Amanda da Silva Rio - arca. ?· Development and validation of high performance liquid chromatography…

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  • PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM VIGILNCIA SANITRIA INSTITUTO NACIONAL DE CONTROLE DE QUALIDADE EM SADE

    FUNDAO OSWALDO CRUZ

    Amanda da Silva Rio

    DESENVOLVIMENTO E VALIDAO DE MTODO ANALTICO POR CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA COM FASE

    ESTACIONRIA QUIRAL PARA AVALIAO DOS ENANTIMEROS DO MEDICAMENTO CLORIDRATO DE BUPIVACANA INJETVEL

    Rio de Janeiro

    2011

  • Amanda da Silva Rio

    DESENVOLVIMENTO E VALIDAO DE MTODO ANALTICO POR

    CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA COM FASE ESTACIONRIA QUIRAL PARA AVALIAO DOS ENANTIMEROS DO MEDICAMENTO

    CLORIDRATO DE BUPIVACANA INJETVEL

    Mestrado Profissional

    Programa de Ps-Graduao em Vigilncia Sanitria

    Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade

    Fundao Oswaldo Cruz

    Orientadora: Prof. Dra. Silvana do Couto Jacob

    Colaborador: Dr. Andr Luiz Mazzei Albert

    Rio de Janeiro

    2011

  • Development and validation of high performance liquid chromatography with chiral stationary phase analytical method for evaluation of enantiomers in hydrochloride bupivacaine injection.

    Rio, Amanda da Silva

    Desenvolvimento e validao de mtodo analtico por cromatografia lquida de alta eficincia com fase estacionria quiral para avaliao dos enantimeros do medicamento cloridrato de bupivacana injetvel / Amanda da Silva Rio. Rio de Janeiro: INCQS/FIOCRUZ, 2011.

    130 f., il., tab.

    Dissertao (Mestrado Profissional) Fundao Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade, Programa de Ps-Graduao em Vigilncia Sanitria, Rio de Janeiro, 2011.

    Orientadora: Dra. Silvana do Couto Jacob Colaborador: Dr. Andr Luis Mazzei Albert

    1. Bupivacana. 2. Levobupivacana. 3. Dextrobupivacana. 4. CLAE. 5. Desenvolvimento. 6. Validao

  • Amanda da Silva Rio

    Desenvolvimento e validao de mtodo analtico por cromatografia lquida de alta

    eficincia com fase estacionria quiral para avaliao dos enantimeros do medicamento cloridrato de bupivacana injetvel

    Dissertao submetida Comisso Examinadora

    composta pelo corpo docente do Programa de Ps-

    Graduao em Vigilncia Sanitria do Instituto Nacional

    de Controle de Qualidade em Sade da Fundao

    Oswaldo Cruz e por professores convidados de outras

    instituies, como parte dos requisitos necessrios

    obteno do grau de Mestre em Vigilncia Sanitria.

    Aprovado em: ____/____/____

    Dr Ktia Christina Leandro (FIOCRUZ) Dr Glucia Barbosa Candido Alves Slana (UFRJ) Dr. Leonardo Lucchetti Caetano da Silva (FIOCRUZ) Orientadora Dr Silvana do Souto Jacob Colaborador Dr Andr Luis Mazzei Albert

    Rio de Janeiro

    2011

  • AGRADECIMENTOS A Deus, por me dar foras, perseverana e estmulo.

    Ao meu esposo e amigo Alexandler pela pacincia, apoio e compreenso, sem os

    quais, eu no conseguiria ter chegado at aqui.

    A minha me Lcia por estar sempre presente em minha vida e minha irm e amiga

    Aline, por sua demonstrao de admirao e carinho.

    Aos meus orientadores Silvana e Andr Mazzei pela orientao e idias.

    Aos membros da comisso examinadora, por aceitarem participar da banca e pelas

    sugestes que contriburam para a qualidade deste trabalho.

    Aos meus amigos Letcia, Ozias e Jos Luiz, pela amizade e importante ajuda na

    elaborao deste trabalho. Espero que um dia eu possa retribuir toda colaborao

    de vocs.

    As amigas Anna Maria e Renata pelas palavras de conforto nos momentos de

    desespero.

    A chefe de setor Mariete, agradeo pelo apoio.

    Aos amigos do grupo de medicamentos, Maria Virgnia, Antenor, Euclides, Solange,

    Elizabeth, Llian e Andr Colonese pelos momentos descontrados.

    Aos amigos do Departamento de Qumica do Instituto Nacional de Controle de

    Qualidade em Sade, agradeo o incentivo.

    A todos os colegas do Mestrado pelo companheirismo e amizade.

    A direo do INCQS por dar a oportunidade de realizao deste curso.

    Aos funcionrios da biblioteca e das secretarias do INCQS pela ateno.

  • RESUMO

    A soluo injetvel de cloridrato de bupivacana tem na sua potncia e no tempo de

    durao de sua ao, os grandes diferenciais clnicos que a tornam uma das

    solues anestsicas mais utilizadas. Esse frmaco possui em sua estrutura um

    carbono assimtrico, apresentando assim, dois ismeros, a levobupivacana e a

    dextrobupivacana, com comportamentos farmacolgicos independentes em

    decorrncia da estereosseletividade. At o momento, os mtodos analticos

    presentes nos compndios oficiais avaliam o somatrio dos ismeros na soluo

    injetvel de cloridrato de bupivacana, no havendo separao e quantificao das

    propores de cada um desses ismeros. O desenvolvimento de mtodos analticos

    adequados para determinar precisamente as concentraes dos ismeros de um

    frmaco em preparaes farmacuticas um pr-requisito essencial para controlar a

    qualidade. O objetivo deste estudo foi desenvolver e validar um mtodo analtico

    para determinar as propores dos ismeros presentes na soluo injetvel de

    cloridrato de bupivacana por cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE). O

    mtodo desenvolvido utilizou coluna cromatogrfica com fase estacionria quiral

    chirobiotic V Vancomycin (250 x 4,6) mm, 5,0m e fase mvel constituda de uma

    mistura de gua: meOH: TEA (60: 40: 0,2) pH= 5,0 ajustado com cido actico. O

    fluxo empregado foi de 0,8 mL/min e deteco no ultravioleta a 230 nm. Este estudo

    demonstrou que o mtodo desenvolvido apresentou linearidade no intervalo de

    concentrao de 0,20 a 1,40 mg/mL e mostrou-se satisfatrio na avaliao dos

    parmetros de seletividade, preciso, exatido, efeito matriz e robustez. Esse

    mtodo poder ser empregado no laboratrio de controle de qualidade do INCQS a

    fim de elucidar possvel fonte de agravo sade, relacionada as diferentes

    propores dos ismeros presentes na soluo injetvel de cloridrato de

    bupivacana, gerando resultados capazes de auxiliar na atuao de vigilncia

    sanitria.

    Palavras-chave: Bupivacana. Levobupivacana. Dextrobupivacana. CLAE.

    Desenvolvimento. Validao.

  • ABSTRACT

    Potency and time of action are the major clinical advantages of bupivacaine

    hydrochloride injection which makes it one of most useful anesthesic solutions. This

    drug has in its structure one assimetric carbon which leads to two forms of isomers,

    levobupivacaine and dextrobupivacaine, with independent pharmacological behavior

    because of its stereoselectivity. At the moment, available oficial analytical methods

    are able to evaluate the total isomers presented in injection solution of bupivacaine

    hydrochloride and do not separate and quantificate each one individually. Developing

    analytical methods to determine concentrations of each isomers individually of a drug

    in final products is a requisite to quality control. The aim of this study was to develop

    and validate a high performance liquid chromatography (HPLC) analytical method to

    quantificate bupivacaine hydrochloride isomers in injection. The method was

    developed using a chromatographic column with chiral chirobiotic V (vancomicyn)

    stationary phase and 250mm length, 4,6mm diameter and 5m particle size. Mobile

    phase was water:methanol:TEA (60:40:0,2) with pH = 5,0 adjusted with acetic acid;

    flow rate was 0,8 mL/min and detection was made by ultraviolet at 230 nm. This

    study have shown analytical method linearity from concentration 0,2 mg/mL to 1,4

    mg/mL and evaluation of selectivity, precision, accuracy, matrix effects and rugdness

    was demonstrated to be satisfactory. This analytical method could be employed by

    the quality control laboratory in INCQS to elucidate possible risk factors to public

    health related to different isomers proportion in bupivacaine hydrochloride injection,

    leading to results able to help health surveillance.

    Keywords: Bupivacaine. Levobupivacaine. Dextrobupivacaine. HPLC. Development.

    Validation.

  • LISTA DE SIGLAS E ABREVIATURAS

    ACN Acetonitrila

    AGP 1-acid glycoprotein (glicoprotena cida)

    ANOVA Anlise de Varincia

    ANVISA - Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria

    BVC Bupivacana

    CEME - Central de Medicamentos

    CLAE Cromatografia Lquida de Alta Eficincia

    CLAE- FEQ Cromatografia Lquida de Alta Eficincia com Fase Estacionria Quiral

    DAD Detector com arranjo de diodos

    DGSP Diretoria Geral de Sade Pblica

    DNSP Departamento Nacional de Sade Pblica

    DOU Dirio Oficial da Unio

    DPR Desvio Padro Relativo

    DPRr Desvio Padro Relativo de repetitividade

    DPRSpi Desvio Padro Relativo de Preciso Intermediria

    DSC Differential Scanning Calorimetry (Calorimetria Exploratria Diferencial)

    DRX Difrao de Raios-X

    FB Farmacopia Brasileira

    FC Fator de cauda

    FEQ Fase Estacionria Quiral

    FIOCRUZ Fundao Oswaldo Cruz

    FM Fase mvel

    ICH International Conference on Harmonization (Conferncia Internacional de

    Harmonizao)

    INMETRO Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial

    INCQS Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade

    MIP Polmeros impressos molecularmente

    K Fator de reteno ou Fator de capacidade

    LCCDM - Laboratrio Central de Controle de Drogas e Medicamentos

    LCCDMA - Laboratrio Central de Controle de Drogas, Medicamentos e Alimentos

    LD Limite de Deteco

    LQ Limite de Quantificao

  • LO Laboratrio Oficial