lactobacillus et autres bactéries lactiques bacilles gram+ réguliers, souvent allongés...
Post on 04-Apr-2015
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Lactobacillus et autres bactéries lactiquesBacilles Gram+ réguliers, souvent allongésasporulés,groupés (paires ou en chaînes)Immobilesfermentation de type lactiqueCatalase-, certains pseudo-catalase, et d’autres sont catalase+, microaérophiles ou anérobiesHomo et hétérolactiques
Lactobacillus et autres bactéries lactiques
Clé dichotomique des genres
1 – Catalase - : Lactobacillus, Carnobacterium, Bifidobacterium, Erysipelothrix2. Catalase + : 2.1 Culture à 37°C + : Listeria2.2 Culture à 37°C - : Brochothrix
Lactobacillus et autres bactéries lactiques
Techniques isolement des Lactobacillus
Croissance faible milieu ordinaire (semi-anaérobiose)Bouillon de Briggs, à la tomate, Elliker…Le plus connu = MRS (contient du Tween 80), pH ajusté à 6,2 ou 6,5Pas assez spécifique
Rogosa : plus sélectif (acétate et acide acétique)
Inhibiteur spécifique : • acide sorbique (bactéries acétiques), • mélange acide sorbique / actidione pour les levures• Milieu MRS acidifié (pH 5)
Lactobacilles = microaérophiles isolement et numération par la technique de la double couche ou incubation en milieu anaérobie ou semi-anaérobie 2 à 3 jours à 30°C
Lactobacillus et autres bactéries lactiques
Techniques d’identification des Lactobacillus
Répartition et identification des espèces basées sur les tests suivants
Lactobacillus divisé en 3 groupes (Orla-Jensen) :• Thermobacterium : homofermentaires thermophiles qui se développent à 45°C
mais pas à 15°C, ne fermentent ni les pentoses ni le gluconate : Les plus fréquentes (fromages, yaourts, lait) = helveticus, bulgaricus, lactis, acidophilus…
• Streptobacterium : homofermentaires mésophiles qui se développent à 15°C et occasionnellement hétérofermentaires en fonction du substrat : L casei (lactobacille prédominant du lait), plantarum (choucroute), curvatus, sake…
• Betabacterium : lactobacilles hétérofermentaires qui fermentent des pentoses et généralement le gluconate : L. fermentum, buchneri, brevis, sanfrancisco…
Lactobacillus et autres bactéries lactiques
Techniques d’identification des Lactobacillus
Type fermentaire
Milieu de Gibson et Abd El Malek – 2 à 7 jours à 30°C hétéro ou homofermentaires
Température de développement
Milieu MRS à 45°C (240 à 48 heures) et 15°C (1 à 2 semaines)Parfois tests à 48 et 51°C
Hydrolyse de l’arginine
Milieu MRS + arginine 0,3% - 2 à 3 jours à 30°C – réactif de Nessler – précipité orange +
Thermorésistance
Comme pour les streptocoques avec de MRS Deux tests : 60°C pendant 90 min et 65°C pendant 30 min
Lactobacillus et autres bactéries lactiques
Techniques d’identification des Lactobacillus
Croissance en présence de NaCl
Milieu MRs + 6,5% de NaCl 30°C pendant 2 à 3 jours
Croissance à pH 3,9
Milieu MRS à 30°C (HCl)
Croissance en présence de Teepol
Milieu MRS + 0,4% de Teepol - 2 à 3 jours à 30°C
Milieu LTV 48 heures à 30°C – centrifugation – surnageant additionné d’un volume éthanol – anneau opaque à l’interface présence de dextranes
Production de dextranes
Réduction du TTC
Milieu MRS + TTC coloration rose-rouge des colonies
Lactobacillus et autres bactéries lactiques
Techniques d’identification des Lactobacillus
Réduction du tellurite
Gélose : noircissement des colonies
Production du peroxyde hydrogène
Gélose glucose-oxyde de manganèse (48 heures à 30°C) apparition de zones claires autour des colonies
Action sur le lait tournesolé
Fermentation des sucres
Mise en évidence sur un milieu spécial de fermentation des lactobacilles additionné de différents sucres
Production H2S
Milieu classique
Lactobacillus et autres bactéries lactiques
Techniques d’identification des Lactobacillus
Hydrolyse de l’esculine
Milieu gélosé à l’esculine – noircissement du milieu
Besoin en vitamines
Tests technologiques
Identiques à ceux des StreptocoquesRecherche de l’activité lipolytique sur gélose à la tributyrine, caractère homo ou hétérofermentaires, essais de fermentations des pentoses ou du gluconate avec dosage des produits formés
Galeries d’identification rapide pour Lactobacilles : API 50CH, CHL
Lactobacillus et autres bactéries lactiques
Pas de clé simple et fiable
Lactobacillus et autres bactéries lactiques
Carnobacterium
Genre proche des Lactobacillus : bacilles isolés ou en courtes chaînes, mobile ou non, catalase-, nitrate réductase-, métabolisme hétérofermentaire, se développent à 10°C et non à 45°C (proche de Betabacterium)Dans les produits carnés et les poissons
Différences par rapport au Lactobacillus des viandes :• Croissance sur gélose à l’acétate : Carnobacterium ne se développe pas au
contraire des Lactobacillus• Présence d’acide diaminopimélique (mDAP) dans la paroi : CCM ou HPLC
Lactobacilus mDAP-(sauf L. plantarum), Carnobacterium mDAP+• Test ADH : Carnobacterium ADH+, Lactobacillus ADH+ ou – (L. plantarum -)
Lactobacillus et autres bactéries lactiques
Bifidobacterium
Milieu de référence pour isolement : TPY (tryptone-phytone-yeast extract) additionné antibiotique ou inhibiteur : TPY-dicloxacilline, gélose NPNL modifié (TGY+néomycine, paromycine, acide nalidixique et chlorure de lithium)Incubation 72 heures en atmosphère enrichie en CO2 (Anaerocult, Gaspak…)
Identification par des caractères biochimiques en particulier enzymatiques :a-arabinosidase, b-glucosidase, N acétylglucosaminidase, leucineglycyl arylamidase, cystine aminopeptidase…Mise en évidence de la F6PPK : apparition d’une couleur violacée du à la production acétyl P
Système identification rapide : galerie Rapid Ana II (IDS), galeri API ZYM, API50CH, API50CHL….
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