AÇÃO DA PEDRA PRETA (CARVÃO ANIMAL) SOBRE O EFEITOLET AL DO VENENO DA SERPENTE Bothrops atrox

Venina Vale'Jane Raquel Silva de Oliveira'

Maria Célia Pires Costa"Marilene Oliveira da Rocha Borges'"

Antônio Carlos Romão Borges'"

RESUMO

A pedra preta, material obtido da carbonização de ossos bovinos, éutilizada popularmente no tratamento de picadas por animaispeçonhentos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação da pedrapreta sobre o efeito letal do veneno da serpente Bothrops atrox(jararaca) em camundongos. A pedra preta foi preparada a partir dofêmur bovino cortado em pedaços de 2 a 4 em, limpos e expostos aosol por 30 dias. Em seguida foram carbonizados sob brasa, colocadossob o solo e posteriormente lixados. Nos ensaios biológicos foramutilizados camundongos C3H, machos e fêmeas (20 a 27 g). Os animaisforam divididos em dois grupos: controle (CT, n=1 O) e tratados com apedra preta (TPP, n= IO). Os camundongos foram injetados, por viasubcutânea na coxa direita, com a dose letal (40mg/kg) do veneno deBothrops atrox. No grupo TPP, a pedra preta foi imediatamentecolocada sobre o local de inoculação e removida após 1 hora. O tempode sobrevida dos animais CT foi de 180,3±12,6 minutos (3 horas) e dogrupo TPP foi de 395,4±64 minutos (6 horas e 35 min.). Houve,portanto, um aumento (P<0,05, teste t de student) de 119% no tempode sobrevida dos animais tratados. Estes resultados indicam que apedra preta é capaz de reduzir o efeito letal do veneno de Bothropsatrox, quando inoculado em camundongos.

Palavras-chave: pedra preta; acidentes ofidicos; dose letal; Bothropsatrox; veneno .

• Alunas do Curso de Farmácia da Universidade Federal do Maranhão•• Doutora I Professora do Departamento de Química e Biologia da Universidade Estadual do Maranhão••• Doutor(a) I Professor(a) do Departamento de Ciências Fisiológicas da Universidade Federal doMaranhão

ABSTRACT

The black stone made from carbonized bovine bones, it is used fortreatment of snake bites. The objective ofthis study was to evaluatethe action ofthe black stone on lethal effect of Bothrops atrox snakevenom in mice. The black stone was made from cuted bovine femur(2-4 em), cleaned and exposed to sun for 30 days. The bone pieceswere carbonized below the burning coal, put under earth and thenpolished. It was used mice C3H, males and females (20-27 g). Theanimais were separated in two groups: control (CT, n=1O) and treatedwith black stone (TPP, n=10). It was inoculatedthe lethaldose (40 mg/Kg) of the Bothrops atrox snake venom in right thigh, bysubcutaneous way, ofthe animais. In the group TPP the black stonewas put on the local ofinoculation and the removed after one hour. Itwas measured the survival time ofthe animais (CTand TPP groups).The middle survival time ofthe group CT was 180.3±12.6minutes (3hours) and the group TPP was 395.4±64 minutes (6 hours and 35min.).There was a increase(P<O.05, Student t test)of 119% of survivaltime of treated animais. These findings support the hypothesis thatthe black stone was capable to reduce the lethal effect of Bothropsatrox venom inoculated in mice.

Keywords: black stone; snake bites; lethal dose; Bothrops atrox;venom.

1 INTRODUÇÃO

No Brasil, as serpentespeçonhentas pertencem aos gênerosBothrops, Crotalus, Lachesis eMicrurus, os quais são responsáveispor mais de 20.000 acidentes notifica-dos anualmente ao Ministério da Saú-de. As serpentes do gênero Bothropsestão distribuídas por todo o territórionacional, sendo responsáveis por apro-ximadamente 90% dos acidentesofidicos registrados no país (AMARALet al., 1991).

A serpente Bothrops atroxLinnaeus, 1758, conhecida popularmen-te como jararaca-do-rabo-branco, estáamplamente distribuída por to: Ia Regiãoamazônica, atingindo quase todos os

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países da América Latina, exceto Chi-le, Paraguai, Uruguai e Argentina(CAMPBELL e LAMAR, 1989). Estaserpente é também bastante comumnas áreas de floresta úmida do Pará eMaranhão, bem como nos cerrados,babaçuais e campos maranhenses, so-bretudo nos locais de cultura agrícola(CUNHA e NASCIMENTO, 1982).

A maioria dos acidentes ofídicosocorrem com pessoas do sexo mascu-lino, em idade adulta, exercendo, sobre-tudo, atividades agrícolas, e atingemprincipalmente os membros inferioresdas vítimas (CAIFFA et aI., 1997;FEITOSA et a!., 1997; NASCIMEN-TO, 2000). Acontecem predominante-mente na zona rural, embora sejamtambém problemas freqüentes na peri-

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feria dos grandes centros urbanos(CARVALHO e NOGUEIRA, 1998).

Em países de grandes dimensõesterritoriais, como o Brasil, no qual osacidentes ofídicos ocorrem principal-mente na zona rural e, portanto, dis-tantes dos postos de saúde, a vítimademora muito até receber atendimen-to médico. Em algumas regiões, as ví-timas só são atendidas em média,cerca de 6 horas após a picada(BORGES et al., 1999). Geralmente,o longo intervalo de tempo entre a pi-cada e a aplicação do tratamento es-pecífico causa agravamento do estadolesivo do paciente, o que pode levá-loaté mesmo ao óbito.

A medida terapêutica mais efi-caz disponível contra as ações do ve-neno é a administração de soroantiofídico, obtido de cavaloshiperimunizados, possuindo, por isso,custo elevado, estoques controlados epossíveis reações adversas comohipersensibilidade imediata,broncoespasmo, choque anafilático,dentre outras. Além disso, o soroantiofídico a ser aplicado deve ser es-pecífico para o gênero ao qual a ser-pente pertence e administrado o maisprecocemente possível e por viaendovenosa (BARRA VIEIRA, 1999).

Para que seja dado o diagnósticodos acidentes ofídicos e, conseqüen-temente, a aplicação do tratamentoadequado, as características clínicasapresentadas pelo paciente e/ou reco-nhecimento da serpente agressora sãobastante importantes. No entanto, acaptura do animal para identificaçãodo gênero nem sempre é possível(BARROSO et al., 1993). Além dis-

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so, alguns gêneros provocam sinais esintomas similares, como os deBothrops e Lachesis, dificultando quea vítima receba o soro específico, oqual é mais eficaz que o soropolivalente (BORGES et aI., 1999).

Em nosso país como os aciden-tes ofídicos ocorrem principalmente nazona rural ou nas periferias dos gran-des centros urbanos, as vítimas levammuito tempo até receberem tratamen-to médico. Além disso, existem rela-tos de alguns casos em que o soroantiofídico é aplicado por outras viasque não a endovenosa, como aintramuscular e a subcutânea(BORGES et aI., 1999).

A "pedra preta", material obtidoa partir da carbonização de ossos bo-vinos, é utilizada popularmente na Ín-dia e na África no tratamento depicadas por animais peçonhentos. Nes-tes locais, o material é vendido em es-tabelecimentos farmacêuticosacompanhado de prospecto que infor-ma quanto à indicação clínica, modode usar, processo para reutilização econfecção do mesmo. Freirasmissionárias vindas destes países trou-xeram a "pedra preta" para o interiordo Estado do Maranhão e doada a la-vradores (MORElRA et aI., 2001 ePEREIRA et al., 2001).

Considerando as dificuldadespara aplicação de um tratamento rápi-do e específico em casos de picadaspor animais peçonhentos, este traba-lho foi realizado com o objetivo de ava-liar a eficácia da pedra preta notratamento de acidentes ofídicos, atra-vés da avaliação de sua ação sobre oefeito letal do veneno de Bothropsatrox.

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2 MATERIAL E MÉTODOS

2.1 Preparo da pedra preta

O preparo das amostras de pedrapreta foi realizado segundo o métodoartesanal utilizado na África, descrito aseguir. O fêrnur bovino foi adquirido emfrigorífico de São Luís e cortado empedaços de 2 a 4 em. Toda a gorduradepositada na superfície foi retirada eos ossos colocados em água sob fervurapor aproximadamente 7 minutos. De-pois de limpos, foram expostos ao sol eao vento por 30 dias e então colocadosdiretamente sob a brasa até que estesficassem incandescentes. O tempo decarbonização foi de aproximadamente15 minutos.

Após a carbonização as amostrasforam colocadas imediatamente sob osolo arenoso, numa profundidade decerca do 40 em e por um tempo de 1hora. A temperatura do solo estava a26°C.

As amostras inteiras foram poli-das com lixa grossa n. 60 para que fi-cassem com a superfície plana, eposteriormente com lixa fina n. 220.

Os testes de aderência e deborbulhamento foram realizados parao controle de qualidade das amostrasproduzidas, de acordo com o prospectoque. acompanha a "pedra preta" vendi-da na África.

As amostras de pedra preta, apósutilização, foram descontaminadas parareutilização. As pedras foram lavadasem água limpa, fervidas por 30 minutose em seguida removidas da água, colo-cadas em leite até não formar bolhas eentão fervidas novamente em água. As

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pedras foram posteriormente levadasà estufa a 110°C por 20 minutos emantidas em dessecador até a realiza-ção do experimento.

2.2 Veneno

Para aestudo foi utilizado venenoda serpente Bothrops atrox obtido soba forma cristalina proveniente do Mu-seu Paraense Emílio Goeldi da Univer-sidade Federal do Pará. Uma soluçãode veneno foi preparada na concentra-ção de 16 mg/mL em solução salina(NaCI 0,15 M), a qual foi dividida emalíquotas e estocadas em congelador.Cada alíquota foi resfriada à tempera-tura ambiente, minutos antes de cadaexperimento.

2.3 Animais

Os animais utilizados neste traba-lho foram camundongos C3H(isogênicos), machos e fêmeas, compeso variando entre 20 a 27 g. Todosos animais foram provenientes doBiotério Central da Universidade Fe-deral do Maranhão.

2.4 Ensaios biológicos

Todos os camundongos foramimobilizados em tábuas de cortiça du-rante o experimento. Foram utilizados20 animais divididos em dois grupos:controle (CT, n=lO) e tratados com apedra preta (TPP, n=10).

Todos os animais receberam nacoxa direita, por via subcutânea, doseletal do veneno de Bothrops atrox de40 mglKg de peso de animal (BAR-ROS et al.,1998 e PAUMGARTTENet aI., 1989). Nos animais do grupo TPP,

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a pedra preta foi imediatamente colo-cada, com auxílio de esparadrapo, so-bre o local de inoculação. Após 1 hora,a pedra preta foi removida. Os animaisdo grupo CT não tiveram contato coma pedra preta.

O tempo de sobrevivência(sobrevida) dos animais controle (CT)e dos animais tratados com a pedra pre-ta (TPP) foi medido em minutos.

2.5 Análise estatística

Os resultados foram expressoscomo médias ± erro padrão das médias.A comparação entre as médias foi rea-lizada por meio do teste t de student nãopareado, utilizando o software Graph PadPRISM V3. As diferenças foram con-sideradas significativas quando P<0,05.

3 RESULTADOS EDISCUSSÃO

3.1 Amostras de pedra preta

Durante o preparo, as amostrasde pedra preta que apresentaram levesfraturas ou estavam bastante quebra-diças foram descartadas.

As demais amostras, durante ostestes de aderência e borbulhamentomostraram que estavam aptas ao uso.Foi observado ainda que quanto maioro tempo de carbonização das amostras,maior o poder de aderência da "pedra".

3.2 Ensaios biológicos

De acordo com os resultados ob-tidos nos ensaios biológicos foi obser-vado que o tempo de sobrevida dosanimais do grupo CT foi de 180,3 ± 12,6

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minutos, o que corresponde a cerca de3 horas. Nos animais do grupo TPP, otempo de sobrevida foi de 395,4 ± 64minutos, o que corresponde a 6 horas e35 minutos (Figura 1), havendo assim,um aumento na sobrevida dos animaistratados com a pedra preta em cercade 119 %. Portanto, o tratamento coma pedra preta foi significativamente efi-caz em aumentar a sobrevida dos ani-mais.

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Fig. 1: Tempo de sobrevida (minutos) decamundongos. em condiçãocontrole (CT) e tratados com a pedrapreta (TPP) após inoculação dedose letal do veneno de Botropsatrox. * significaP<O,05 vursus CT.

Como a pedra preta demonstrou,neste trabalho, ser capaz de reduzir oefeito letal da peçonha quando inocula-da em camundongos, pode, assim, seruma importante alternativa para o tra-tamento de picada por animaispeçonhentos até que a vítima possa re-ceber atendimento ambulatorial.

Embora a pedra preta não substi-tua o tratamento específico com o soro

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antiofidico, ela apresenta algumas van-tagens: não tem ação específica com-provada para alguns tipos de venenos,podendo ser utilizada em acidenteofídico causado por serpentes de qual-quer gênero; não apresenta reaçõesadversas comprovadas; seu transportee uso são fáceis, o que permite que aprópria vítima a aplique sobre o localda picada imediatamente após o aci-dente; e seu processo de confecção éfácil e barato.

O mecanismo de ação da pedrapreta ainda está sendo estudado. Apedra preta é obtida através de um pro-cesso de carbonização de ossos bovi-nos, que possuem altaporosidade epodem fornecer, assim, alta área super-ficial. Em trabalhos paralelos a esteestudo, tem sido demonstrado que apedra preta tem alto poder adsorvente(MOREIRA et aI., 2001 e PEREIRAet al., 2001). Desta forma ao adsorvervárias substâncias contidas no veneno,a pedra preta reduz a concentração decomponentes do veneno no local da pi-

cada, o que consequentemente reduz aintensidade das seqüelas produzidaspela secreção ofídica.

4 CONCLUSÃO

A pedra preta demonstrou, nestetrabalho, ser capaz de reduzir o efeitoletal do veneno de Bothrops atrox, ino-culado em camundongos, por aumen-tar a sobrevida destes animais. Destaforma, a pedra preta pode ser uma im-portante alternativa terapêutica, sobre-tudo nos casos em que a vítima demoraa receber atendimento médico, permi-tindo que o paciente tenha mais chancesde sobrevivência.

AGRADECIMENTOS

Os autores agradecem ao Bancoda Amazônia S. A. (BASA) pelo fi-nanciamento desta pesquisa.

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