amanda da silva rio - arca.· development and validation of high performance liquid chromatography

PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM VIGILNCIA SANITRIA INSTITUTO NACIONAL DE CONTROLE DE QUALIDADE EM SADE

FUNDAO OSWALDO CRUZ

Amanda da Silva Rio

DESENVOLVIMENTO E VALIDAO DE MTODO ANALTICO POR CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA COM FASE

ESTACIONRIA QUIRAL PARA AVALIAO DOS ENANTIMEROS DO MEDICAMENTO CLORIDRATO DE BUPIVACANA INJETVEL

Rio de Janeiro

2011

Amanda da Silva Rio

DESENVOLVIMENTO E VALIDAO DE MTODO ANALTICO POR

CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA COM FASE ESTACIONRIA QUIRAL PARA AVALIAO DOS ENANTIMEROS DO MEDICAMENTO

CLORIDRATO DE BUPIVACANA INJETVEL

Mestrado Profissional

Programa de Ps-Graduao em Vigilncia Sanitria

Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade

Fundao Oswaldo Cruz

Orientadora: Prof. Dra. Silvana do Couto Jacob

Colaborador: Dr. Andr Luiz Mazzei Albert

Rio de Janeiro

2011

Development and validation of high performance liquid chromatography with chiral stationary phase analytical method for evaluation of enantiomers in hydrochloride bupivacaine injection.

Rio, Amanda da Silva

Desenvolvimento e validao de mtodo analtico por cromatografia lquida de alta eficincia com fase estacionria quiral para avaliao dos enantimeros do medicamento cloridrato de bupivacana injetvel / Amanda da Silva Rio. Rio de Janeiro: INCQS/FIOCRUZ, 2011.

130 f., il., tab.

Dissertao (Mestrado Profissional) Fundao Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade, Programa de Ps-Graduao em Vigilncia Sanitria, Rio de Janeiro, 2011.

Orientadora: Dra. Silvana do Couto Jacob Colaborador: Dr. Andr Luis Mazzei Albert

1. Bupivacana. 2. Levobupivacana. 3. Dextrobupivacana. 4. CLAE. 5. Desenvolvimento. 6. Validao

Amanda da Silva Rio

Desenvolvimento e validao de mtodo analtico por cromatografia lquida de alta

eficincia com fase estacionria quiral para avaliao dos enantimeros do medicamento cloridrato de bupivacana injetvel

Dissertao submetida Comisso Examinadora

composta pelo corpo docente do Programa de Ps-

Graduao em Vigilncia Sanitria do Instituto Nacional

de Controle de Qualidade em Sade da Fundao

Oswaldo Cruz e por professores convidados de outras

instituies, como parte dos requisitos necessrios

obteno do grau de Mestre em Vigilncia Sanitria.

Aprovado em: ____/____/____

Dr Ktia Christina Leandro (FIOCRUZ) Dr Glucia Barbosa Candido Alves Slana (UFRJ) Dr. Leonardo Lucchetti Caetano da Silva (FIOCRUZ) Orientadora Dr Silvana do Souto Jacob Colaborador Dr Andr Luis Mazzei Albert

Rio de Janeiro

2011

AGRADECIMENTOS A Deus, por me dar foras, perseverana e estmulo.

Ao meu esposo e amigo Alexandler pela pacincia, apoio e compreenso, sem os

quais, eu no conseguiria ter chegado at aqui.

A minha me Lcia por estar sempre presente em minha vida e minha irm e amiga

Aline, por sua demonstrao de admirao e carinho.

Aos meus orientadores Silvana e Andr Mazzei pela orientao e idias.

Aos membros da comisso examinadora, por aceitarem participar da banca e pelas

sugestes que contriburam para a qualidade deste trabalho.

Aos meus amigos Letcia, Ozias e Jos Luiz, pela amizade e importante ajuda na

elaborao deste trabalho. Espero que um dia eu possa retribuir toda colaborao

de vocs.

As amigas Anna Maria e Renata pelas palavras de conforto nos momentos de

desespero.

A chefe de setor Mariete, agradeo pelo apoio.

Aos amigos do grupo de medicamentos, Maria Virgnia, Antenor, Euclides, Solange,

Elizabeth, Llian e Andr Colonese pelos momentos descontrados.

Aos amigos do Departamento de Qumica do Instituto Nacional de Controle de

Qualidade em Sade, agradeo o incentivo.

A todos os colegas do Mestrado pelo companheirismo e amizade.

A direo do INCQS por dar a oportunidade de realizao deste curso.

Aos funcionrios da biblioteca e das secretarias do INCQS pela ateno.

RESUMO

A soluo injetvel de cloridrato de bupivacana tem na sua potncia e no tempo de

durao de sua ao, os grandes diferenciais clnicos que a tornam uma das

solues anestsicas mais utilizadas. Esse frmaco possui em sua estrutura um

carbono assimtrico, apresentando assim, dois ismeros, a levobupivacana e a

dextrobupivacana, com comportamentos farmacolgicos independentes em

decorrncia da estereosseletividade. At o momento, os mtodos analticos

presentes nos compndios oficiais avaliam o somatrio dos ismeros na soluo

injetvel de cloridrato de bupivacana, no havendo separao e quantificao das

propores de cada um desses ismeros. O desenvolvimento de mtodos analticos

adequados para determinar precisamente as concentraes dos ismeros de um

frmaco em preparaes farmacuticas um pr-requisito essencial para controlar a

qualidade. O objetivo deste estudo foi desenvolver e validar um mtodo analtico

para determinar as propores dos ismeros presentes na soluo injetvel de

cloridrato de bupivacana por cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE). O

mtodo desenvolvido utilizou coluna cromatogrfica com fase estacionria quiral

chirobiotic V Vancomycin (250 x 4,6) mm, 5,0m e fase mvel constituda de uma

mistura de gua: meOH: TEA (60: 40: 0,2) pH= 5,0 ajustado com cido actico. O

fluxo empregado foi de 0,8 mL/min e deteco no ultravioleta a 230 nm. Este estudo

demonstrou que o mtodo desenvolvido apresentou linearidade no intervalo de

concentrao de 0,20 a 1,40 mg/mL e mostrou-se satisfatrio na avaliao dos

parmetros de seletividade, preciso, exatido, efeito matriz e robustez. Esse

mtodo poder ser empregado no laboratrio de controle de qualidade do INCQS a

fim de elucidar possvel fonte de agravo sade, relacionada as diferentes

propores dos ismeros presentes na soluo injetvel de cloridrato de

bupivacana, gerando resultados capazes de auxiliar na atuao de vigilncia

sanitria.

Palavras-chave: Bupivacana. Levobupivacana. Dextrobupivacana. CLAE.

Desenvolvimento. Validao.

ABSTRACT

Potency and time of action are the major clinical advantages of bupivacaine

hydrochloride injection which makes it one of most useful anesthesic solutions. This

drug has in its structure one assimetric carbon which leads to two forms of isomers,

levobupivacaine and dextrobupivacaine, with independent pharmacological behavior

because of its stereoselectivity. At the moment, available oficial analytical methods

are able to evaluate the total isomers presented in injection solution of bupivacaine

hydrochloride and do not separate and quantificate each one individually. Developing

analytical methods to determine concentrations of each isomers individually of a drug

in final products is a requisite to quality control. The aim of this study was to develop

and validate a high performance liquid chromatography (HPLC) analytical method to

quantificate bupivacaine hydrochloride isomers in injection. The method was

developed using a chromatographic column with chiral chirobiotic V (vancomicyn)

stationary phase and 250mm length, 4,6mm diameter and 5m particle size. Mobile

phase was water:methanol:TEA (60:40:0,2) with pH = 5,0 adjusted with acetic acid;

flow rate was 0,8 mL/min and detection was made by ultraviolet at 230 nm. This

study have shown analytical method linearity from concentration 0,2 mg/mL to 1,4

mg/mL and evaluation of selectivity, precision, accuracy, matrix effects and rugdness

was demonstrated to be satisfactory. This analytical method could be employed by

the quality control laboratory in INCQS to elucidate possible risk factors to public

health related to different isomers proportion in bupivacaine hydrochloride injection,

leading to results able to help health surveillance.

Keywords: Bupivacaine. Levobupivacaine. Dextrobupivacaine. HPLC. Development.

Validation.

LISTA DE SIGLAS E ABREVIATURAS

ACN Acetonitrila

AGP 1-acid glycoprotein (glicoprotena cida)

ANOVA Anlise de Varincia

ANVISA - Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria

BVC Bupivacana

CEME - Central de Medicamentos

CLAE Cromatografia Lquida de Alta Eficincia

CLAE- FEQ Cromatografia Lquida de Alta Eficincia com Fase Estacionria Quiral

DAD Detector com arranjo de diodos

DGSP Diretoria Geral de Sade Pblica

DNSP Departamento Nacional de Sade Pblica

DOU Dirio Oficial da Unio

DPR Desvio Padro Relativo

DPRr Desvio Padro Relativo de repetitividade

DPRSpi Desvio Padro Relativo de Preciso Intermediria

DSC Differential Scanning Calorimetry (Calorimetria Exploratria Diferencial)

DRX Difrao de Raios-X

FB Farmacopia Brasileira

FC Fator de cauda

FEQ Fase Estacionria Quiral

FIOCRUZ Fundao Oswaldo Cruz

FM Fase mvel

ICH International Conference on Harmonization (Conferncia Internacional de

Harmonizao)

INMETRO Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial

INCQS Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade

MIP Polmeros impressos molecularmente

K Fator de reteno ou Fator de capacidade

LCCDM - Laboratrio Central de Controle de Drogas e Medicamentos

LCCDMA - Laboratrio Central de Controle de Drogas, Medicamentos e Alimentos

LD Limite de Deteco

LQ Limite de Quantificao

LO Laboratrio Oficial