hemoglobin - sysmex partec · 2016. 11. 30. · střední objem reti střední obsah hgb v reti-...
Post on 15-Dec-2020
9 Views
Preview:
TRANSCRIPT
Retikulocytární
hemoglobin
Soňa Vytisková
1
Úvod
2
3
Erytropoeza
Proerytroblast Basofilní
erytroblast Polychromatický
erytroblast
Ortochromatický
erytroblast
Retikulocyt Erytrocyt
Zmenšování velikosti buňky
Nárůst syntézy HGB
Kostní dřeň Krev
1-3 dny KD / 1-2dny PK
Retikulocyt obsahuje zbytky organel obsahující RNA (ribozomy, zbytky
endoplazmatického retikula).
Erytrocyty a retikulocyty
Vzhledem k tomu, že normální doba života RBC je 120 dní, zhruba 1/120 (~1%) nových RBC musí být denně doplněno do periferní krve, aby byl zachován jejich konstantní počet.
Erytrocyty jsou „dlouhověké“ a mohou nám vypovídat o erytropoetické aktivitě během několika posledních měsíců.
◦Erytrocyty již neprodukují nový hemoglobin.
Naproti tomu retikulocyty jsou „krátkověké“ a mohou nám proto poskytnout informace o aktuální erytropoetické aktivitě.
◦Retikulocyty stále produkují Hgb.
Erytrocyty – nové parametry
5
HPO -% hypochromních erytrocytů
HPR -% hyperchromních erytrocytů
MIC - % mikrocytů
MAC - % makrocytů
střední koncentrace korpuskulárního HGB
obsah korpuskulárního HGB
šíře distribuce dle koncentrace HGB
šíře distribuce dle obsahu buněčného hemoglobinu
stanovení počtu fragmentů (schistocytů)
Retikulocyty – nové parametry
6
Retikulohematokrit
Koncentrace HGB v retikulocytech
Rozdíl mezi koncentrací HGB v RBC a RETI
Střední objem RETI
Střední obsah HGB v RETI- Ret-He, CHr, MCHr (od 6. 4. 2016 – žádanka)
Šíře distribuce RETI
Mladší a starší vývojové formy RETI (IRF, LFR, MFR, HFR)
Střední koncentrace korpuskulárního HGB v RETI
Obsah buněčného HGB v RETI
Šíře distribuce dle koncentrace HGB v RETI
Šíře distribuce dle buněčného obsahu HGB v RETI
Princip stanovení
7
Retikulocyty – metody stanovení
8
Mikroskop:
barvení brilantkresylovou nebo metylenovou
modří – barví se tzv. substatnia granulofilametosa
Fluorescenční metoda: Sysmex
Abbott
Cytochemická metoda: Beckman Coulter
Advia
Dle množství zbytkové RNA rozeznáváme zralé a nezralé retikulocyty (IRF).
9
Mieho teorie Při průchodu světla skrze kulovitý (sférický) objekt dochází k jeho odchýlení (difrakci)
o vnitřní strukturu objektu
Publikováno 1908
Kulaté částice rozptylují světlo tak, že rozptýlené světlo tyto částice popisuje co do
velikosti a obsahu
Mieho teorii lze aplikovat na jakýkoli kulovitý objekt - erytrocyty nevyjímaje, avšak za
předpokladu, že jsou izovolumetricky sferizovány.
Mohandas et al. Accurate and independent measurement of volume and hemoglobin
concentration of individual red cells by laser scattering, Blood, 1986: 68:506-213
10
Mieho teorie
High refractive index Low refractive index
Princip stanovení
Advia
11
Advia – parametr CHr
12
Erytrogram, histogram CHr
13
Princip stanovení
Abbott
14
Sapphire – parametr MCHr
15
Laser
488 nm
Optical flow
cell
7º detector
0º detector
PMT2 PMT3
PMT1
90º detector
FL1
detector
• Identifikace retikulocytů
•FL1 (intensita fluorescence, RNA)
•Koncentrace hemoglobinu v buňce
•IAS (lom světla v 7º; log + lin)
•PSS (lom světla 90º)
•Objem buňky
•ALL (lom světla 0º)
•PSS (lom světla 90º)
Put science on your side.
Optické RBC parametery Diagram „Objem vs. CHC“ (MCVr, MCHr, CHCr)
MCVr
85.7 fL
CHCr
289 g/L
MCHr = MCVr x CHCr
Červené tečky: RBC
Zelené tečky: retikulocyty
Put science on your side.
Erytrogram
Červené tečky: RBC
Zelené tečky: retikulocyty
Normocytic, normochromic Microcytic, hypochromic
--------
Microcytic------
------
Macrocytic------ -
----
-
Hypochro
mic
---
-
Princip stanovení Sysmex
18
19
RET Channel – RET-He vs. RBC-He
RBC-He
● RBC haemoglobin equivalent
● Calculated from RET-RBC-Y
RB
C-
Are
a
IRF - Area LFR-Area
Fluorescence-Thrombocytes
Fluorescent light intensity
Fo
rward
scatt
ere
d l
igh
t in
ten
sit
y
DELTA-He
RET-He - RBC-He
RBC-He
RET-He
RET-He
● Reticulocyte haemoglobin equivalent
● Calculated from RET-Y
Sysmex – parametr Ret-He
Ret-He – r. 2005
20
Ret-He
21
Ret-He
22
Kontrola kvality
23
Klinické využití
24
Retikulocytární hemoglobin Nazývaný „krátkodobým ekvivalentem MCH“ – oproti MCH poskytuje
potřebnou informaci v horizontu dní
Retikulocyty v krevním oběhu pouze několik dní – díky svému rychlejšímu obratu jsou jejich parametry rychlejším a citlivějším indikátorem činnosti kostní dřeně (zejména její schopnosti využívat železo k syntéze hemoglobinu)
Zvýšené hodnoty retikulocytů pouze informují o počínající reakci kostní dřeně na stimulaci, nic však nevypovídají o skutečné kvalitě retikulocytů – obsahu hemoglobinu v nich
Prokazuje utilizaci železa ve tvorbě hemu, může být indikátorem nedostatku železa v kostní dřeni podobně jako barvení na železo v KD (Fishbane S., Mast A. E., Blood 2002)
Sledování erytropoetické aktivity kostní dřeně
obsah hemoglobinu v retikulocytech odráží aktuální stav a kvalitu erytropoézy
Poskytuje informace o hemoglobinizaci v průběhu erytropoézy v reálném čase
Diagnostika a monitorace léčby anemie z nedostatku železa, optimalizace léčby železem
Účinný parametr při monitoringu kinetiky železa
Časná diagnostika funkčního nedostatku železa, odlišení funkčního a nefunkčního nedostatku železa
Účinný parametr pro optimalizaci a racionalizaci léčby erytropoetinem, zejména u pacientů podrobujících se chemoterapeutické léčbě a u dětí
Obdoba glykemie a % HbA1c
Klinické využití Ret-He
Retikulocytární hemoglobin vs. klasické parametry metabolismu Fe
Sérové železo
Sérový feritin – zásoby železa v organismu
Saturace transferinu – prezentuje mobilizaci železa
Solubilní transferrinový receptor (sTfR) a sTfR-F index (sTfR/log ferritin)
Hepcidin
Zn Protoporfyrin
RET-He - není ovlivněn reakcí akutní fáze, obsah hemoglobinu v retikulocytech je snížen bez ohledu na přítomnost či nepřítomnost zánětu
dle dosud publikovaných údajů je největší klinické využití v oblasti léčby dialyzovaných pacientů EPO
1997 „FDA approved“: metoda validovaná pro pacienty podstupující hemodialýzu
Nefrolofická guidelines (Evropské pokyny pro osvědčené postupy (EBPG) nebo iniciativa
pro kvalitu výsledků vyšetření ledvinových onemocnění, National Kidney Foundation Kidney Disease Outcome Quality Initiative (NKF KDOQI).
Klinické využití - nefrologie
29
Klinické využití - pediatrie
Klinické využití - gravidita
Refereční rozmezí: 28 -35 pg (Sysmex) ◦ Hodnoty nižší než 28 pg se považují za projev funkčního nedostatku železa
Vydávání výsledků pro klinická pracoviště od 6. 4. 2016
Počet vyšetření RET-He: cca 130 RET-He /měsíc
FN Brno
Závěr
32
Měření RET-He je rychlé, časově nenáročné
Nízké náklady pro laboratoře i zdravotní pojišťovny ◦ 96857 – stanovení počtu retikulocytů na automatickém
analyzátrou – 66 bodů
◦ Vykazovat s KO
Časný ukazatel onemocnění/odpovědi na léčbu: dříve než klinické hematologické či biochemické ukazatele
Vysoká výpovědní hodnota ◦ 100% citlivost pro diagnostiku deficitu železa
◦ 80% specifita pro diagnostiku deficitu železa
Shrnutí
Poděkování
Děkuji za pozornost
35
top related