a novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

15

Click here to load reader

Upload: satish-gaikwad

Post on 06-Aug-2015

8 views

Category:

Documents


2 download

DESCRIPTION

A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

TRANSCRIPT

Page 1: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

� ����� ���������� ��������������������� ����������������� ��� ��� ������� ��� �����������

���� ���������� �� ��������� �!� "�� � #�$� #����%

��������������� � ����� �� � �� � � ����� � ����� � ���� ���� �� ������� �� � ����� �� ����������� � !%� �� � ��� !����"�"�� #��� �$����� ���� ���� �� ������ #��� �$���� %�����"� � �� � ����� �� �������&�� � !

�������� &' � ��� '((') �������� �� ������ ���� && *� '((') ��� ��� + ,��� '(('

��������

-� ��� �� ���� .� ��. ��� ���������������� /0*�"1 ������ �� ����2������� ���������� �� ������� ��� �� �������

���� �3� ���� �� ��� ��� ����� %� �� ������ ��� ��� ���������� �������� �� ���� 0$� �����3� ��� ����� ��� ��

�������� 4� ����� ��� 0*�" ������� ���������� ��5������� �� �� ��������� �� ���������������� �� �02&& �������

���� �3� ����� 6�� �� ��� ����� ��� .� ��.�� ��� ���������� �������� �� 0$� ���������������������

������� /&7&1 �� �������� ��� �� ������� ����� �� .��� �����%����� �� ��� ���� �� ��� %���� 0����%����� ����� .���

���� ���3 ���� �������3 ������� 3���� 8�������� ������ /� 9:1 �� ����� 3��� �� %������ 0$������� �����3 ���

��������� %��� ���� ���� /-60#1 �� $�.���� ���� ���� /$0#1 ������3���� ������ 3���� ;�� %������ ������

������� ����� �� ������ ������ �� ���� ��������� %� -3� �� -3* ��������� �� ��� ��� �� ���� �� ��������

�������� *���� ������ �� ��� �� ��� ��� ���� �� ��� ��������� .��� �3��5����� ��3��� �� � (�(<� ��� ���� ������������ �� ��� �� 0$� ������ �� .��� ����������� %� ��� %���� �� � -3 �� ���� ;�� %�������%����� �� ����

�������� ��� �� ��� �������� .��� 0*�" ������� �� .��� �����%����� �� �������� �� ��� ���� ����� &< .��� ��2

����� ���������� 6��� �������� ������ ������� �� �����2 ���5� ��3� %���3 ��� �� ����� %��� ����� %�� ����

�� ��� �������� ��� ����2 ���5� ��$� ����� %� �������� �� ��� %��� ����. �� ��� ��� �� ����� ������� ����� &< .��� ��2

����� ���������� 9����������� ���������� �������� �� ��� 0$� ������ ���3 0*�" ��������� ��������� ����

������3� .��� �������� -60# /=+> ������1 �� $0# /=+> ������1� ;�� ����� ���������� ������ �� �������� �� 0$�

������ ��. ����� %���3 � �� �� ��������� .� �� ������� ������� ��� �����3� ����� ��� ��� ��������� ��

���� ����� �� ���

� '((' ������� ������� 6�#� ��� ��3�� ��������

' (����) 0$� ������) ����) ;��������� �����������) *���� ��������) ?������) 0���������������) -�������� %��� ����

����) $�.���� ���� ����

� ���� ������

$������ ��� /$�1 ��������� �� 3������ ������2

����� � %��� ��.� �� ������ ���5� ������� ��

������ ������ �� ��� �� ��� ��������� 3���

�� ��� ��������� ���� /6%��� �� ��� '((() ��

�� ��� &@@@) A�.����� �� ����� &@@@) 4����� ��

#�������� -�������3� �� -����� �����3� =@ /'(('1 +B�=&

!**� ��������) ?*#� ������3������) 0*�"� �����������2

�����) � 9:� ������� 3���� 8�������� ������) �-� ���33��2

������� ����%�����) �$� ���33�������2����������) -60#�

��������� %��� ���� ����) $0#� $�.���� ���� ����)

:�-� ���������������) :-� ��2����������) �:9� ���5�2 ���2

3��2����� ?���� �����3 ������ ;���7 �&2C(&2C&D2+=C()

��7 �&2C(&2C&D2+=<(�+�,�� ���� ��) ��&B<E������������ /���� �������1�

(&+<2'D'BF('FG � �� ����� ����� � '((' ������� ������� 6�#� ��� ��3�� ��������

:--7 � ( & + < 2 ' D ' B / ( ' 1 ( ( & = + 2 &

Page 2: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

A������� &@@@) "�� �� ��� '(('1� ;�� ��. ��� ��

���������� �������%������ ��� �� �������� �� ����2

������ �� ��� %����� �� ���� ����� ���� ��

��3�� ������ ��������� ���0$������� � ����2

���� ���� ��� ��������3 �� �� ����� #�2

���� �� ����� ��������� %� ���� ��H������ �� ������

;�� ���� �����3� %����� �� �����%�� ������� � �

��3� �� �������� /6�� &@@B1 �� ����� ������

�� ��� �� ��� ����� �� �3 /;�I���3 �� ��� &@@=1�

#�������3 ���� �� ���� %� ���������3 � ����2

��3�� ���� ��� ����� ���� �� ��� ��� �� ���2������

���� � � ����3 ����3�� $��2������ �����2

���� %� �� ��� ������� � %��� ��.�.��� ������2

%�� ������ /*�� �� ��� &@@@) ������ �� ���

'(((1 ��0$�2%�� ������ ������ /�������� ��

������� &@@<) 9� �� ��� &@@@) ���� �� ��� &@@=) ���

�� ��� &@@@) ;�3 �� ��� &@@B) ;�I���3 �� ��� &@@=) J�

�� ��� &@@@1� -� � %��� ������� ��� ��� ����3 ��

������� ������ �� ������� ������ �� ��� ���

�����. ��������� 0$� ����������� �� ������ ��

��� �� ����� ������ ���������� �������� �� ��� ���

�� ��� ���2������ ��� ���� ���� /;�I���3 �� ���

&@@=1� -� ��� �� ��� ������ ������ ��� ������2 ��

$�2%�� ������ . ��� ��� �� � �H���� �� �� �2

��� �� ��� ���. ������ %���� �� ������� ������

. ��� �� � ���� � �� ������� ����� 9�� ����2

������ ��� �� �� ���%����� ���� � �������

�� �� ����� ��� ����� ��������� ������ � ���

��������� ������� �������� /*� ��� �� ��� &@@'1�

;� ������ ���� �������� ��� ��� �����

� �������� �� �� ������ ���� ���������� �� ���

��3�� ��3�� ������ ����� ������ ������� ������

�� ��� �� ����� ����� ���� �� ��� �������

�������� -3� �� -3 ���%���� ��� �� �� ����� ��

������ ���� ������������ �� ������ ���� ������

�� ����� ������� -3�� .���� �� ����%�� �����������

���� �� ������� /*���� �� ��� &@@'1� �������

����������� 3������� ��� �� ������ ����� �����2

����� ��.����� 0$� ������ ��� %��� ��.� ��

������ ����� �������� .��� ��������� �� �����

����� / ��� �� ��� '((() A������ �� ��� &@@@1�

6�� �� ��� ����� � �� ������ �����

������ ���� /*�0������ �� 6����������

&@B@) 4���2?����3��� �� ��� &@B@1� .� ������

.������ 3������ ����������� %� �� ��� �������� ��

0$������� �� ��� ��� �� ������� .���� ������ %���

������ �� �������� �% �� ���� 4� ���

���� �� ����3 ��� ������� 3���� 8��������

������ /� 9:1 ����� �� ������3��7 /&1 ���

��5������ �� ���������������� /0*�"1 �� �3����

������� �� ��2������� ���������� �� ������� ����2

�3� ���� �� ����� �� /'1 ��� ��5������ �� 0*�" ��

������ �� ��� 3��� ������ �����3� ��� ��� �� �����2

��� 4� ���� ������� ��� ��5������ �� 3��� ������

���3 ���� �������3 ��� ��������� ���� ������

%� ��� �����.��37 /&1 ��� �����%����� �� ���� ��

������� �� ��$� ������� ���� ��� ���� �� /'1

��� ������ �� ����� ������ �� ��� �� ���

���� ������ ���� �� ��� 0*�"2������� 3������

������������

-� ��� �� ���� .� ��. ��� �� ��� �������� ��

0$������� ���%���� .��� 0*�" �� �������� ���

�� ������� ����� �� .��� �����%����� �� ���

���� �� ��� %��� �� ������ ���� � �� �����

�� ������ ������ �� ���� ��������� %� -3�

�� -3* ��������� �� ��� ��� �� ����� -�����

�� ��� .��� �3��5����� ��3��� ���� �� ���

����������� ��� ���� ���� �������� �� ��� ��

0$� ������ �� ����������� %� ��� %���� �� �

-3 �� ���� -� �������� ��� ��������� ���������

������� �� ��������� ���� ������3� 3��� ���

����� ��� .���� ��� ������ . ��������� ;�� �����

������ ��. ����� %���3 � ��������� .� ��

������� ������� ��� �����3� ����� ��� �� ��%2

���� ��� ����2��2����� � ��� ���������� ����2

������� �� ������� .��� 0$� �������

� ��������� �� ����� �

�-�- � �����

K��3 ����� �������� %����3� ���������� ���

���� ?*#�3� . ��� %� �������3 ��� � 9:

3��� ������� ���� ��� ���� � 9:2& /?��������

-���1 %��.��� ��� #�,. % �� /�� % ��� �� �0$�C�&

�� ��� �� ���������� ����� �� �02&& ����� ;��

���� ?*#���� . ���������� %� ������3

�������� �0$� ��������3 ��� ���33�������2����2

������ /�$1 3��� ���� $�.���� ���� ����

/$0#1 �� ��� #:'� C �� D 3��� ���� ���������

%��� ���� ���� /-60#1 -* ���� ���� �0$�C�&

/-������3��� -���1� ;�� �0$�. ������ %��.��� /$

� �� '0� � ��� �� ��� ������ ����� ��� ������� ��

������3������ /?*#1 �������� ���� �������

�� %����� 3��.�� ������� ������������ �3���

+= �-!- . �� �� � �- 1 � � ����� %,,"���� ��� %,,"��0��$��� 23 4����5 6�72�

Page 3: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

�� ����� �� $0#�� -60# ������ . ���5����

%� �������� ������8��������� �����3 ���� ����2

�� ���� � /��� �$ ������1 �� ��������� ���2

������ ������� ��%��� 5%��%�� ����� ;�� ?*#2"

������� ���� . �0$�C�& .������ �� ������ ;��

���� .��� 3��.� �� +��$ ���$�� ��� 0� &( 6

%����� / -6?" 6�!� K��1� :���� 0$�. ��2

��� ���3 ��3�2��� �����2%�� ���5�����

�������3 �� ����������L ������������� /M�2

3��� -���� K��1� ��� ����� �� ���������2���� .���

�� ������� ��� ��������� ������� %� !����� ���2

%����� ���� ��� ��� /�2;����� ��3�� K��1�

�-�- !��,��

9���2.���2��� ���5�2 ���3��2���� /�:91 !�32

���� ������� .��� �%����� ���� ���������

� ���� /�:�9��� ������ ?;1� ;��� .��� �����

�� ���� ��� �� �������� .��� ��� ���� ��� ��

�� ����� �� �� ��� K�������� �� *������

�-�- 8����� ����� �� �$��� � ,����0$�� � �

;� ��� ��� ���� �� ����� �� ��� 0*�" ��

������ ���������� �� 0$� ���� ������ ����

�� ��������� %� �� ������ ��� �� ���� �������� ��

������� ��� ������ �� �������� .� �������� �����

��� �� ����2������� ���������� ��5������� �� ���

������ �� 0*�" �� �02&& ������� ���� �3�

����� 9�� �� ����2������� ����������� �������

�� ��� !� ��������� :�� / -6?" 6�!� K��1 ��

������� ������� ��������������� /:�-1 /��3�� <((�

*6- 9������� K��1 .��� ���� 9�� ��� �� ��

����������� & �3 �� ��� ���� ?*#�3� . ��� �� .��� �� +2.��� ���� ������� ��� .���� .��� �����

& �� %����� ���������� .��� '�<� &(+ �02&& �����;�� �� ����70$� ��� ���� �� " ��2*�* / -6?"

6�!� K��1 .��� �� ��� �� ����������L

�������������� ;� ��� ����7������� �� �� ���2

����� 0*�" . ���� � (� '� D� < �� &(> ������2

������ �� ��� ������� ����%��� ��� < ��� � ����

��� ������� ;�� ���������� ��5������ �� ����

0$�70*�" � (� '� D� < �� &(> ������������

. �� ����� �� ��������� .������ 0*�" ��������

���������� �� ����������� �3� ���� �� ��� %����

�� ������� �� ��� ;�� �02&& ���� .��� .���

���� .��� ����2���� �:*- &+D( ������ �� ���

0$�7�� ����70*�" ��� ���� ����� ;�� ����

������� ���� .��� �� � =((� � ��� &( ��� ��

����%��� ��� C � � CB �?� ���� ������� �������� ��� 'D �� CB �? �� �:*- &+D( .��� B> 9?� �� ������� ������������� ��5������ �� 8�������� ������� �� ;��

���%�� �� ���� �� ����3 � 9: . ������� �� �

��� 5�� ������� �� 5��� �� ��� ��� �� ������

�-�- � ���� ��,�����������

�-�-�- +90 ��, �� �

;� ������ ��� ���%����� �� �� ��� ��������� �.� D2

.���2��� ������� .��� ���������� ��� ?*#�3�

���� �� �.� ������� .��� �������� �������

��� �������� ���� ?*#2"� 9�� �� ��� ��2

������ ��� ���� .��� ����� %� � �����3 &7&

.��� 0*�" �� ���� �� ��� ��� �� ��� .��3

.�% /<( �3F%���� ��3�� ��� �� &(( ��1� ;�� ������2������ �� 0*�" /<(>1 . ����� �%�������� %��

�� ��� ����� �� �� ����� ����������� �� ��� ��3�

����� �� �� ��� ������� ���� 9�� ��� 0$�������

����� ���� 3��� �� D2.���2��� ������� .���

�� ������ ;�� ���� .��� 3���� %� ���� ��H������

/�.� ��� �� ��� %��� ������ '< �3 ����F���1 ��%� �� ��� ������� / %���1� ��� � �� ? /��

%���F3��� 1 �������� ��� ?*#���� ���� �����3�

���� �� �� ��� ������ �� ��������� ��� 6 �� 0

/���� %���F3��� 1 .��� ���������� ?*#2" ���2

���� ���� %� ��� ���� �� �� ��� ������ �� ��2

������� � ����� ����� /� ��� ��� �� ����������1 ��

%��� ����. .��� ��������� ���� ����� �� ��� ����2

���� %���� �� �.� �� ��� ������� %��� � = �� &<

.��� ��2��������� ��� 0$� �� ��$� �������2

������ ;�� � �� .��� ��������� � &� '� C� D� +� =�

&'� &D �� &< .��� ��2��������� %� ����3

���� �� �� �� ��� ���H������ /�������� �� ���

&@@+1� ����� � �� .��� ��������� � '� D� =� �� &<

.��� ��2���������� 9�� �% ���� � .��� &'�

&D �� &<� ���� ����� ������� ���� ��� ��������

3��� �� �.� ���� ��� ������� 3��� .��� ���������

�-�-�- +90 ��, �� �

;� ������ ��� ��������� ��5��� �� ��� %������

0$�������� ������3� �� ������� . ����������

;���� 3��� �� D2.���2��� �:9 ������� .���

�� ������ ��� � �� ? ��� ���� �� &D %���

�� 3��� � ;�� %��� �� 3��� � �� 6 ��������

�� ����� ������ ?*#���� �� ?*#2" ����

0$� ���� �����3 &7& .��� 0*�" /&(( �3F%���1 �

�-!- . �� �� � �- 1 � � ����� %,,"���� ��� %,,"��0��$��� 23 4����5 6�72� +@

Page 4: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

D .��� �� 3� �� ���������� 3�� � = .��� ��

3� .��� ��� �� ���� ��� ? ������� ����2

������ �������� ;.� .��� ���� ��� ������������

���� %��� ���� ��� 3��� .��� ������3�� .���

������ $0# 6 ;�� ���� /&(< ��� ��%��� �����2

���� ���F��) (�< ��F%���� ��� �� ���1 �� -60# N-*L

���� /&(C ��� ��%��� ��������� ���F��) &(( �� ��������� ��� �����3� ��� ��� �� �����1� ;��

������ �����%����� �� ��������� ������� . �����2

����� ���� ����� �� &( ���������� ���

�-&- ��, ��� �$��� � ������

;��� � �� /<(�&(( �31 .��� ����3������

���3 ���2���� ����� ���� �� &�= �� � ������

��%� �� ��� 0$� �������� �� ��� ����������L

��������� ���3 0$���� / -6?" 6�!� K��1� :?�

� ��5����� . �������� �� <( �� ��������3 < ��0$� / ������ ���� � ��1� '(( �* �� ���

�$;:� &�'< K �� �� ;� 0$� �������� & �* ��

��� ������ �� &(� %����� /:����� K��1� ;����� ����� :?�2-*2� /<��?��;��???; �;2���; ?C�1 �� ������ ����� :?�2-*29 /<�;�2??��; ?;;��;?� ;?C�1 .��� ��� �������� ��������� �� ��� ������ %��%���� ����� � ������

��������3 �� � @D �? ��� &( ���� � ��5�����

. ������ ��� ���� C( ����� �� & ��� � @D �?�& ��� � << �?� �� & ��� � += �?� �����.�� %� �5�� �������� �� �� &( ��� � += �?�

�-6- �/!��0 ��:� ��� 4� ����5

;��� � �� /<(�&(( �31 .��� ����3������

���3 ���2���� ����� ���� �� &�= �� � ������

��%� �� ��� �$� �������� �� ��� ����������L

��������� ���3 3������� �����������2%��

��3��� /;������ -6?" 6�!� K��1� ;� ���� � ��2

5����� �� 0$� ������� �� ��� ����� � ��2:?�

. ��� �� ������ ��$� ���� ��� ���� �����

�����%�� /��������� �� ��� &@@(1� �� ���3�����������

������ DB %� �� ���3��� .��� ������� ������

&B %� � �� C�2��� ��� �� ��� �������� �� ��3��� �� ��� ��3�� �$� �� C( %� � ��� <�2��� ����� ������� . ��� �� ������%� ���� �$�� 9���

���� �0$�. 3������� %� ����%���� � CB �? ���+( ��� �� '( �� ������� ������� ��������3 < �3���� �$�� '(( �* �$;:� D( K �$���� B K �*#2

������ ������ ��� <( ��� �� ��� DB��� �����

/<�?;;�;�? �;�;??; ?��;;? �?;;�2 �??;? �??;�?��;C�1� �� <O �*#F;8 %�����/:����31� � ��3���� ������� ������� ��������3

���� .��� �� �� ��� ��� �$� . ��� .��� ���

�� �� ������� �� ����� ��� ��3��� ������������

;�� ������ ���� ��� ������ ������ ���� ������� �

��3��2������ �0$�� .���� ������ C( %� ��

������ ������� �� �3� 9��� ���� ������ .���

���� ��������� �� ���%��2������ �0$� ���3 ��2

��� �� C( %� �� ���3��� ;�� � ���� �����

������� ;32� /<�?; ;; ;�?; ; �; � 2��;; ;��;C�1 . ��� �������� �� ��3����� ��� ����� �$�� ;�� ��.����� ����� ;329

/<�?;;�;�? �;�;??; ?��;;? �?;;C�1. ������ ��� �������� �� ��� C( %� �� ������

�3 �� ��� �0$� 3������� %� ��� ������ ������ ����

.��� ��� DB��� ����� �� ��� ������ �� � :?�

� ��5����� . ���� ������ ��� �������� ���2

����� %���� ;����� ������3 . ������ ��� ��� D(

����� ���� ������ ��������3 � @D �? ��� < ���

/@D �? ��� & ���) += �? ��� & ���) B' �? ��� & ���1�;�� 5�� �������� �� . B( �? ��� &( ����

�-�- !����� �� ��� ,�� ��� ,"���� �,,"�

� �0��� �

?�������� �!-�� ��� /A����3�� �� :����

!%�������� �����%��3� *01 .��� ��� ��� ���

�������� �� $0#2 �� -60#2 ���5� ���%����

������������L �������������� -� ������� �� ���

��������� �!-��� � �% � ���� /�6?1 � .

������ �� �� ������ ��2 ���5� �% �� ��� �� ���

����� %�� �� ��� � �����%�� %� �� P�� ��

-H����� /&@=D1� 6���8�� ��������� ���������� ���

/-������ '� 0������1 .��� ����� .��� �5���� ��2

�5�� 3�� ���2������� -3 � -3� �� -3* ���%����

/6����� !%�������� *���3������ K��1� �����

%������3 ��� ��%���� ��� .��� &> %����� ����

�%���� �� :6�� ��� ��� � �� � &F<( �������� .���

���� �� ��� ��� �� � ����� .��� ����� 3������

���5�� ����� /-60#�� $0#1� ;�� %���� �% �� �3

��� ���� .��� ����� � .��� ���2-60# /6+@ ��

�+C1 /������ �� ��� &@==1 �� $0# /&<?D� &(0&& ��

6B@1 /!� �� ��� &@==1 ��������� �% ��������

��������2 �������2���H�3��� 3�� ���2����

-3 /A����3�� �� :���� !%�������� �����2

%��3� *01 �����.�� %� ;*6 �����2.��� �������

�%���� /A����3�� �� :���� !%��������

B( �-!- . �� �� � �- 1 � � ����� %,,"���� ��� %,,"��0��$��� 23 4����5 6�72�

Page 5: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

�����%��3� *01 . ��� ��� ���������� ����� �� 2

��3 ��� ������� .��� (�& * ������� ���� ��� %��2

%��� �� ��� .��� . ��� � D<( ��� ;�� %��%���

���� �� ��� � �� . ��������� %� �%������3

�.��� ��� ��� �� ��� %��%��� ���� ��� %���� .����

�������� ?*#2"� %� ������ ���� �� �� ��� ������ �

��� ���� ����� ;�� ���� . ������� ��� ���2����

�� �.� �������� ��� ���� ����� ���� �������� �������� �� ��� ��3���� %��%��� �����

�-2- ������ � ���

;�� ������������ ����� �� ������� ���� �� ���

.��� ���������� %� ��� ������ ���� �� �����3

�������� �� ���� ������� ;�� ����� .��� �� ����

��3' �� ��� ��3��� �������� �� ��� �% ��� ����

<(> ��������� �� ���� ���� ������ ������� �� ����

�������� ���� $0# ���� 6& �� -60# ���� 0B=� ;��

���33��������� ����%����� /�-1 ��� . ����

�����%�� %� ���� �� ��3� /&@BD1 �� �����3 ����

���33��������� ���� �� $0# 6& ���� �� ����

������� ������������ ;�� ����� �� ���� �� ��� .

�� ���� ��3' �� ��� ���� ���� �� ��� ��3���

�������� �� ��� �% ��� ���� � ����%����� �� ����

���33��������� ���� �� ��� �����

�-3- ��������� ���� �

��� �� .��� ������ .��� ��� �� �� �������

���.�� ��3�� /�;�;-�;-O ��� 4����. ������

B�() �������� ����.��1� 0��������� %��.��� ��� �%

�� ��� �� ��� �� ���� �� ��� ������ 3���

.��� ������� %� ���2.� �$"#�� ;�� ����������

%��.��� �������� 3��� �� ��� �� ����� ����������

�� ������� .��� �� ������� %� ���2.�

�$"#�� -� ��� ������ ��� ��� �������� ������ ��

�$"#� . �3��5���� ���� ��� ��� �� ��� ���2

������ ���%�� .��� ��� ��� %� ;����L �������

�������� �3��5����. �� � � � (�(< ��� �� ����

� �������

�-�- 8����� ����� �� � � �� ����� ��� �� ����

(��$ � � 0��� � � �

4� ���������� ��� �� ����2������� �������� ��

���� 0$� �� ������� ���� �3� �� ����� �����

%� ������� %� ��� �� �� 0*�"� ;�� ����������

��5������� .��� ������� � �� 5�� ������������

�� &(> 0*�" �� ��� ���������� ������� ���3 :�-

�� � �� '�D> 0*�"� ���3 �� ��������� /9�3� &1�

��.����� ���� 0$� /�� ��� %���� �� �������

�� ��1 �� 0*�" � �����3 ������������ ����� ��

������� �02&& ����� ;� ������� ��� ��� �� �����

��� 0*�" ����� %� ��� �������� ������� ���

���� 0$� �� ����� .� ���������� ���

?*#�3� ���� .��� 0*�" �� ��� �������� ���

�� �.� D2.���2��� ������� �� ������ ��� �� ��2

��� �� � 9: �� ����� ���� D= � ����� � 9:

�� ����� . �������� � ��� ��� �� ��������

�� ��� ���������3 ������ ����� ���3 �� ����

/�� ��� ��.�1� ;��� ��� .��� ������� %��

��.�� �� 8�������� ������ �� ����� .��� ���

��������� ������ �� ��� ������ /�� ��� ��.�1�

$��� �� ��� ���� ���� ��� ������� %��� ��.��

� 9: �� ������

�-�- ��,0������ �� ��0��� ��� �-,- ��,�����������

�� �� ����� �/! ������

;�� ����� �� ������� �� ��� ������ �� ���

3�������� ������� %� ����2 ���5� -3�� �� -3*

�!-�� �� ���� �� ��� /9�3� '1� ����������3

���%���� %� ���� ������������ ���� �� �- ���2

%���� �� $0# /;%�� &1 ���� ��� ����� �� ��� ���� ��

�� ������� &� �� ��.�� 6��� ����� �� �����������

������� �� -3* �� -3� �% �� ��� �� ���� ��

���� ��.����� ��� ���� �% �� ��� .��� ���

�3��5����� ��������� � �� ���� ���� %��.��� ���

��������� ����� �� ����������� �� � (�(<�� ;����.��� �3��5����� ��3��� �� � (�(<� -3� �� -3* �%

�� ��� �� ��� ��� ���� ���� ������������ .���

��� ���� . ��������� %� ��� �� ��� ������ %�� ���

������������ /9�3� '1� -� ��� ���� -60# -3� ��

-3* ���%���� .��� �3��5����� ��3��� �� � (�(<��� �� ����� �������� ������� ���� � ' .��� ��2

���������� $0# -3* ���%���� .��� �3��5�����

��3��� �� ��� ��� �� �� ����� �������� ������� �

'� D� = �� &' .��� ���� ����� ����������� ���

���� �������� ������������� ;�� -3� ���%����

3��� $0# �� ��� .��� �3��5����� ��3��� ��

�� ��� 3��� ���� � & �� D .��� ��2 �����

���������� $� ����2 ���5� -3 ���%���� .���

������%�� %� ��������� �� �6? �!-�� ��� ������

���� �� ���� �� ����

�-!- . �� �� � �- 1 � � ����� %,,"���� ��� %,,"��0��$��� 23 4����5 6�72� B&

Page 6: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

9�3� &� ;��������� �� �02&& ���� /������� ���� �3�1 .��� � � 9: �������3 ���� / ?*#�3� 1 �� 0*�"� ;�� ��� ���������� ��5������ ��� ��� �� � �� ����������

. ������� %� �������3 ��� ���%�� �� 8�������� ���� � 5�� D(� ������� �� 5��� /�1 �� ��� ��� ���������� ����������� ����� ����� ��� ��� ������������ �� 0*�"

. ������ /61� ;�� ��� %����3 ��� �� � ����� � �� ��� ������ �3��5����� �� � (�(<� ���� ��� ����� .����� 3��� � *�� %����3 ��� � ������� �3��5��� ����������%��.��� 0$�7�� ���� ������� � ��� �� 0*�" �������������

B'

�-!-. �� ��

��-1�

� �����

%,,"�������%,

,"��0��$���234����56�72�

Page 7: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

9�3� '� -��� �2 ���5� ������ �� ��� �� $0#�� -60# �� ���� �� ��� �� ������� �������� .��� <( �3 �� 0$� %� ��� �� ��� /�1 �� ���� /�1 ����� �� .��� ������� ���� 0$� /.��� �� ���� 3���1 %� ��� �� ��� /�1 �� ���� /�1 ������ 6��� .��� ���������� D .��� ���� /���.1 .��� ��� �� ��� �� ��� ������� ;�� -3* �� -3� �%

�� ��� ��� -60# /��01 �� $0# /���1 .��� ������ �� ��� ���� �� ��� �� �������� %��� � ����� ���� ���� %� �!-��� ��2���� Q(�(< .��� ��������� �3��5����

�-!-. �� ��

��-1�

� �����

%,,"�������%,

,"��0��$���234����56�72�

BC

Page 8: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

9�3� '� /������" � 1�

BD

�-!-. �� ��

��-1�

� �����

%,,"�������%,

,"��0��$���234����56�72�

Page 9: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

����� ������������ /�$1 ����� �� �&+ �� $�.2���� ���� �� -60# .��� ��������� �������

$���������3 �% ����� �� ����F��� ���� �� ��

���� �������� ������� .��� %���. ������%��

����� /Q&+1� $���������3 ���%���� �� ���� ��

�� ������ ����� .��� ������%�� ���� � �� D .���

��2���������� /:-1 �� ��� ����� ��3�� ���� Q&+ ��

+D /;%�� &1� $���������3 ���%���� .��� �������� ��

��� ���� �� ��� �� �� �� ����� �������� %��� ��

���� � ' .��� :-� �- ����� �� �= �� $0# .���

��������� ������� ;�� ��3� �� ����� . Q= ��

&('D� �- ����� �� ����F��� ���� �� �� ����

�������� ������� .��� %���. ������%�� ������ ;��

���%���� �� $0#� ���������� %� �-� .���

�������� �� ��� ���� �� %��� ��� �������� ��� ������

%� %��� ����� �� ���� �� ��� ��� �� �� �����

�������� ������� � �.� .��� ��2����������

����������� �� ��� �������� D .��� ���� ���

����� ����������� �������� ���� �� ��� ����2

��� �� ��� %� %��� ������ ������%�� ���� ���� D

.��� ��2%��� �� ��. %���� ;�� ���%�� �� %���

��� �� ����� �� ��������� � ��.� �� ;%�� '�

6��� ��������� .��� ��� �� �� ������� ���� %�

������ ����� ��� ��� ������ �� ������ �� �����

������ �� ��� �� ��� ������

�-�- ���� ����� �:��� �� �/! ������

������� %#�� ��� /��

;�� ������ ��� �� �� ����� �������� ��

���������� ������� ���� -60#�� $0# ������3�

�� �� ������� '� �� ��.� �� 9�3� C� 6��� ������3��

.��� -60# �� 3��� 6 �� ? �� ������� �3� ��

-60# ��������3 �� ������ �� ���8�� ������ ���2

������3 ���� �� ' ��2������3�� ;�� ���%�����

��� �� ������� �� 3��� 6 �� ? . &((>�

*������� ��������� �� ���� %��� ���� �� ' ��

����� %� �� D� -� %��� .��� ����%��� ���� .���

������� ��������� �� ����� ��� ��� ���� ���

;�� �������� ��� �� 3��� ? %��� . '@> �� ��

3��� 6 . CC>� ��� ��� ��� %��� �� �������3��

%���� ;�� �������3 %��� �� 3��� 6 �� ? ��

��� ���� %��� � &( �� ��2������3�� "��� ���

��� �� ���� 0$� �������� %��� ��.�� �������

�3� �� �� '� .���� . ����� ��� %� �� C ��2

������3�� ;�� ����� %��� �� ��� 0$� ��������

3��� ������� ������ �� ������� ��� &(2��

�%������� ����� .��� 3���� ����� %����

?�����3� .��� N 6L ;�� ���� �� $0# �������

������� �3� ��������3 ��� ��� �.������3 �� �� ��2

��������� �� 3��� 6 �� ? ���� �� D �� �� ��� ���

�� ���� %��� �� 3��� � �� �� <� �������� %���

%���� ������ & �� ���� ��� ������������ ��

������� �3�� ��� ��� %��� ���� 3��� ? .��� ��� ��

��������� %��.��� �� D �� B� .���� ���� �� 3���

6 ���� %��.��� �� D �� +� ;�� ��� ��� %��� ����

3��� � �����%�� �� ������3� �� �� + .���� ���

��� �� ��� �������� ������� ������� ������3�

.��� ��� %���� �� ������� �3��

;�� ��������� ��5��� 3��� ������3�� ���2

���3� .��� ��� N-*L ���� �� -60# �� 0$���������

������� . =+>� ?�����3� .��� ��� N 6L ;��

;%�� &

#���2 ���5� �% �� ��� �� ���� �� ��� ���� ���������� �� �� ��� �������� �� 0$� ������ �� �������

����� �� ������

��������

4��� ��2

���������

$0#2 ������ ���%���� -60#2 ������ ���%����

�- #$ #$

����� ;�� ����� ;�� ����� ;��

-��������� ;.� +F+% (F+ 'F+ (F+ &F+ (F+

;� ��� DF+ &F+ +F+ &F+ 'F+ (F+

-��������� 9��� (F+ (F+ &F+ (F+ (F+ (F+

;� ��� (F+ (F+ (F+ (F+ &F+ (F+

;�� ���� ��F�� ��� � �� .��� ������ ��� ����������3 �� �- ���%���� �� $0#�� ���� ����������3 /#$1 ���%���� �� -60#

� &� '� C� D� +� =� &'� &D �� &< .��� ��2���������) ��.����� ���� ��� ���� ���� � .���� ���%���� .��� �������� �� ��.��% ;�� ���%�� �� %��� ��� ����� ������F���� ���%�� �� %��� �������� �� ��.� ��� ' �� D .��� ��2���������� ��� ��� �������

.��� ��3���� ��� ����������3 �� �- ���%���� �� $0# �� ����������3 ���%���� �� -60# � &� C� +� =� &'� &D �� &< .��� ��2

����������

�-!- . �� �� � �- 1 � � ����� %,,"���� ��� %,,"��0��$��� 23 4����5 6�72� B<

Page 10: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

���� �� $0# �������� =+> �� 0$� ��������

������� �� �� ��� ���������� �� ?*#2" ���2

������� ������� �����%�� �� ������3��

�-�- � � ����� �� 0��,�� ��� ,�/! �� �����"�

����" � �� � ��,

��� :?� � .��� ����� �� %� ���� �� �����2

������ ���������� %� ��� %���� �� �� � ��52

����� ������ �� ��� N�� 0$�L ������� � �� ���

.��� �������� �� ��� �� �� :?�� � ������

������� �� ������ ��� %���� �� :?� ����%���� ��

��� 0$� ������� ��� � �� �� ���� 0$� ���� ���

������� ���� . ���� .��� & �3 �� ��� �� ������ ����� ;�� :?� ���� �� ����� �� ��� ����

. �������� �� %� ����������

;� ������ ��� ���5���� �� ��2:?�� .� ���

N�� ��� ���L ������� �� .���� .��� . ���� �����

��� � �$� ��� ��� �� ����� �� �� �������� 4���

���%��2������ ���� 0$� �� 0$� ����������

�$� ��� ��� . ��� �����3 ��� ����

�� ������ ����������� �;2:?� ������� �� ����3

������ �3��� .���� ��� ��2:?� ������ ������� ��

�� �3���

:���� 0$�. �������� �� ��� %��� �� �� ��

���� � = .��� :-� %�� �� ��.�� %��� � &< .��� :-

/;%�� C1� � 3����� ���%�� �� %��� �� ���� 0$�

�� .���� ������ �� ���� .��� 3���� ��� ���� %�

��� �� ��� ���� ��� ���� ������ -����2 ���5� ��$�

. ����� ���������� �� �� ����� �������� �����2

�� � = .��� :- �� ��� ���� �� ������ %�� ���� ��

��� %��� � &< .��� :- �� ��� %��� ����.� $���$�

. ����� �� �� �� ��� ���� ���� ��� %��� 3���� ���

�� �� ������� �����

;���� ���� �� %� ������ ���������� %��.���

��� ������ �� ��� ���� �� ��$� �� ��� �%

;%�� '

����%��� �� ����� %� �!-�� �� 0$� �������� �������

4��� ����

�����

���������

-60# /���%�� �� �����F���%�� �����1 $0# /���%�� �� �����F���%�� �����1

-3� -3* -3� -3*

����� ;�� ����� ;�� ����� ;�� ����� ;��

& ;� ��� $0 (F+ $0 CF+ $0 +F+ $0 +F+

-��������� $0 (F+ $0 CF+ $0 <F+ $0 <F+

' ;� ��� (F+ <F+ &F+ <F+ +F+ <F+ +F+ <F+

-��������� DF+ &F+ DF+ &F+ DF+ &F+ DF+ &F+

C ;� ��� $0 &F+ <F+ 'F+ $0 CF+ $0 'F+

-��������� $0 (F+ $0 (F+ $0 (F+ $0 (F+

D ;� ��� <F+ DF+ &F+ DF+ <F+ CF+ <F+ 'F+

-��������� (F+ &F+ DF+ &F+ DF+ (F+ DF+ (F+

+ ;� ��� $0 &F+ $0 'F+ $0 'F+ $0 'F+

-��������� $0 &F+ $0 &F+ $0 (F+ $0 (F+

= ;� ��� (F+ CF+ &F+ CF+ <F+ CF+ <F+ CF+

-��������� (F+ CF+ (F+ CF+ <F+ CF+ <F+ CF+

&' ;� ��� $0 &FC $0 (FC $0 (FC $0 &FC

-��������� $0 (FC $0 (FC $0 (FC $0 &FC

&D ;� ��� $0 (FC $0 (FC $0 (FC $0 (FC

-��������� $0 (FC $0 (FC $0 (FC $0 (FC

&< ;� ��� (FC (FC (FC (FC (FC (FC (FC (FC

-��������� (FC (FC (FC (FC (FC (FC (FC (FC

����� � �� .��� ��������� � '� D� =� �� &< .��� ��2 ����� ���������� ;�� .��� ��������� � &� '� C� D� +� =� &'� &D� �� &<

.��� ���� ����� ���������� ;�� ������� .��� �������� � D .��� �� 3� �� ���������� � = .��� �� 3� .��� <( �3 ���� 0$������� �� ����� �� �������������

B+ �-!- . �� �� � �- 1 � � ����� %,,"���� ��� %,,"��0��$��� 23 4����5 6�72�

Page 11: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

�� ��� ���� � ��� ���� ���� �������� -��� ��2

���� �� ��� ������ �� ���� 0$� �� �����2 ���5�

��$�� �� ����� %��� ����� � = .��� ��2 �����

��������� .��� ������ ��� $0#2 ���5� -3� ��

-3* �� ��� �� ���� ���� %��� ������ �� ���������

4���� �� �� ���� %��� .��� ������ ��� -60#2

���5� -3� �� -3* �� ���� ���� ��� �� �����

�������� %��� . ������ ��� ���� -3* �� ����

9�3� C� ?�����3� ��������� 3��� -60# /�1 �� $0# /61� ��� �� ������� .��� ���������� &(( �3 �� ���� 0$� ������ ��%��%��� �� ���� ���������� � D .��� �� 3� �� %����� � = .��� �� 3�� ;�� %��� .��� ������3�� ' .��� ���� ��� %�����

���������� .��� �� ������ ������ ;�� ������ ������� ���� &(2�� �%������� ����� �� �������

�-!- . �� �� � �- 1 � � ����� %,,"���� ��� %,,"��0��$��� 23 4����5 6�72� BB

Page 12: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

�� ���� .��� ������ ��� -3� �� ���� 3��� -60#�

��� ����� %��� ����� � &< .��� .��� ��3���� ���

����2 ���5� ���%���� ���� ������ ����� �� ��������

���� ����3� ��� ���� . �������� �� ��� ����

�� %��� ����. /;%�� C1�

� ����������

:��������� ������ ��� �� ����� ���������� ��

��� ���� � %��� ������� �� ��������� ����������

�� ����2������� �� %������ ��������� /�������

�� ��� &@@D) !� �� ��� &@@<) 4��%� �� ��� &@@D1�

-� ��� ����� .� ��.�� ��� ��� ������� �� 0*�"

������� �� ����2������� ���������� �� �������

����� 9����������� .� ����� ��� ���������� ��

������� ���� �3� ���� .��� 0$�7:�-70*�"

������� � %����� ��� �� ���������2������� ���2

�������� ������3�� ���������������� / ������� ���2

���1 � %��� ��.� �� %� � ��������� ����������

��3��� %��� �� ���� ������� �� ������ /6���� �� ���

&@@<) ��� �� ��� '(((1� �� � ����� %��� ��� ��

���H������� .��� 0*�"� 0*�" � ��������� ��

������ � ��� �� ���%�� 0$� %� �������3

��� ����%����� �� ���� ���%��� /A.� ��

$����.� &@=D1� "���� ��� ��.� ��� 0*�"

�� ������ ������� ������ ��5������ �� ������

�� �� ��� �������� 3��� ���� �� ������� ��%���

5%��%�� /*������� �� ��� &@@+) ���3 �� ��� &@@=1�

����� .� ����� ��� 0*�" ������� ���������� ��

0$� �� ������ .� ���� ��� ��� ���� �� �������

0$� �� ���� �����3� ��� ����� ��� �� ��������

������3�� .� ����� ��� ���� 0$� ����� ��� %�

��������� ���� ������� ���� �3� ���� �� �����

���3 0*�" ����� �� ����� ��5������� ������ ���2

������� ���������� �� �����

#�������3 ���� �� ���� %� ���������3

������� ���2%�� ������ �� ����� � � ����3

����3�� ������� ��� ����� � 3��������� ��

��5����� �� ����� �� ��� ���3�� ������� %� ���

������ �� ������ ��������� ;�� ���� ����������

��� ����2��2����� � ��� ���� 0$� ����� %� �����2

���� ������������ �� ��� ������� ���3 0*�"�4�

��� ��.� ��� �� ��� ������� �� ���� 0$� ��

<(> 0*�" �� �������� ��� �� ������ ���5�

������ �� ���� %��� ������� �� ���������

�� ������ ������� 3��� ������3� .��� ������2

3�� ������ ;�� ������ �� ��� 3������� .���

%����� ��� ��� ����������� ���� ��H������� ���� � ��

�� ������� ������� �� -3* �� -3� ������3��2

%����� ;�� ��� ������ �� ��� . ��� ����

��������� �� -3� �� ��� ���� 4� ����� ���� �������

-3� ���%���� �� ������ �������� ��%�� ���� ���

������� 3���� .� ����� ��� ��������� ����3

���� /QD .���1 -3� �� ��� �� ��� ���� ���

.���� ���. ��� ��������� ���� ��� ������� ���2

������� 9������� ��� ���%���� ������� .��� %��2

��3����� ������ �������� %� ����� %����� ��

��������� ���� �� ����%�� ���33���������� 4�

����� ��� ������ ����������3 �� �- ���%���� ����

D .��� ��2���������� %�� �������� ����2 ���5�

-3* �� -3� ���%���� %� �!-�� ����� &< .���

;%�� C

;��� �����%����� �� ���3����� �� ���� 0$� �� ����3�� �$� �� 0$� �������� �������

;��� $��%�� �� %��� ����� ������F����%

-��������� ;� ���

4��� = 4��� &< 4��� = 4��� &<

0$� ��$� 0$� ��$� 0$� ��$� 0$� ��$�

� ���� 'FC (FC &FC (FC 'FC 'FC 'FC (FC

*���� 'FC (FC (FC (FC 'FC 'FC (FC (FC

6��� ����. (FC (FC (FC (FC 'FC &FC &FC &FC

��� �:9 ������� .��� �������� %� ��� �� ��� �� ���� ����� .��� <( �3 0$� ������ / ?*#����1 �� ���� ������� .��� ������� ���� 0$� / ?*#2"1 � D .��� �� 3� �� ���������� � = .��� �� 3� .��� ��� �� ��� �� ��� ������� �� = .��� :-� ����� %���

���� ��� �� ��� ������ 3��� �� �.� %��� ���� ��� ��� �� ��� ������� 3��� .��� ���5��� �� ���� ������� ��� ������3 ����

�����%����� �� ��� ���� 0$� �� ����� ���5� ����3�� �$� /��$�1�% ;�� ���%�� �� %��� ��� ����� ������F���� ���%�� �� %��� ����� ��� ���� 0$� �� ��$� ���� �� ������ ����� �� �������� ��

0$� ������ �� ��������

B= �-!- . �� �� � �- 1 � � ����� %,,"���� ��� %,,"��0��$��� 23 4����5 6�72�

Page 13: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

��2 ����� ���������� ;�� ��3�� %� ��� �� ���

������� ��������� �� ��� �!-�� ��� ���� ��� �-

/������ �� ��� &@=C) ;���� �� ��� &@=B) ���� �� ���

&@=@) ?������2?%����� �� ��� &@@') ?����� �� ���

&@@+1� A��� �� �� /&@B+1 �� ����� ��� ���� ���2

� ��2������ �������� �� ������� ����� �$� �-� ��

���� �����3 ���%���� 3��� $0# ����� %�

�������� -3* �� -3 ������3��%����� ��.�����

�� ���� 2'(( ���������� �� ��.�� ���� �$

������� �� ��� -3* �������� .���� ��� -3 �������

��.�� %��� �- �� �$ �������� ;�� %���� �� -3

���%���� �� ��� ��3��� ������ �������� /R'D1 ���

��� �����3 �$ ������ %��� ��3�� �� %� ���� ���

��� %���� �� �- �� �$ ���%���� ���� D .���

��2��������� �� ��� �����

;�� .��� � ��� �� ���� �.� ����� �� .���� ���

������ ������ �� ��� �� 0$� ������ �� ���

��� � %��� ����������� ���� ���� �2 ���5�

�� ���� ������3� ����� ����� �� ���

�� ����� �% �� ��� ���� 0$� ������������ ���

��� ��� ������� .���� ���� � . ���������

;��������� .� .��� �����3��� .��� ��� ��� �� -3

�%����� �� ��� ����� ;�� �� ��� %� ��������

�� ����3 ���� ��� �� ������ ������ �� ���

���� ���� 0$� ����������� �� ��� ������� � %���

�� ����� /A������� �� ��� &@@B� '((() ?��3 �� ���

'((&1� -� �������� ����� �� *���� /'((&1 .���

��%�� �� ��. ����3 -3 �� ��� �� ������� ����

�� ��� ����� ����������� �� ��3�� ��� �� +< �3 ���� 0$� �������3 ��� �� ����� ������ %��32

�������� ;�� ��� �� -3 �� ��� ���� �� ��� ��

����� �� ��� %��� ��� �� ��� ��. ����� �� 0$�

��� ��� ������������ 4� ��������� .��� �.� ���

�� <( �3 0$� �� �������� .���� ����� .�����

��� ��� &((�=(( �3 �� 0$� �� ������� �� �� ������� /9��� �� ��� &@@C) ��3���� �� ��� &@@+)

9���� �� ��� &@@@) ?��3 �� ��� '((&1� �������������

������� ���� � .������3 �� ������ ���� �� ��2

����� �� ������� � ��%����� �� ��� 0$�������

�� 3������ 3������ ������ �� ��� ���� ����

/*�!����� &@@D1� ;��� ����� �� �� ������

�� ��� ������ ?0D(2������ ����������� �3�� �����2

���� %� ������� ��� �� ; ����� �� ��������� ��

%���� �� ��� �H�� ������2������� �3�� ��

��� ��������� ;26 ��3��� ���������� �� �� ���

�� ��� ���� ���3�� .������ �������3 -3* ���������

.���� � ���� ������ �� ?0D( ��3���� /A.%� �� ���

&@@D1� ������3� ��� �3������ �� ������ �� ���

3������� �� ��� ���� .��� ���%�� �� �� ������2

%��� ��������� �� ������ �� ��� �� ���������

���� ������3� ��5��� �� ��. ��� ���� �� ����� ��

��� .� ��3���

;� ��� ���.���3�� ��� � ��� 5�� �� ��� �� ���2

������� ����������� �� ��� ��� ���� .���

0$� ������� � ������ �����. �� ����������

����������� �� ������� ���� ������� .���

��3� �� ����� %�� ��� ��� ������� /������ �� ���

'(((1� 0$� ������ ���� ���� ��� ��� �� ���2

������ ����� �� ������� ���� ��� %��� �� ���

��������� �� %� ���� � %� ��� ���������3 � ������

���� ��� �� ������� ���� ���%��� ����%�����

������� %� 0*�"� -� � ��%�� ��� !�3����

����� .���� �� %��� ����. ������� ��������� �����

�� ��� ��� �� ��� ������� /?������29�3 �� ��� &@@&1

�� ��� %��� ��������� �� ��� ����� ��� 0$� ��

��� ����� ����� ���������� �� ���� /6�����

�� ��� &@@@1� ������������� ���� ��� ��3��� �����2

���� ���� ���� 0$� �� �������� ����� ��� �����2

����� �� �������� �� ��� ���� �� ��� �������

3���� �����3 ��� ��� ������ �� ����� ������

�� ��� �� ����� ������� ;�� .��� ���������� ��

���� � � ����� %� ��� �%������� ���3 ���

�� ����� ������ /� 9:1� ��.��3 ��� �� ��� ��������

�� ���� ����� �� ������ �����%����� �� ���

���� �� %� ��� ����� ���� ������3 ��� ����

�� ��3�� ;�� ���� �� ��$� ���� ����� ��

�����%����� ����� ��.�� ��� ��� ���� . ���

���� .����� �����%���� �� ������� �� ��3�� %��

�� ������ ��� � ��� &< .���� ;� ��� ���.���3�

����� �� �� ����� ����� �� ��� ��� .���� ���

�����.�� ��� ���� �� ��3� �� .���� .� ��

��� �� ��� 5����3� 0������ ��������� ����� ��

��� � ��� �� ���� 0$�� �� %�������%������ ��2

������ �� ���� �� �� ����� �� ���3��� ��

�� ������ ��� %����� ����������3 �� ��� �����

3�������� �� ������ ��������3� �� ��� ��� �����

"�� ����� ���������� ��� 0*�"� �������

�� ����2������� ���������� �� ����� �� ���������

�������� �� ������� ��� �����3� ����� ���� � .���

������ �� ������� ��� %��� ��� ��� �����2

���� ������� /�� �����. %� *3����1 ��������3

0*�" ��� ���������� �������� �� ���3 /*3��2

�� �� ��� '((&1� 6���� ��� �����3 ��� ���� ��

����� ��� �� ��� %���� ���� ����� ������

�� ��� 3��� ����2 ���5� ������ �� %�

������� %� ��� �������� ������ �� ��������

�-!- . �� �� � �- 1 � � ����� %,,"���� ��� %,,"��0��$��� 23 4����5 6�72� B@

Page 14: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

������3�� ��� ������� %� .���� ����������

�������� �� 0$� �����3� ����� ��� ������ ��2

��%�� ������ �� ��� � �����.�� ��� .���

�33�� ��� ��� �������� ������� �� ����� �� ����2

������� �� ������� ����� ��� ����� ��� ����� �� ���

�������� ��������� -� �������� ��� 3�������� ��

����� ��������� ���5����� ��� ������� �%

��������� �� %� ��8������ %� ��� ����� �� 0$�

��������� �� ��� %���� ;�� �� ��� �3��5���

�� �� �� ���3���3 0$������� �������� ���������

��� �� ��3���� 3��� ��������� 3���� .���� 3��

��� �� ��� %��� �� ����� ������ ;�� �����

���������� �������� ��������� �� ��� .����

������� ��� ����������� �� ������ �� ����2

����� �� ��������� ���������

�������� �������

;�� ����� ���� !���� *���� ,�� 4���� ��

0���� 6���� ��� ����� �������� ����� �� ���2

�����3 ��� .����

����������

����� 6�*�� *�$����� *���� ;���� 0�� ?������ ;�,�� 6���� A��

&@=@� M��������� �������� �� $�.���� ���� ����

���%��� ����� �� ������� �� ������ %� �!-��� ����

:����� &=� &B<�&@'�

��������� *�J�� ������� ��,�� &@@<� !� ����2�������� 3���

������ �� �� ����� �� ��� ���� ���� *��� ����� D� ''B@�

''=<�

����� 4���� ��3�� ����� &@BD� � ����� ���33���������

����%����� ��� ��� $�.���� ����� &� � ��� ���� ��

����2 �� �����2������� #��� ���� @<� &'(�&'C�

�������� $�� ;���� ,�!�� ?��%������ J�� $�3��� #�*�� #������� ��

!�3�� ?�� &@@D� K� �� ��������� ������ �� ��������� ��

�� �� ��� %��23������� ����� 3��� �� �������� �������

�������� 3��� ����� 0��� 6���� &+<� C(�CB�

6%���� !���� 6%���� ��!�� !����� 6�-�� �� 0������ !�����2��

��� ����� ��� '(((� $������ ��� ������7 ������ ���� ��

��������� ������� #��� -������� -����� ����� B+� &�'C�

6�� ,�0�� &@@B� ;�� ��� � ��3� �� ��������� ?����

�� � -������� &(B /�� �� &1� C�<�

6������ ��� 4����� :�� ������ ,�?�� #�3��� ,�?�� A��� ��-�� &@@@�

-���������� �����3� ����� �������� �� ������2�������3

0$�7 ���� ��� ��3����� ��������� ����� ���� ,� -������� '@�

DD+�D<D�

6����� "�� !������L�� 9�� P��� *���� *��3��� *�0�� ��������

0�� 0�������� 6�� 6���� ,�:�� &@@<� � ������� ������ ��� 3���

�� ���3����������� ������ ���� ���� �� ������� �� �� ����7

���������������� :���� $��� ���� ���� K�� @'� B'@B�

BC(&�

?������29�3� ,�� :���� ;����� ��� ?���� �����3���� ��� �����

6������ ��� &@@&� �������� ��� �� ���2 ������ !�3��2

��2���� ���� �� ��� � ������ �� ��� ������� /;�"� ��"�1�

,� ���� &B+� &�=�

?��3� ��?�� !��� ;�!�� 4�� ?�?�� '((&� 0$�2������� �����2

���� 3��� ��������� %��� ���� �� �������� #����� '(�

C'=�CC<�

?������2?%������ #�� *��H� ��� 6������ P�� �3���� 4�!�� &@@'�

?��������� �� ���33���������2����%����� �� ������2������

��������%��� � ��� ���%���� �� $�.���� ����

����� ���� :����� '&� <(@�<&'�

?������ �� $����� *�� ��������� 0�,�� *������ ��� A���������

��� ��3����� 6���� &@@+� 0�������� �� :*#2&2 ���5�

���%���� .��� ��������� ���%��� %������3 ������2������

��������%��� �� ���� :����� '<� +@&�B(C�

��������� ��� 0������H� �� ;��3����� ��� A����.���

��� ��%���� ��� #���3� ��� ��;�� &@@+� �������� ��

���%���� �� $�.���� ���� ���� �� ���� ;�� � �����

����� :���� '=� '@C�'@B�

9�� ��� *������� ���� A����� :���� &@@@� -���������� ��

��� �������� %� �� ��� ������� �� ���� 0$� �� �����

���� $���� 6���������� &B� =B(�=B'�

9����� -�� ������� ��� 9����� $�� $3�� ��� ����������� ���

#����� #�$�� 0�%�� ��A�� &@@@� -�������� �� ���������

�������� �� ������� ��������� .��� ���� 0$� �������3

��������� %��� ���� ���� ���3��� ���� #��� ���3� DB�

D=&�D@'�

9���� ��9�� ��%����� ��!�� 4�%���� �� �� &@@C� K� �� 0$�

�������3 ��8���� ���33������� � ��� ��8����

������� 0$� ?��� 6���� &'� B=<�B=@�

���� ��� 0������� ?�!�� O�� 6�� 4���� � ,�?�� '(((�

������� 3��� �� ����� �� ���� ���3 ���� :�-20$�

����� ��������� *��� ;���� '� +C�B(�

����� �*�� ��� *�� *��� ���� �����3� ?���� &@@=� ����

����������� ��� ��%�� %� ������ ������ $���� C@&� =<&�

������� ����� ;���� ?�� ������� A�� �����.� A�� �������2

A������ ;�� ?������� -�� ����� �*�� '(((� ;���������

����������� �� ������� ����7 � ��������� �� ���2

���3�� ���� 0��3� 0����� ���� DC� D<�<<�

��� K���� �%�� ��*�� �� ��� 0���� 4���� 6�4�� *����.� 4�,��

&@@@� $������ ��� �����������7 ����� � �� ���������

������ .��� ����� 3�������� ������� ,� -������� *����

''@� &�''�

���3� J���� *���� J�A�� ,���3� 0�A�� ��� ,�J�� &@@=� -� �����

���������� ��5������ �� ������� 3���� �������� 3���

���� ��� ��� ��������� �� ���3���� ������� ;��3���� ���

B� 'DB�'<'�

A.%�� ;�� $�� ;�� J����� A�� ;��� ;�� 9�H�.�� ���

������� ��� J����� $�� A�������� ;�� A������� ��� &@@D�

;�� ������ �� ��� �� ?0D(2��5����� ����7 �� ����

������3��%���� �� .������3 �� 3������ ������ ����2

����� -������� &� &+B�&B=�

A.�� ��� $����.� *�� &@=D� $�. �������� ��� 0$�

���������� .��� �������� �� ����������������� *��� ?���

6���� D� &&B'�&&BD�

=( �-!- . �� �� � �- 1 � � ����� %,,"���� ��� %,,"��0��$��� 23 4����5 6�72�

Page 15: A novel transcutaneous plasmid-dimethylsulfoxide delivery technique for avian nucleic acid

A���� *�!�� A���� ��� ���� ,�� &@B+� -�����3��%���� �� ���

������� ���%��� �� $�.���� ���� ���� /*����.� �� 9

����1� :����� ���� <<� &<'�&<@�

A������� !���� 6��5���� ?�� �� !�� :����� ��� &@@@� -�����

����������� .��� ���� 0$�2�� �� ��� ���� ������

����� �������� �� ��� ����� 3����� �� ����� ����� ,�

-������� &+'� '<D�'+'�

A�������� ��� ����� ,���� ��%����� ��!�� 4�%���� �� �� &@@B�

?��2 ��������� ���3 ����� �<$' ��8���� ����� �������

%� 0$� ������ �� ��� ���33�������� ,� #����� B&� CC@&�CC@+�

A�������� ��� A�%� 0�!�� 4�%���� �� �� '(((� �����3�� ���

�������3 ��������� 3��� ��� ��8���� � ���� �%�� �

.��� 0$� ������� #����� &=� '<@'�'<@@�

A�.������ 0�4�� ����� ��?�� &@@@� -����� �� ��� �� 0$�

������� ?��� *��� !��� ���� <<� B<&�BB(�

!�� 0�:�� ������� 0�6�� A��3� 0�,�� *������� 4�4�� &@==�

?������������ �� %����� �� ��������� ���%���� ���

�������������� �� $�.���� ���� ���� �� �3��� �2

��������2& ����� ���� 0�� C'� 'BC�'=&�

!�� J�� 6����� ,�� ������ A�� &@@<� 6������ ���������� �� ���

�������� 3��� ���� �� ����� ;��3���� ��� D� '+�'@�

*�!����� -�?�� &@@D� ������ ������� ����� ���� -�������

&'� &&B�&C@�

*3����� 6�*�� 4����� A���� ��%���� *���� '((&� #��������

���3 ��������7 ������� ��� ��� ��������� ����������� ����

0��3 0����� ��� <(� '(<�''B�

*����� *�6�� A������ ?���� !��� *���� 9�������� 0�� $������

,� �� &@@'� -���������� ������������ �� ���� %� ������3��2

%���� � ���%����� :���� $��� ���� ���� K�� =@� +@(&�+@(<�

*�0������� *���� 6���������� ,�� &@B@� �������� ��� ������

����� ��������3�� ����� -� *�3����� �� 6 ������%��

���� ��������� �� ������� �� 3����� ����� ,� -������� &''�

&=@'�&=@=�

*� ���� ,���� *������� ,�� 0����%�3�� *�;�� ������3�� ,����

���.� *�� A������ ��� &@@'� ;�� ����� ������ ����7

���� ��������� ����� � �� ������ ������ ����� #�����

&(� B<�==�

*�������� ��� ���3� ?�� A��� �� *�� &@@+� ������� ������

��5������ �� ������ ���� � ������� %� �����������2

����� /0*�"1� $������ ���� ��� 'D� DC<+�DC<B�

*��� ��� �3� ��� K ����� :�� &@@@� $�����2����� ���2

�H������ ��� ����������� %� ������� ������2�������

�������� �������� �� �� ������ ������ �� �������

� ���� ������ 3��� �� ���� 6 ����� #����� &=� <&B�<'C�

"�� � �!�� ��������� ��� �������� ����� '(('� #��� -�������

-����� �����

������ :���� *����� ��� '((&� ���2��� 0$� �� ������ -3� ��

��� ��� �� %��� �� �������� #��� -������� -����� �����

=(� C'B�CC'�

��3����� *�� $����� ��� ������ A�� ���� 9�� ����� A��

&@@+� :��������� �� ������� ���� $�.���� ���� %�

��������� .��� ����� ���� 0$� �� ����3 ��� 9

������ �� $�.���� ���� ����� #����� &D� BDB�B<'�

���� P�� ?������ 0�;�� ;�3� 0�?�� &@@@� 0$�2%�� ���2������

��������� ���� ��� ���� #����� &B� '&C+�'&D&�

���������� ����� $����� ��� ����� ,�� &@@(� �$� ��� ���2 ���5�

������� ���� ������� /��2:?�17 ����� ����3� ��

������ ��������� ��� ������� ��� @&� &C@�&D'�

������� 0�6�� *������� 4�4�� *������� ��;�� ����� ��� &@=C�

� �� �����3��� ��5���3 %� ������2������ ��������%���

�� -� *�������� �� ���%��� ������� ����� 3���

$�.���� ���� ���� �� ��3�� ���� ��������� ���� 0��

'B� &+&�&B(�

������� 0�6�� !�� 0�:�� ?��� 6���� *������� 4�4�� &@==�

��� �� ����2 ���5� ������������ ��� �� ���������

%��� ���� ���� ��5��� .��� ��������� ���%����� ����

0�� C'� <'B�<CD�

;�3� 0�?�� ���� P�� ?������ 0�;�� &@@B� #�������� ���� %�� ����

$���� C==� B'@�BC(�

;����� �� �� #����3� :�� 9�������� "�,�� &@=B� ?�� ���� �� �.�

��������� ������2������ ��������%��� � �� ������2

����� ������ ��� ��� �����3�� ���� 0�� C&� &'(�&'D�

;�I���3� ;�� ������� 4�,�� 9��� !�0�,�� &@@=� 0$� �����������

��3����3 ��� ���7 �������� ������� �� � ���� ��������� ,�

-����� 0������� &&&� &=C�&==�

�� P��� 0�� -H������ ,�� &@=D� *�������� ���%���� 3���

%����� ������3��%���� �� ����� �� �� ���� �2 ���5�

�!-�� ��� ������� ���%���� ,� -������� *���� B'� D'B�

DD&�

4��%�� *�� $���� *�� ���� ��� ������ *�� A�.�� ;��

"���� ;�� &@@D� !� ����2������� 0$� ������ ���� �������

�������� 3��� ���� �� ����� *��� �� ���� 0��� C=� '+=�'BD�

4������ 0�6�� A������� ��?�� &@@@� ������ ������� ���� ���

'=&� <(�<B�

4���2?����3���� :�� ����� *���� *�4������ *�� :����� 2

M�3���� ,�*�� !��� *���� &@B@� "�3� �� ���� �

�����%����� �� �� ���� �������3 ���5� ���%��� ����

��� �����������7 �������� ��� 3��������� ��������

������ ����� ,� -������� &'C� &B(<�&B(=�

J�� 4���� A���2�%��� *�� !�33���� 0�� *����� 0�� ����� ;�0��

0�%� ��,�� &@@@� ;� ��� 3��� �������� �� ������ ���� ,�

-����� 0������� &&'� CB(�CB<�

�-!- . �� �� � �- 1 � � ����� %,,"���� ��� %,,"��0��$��� 23 4����5 6�72� =&