nachweis verschiedener mrnas des prostataspezifischen membranantigens in lymphknoten von...
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Nachweis verschiedener mRNA‘s des
Prostataspezifischen Membranantigens
in Lymphknoten von PCa-Patienten
U. Fiedler, A. Manseck, R. Kranz, J. Herrmann, M. Wirth
Klinik und Poliklinik für Urologie
Universitätsklinikum der TU-Dresden
Metastasierung beim PCa
Ansiedlung:Ansiedlung:
Lymphknoten 69 %
Knochen 68%
Lunge 48%
Leber 33%
Ausbreitung:Ausbreitung:
Lymphbahnen
peripheres Blut
Eble 1993
Diagnostik der Lymphknoten-Metastasierung
Serum-PSA
Tumorstadium, Gleason Score Bildgebende Verfahren(CT, MRT, PET)
Histopathologie
Einschätzung der Lymphknoten-Metastasierung, PSA >20 ng/ml
Wahrschein-lichkeit %
cT1a cT1b cT1c cT2a cT2b cT2c cT3a0
10
20
30
40
50
60
2-45
67
8-10
Gleason Score
Tumorstadium Partin 1997
Molekularer Nachweis von PCa-Zellen
Nachweis prostataspezifischer mRNA
DNAProstata-spezifischemRNA
ProteinRibosom
ZytoplasmaZellkern
mRNA
Nachweis prostataspezifischerTranskripte mittels RT-PCR
Lymphknoten-gewebe
Isolierung der Gesamt RNA
Dnase I-Behandlung
cDNA-Synthese
Transkript-spezifische PCR
AAAmRNA
cDNA
PCR
AAA
AAA
AAA
TTT
Das prostataspezifische Membranantigen (PSM)
Lokalisation: Plasmamembran
Funktion: Folathydrolase
Größe: 94 kDa
Gene structure
extracellular
cytosolic
HOOC
NH2
PSM
Lokalisierung des Proteins
extrazellulär
intrazellulär
PSM-Gen und Transkripte
PSM’ 2387 bp (Su et al., 1995)
X
PSM - 2653 bp (Israeli et al., 1993)
PSM-Variante (Bzdega et al., 1997)X
Deletion von Exon 18 (657-688)
Deletion im Exon 1 (114-380)
The PSM gene
11q14
11p11-12
chromosome 11
PSM mRNA (2653 bp)
19 exons, 20 introns
[Leek et al. 1995, Rinker-Schaeffer et al. 1995]
Chromosom 11
PSM-Gen
19 Exons, 20 Introns
PSM mRNA 2653 bp
Patientenkollektiv
60 PCa-Patienten (232 Lymphknoten)16 hormonell vorbehandelt17 pTN132 pT2N0
8 pT3N0 3 pT4N0
3 Patienten mit Nieren bzw. Blasentumor
2 Patienten ohne maligne Erkrankung
RT-PCR zum Nachweis von PSM-Transkripten
Urologische KlinikUniversitätsklinikum Dresden
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1-3, 5-7: Lymphknoten von PCa-Patienten
8: pos. Kontrolle (LNCaP)
9: neg. Kontrolle
10: 123 bp DNA Standard
Nachweis von PSM-Transkripten in regionären Lymphknoten
n RT-PCR-PSM + RT-PCR-PSM -
* histologisch neg. LK, Sensitivität: 94,1%, Spezifität: 4,7%
PCa 60 57 3
RCC 3 3 0
kein Ca 2 0 0
PCa/N+ 17 16 1*
PCa/N- 43 41 2
Urologische KlinikUniversitätsklinikum Dresden
Nachweis von PSM’-Transkripten in regionären Lymphknoten
n RT-PCR-PSM’ + RT-PCR-PSM’-
PCa 60 37 23
RCC 3 2 1
kein Ca 2 0 0
PCa/N+ 17 15 2 *
PCa/N- 43 22 21
* histologisch neg. LK, Sensitivität: 88,2%, Spezifität: 48,8%Urologische KlinikUniversitätsklinikum Dresden
Verteilung der PSM- und PSM’-Transkripte bei PCa-Patienten
n RT-PCR-PSM + RT-PCR-PSM’+
pT4N0 3 3 (100%) 1 (33%)
Gls 2-3 4 4 (100%) 2 (50%)
Gls 4-6 27 26 (96%) 17 (63%)
pT2N0 32 31 (97%) 16 (50%)
pT3N0 8 7 (88%) 5 (63%)
Gls 7-9 13 12 (92%) 9 (69%)
Urologische KlinikUniversitätsklinikum Dresden
RT-PCR oder Histopathologie ?
Bestimmung der Relevanz von PSM‘ im follow up
alle histologisch positiven Lymphknoten mit der RT-PCR für PSM und PSM‘ erkannt
PSM: - hohe Sensitivität, geringe Spezifität- ungeeigneter Marker
PSM‘: - hohe Sensitivität, Spezifität von 48%- positive Korrelation zwischen PSM‘-RT-PCR und Gleason Score - sensitiverer Nachweis von PCa-Zellen gegenüber Histopathologie ?
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