode GC-MS dan Metode HPLC.
1. Metode GC-MS
Gambar 0 menunjukkan kromatogram khas sampel urin kosong
dibubuhi morfin dan kodein. ?idak ada campur !at endogen ang diamati
pada 7aktu retensi dari morfin dan kodein. :ur3a kalibrasi untuk morfindan kodein ang dihasilkan oleh regresi linear dari rasio luas puncak
terhadap konsentrasi, persamaan regresi respecti3el. ?he untuk plot
kalibrasi ang N 00K.8O 00,2 dengan N ,88K9 untuk morfin (
adalah area puncak analit, dan adalah konsentrasi analit dalam urin
manusia), dan konsentrasi berada di kisaran 0
-
7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC
8/14
?abel 0; +ingkasan stabilitas morfin dan kodein dalam berbagai kondisi
penimpanan (N 2).
rentang ang dapat diterima dan metode ini akurat dan tepat. $emulihan morfin
dan kodein die3aluasi dengan membandingkan rasio daerah puncak diekstraksi
sampel F& dengan orang'orang dari referensi solusi F& dilarutkan dalam ekstrak
urin kosong. $emulihan berarti morfin dan kodein ang lebih baik dari K
-
7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC
9/14
:ur3a kalibrasi dibangun dengan memplot rasio luas puncak
morfin terhadap kodein. :ur3a kalibrasi untuk morfin adalah linear pada
rentang konsentrasi 1
-
7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC
10/14
Gambar.
-
7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC
11/14
akurat (sesuai pedoman AD4) dalam mengukur konsentrasi morfin ini di kisaran
konsentrasi bunga.
?abel 1; $resisi dan akurasi metode untuk penentuan morfin dalam urin manusia
?abel 2; studi tabilitas morfin
$enerimaan dihitung sebagai persentase dari daerah rasio diekstraksi
dengan sampel terekstraksi. $enerimaan morfin ber3ariasi dari
-
7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC
12/14
#atas deteksi (%"D) adalah konsentrasi terendah dari analit dalam sampel
ang dapat dideteksi tetapi tidak harus kuantitatif menilai, di ba7ah kondisi
percobaan menatakan. #atas kuantifikasi (%"F) didefinisikan sebagai
konsentrasi plasma terendah dalam kur3a kalibrasi ang dapat diukur secara rutin
dengan presisi ang baik (+D P0=) dan akurasi ('10=). Dalam penelitian
ini, %"D dalam metode ini adalah
-
7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC
13/14
?abel 1; $resisi dan akurasi metode untuk penentuan morfin dalam urin manusia
dengan Metode H$%&.
#erdasarkan kedua tabel tersebut. Dapat diketahui bah7a presisi dan
akurasi dari kedua metode tersebut berbeda dengan konsentrasi berbeda pula.
*amun, metode H$%& mempunai tingkat presisi dan akurasi ang lebih tinggi
daripada metode G&'M dalam penentuan adana morfin. Dapat dilihat dengan
tingkat presisi tertinggi dari metode H$%& adalah 10.
-
7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC
14/14
(A*+A, PUS+A!A
#asset, ., et al., 1889,Buku Aar Vogel Analisis unatitatif Anorganik. akarta,
@.G.&.$enerbit #uku :edokteran
Douglas 4., Jest, Donald M., dan Holler, A. ames, 1886, Analytical hemistry,
aunders &ollege $ublishing, 4merika.
"morgui, ., 188K,Buku /aku 0bat-obatan Anastesi, @disi II, @G&, akarta.
+u!ila7at, 4.#., et al.* 012, Determination of Morphine in Human rine b 4
imple +e3erse $hase High'$erformance %i>uid &hromatograph
Method 7ith - Detection, 1nternational 2ournal ofPharmaceutical /ciences and rug 4esearch, ol. / 0o. 1/
ni3ersiti ains Malasia, :elantan, Malasia
/hang, ., et al., 012, Determination of Morphine and &odeine in Human rine
b Gas &hromatograph'Mass pectrometr, 2ournal of Analytical
Methods in hemistry, &hina.
top related