amanda da silva rio - arca.· development and validation of high performance liquid chromatography
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PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM VIGILNCIA SANITRIA INSTITUTO NACIONAL DE CONTROLE DE QUALIDADE EM SADE
FUNDAO OSWALDO CRUZ
Amanda da Silva Rio
DESENVOLVIMENTO E VALIDAO DE MTODO ANALTICO POR CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA COM FASE
ESTACIONRIA QUIRAL PARA AVALIAO DOS ENANTIMEROS DO MEDICAMENTO CLORIDRATO DE BUPIVACANA INJETVEL
Rio de Janeiro
2011
Amanda da Silva Rio
DESENVOLVIMENTO E VALIDAO DE MTODO ANALTICO POR
CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA COM FASE ESTACIONRIA QUIRAL PARA AVALIAO DOS ENANTIMEROS DO MEDICAMENTO
CLORIDRATO DE BUPIVACANA INJETVEL
Mestrado Profissional
Programa de Ps-Graduao em Vigilncia Sanitria
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade
Fundao Oswaldo Cruz
Orientadora: Prof. Dra. Silvana do Couto Jacob
Colaborador: Dr. Andr Luiz Mazzei Albert
Rio de Janeiro
2011
Development and validation of high performance liquid chromatography with chiral stationary phase analytical method for evaluation of enantiomers in hydrochloride bupivacaine injection.
Rio, Amanda da Silva
Desenvolvimento e validao de mtodo analtico por cromatografia lquida de alta eficincia com fase estacionria quiral para avaliao dos enantimeros do medicamento cloridrato de bupivacana injetvel / Amanda da Silva Rio. Rio de Janeiro: INCQS/FIOCRUZ, 2011.
130 f., il., tab.
Dissertao (Mestrado Profissional) Fundao Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade, Programa de Ps-Graduao em Vigilncia Sanitria, Rio de Janeiro, 2011.
Orientadora: Dra. Silvana do Couto Jacob Colaborador: Dr. Andr Luis Mazzei Albert
1. Bupivacana. 2. Levobupivacana. 3. Dextrobupivacana. 4. CLAE. 5. Desenvolvimento. 6. Validao
Amanda da Silva Rio
Desenvolvimento e validao de mtodo analtico por cromatografia lquida de alta
eficincia com fase estacionria quiral para avaliao dos enantimeros do medicamento cloridrato de bupivacana injetvel
Dissertao submetida Comisso Examinadora
composta pelo corpo docente do Programa de Ps-
Graduao em Vigilncia Sanitria do Instituto Nacional
de Controle de Qualidade em Sade da Fundao
Oswaldo Cruz e por professores convidados de outras
instituies, como parte dos requisitos necessrios
obteno do grau de Mestre em Vigilncia Sanitria.
Aprovado em: ____/____/____
Dr Ktia Christina Leandro (FIOCRUZ) Dr Glucia Barbosa Candido Alves Slana (UFRJ) Dr. Leonardo Lucchetti Caetano da Silva (FIOCRUZ) Orientadora Dr Silvana do Souto Jacob Colaborador Dr Andr Luis Mazzei Albert
Rio de Janeiro
2011
AGRADECIMENTOS A Deus, por me dar foras, perseverana e estmulo.
Ao meu esposo e amigo Alexandler pela pacincia, apoio e compreenso, sem os
quais, eu no conseguiria ter chegado at aqui.
A minha me Lcia por estar sempre presente em minha vida e minha irm e amiga
Aline, por sua demonstrao de admirao e carinho.
Aos meus orientadores Silvana e Andr Mazzei pela orientao e idias.
Aos membros da comisso examinadora, por aceitarem participar da banca e pelas
sugestes que contriburam para a qualidade deste trabalho.
Aos meus amigos Letcia, Ozias e Jos Luiz, pela amizade e importante ajuda na
elaborao deste trabalho. Espero que um dia eu possa retribuir toda colaborao
de vocs.
As amigas Anna Maria e Renata pelas palavras de conforto nos momentos de
desespero.
A chefe de setor Mariete, agradeo pelo apoio.
Aos amigos do grupo de medicamentos, Maria Virgnia, Antenor, Euclides, Solange,
Elizabeth, Llian e Andr Colonese pelos momentos descontrados.
Aos amigos do Departamento de Qumica do Instituto Nacional de Controle de
Qualidade em Sade, agradeo o incentivo.
A todos os colegas do Mestrado pelo companheirismo e amizade.
A direo do INCQS por dar a oportunidade de realizao deste curso.
Aos funcionrios da biblioteca e das secretarias do INCQS pela ateno.
RESUMO
A soluo injetvel de cloridrato de bupivacana tem na sua potncia e no tempo de
durao de sua ao, os grandes diferenciais clnicos que a tornam uma das
solues anestsicas mais utilizadas. Esse frmaco possui em sua estrutura um
carbono assimtrico, apresentando assim, dois ismeros, a levobupivacana e a
dextrobupivacana, com comportamentos farmacolgicos independentes em
decorrncia da estereosseletividade. At o momento, os mtodos analticos
presentes nos compndios oficiais avaliam o somatrio dos ismeros na soluo
injetvel de cloridrato de bupivacana, no havendo separao e quantificao das
propores de cada um desses ismeros. O desenvolvimento de mtodos analticos
adequados para determinar precisamente as concentraes dos ismeros de um
frmaco em preparaes farmacuticas um pr-requisito essencial para controlar a
qualidade. O objetivo deste estudo foi desenvolver e validar um mtodo analtico
para determinar as propores dos ismeros presentes na soluo injetvel de
cloridrato de bupivacana por cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE). O
mtodo desenvolvido utilizou coluna cromatogrfica com fase estacionria quiral
chirobiotic V Vancomycin (250 x 4,6) mm, 5,0m e fase mvel constituda de uma
mistura de gua: meOH: TEA (60: 40: 0,2) pH= 5,0 ajustado com cido actico. O
fluxo empregado foi de 0,8 mL/min e deteco no ultravioleta a 230 nm. Este estudo
demonstrou que o mtodo desenvolvido apresentou linearidade no intervalo de
concentrao de 0,20 a 1,40 mg/mL e mostrou-se satisfatrio na avaliao dos
parmetros de seletividade, preciso, exatido, efeito matriz e robustez. Esse
mtodo poder ser empregado no laboratrio de controle de qualidade do INCQS a
fim de elucidar possvel fonte de agravo sade, relacionada as diferentes
propores dos ismeros presentes na soluo injetvel de cloridrato de
bupivacana, gerando resultados capazes de auxiliar na atuao de vigilncia
sanitria.
Palavras-chave: Bupivacana. Levobupivacana. Dextrobupivacana. CLAE.
Desenvolvimento. Validao.
ABSTRACT
Potency and time of action are the major clinical advantages of bupivacaine
hydrochloride injection which makes it one of most useful anesthesic solutions. This
drug has in its structure one assimetric carbon which leads to two forms of isomers,
levobupivacaine and dextrobupivacaine, with independent pharmacological behavior
because of its stereoselectivity. At the moment, available oficial analytical methods
are able to evaluate the total isomers presented in injection solution of bupivacaine
hydrochloride and do not separate and quantificate each one individually. Developing
analytical methods to determine concentrations of each isomers individually of a drug
in final products is a requisite to quality control. The aim of this study was to develop
and validate a high performance liquid chromatography (HPLC) analytical method to
quantificate bupivacaine hydrochloride isomers in injection. The method was
developed using a chromatographic column with chiral chirobiotic V (vancomicyn)
stationary phase and 250mm length, 4,6mm diameter and 5m particle size. Mobile
phase was water:methanol:TEA (60:40:0,2) with pH = 5,0 adjusted with acetic acid;
flow rate was 0,8 mL/min and detection was made by ultraviolet at 230 nm. This
study have shown analytical method linearity from concentration 0,2 mg/mL to 1,4
mg/mL and evaluation of selectivity, precision, accuracy, matrix effects and rugdness
was demonstrated to be satisfactory. This analytical method could be employed by
the quality control laboratory in INCQS to elucidate possible risk factors to public
health related to different isomers proportion in bupivacaine hydrochloride injection,
leading to results able to help health surveillance.
Keywords: Bupivacaine. Levobupivacaine. Dextrobupivacaine. HPLC. Development.
Validation.
LISTA DE SIGLAS E ABREVIATURAS
ACN Acetonitrila
AGP 1-acid glycoprotein (glicoprotena cida)
ANOVA Anlise de Varincia
ANVISA - Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
BVC Bupivacana
CEME - Central de Medicamentos
CLAE Cromatografia Lquida de Alta Eficincia
CLAE- FEQ Cromatografia Lquida de Alta Eficincia com Fase Estacionria Quiral
DAD Detector com arranjo de diodos
DGSP Diretoria Geral de Sade Pblica
DNSP Departamento Nacional de Sade Pblica
DOU Dirio Oficial da Unio
DPR Desvio Padro Relativo
DPRr Desvio Padro Relativo de repetitividade
DPRSpi Desvio Padro Relativo de Preciso Intermediria
DSC Differential Scanning Calorimetry (Calorimetria Exploratria Diferencial)
DRX Difrao de Raios-X
FB Farmacopia Brasileira
FC Fator de cauda
FEQ Fase Estacionria Quiral
FIOCRUZ Fundao Oswaldo Cruz
FM Fase mvel
ICH International Conference on Harmonization (Conferncia Internacional de
Harmonizao)
INMETRO Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial
INCQS Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade
MIP Polmeros impressos molecularmente
K Fator de reteno ou Fator de capacidade
LCCDM - Laboratrio Central de Controle de Drogas e Medicamentos
LCCDMA - Laboratrio Central de Controle de Drogas, Medicamentos e Alimentos
LD Limite de Deteco
LQ Limite de Quantificao
LO Laboratrio Oficial