a07v17n3
TRANSCRIPT
325
Dierenciación morológica y molecular de cinco taxa de P lukenetia
Rev. peru. biol. 17(3): 325 - 330 (Db 2010)
h
t
t
p
:
/
/
s
i
s
b
i
b
.
u
n
m
s
m
.
e
d
u
.
p
e
/
B
V
R
e
v
i
s
t
a
s
/
b
i
o
l
o
g
i
a
/
b
i
o
l
o
g
i
a
N
E
W
.
h
t
m
Rev. peru. biol. 17(3): 325 - 330 (Db 2010)© F Cs Bs UNMSM
Diferenciación morfológica y por ISSR (Inter simple sequencerepeats) de especies del género Plukenetia (Euphorbiaceae) de la
Amazonía peruana: propuesta de una nueva especie
Ángel Rodríguez1*, Mike Corazon-Guivin1, Danter Cachique1, Kember Mejía1,Dennis Del Castillo1, Jean-François Renno2, Carmen García-Dávila1
Differentiation morphological and by Inter simple sequence repeats(ISSR) of species of genus Plukenetia (Euphorbiaceae) from Peruvian
Amazon: suggestion for a new species
*corresponding author
1 Instituto de Investigaciones dela Amazonía Peruana, IIAP- La-boratorio de Biología y GenéticaMolecular – LBGM. Av. José A.Quiñones km. 2.5 - Apartado Postal784, Iquitos, Perú.
Email Ángel Rodríguez:[email protected] Carmen García-Dávila:[email protected]
3 Institut de Recherche pour leDéveloppement – IRD-. Montpellier,France.
Presentado: 02/10/2010 Aceptado: 28/11/2010Publicado online: 21/01/2011
Introducción
L vs pss s pss Ap, h p vés s ss, s ss sps ps vs vbé (Zp 2003). L ps vs bh q hs ss sps h s ss p, s ú hs ssbs, és qs. Plukenetia volubilis L.,sh h s p v A p, sss ps s s ps, ás ss(ss: s 3, 6; 9) v E (s s) s sv s qs ss ss , p, s, , s (Hk 1992).
E v sh h s s sps -s, s hss, s bé s b. S v p s psbs s (Aév
1995), v s s v; s b, s b-sv vb é, q, q h q ps ps vs h sps é Plukenetia.Hs ñ 2008 ss p A p, sps bs s s: P. volubilis L., P. brachybotrya Mü. A., P. loretensis U, P. polyadenia Mü. A. R s, p A-s, P. huayllabambana Bss, C. Té & A. G.Nss bsvs s sbs Hb As (AMAZ) sbps s s s ss sps, q p s .
Ls s s s pss h-s p s ss ss - p s s s. As, ADN h s p pb ssá p s (J . 1999). L -
Resumen
En el presente trabajo se estudian cinco especies del género Plukenetia de la Amazonía peruana: P. brachy-
botrya, P. loretensis, P. polyadenia, P. huayllabambana, P. volubilis (procedencia San Martín); y de un supuestomorfotipo (P. volubilis, procedencia Cusco). Los 126 especímenes estudiados fueron identicados medianteclaves de caracteres morfológicos (formas de hojas, tallos y semilla; posición de glándulas basilaminares)y posteriormente mediante marcadores moleculares ISSR (CAA, CAG, GACA). Los análisis morfológicospermitieron separar las cinco especies descritas: P. brachybotrya, P. loretensis, P. polyadenia, P. volubilis y
P. huayllabambana. Los dos supuestos morfotipos de P. volubilis fueron discriminados por la posición de lasglándulas, tamaño de semillas y forma del tallo. Los resultados proporcionados por el Análisis Factorial deCorrespondencia (AFC) y corroborados por el Índice de jación (F
ST), distancia genética y el dendograma
estimado por el método UPGMA, evidencian una fuerte diferenciación entre los seis taxa, corroborando laidentidad taxonómica molecular de las cinco especies ya descritas morfológicamente. Además, los resultados(Fst y la distancia genética) indicarian que P. volubilis (del Cusco) podría ser una nueva especie de SachaInchi, aún no descrita para la ciencia.
Palabras clave: Sacha inchi, ISSR, Plukenetia, Biodiversidad, Amazonía.
Abstract
In this work, ve taxa of the genus Plukenetia from Peruvian Amazon: P. brachybotrya, P. loretensis, P. poly-
adenia, P. huayllabambana, P. volubilis (from San Martin) and one morphotype (P. volubilis, from Cusco) werestudied. The 126 specimens used were identied by morphological keys (shapes of leaves, stems and seed;basilaminar glands position) and by ISSR molecular markers (CAA, CAG, GACA). The morphological analysisof the different taxa studied allowed us to clearly identify ve described species: P. brachybotrya, P. loretensis,P. polyadenia, P. volubilis (from San Martin) and Plukenetia huayllabambana. Both morphotypes of P. volubilis (San Martin and Cusco) were distinguished for the position of the glands, seed size and shape of the stem.The results provided by Correspondence Factorial Analysis (AFC) and supported by the xation index (Fst),genetic distance and the dendogram estimated by the UPGMA method, show a strong differentiation amongthe six taxa, corroborating the molecular taxonomic identity of the ve species morphologically described. Also,results (Fst and Genetic distance) suggest that P. volubilis (from Cusco) could be a new Sacha Inchi species,not yet described to science.
Keywords: Sacha inchi, ISSR, Plukenetia, Biodiversity, Amazon.
Versión Online ISSN 1727-9933
326
Rodríguez et al.
Rev. peru. biol. 17(3): 325 - 330 (Db 2010)
h t t p : / / s i s b
i b . u
n m s m
. e d u
. p e / B
V R e v
i s t a s / b i o l o g
i a / b i o l o g
i a N E W
. h t m
s s ISSR ss v pp p . P jp, Ch-K . (2007) - s ISSR áss Sullaspinosissima S . capitata, s s é ss s sps; s q Sh . (2006) áss 20 sps Lycoris , s ps sps, q s ss bsvs s s.Rss ss s ISSR -s , b, s ps (Ch . 2007, Yk . 2003, X & S 2001, R . 2001, H . 2003, L 1999). As s Asp Ph Gp(APG 2003), v p s é s v s s s ss és ps, pp pp v vs é ssá ps s.
E s s, ps s v bjv -b ss éPlukenetia s vs s áss sps é, p é ISSR.L p ps bj svá bs ps j j é.
Material y métodos
Muestras biologicas
S ss bs 126 vs p-s sps: Plukenetia huayllabambana (Ch,R As; 18M 0229606, UTM 9279162), P. polyade-nia (Pvs, R L; 19M 0174043, UTM 9631195), P.loretensis y P. brachybotrya (P As, R L;18M 0680833, UTM 9576661), Plukenetia volubilis (Sh,R S M; 18M 0315372, UTM 9301077) ú p p s s bé Plukenetia volubilis q pv Eh R Cs (18M 0765342, UTM 8583639).
Ls ss bás s (hjs, s s) , s p j ss vs s. Ls ss b-ás pss s s Hb As (AMAZ), Uvs N A p – UNAP.
Extracción y amplifcación de ADN
L p j (s-vs S C Ah), é CTAB (D & D 1987). L p ADN s s ps CAA (CAACAACAACAACAA),CAG (CAGCAGCAGCAGCAG) GACA (GACAGACA-GACAGACA), sñs p B Bh (2001); é I Sp Sq Rp-ISSR (Zkw . 1994). Ls ps s vús s 25µL : 100/µL ADN, 5 U/µL Tq ps, 5X Bf, 25M MC
2,
10M NTPs, 10µM p p. Ls -s p : s 95 ºC 1 ., s 27 s sss : s- (94 ºC 1 .), hb (37-60 ºC, p 1 .), (72 ºC 4 .), s s 72 ºC 7 . L v p
p s s 2% ñs b (10/L). Ps s v ps () s ss s p 6%, ñs é é Rb.
Interpretación y tratamiento de datos
S b bs ps (1) s (0) s bs bsvs (ps) svs. L vs é s s (s-ps s p) Plukenetia vs Aáss F Csp (AFC), s s bs j (F
ST) pps p W Ckh (1984). Ess
áss s sw GENETIX vs 4.05 (Bkh . 2004). Ls s sps sbs bs (é UPGMA), b p s é(D) b sú Rs . (1983), s s vs Bsp (s bs 1000 ps) bs PHYLIP vs 3.5 (Fss1993). Ls ábs vss swTREVIEW (P 1996).
Resultados
Caracterización morológica y tratamiento taxonómico
E bs s vs s Gsp (1993) s sps s s s-s: P. loretensis, P. brachrybotrya, P. polyadenia, P. volubilis (p S M); P. huayllabambana bs ssps Bss . (2009). Obsvás qéP. volubilis (p Cs) ps s ss (hjs, ss) s spss s (Tb 1).
Ls ss s s ás ss s s ss s sps Plukenetia (F. 1), q v s s hs s; s s s ss, sp s s ss [P. loretensis, P. brachy-botrya, P. volubilis (p S M) P. polyadenia], s P. huayllabambana P. volubilis (p Cs). Ass s bsv sb v ñ s ss.
Caracterización molecular
E s Aáss F Csp (AFC)s s ss ss s vé s sbps s (F. 2: A, B, C).E áss F
ST ps (Tb 2) s
s s s (vs, p= 0). P. brachybotrya P. volubilis (pCs) F
STás v (F
ST= 0,98491; p= 0). M-
s q P. huayllabambana P. volubilis (p SM) s s s ás s (F
ST= 0,89562,
p= 0). Ls FST
p ps ss svs.
Ls ss és (Tb 2) ss sú Rs . (1983) s s s p ps. S q P. volubilis (p S M) P. huayllabambana ps s - (D= 2,25973). E q P. brachybotrya P. volubilis
327
Dierenciación morológica y molecular de cinco taxa de P lukenetia
Rev. peru. biol. 17(3): 325 - 330 (Db 2010)
h
t
t
p
:
/
/
s
i
s
b
i
b
.
u
n
m
s
m
.
e
d
u
.
p
e
/
B
V
R
e
v
i
s
t
a
s
/
b
i
o
l
o
g
i
a
/
b
i
o
l
o
g
i
a
N
E
W
.
h
t
m
Figura 1. Semillas de de las seis agrupaciones del género Plukenetia estudiados en la Amazonía peruana: A = P. brachybotrya; B = P. lore-
tensis; C = P . volubilis (procedencia San Martín); D = P. volubilis (procedencia Cusco); E = P. huallaybambana; F = P. polyadenia.
(A)(B)
(C)(D)
(E)(F)
Caracteresobservados
Agrupaciones Plukenetia estudiadas
P. loretensis P. brachybotrya P. polyadenia P. volubilis(procedenciaSan Martín)
P. volubilis(procedencia
Cusco) P. huayllabambana
Glándulasfoliaresbasilaminares
Glándulasbasilaminaresen uno o más
pares próximas alpecíolo
Glándulasbasilaminares
numerosaspróximas al
pecíolo.
Un únicopromontorio
glandular
Par de glándulasbasilaminarespróximas al
pecíolo.
Par de glándulasbasilaminaresrelativamentedistantes del
pecíolo.
Par de glándulasbasilaminaresrelativamentedistantes del
pecíolo.
Borde y basede la hoja
Borde crenado ybase caudada.
Borde liso y basecaudada.
Borde lisoy base
acuminada.
Borde crenado ybase caudada.
Borde aserrado ybase caudada.
Borde crenado ybase caudada.
Base del tallo Redondeado Redondeado Aplanado Redondeado Redondeado Hexagonal
Fruto(cápsula)
Cada carpelo concornículo agudo
Cada carpelocon un tubérculo
redondeado
Cuadrangularcon ángulos
quillados
Cuadrangularcon ángulos
quillados
Cuadrangular conángulos quillados
Cuadrangular conángulos quillados
Tamaño de lacápsula
Diámetro aprox.1,15 cm.
Diámetro aprox.1,15 cm.
Diámetro aprox.de 6-11 cm.
Diámetro aprox.de 5 a 6 cm.
Diámetro aprox. 5a 6 cm.
Diámetro aprox. 6a 8 cm.
Superfcie dela semilla
Lisa Lisa Lisa Lisa Rugosa Rugosa
Forma de lasemilla
Redondeada Redondeada Redondeada AplanadaLigeramente
aplanadaLigeramente
aplanada
Tamañosemilla
Media = 0,51 x0,42 cm
Media = 0,41 x0,39 cm
Media = 2,89 x2,6 cm
Media = 2,01x0,85 cm
Media = 2,01 x1,36 cm
Media = 2,38 x 1,66cm
Tabla 1. Principales diferencias morfológicas de los seis taxa del género Plukenetia estudiados en la Amazonía peruana.
328
Rodríguez et al.
Rev. peru. biol. 17(3): 325 - 330 (Db 2010)
h t t p : / / s i s b
i b . u
n m s m
. e d u
. p e / B
V R e v
i s t a s / b i o l o g
i a / b i o l o g
i a N E W
. h t m
(p Cs) ps s é(D= 4,19378).
E b é UPGMA (F.3) s s pps ps: p p P. volubilis (p S M), P. volubilis (p- Cs) P. huayllabambana (bsp= 100), s bsv sb-p s p P. volubilis (p S M) P. huayllabambana (bsp= 68); s p P. polyadenia, P. loretensis P.brachybotrya (bsp= 100); P. brachybotrya P. loretensis ss ás s (bsp= 96).
Discusión
E vs Plukenetia Gsp (1993) s 11sps ps, s s p s vs sps s s, , s p, ñ hj. E p p Cph, p P. volubilis , P. lehmaniana, P. polyadenia P. stipellata; s p, Epk P. brachybotrya, P. loretensis P. verrucosa. E é Plukenetia p s p ps ás bss á , 4-b háb - p s vs s.
U áss p s s s s pb s Plukenetia s, sps:Plukenetia volubilis (p S M), P. polyadenia, P.huyllabambana, P. loretensis y P. brachybotrya.
Plukenetia loretensis P. brachybotrya sps s ás p ps p ssás bss p.
Tbé s p bsv á bs P. huayllabambana ( h) P. polya-denia ( p).
Ls s v s s áss. E ñ áps s ss, sp - s : P. brachybotrya P. loretensis s sss ps s s , sp ssss s ss sp s p bs sps;
Figura 2. Proyección gráca de los resultados del AFC: (A) ejes 1y 2, (B) ejes 1 y 3, (C) ejes 1 y 4 para los individuos de de las seisagrupaciones de Plukenetia estudiados en la Amazonía peruana.P. huayllabambana = ▲, P. polyadenia =*, P. loretensis =♦, P. bra-
chybotrya =▬, P volubilis (procedencia San Martín) =●, P. volubilis (procedencia Cusco) =■. Algunos puntos en los grácos representanla sobreposición de más de un individuo.
Pares de taxa FST
D
P. volubilis (procedencia San Martín) - P. volubilis (procedencia Cusco) 0,92804*** 2,63171
P. volubilis (procedencia San Martín) - P. huayllabambana 0,89562*** 2,25973
P. volubilis (procedencia San Martín) - P. polyadenia 0,95347*** 3,06761
P. volubilis (procedencia San Martín) - P. brachybotrya 0,97088*** 3,53633
P. volubilis (procedencia San Martín) - P. loretensis 0,96092*** 3,24215
P. volubilis (procedencia Cusco) - P. huayllabambana 0,91025*** 2,41075
P. volubilis (procedencia Cusco) - P. polyadenia 0,96939*** 3,48649
P. volubilis (procedencia Cusco) - P. brachybotrya 0,98491*** 4,19378
P. volubilis (procedencia Cusco) - P. loretensis 0,97678*** 3,76277
P. huayllabambana - P. polyadenia 0,95738*** 3,15540
P. huayllabambana - P. brachybotrya 0,97519*** 3,69661
P. huayllabambana - P. loretensis 0,96564*** 3,37093
P. polyadenia - P. brachybotrya 0,97223*** 3,58366
P. polyadenia - P. loretensis 0,96298*** 3,29635
P. brachybotrya - P. loretensis 0,95991*** 3,21657
Tabla 2. Estimación de Índices de Fijación (Fst) y Distancias genéticas (D) según Reynolds et al. (1983) para los seis taxa de
Plukenetia estudiadas en la Amazonía peruana.
329
Dierenciación morológica y molecular de cinco taxa de P lukenetia
Rev. peru. biol. 17(3): 325 - 330 (Db 2010)
h
t
t
p
:
/
/
s
i
s
b
i
b
.
u
n
m
s
m
.
e
d
u
.
p
e
/
B
V
R
e
v
i
s
t
a
s
/
b
i
o
l
o
g
i
a
/
b
i
o
l
o
g
i
a
N
E
W
.
h
t
m
á s ss s sps s áps: P. loretensis p , P. brachybotrya p s s bé.
P , P. polyadenia s sp q ps ñ s ( 6 11 ) ss, ss ss , áps s ás qs.
Ls ss P. volubilis (p S M) s ñ q s P. huayllabambana P. volubilis (p Cs), s q s P. huayllabambana ssb s q s P. volubilis (pS M p Cs).
L vb s s s P. volubilis bsvs p M (2006), q p s 47 ps Aév (1995) q ps s sbs á j, ñ ss hjs ss. Ess vs bsvs s s s s psb hsvs s, s s s hs p jp s -s s, p v s s s bsvs s , ps vb á (ps) s sps ps.
Ls ss s h psb s ss és b s ss (s áss AFC). C é s sps: P. brachybotrya, P.loretensis, P. polyadenia, P. volubilis (p S M) P. huayllabambana. E AFC ás s q P. volubilis (p S M), P. huayllabambana P. volubilis
(p Cs), s s és s s, ss ss bs s ss F
ST s é (Tb 3) s bsv q s
vs s ss s ps s ss ss s s sps. Ev é s ss ps ss.
E b p s ss ésp s sps s é Plukenetia s s ps pps: p - p P. volubilis (p S M), P. huayllabam-bana P. volubilis (p Cs), s q P. volubilis (p S M) P. huayllabambana s ás s (s é = 2,26). Ls p b P. polyadenia, P. loretensis P.brachybotrya, s q ss s ús s áss p (ss és: P. brachybotrya P. loretensis = 3,22).
Ess ps és s p ps s, s p- p s v p, q s p ps ss s ssps. A s s Pluke-netia ps (bs s s ñ ) p Gsp (1993), P. polyadenia s j P. volubilis p Chph.
Ls s bs s bj s q Pluke-netia polyadenia s ás P. brachybotrya P. loretensis q s sps q ps ss pqñs(: P. loretensis = 0,51 0,42 ; P. brachybotrya = 0,41 0,39 ), s q ñ s s ps s á s () pp s sps ss.
P. huayllabambana
P. volubilis
procedencia Cusco
P. volubilis
procedencia San Martín
P. loretensisP. brachybotrya
P. polyadenia
100
100
96
68
10
Figura 3. Dendograma de las seis agrupaciones del género Plukenetia estudiados en la Amazonía peruana. Elaborado mediante el métodoUPGMA a partir de los datos de distancia genética de Reynolds et al. (1983). Los números en las ramas representan los valores de bootstrappara 1000 repeticiones.
330
Rodríguez et al.
Rev. peru. biol. 17(3): 325 - 330 (Db 2010)
h t t p : / / s i s b
i b . u
n m s m
. e d u
. p e / B
V R e v
i s t a s / b i o l o g
i a / b i o l o g
i a N E W
. h t m
Conclusiones
Ls ss s bs s v s ss Plukenetia ss,b s sps Plukenetia ss hs p Ap: P. brachybotrya, P. loretensis , P. polyadenia P. volubilis P. huayllabambana.
As s, v é s s-ps ss s s s spss ps P. volubilis ps SM Cs, s q ss ps pss és sps s ps P. volubilis , s sps s s. P s ss s s és s sps ss, ps v s é, s s bj p v v sp Sh Ih Cs.
Agradecimientos
A p Iv Cpv p AP - INCAGRO p p ps vs.
Literatura citadaAPG, Angiosperm Phylogeny Group. 2003. An update o� the An-An update o� the An-
giosperm Phylogeny Group classication for the orders and
families of owering plants: APG II. Botanical Journal of
the Linnean Society 141: 399–436.
Arévalo G. 1995. El cultivo del sacha inchi (Plukenetia volubilis
l.) en la Amazonía. Programa Nacional de Investigación
en Recursos Genéticos y Biotecnología - PRONARGEB,
Estación Experimental El Porvenir – Tarapoto, Perú. 21 pp.
Belkhir K., P. Borsa, I. Chichi, et al. 2004. Genetix 4.05.2, logiciel
sous windowns TM pour la genétique des populations. La-
boratoire génome, populations, interactions, CNRS UMR
5000, Université de Montpellier II, Montpellier, France.
Bornet B. & M. Branchard. 2001. Non anchored Inter Simple Se -
quence Repeat (ISSR) Markers: Reproducible and Specic
Tools for Genome Fingerprinting; Plant Molecular Biology
Reporter 19: 209–215.
Bussmann R.W., C. Téllez & A. Glenn. 2009. Plukenetia huaylla-
bambana sp. nov. (Euphorbiaceae) �rom the upper Amazon
of Peru. Nordic Journal of Botany 27: 313-315.
Chen J., W.R. Gituru & Q. Wang. 2007. A comparison of the extent of
genetic variation in the endangered Sagittaria natans and its
widespread congener S. trifolia. Aquatic Botany 87: 1–6.
Chennaoui-Kourda H., S. Marghali, M. Marrakchi & N. Tri-Farah.
2007. Genetic diversity o� Sulla genus (Hedysarea) and
related species using Inter-simple Sequence Repeat
(ISSR) markers. Biochemical Systematics and Ecology
35: 682-688.
Doyle J.J. & J.L. Doyle. 1987. A rapid DNA isolation procedure
for small quantities of fresh leaf tissue. Phytochem. Bull.
19:11-15.
Felsenstein J. 1993. PHYLIP (Phylogeny Inference Package), version
3.5 c. Seattle: University o� Washington.
Gillespie L.J. 1993. A synopsis of Neotropical Plukenetia (Euphor -
biaceae) including two new species. Systematic Botany
18 (4): 575 – 592.
Hamaker B.R., C. Valles, R. Gilman, et al. 1992. Amino Acid and
Fatty Acid Proles of the Inca Peanut (Plukenetia volubilis
L.), Cereal Chem. 69: 461–463.
Hang A., C.S. Burton & D.L. Ho��man. 2003. Use o� intersimple
sequence repeat (ISSR) polymorphisms to study genetic
relationships in closely related North American malting
barley cultivars. J. Genet. Breed. 91: 16–21.
Judd W., C. Campbell, E. Kellog, P. Stevens. 1999. Plant Systemat -
ics: A Phylogenetic Approach. Sinauer Associates, Inc.
Sunderland, MA, USA. 464 pp.
Liu S. 1999. Cotton genetic mapping and QTL analysis using simple
sequence repeat markers and the identication of their
chromosome location. [MS Thesis]. New Mexico State
University, Las Cruces, NM.
Manco E. 2006. Cultivo de sacha inchi. INIEA – SUDIRGEB – Es-Cultivo de sacha inchi. INIEA – SUDIRGEB – Es-
tación Experimental Agraria “EL PORVENIR”, Tarapoto,
San Martín – Perú, 8 pp.
Page R.D.M. 1996. TreeView, Tree drawing software for Apple
Macintosh and Microsoft Windows. Division of Environ -
mental and Evolutionary Biology, Instituteo� Biomedical
and Life Sciences, University of Glasgow. Glasgow,
Scotland, UK.
Raina S.N., V. Raini, T. Kojima, et al. 2001. RAPD and ISSR
ngerprints as useful genetic markers �or analysis o�
genetic diversity, varietal identication, and phylogenetic
relationships in peanut (Arachis hypogaea) cultivars and
wild species. Genome 44: 763–772.
Reynolds J.S., B.S. Weir & C.C. Cockerham. 1983. Estimation
of coancestry coefcient: basis for a short-term genetic
distance. Genetics 105: 767-779.
Shi S, Y. Qiu, L. Wu & C. Fu. 2006. Interspecic relationships of
Lycoris (Amaryllidaceae) in�erred �rom inter-simple se-
quence repeat data. Scientia Horticulturae 110: 285–291.
Weir B.S. & C.C. Cockerham. 1984. Estimating F-statistics for the
analysis o� population structure. Evolution 38: 1358-1370.
Xu F. & M. Sun. 2001. Comparative Analysis of Phylogenetic Re -
lationships o� Grain Amaranths and Their Wild Relatives
(Amaranthus; Amaranthaceae) Using Internal Transcribed
Spacer, Amplied Fragment Length Polymorphism, and
Double-Primer Fluorescent Intersimple Sequence Repeat
Markers. Molecular Phylogenetics and Evolution 21(3),
372–387.
Yockteng R, H.E. Ballard, G. Mansion, et al. 2003. Relationships
among pansies (Viola section Melanium) investigated us -
ing ITS and ISSR markers. Plant Syst. Evol. 241: 153–170.
Zapata S. 2003. Posibilidades y potencialidad de la agroindustria
en el Perú en base a la biodiversidad y los bionegocios.
Comité Biocomercio Perú. Lima – Perú. 70 pp.
Zietkiewicz E., A. Rafalski & D. Labuda. 1994. Genome ngerprint-
ing by simple sequence repeat (SSR)-anchored polymerase
chain reaction amplication. Genomics 20: 176-183.