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DIAGNÓSTICO IMUNOLÓGICO DAS INFECÇÕES POR DENGUE,
CHIKUNGUNYA E ZIKA VÍRUS
Prof. Dra. Edna Maria Vissoci Reiche
Imunologia Clínica
Diagnóstico Molecular
PAC/CCS/UEL
Dengue• vírus da dengue
• Flavivírus – RNA vírus • Grupo dos Arbovírus (Arthopod borne virus)
• Sorotipos DEN-1,DEN-2, DEN-3 e DEN-4
• Geneticamente e antigenicamente diferentes• DEN-2: mais imunogênico
• Diferentes genótipos para cada sorotipo
Diferenças clínicas entre sorotipos• DEN1
• maior taxa de morbidade e • menor taxa de mortalidade
• DEN2• maior variabilidade na patogenicidade• alguns genótipos parecem produzir pouca ou nenhuma
doença• outros genótipos podem apresentar doença grave (FHD)
• DEN 3• Infecções similares ao DEN1
• DEN 4• Infecções similares ao DEN2
• DEN 5• não identificado no Brasil (epidemia na Malásia)
Organização genômica do vírus da dengue
Dengue: Testes Laboratoriais
• Específicos Diretos: • Isolamento viral• Detecção do RNA viral : RT-PCR• Pesquisa de antígeno NS1
• Específicos Indiretos: • Pesquisa de anticorpos IgM e/ou IgG• IHA• Teste de Neutralização• ELISA
Isolamento viral
• Inoculação em culturas celulares, animais e mosquitos
• Detecção de antígenos virais (ELISA ou RIE)
• Detecção do genoma viral (RT-PCR)
Isolamento viralCultura de células
Coleta : Até o quinto dia
Amostra: Sangue ou outros fluídosorgânicos, fragmento de órgãos emacerado de mosquito
Procedimento: frasco estéril semanticoagulante
Método: Cultura celulares emlinhagens C6/36 provenientes domosquito Aedes
Tempo: 6 a 10 dias
Diagnóstico da dengue
Resposta imune na dengue
30 a 60 dias
Teste rápido para Dengue (IgG e IgM) –
Imunocromatografia (para 4 sorotipos);
Sensibilidade e especificidade depende do laboratório
Sens: 96 - 99% Esp: 98%
Diagnóstico laboratorial específicoSorologia - Pesquisa de IgM
Coletar no 7º dia de início da doença, IgM persiste por 1 a 2 meses (s/n repetir entre o 11º e 30º dia do início dos sintomas)
> 75% de positividade entre 7 a 10 dias
> 99% de 10 a 20 dias
IgG + no 9º dia na primo-infecção e no 1º dia na re-infecção
Diagnóstico laboratorial específico
Detecção do vírus ou antígenos virais:
Detecção de antigenemia - NS1
Reação em cadeia de polimerase (RT-PCR) - genoma viral
Isolamento viral - define sorotipo
Imunohistoquímica - antígenos virais
Indicação: casos graves (nos primeiros 3-5 dias de evolução)
Teste rápido Ag NS1 - Imunocromatografia
CT
Teste positivo
Kit – “COMBO”AgNS1 + IgM + IgG
Dengue: Testes Laboratoriais
• INESPECÍFICOS
• Hemograma• Hematócrito • Plaquetas• Albumina• Função hepática: AST, ALT• Urina I
Dengue Grave (Febre hemorrágica do dengue
Síndrome de choque)
• Hematócrito: aumento súbito de 20% do valorhabitual do paciente em 24 horas
• Plaquetas: < 100.000/mm3
• Hipoproteinemia• Elevação das aminotransferases AST e ALT• Elevação de uréia• Hiponatremia• Redução da fração C3 do complemento
Dengue Grave(Febre hemorrágica do dengue
Síndrome de choque)
• CID• Redução dos fatores de coagulação
• V, VII, IX e X
• Prolongamento do tempo • Protrombina
• Tromboplastina parcial
• Elevação dos produtos de degradação da fibrina
Prova do Laço
• (PAS +PAD)/2: manguito insuflado
• Adulto: 5 mim ( 20 petéquias)
• Criança: 3 min (10 petéquias)
• Presença de petéquias
Área de 2,5 x 2,5 cm
Vírus Chikungunya (CHIKV)
RNA vírusFamília: Togaviridae (mesmo da rubéola)Gênero: Alphavírus
Apenas um subtipo causa a doença
CHKV
• Diagnóstico laboratorial: sangue ou soro, LCR
• Métodos diretos:• Isolamento do vírus• Detecção do RNA viral: RT-PCR
• Métodos indiretos:• Detecção de anticorpos IgM e/ou IgG: ELISA, IHA
• Aumento de 4 vezes o título acs entre as amostras nas fases aguda (preferencialmente primeiros oito dias de doença) e convalescente, preferencialmente de 15 a 45 dias após o início dos sintomas, ou 10-14 dias após a coleta da amostra na fase aguda
• Teste de neutralização por redução de placas (PRNT)
DIAGNÓSTICO LABORATORIAL
• ISOLAMENTO DO VÍRUS (C636)
• RT-PCR (fase aguda da doença – até D8)
• DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO:
• FASE AGUDA: após D5• FASE CONVALESCENTE: 15 –45d
• ELISA: Anticorpos anti-CHIKV (após D7)
• INIBIÇÃO DA HEMAGLUTINAÇÃO (5º - 7º d)
FEBRE CHIKUNGUNYA
Teste de Neutralização por Redução de Placas de Lise – PRNT
• Plaque Reduction Neutralization Test • Método sorológico de quantificação dos anticorpos
neutralizantes. • Teste referência (padrão) • Avaliação resposta vacinal
• fornece a melhor correlação para proteção da infecção,
• Mais sensível do que os testes IH e ELISA.
Exames inespecíficos
• Hemograma• Leucopenia• Linfocitose
• Trombocitopenia: rara
• VHS elevada
Diagnóstico diferencial
• Outras enfermidades a considerar são: • malária • leptospirose • infecções por outros Alphavírus (ex. vírus Mayaro)• artrite pós-infecciosa (Chlamydia, Shigella, Neisseria, febre
reumática), • artrite reumatoide juvenil, • mononucleose infecciosa • primo-infecção por HIV. • Região Amazônica: a malária e febre Mayaro são endêmicas
e fazem parte do diagnóstico diferencial obrigatório.
Zika vírus (ZIKV)• É um vírus RNA pertencente à família Flaviviridae e
causa quadro clínico semelhante à dengue.• O Brasil é um dos países com maior diversidade de
flavivírus
• DEN 1-4, • vírus da encefalite japonesa • vírus da febre amarela • vírus da hepatite C
Serviços de referência no Paraná para atendimento de casos suspeitos de MICROCEFALIA e/ou outras
malformações do SNC
• Serviços de referência para as respectivas macrorregiões de saúde para o encaminhamento das crianças que ao nascimento apresentarem microcefalia.
• Macrorregional Norte: • Hospital Universitário de Londrina (HU – UEL);
• Macrorregional Noroeste: • Hospital Universitário de Maringá (HU – UEM);
• Macrorregional Oeste: • Hospital Universitário do Oeste do Paraná (HUOP);
• Macrorregional Leste: • Hospital Infantil Waldemar Monastier; • Hospital Infantil Pequeno Príncipe.
Esquema proposto para diagnóstico laboratorial do ZIKAV por técnicas de isolamento, RT-PCR e sorologia (IgM/IgG)
Sorologia X PCR Zika
Pode ocorrer reação cruzada com outros flavivírus, como o da dengue, febre do Nilo Ocidental e febre amarela
DIAGNÓSTICO LABORATORIAL
DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO
ISOLAMENTO VÍRUS (C636)
D1– D5 RT PCR TR
DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO
NOVOS TESTES SOROLÓGICOS – somente em laboratórios de referência
Reação cruzada: dengue, febre amarela
ZIKA
Teste rápido ZIKA- V
• 15 fevereiro 2016
• ANVISA concedeu registro de um teste rápido para detecção do zika vírus.
• Laboratório canadense Biocan Diagnostics
• Detecta Anticorpos em até 20 minutos
ZIKA-V
• alterações típicas laboratoriais associadas com a infecção são escassas,
• leucopenia, trombocitopenia • ligeira elevação da LDH sérica, gama-GT• ligeira elevação de marcadores de atividade
inflamatória • proteína C reativa, fibrinogênio e ferritina
Como diferenciar DEN, CHKV e ZIKV
• DEN: • PCR para dengue• Teste rápido para Dengue• Sorologia para Dengue IgG, IgM e antígeno NS1
• CHKV • PCR qualitativo para Chikungunya• Sorologia para Chikungunya
• ZIKV• PCR para Zika vírus
Sorologia para Zika Vírus IgG e IgM quantitativos
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