automatizacion del hemograma

Automatización del hemograma

por: Lisseth Samudio

¿Qué es el hemograma?

• Análisis en que se miden de forma global y en porcentaje los tres tipos básicos de células sanguíneas:– Serie eritrocitaria o serie

roja – Serie leucocitaria o serie

blanca – Serie plaquetaria

Hemograma

• CBC: Complete blood count• CSC: conteo sanguíneo

completo.• BH o BHC: biometría

hemática o biometría hemática completa.

• Sangre anticoagulada de preferencia con etilendiaminotetracético.

EDTA

• Anticoagulante sólido recomendado por varias razones:– No produce dilución de la sangre.– Respeta la morfología eritrocitaria y leucocitaria.– Asegura la conservación de las células durante 24

horas.– Inhibe la agregación de las plaquetas, facilitando

el recuento de las mismas.

Estudio de la serie Roja

• Se cuantifica: – Globulos rojos– Hemoglobina.– Hematocrito.– Índices hemáticos (algunos calculados):• VCM: volumen corpuscular medio.• HCM: hemoglobina corpuscular media.• CHCM: concentración de hemoglobina corpuscular

media.• IDE: índice de distribución eritrocitaria.

Estudio de la Serie Blanca

• Se cuantifica:– Cifra total de glóbulos

blancos.– Fórmula leucocitaria

diferencial (neutrófilos, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos)

Estudio de la Serie Plaquetaria

Se cuantifica:• Plaquetas• VPM: volúmen plaquetario medio• PCT: plaquetocrito.• IDP: índice de distribución de plaquetas.

Recuento automatizado – Historia-

• 1949 con Wallace Coulter (desarrollo el principio de resistencia eléctrica o impedancia).

• A principio de los 60 ´s los equipos suministraron las principales magnitudes.

• En los 70 recuento de plaquetas.• 1953 Parker y Horts, recuento mediante luz

halógena (previa tinción)• 1965 katmentsky introdujo la espectrofotometría

y el principio del fondo oscuro.

Recuento automatizado – Historia-

• 1966 cambios en ondas de radiofrecuencias.

• 1980 citometría de flujo.

COMPAÑÍAS FABRICANTES DE AUTOANALIZADORES

• Menarini Diagnostics IT • Abbott Diagnostics US • Aurora Instruments Ltd • Bayer Diagnostics US • Beckman Coulter Inc US • Biocode Hycel BE • bioMerieux FR • Bio-Rad Laboratories US

COMPAÑÍAS FABRICANTES DE AUTOANALIZADORES

• Grifols International ES • Horiba ABX FR • Olympus JP • RAL Tecnicas para el Laboratorio SA ES • Roche Diagnostics Corporation EUR• Spinreact SA ES • Sysmex JP

Principios de medición más empleados

• Contador hematológico que realiza el conteo por variación de impedancia.

• Conteo óptico.• Contador hematológico que realiza el conteo

mediante utilización de citometría de flujo.• Contadores celulares centrífugos.

Equipos de hematología

• Según el tipo de ondas electromagnéticas empleadas se utilizan individual o combinadas las siguientes metodologías básicas: – Impedancia (corriente directa)– Dispersión lumínica.– Fluorescencia (mejora la sensibilidad y precisión).

Automatización

• Para obtener cantidad y volumen de los componentes sanguíneos los analizadores hematológicos automatizados utilizan las variaciaciones que ejercen las células al atravesar campos magnéticos.

• Las condiciones son estrictas y constantes.• Los datos cuantitativos se expresan en tablas,

histogramas y citogramas.

VARIACIÓN DE IMPEDANCIA

• El contador de impedancia eléctrica trabaja mediante la suspensión de las células sanguíneas en un líquido electrónicamente conductor. Cada partícula es forzada a atravesar un par de electrodos produciendo un cambio en la resistencia eléctrica entre los electrodos. Cada célula produce un pulso eléctrico específico que permite su clasificación y conteo.

IMPEDANCIA

Impedancia • Los impulsos generados son directamente

proporcionales al tamaño de la célula y el número de partículas que atraviesa el orificio de apertura por unidad de tiempo es proporcional a su concentración en el medio electrolito.

• Para el recuento correcto necesitamos corriente directa y que las células sigan una trayectoria uniforme por el detector.

Impedancia

• Ejemplos de instrumentos con este principio son el Contador Coulter, los instrumentos TOA Sysmex y los instrumentos Abbot Cell-Dyn.

Contadores celulares centrífugos

Basado en la densidad variable de los componentes celulares al ser colocados en un capilar de micro hematocrito y ser sometidos a centrifugación. Un flotador cilíndrico específicamente colocado entre la capa de eritrocitos y el plasma expande en distintas capas de los componentes leucocitarios.

BUFFY COAT• Los resultados

contenidos comprenden hematocrito, hemoglobina, número de células rojas, número de leucocitos, granulocitos totales, neutrófilos, eosinófilos y porcentaje de reticulocitos

Contadores celulares centrífugos

• La diferenciación se logra mediante el uso de reactivos y colorantes (naranja de acridina, oxalato potásico y un anticuerpo monoclonal) que cubren internamente el tubo o capilar.

• Los componentes una vez teñidos son expuestos a una fuente de luz azul violeta y la fluorescencia permite distinguir los componentes celulares.

Contadores láser o citometría de flujo

• El principio de trabajo de estos equipos radica en la dispersión de la luz sobre una célula.

• Las interrupciones del láser pueden ser usadas para el conteo celular.

• Los cambios en la refracción de la luz brindan información de tamaño celular o complejidad y densidad interna.

Tres haces de luz blanco al pasar por un coloide de partículas de azufre en un liquido, se convierten en anaranjados, rosados y azul verdosos.

Citometría de flujo

Citometría de flujo

• Para ello hacemos pasar dichas células, a velocidad constante de varios miles por segundo a través de un cámara de flujo laminar sobre la que incide un haz de luz a una longitud de onda específica “Láser”.

• Como consecuencia del impacto, se produce una dispersión de luz policromática generada por los diferentes fluorocromos que es captada por diversos detectores de gran sensibilidad.

Citometría de flujo• Los detectores convierten las señales en

señales electrónicas que posteriormente serán digitalizadas para permitir la medida simultánea de varios parámetros en la célula.

• Estos parámetros son:- características intrínsecas de la célula: tamaño y la complejidad de su núcleo y citoplasma. - Características antigénicas de cada célula.

Citometría de flujo• Analizar cada señal permite conocer

propiedades celulares y el comportamiento al ponerlas en contacto con diferentes sustancias o marcadores.

• Las señales pueden ser de dispersión (interactúa la partícula con la luz y produce cambios de dirección en el espacio) o de fluorescencia (interacción del fluorocromo con la luz y emisión de energía radiante).

Citometría de flujo

Citometría de flujo

• La citometría de flujo se utiliza en muy diversas aplicaciones, que van desde inmunofenotipado, muerte celular, contaje celular, expresión de genes reporteros, etc.

Determinación de la Hemoglobina

• Ferrocianuro potásico oxida la hemoglobina a hemiglobina (metahemoglobina).

• Cianuro de potasio para formar el compuesto cromogénico (HiCN).

• Se mide por espectrofotometría a una longitud de onda de 550 nm.

• Resultado final: valor de absorbancia x coeficiente de calibración.

Reactivos empleados• EQUIPOS DE TRES PARTES:– Diluyente– Lisante– Detergente.

• EQUIPOS DE CINCO PARTES:– Diluyente.– Lisante.– Detergente limpiador o cleaner.– Reactivos con fluorocromos.

Presentación de los resultados

• Tablas numéricas.• Histogramas.• Diagrama de

dispersión.

Limitaciones

• Mantenimiento.• Muestras de sangre.• Interferencias.• Limitaciones del

operador.

Gracias…