2_Методы экспериментальной микологии. Питательные...

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ● по консистенции: жидкие, полужидкие и плотные. ● по составу: натуральные, полусинтетические и синтетические.● по назначению: универсальные, дифференциально-диагностические,

селективные (элективные,избирательные, ингибиторные), консервирующие. Первые основы питательных сред: - коагулированный яичный белок- клейстер из крахмала- мясной отвар с добавлением желатины Недостатки желатины:. - разлагается и разжижается м/о - при 25-30° С желатиновые среды плавятся - плотность этих сред при рН ниже 6,0 и выше 7,0 уменьшается и они плохо застывают

К растворам солей добавляют: 10-15% желатины

АГАР-АГАР — продукт (смесь агарозы и агаропектина), получаемый путем экстрагирования из красных и бурых водорослей,

произрастающих в Черном море, Белом море и Тихом океане, и образующий в водных растворах плотный студень.

Содержит около 1,5—4 % минеральных солей, 10—20 % воды и 70—80 % полисахаридов, в составе которых выявлены D- и L- галактозы,

3,6-ангидрогалактозы, пентозы, пировиноградная кислота и др. Преимущества агара:- не растворим в холодной воде- полностью растворяется только при 95 -100 °С - горячий раствор является прозрачным и ограниченно вязким- при охлаждении до 35—40°С он становится чистым и крепким гелем - при нагревании до 85—95°С опять становится жидким раствором- не расщепляется большинством микроорганизмов при культивировании- не ингибирует рост микроорганизмов и не изменяет питательную ценность среды- прозрачнее желатиновых средК растворам солей добавляют: 2-2,5% агар-агар, 1,5% силикагеля,

карбоксиметилцеллюлоза

желтовато-белый порошок или пластинки

Функция Пример

загустение агар, желатина, силикагель, карбоксиметилцеллюлоза

метаболиты пластического и энергетического обмена

сахара, отвары различных частей растений, экстракты и гидролизаты продуктов животного происхождения

селективность органические кислоты, антибиотики, красители

источник воды вода (дистиллированная)

ОСНОВНЫЕ СОСТАВЛЯЮЩИЕ ПОЛУСИНТЕТИЧЕСКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ

кристаллвиолет и некоторые другие красители

угнетение роста грибов и грамположительных бактерий

подкисление (понижение pH) подавление роста бактерий

подщелачивание (повышение pH) предоставление конкурентного преимущества миксомицетам, акразиевым

антибиотики подавление роста бактерий

обеднение среды (уменьшение сахаров)

стимулирование спороношения, устранение быстрорастущих видов

Выравнивание соотношения растительных и животных продуктов

предоставление конкурентного преимущества фитопатогенным или зоопатогенным грибам

КАК СДЕЛАТЬ ПИТАТЕЛЬНУЮ СРЕДУ СЕЛЕКТИВНОЙ

РЕЦЕПТЫ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

Голодный агар: агар-агара – 10 г; воды – 1 л. Для исследования микофлоры воздуха, для получения спороношения большинства грибов

Среда Чапека (Cz, Czapek Agar) Элективный агар, предложенный Чапеком (1902-1903) и Доксом (1910) для культивирования грибов и почвенных бактерий.сахароза - 30 г NaNO3 - 3 г KH2PO4 - 1 г MgSO4 * 7H2О - 0,5 г KCl - 0,5 г FeSO4* 7H2O - 0,01 г Агар-агар 20 гВода – 1 л

Чапека-Докса (CzD, Czapek-Dox Agar): KH2PO4 - 0,7 г K2HPO4 * 3H2О - 0,3 гОстальные компоненты как у предыдущейрН питательной среды 6 ± 0,5

Среда БарнесаФосфорнокислый калий - 1 гаммоний азотнокислый – 10 газотнокислый калий – 1 г глюкоза – 1 г агар – 20 гВода – 1 лИспользуется для получения плодовых тел сумчатых грибов

Минеральный раствор ПетриНитрат кальция - 0,40 сульфат магния - 0,15 фосфат кислого калия - 0,15 г хлорид калия - 0,06 гВода – 1 л Для получения спорангиев грибов рода Phytophthora

Декстрозный агардекстроза – 10 гфосфорнокислый калий - 0,5 гаспарагин – 0,5 гагар – 15 гвода – 1 л Для культивирования актиномицетов

Картофельно-глюкозный (сахарозный) агар (КГА)Состав: картофель – 200 г;глюкоза (сахароза)– 20 г;агар – 20 г;дистиллированная вода – 1 л.рН 5,5-7Для большинства фитопатогенных грибов

Картофельно-декстрозный агар (PDA, Poptato-Dextrose Agar)Среду готовят так же, как и предыдущую, но вместо сахарозы добавляют декстрозу (20 г). Используют для широкого спектра грибов. Обедненная среда (углеводов в 10 раз меньше) стимулирует спорообразование грибов рода Fusarium.

Черносливовый агарчернослив – 50 гагар – 20 г вода – 1 л Кипятят 1 час + агар + снова кипятят 1 час. Стерилизуют 2 раза по 1 часу текучим паром с суточными промежутками. Для культивирования грибов рода Sclerotinia.

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ НА ОСНОВЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ НА ОСНОВЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ

Кукурузный агар (СМА, Cornmeal Agar)Экстракт кукурузной мукиВода Агар

Для широкого спектра грибов

Модифицированный кукурузный агарЭкстракт кукурузной мукиДрожжевой экстрактГлюкозаВода Агар Для культивирования миксомицетов

Сусло-агар агар -20 г 5-10 % пивное сусло (неохмеленное) – 1 л. рН 6,5-7

Мальц-агар (MEA, Malt Extract Agar)Состав: мальц-экстракт -15 гагар – 20 г;вода -1 л

Среды используют для культивирования широкого спектра грибов (базидиальных, головневых, плесневых грибов)

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ НА ОСНОВЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ

Пивное сусло - это водный раствор экстрактивных веществ солода и хмеля

Этапы производства пива:1.Приготовление солода Дробление солода2. Получение пивного сусла Затирание Фильтрование Кипячение сусла с хмелем Отделение сусла от хмелевой дробины Охлаждение и осветление сусла 3. Сбраживание пивного сусла и дображивание пива Осветление и розлив пива

В пивоваренном производстве используют дрожжи: Saccharomyces carlsbergensis (дрожжи низового брожения) и Saccharomyces cerevisiae (дрожжи верхового брожения).

Питательный агар для культивирования микроорганизмов (ГРМ-агар)Состав:Гидролизат рыбной мукиПептон ферментативныйНатрия хлоридАгарВодарН 7,1-7,5

Используют для выделения широкого спектра микроорганизмов

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ НА ОСНОВЕ ЖИВОТНОГО СЫРЬЯ

навозный агар (DEA, Dung Extract Agar)

агарэкстракт из конского навоза водаИмитирует природный субстрат для копротрофных видов

агарэкстракт из измельченных плодовых тел трутовиков

Для культивувания некоторых микофильных грибов

Трутовиковый агар (PEA, Polypore Extract Infusion Agar)

ТРЕБОВАНИЯ, ПРЕДЪЯВЛЯЕМЫЕ К ПИТАТЕЛЬНЫМ СРЕДАМ-содержать все необходимые элементы питания в легко усвояемой форме и в оптимальных количествах;-иметь оптимальную концентрацию водородных и гидроксильных ионов;-быть стерильными;-плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную консистенцию;-быть по возможности унифицированными;-желательно, чтобы среды были прозрачными.

Этапы приготовления сред: 1) варка; 2) установление оптимальной величины рН; 3) осветление; 4) фильтрация; 5) разлив; 6) стерилизация; 7) контроль.

Осветление: белок куриного яйца, сыворотка крови, декантирование.

Антибиотики: - пенициллин и стрептомицин добавляют после автоклавирования;- левомицитин 2 т. по 0,25 или 1 по 0,5 растирают и добавляют 100 мл воды. 20 мл р-ра на 1 л среды. До автоклавирования.

Стерилизация питательных сред

-синтетические среды и все агаровые среды, не содержащие в своем составе нативного белка и углеводов, стерилизуют 15-20 мин в автоклаве при температуре 115-120°С (0,5 – 1 атм);

-среды с углеводами и молоком, питательный желатин стерилизуют текучим паром при температуре 100°С дробно или в автоклаве при 112°С;

- среды, в состав которых входят белковые вещества обеспложиваются тиндализацией или фильтрованием;

- для стерилизации питательных сред, содержащих в своем составе наживные белки, пользуются фильтрацией через мембранные фильтры Зейтца.