a influÊncia do organofosforado clorpirifÓs no …
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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA
CENTRO DE CIEcircNCIAS DA SAUacuteDE
PROGRAMA DE POacuteS- GRADUACcedilAtildeO EM DISTUacuteRBIOS DA
COMUNICACcedilAtildeO HUMANA
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO
CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA VESTIBULAR DE
COBAIAS
DISSERTACcedilAtildeO DE MESTRADO
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Santa Maria RS Brasil
2013
2
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA
VESTIBULAR DE COBAIAS
por
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Dissertaccedilatildeo apresentada ao Curso de Mestrado do Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana Aacuterea de
Concentraccedilatildeo em Audiccedilatildeo e Equiliacutebrio da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM RS) como requisito parcial para a obtenccedilatildeo do
grau de Mestre em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana
Orientador Prof Dr Aron Ferreira da Silveira (UFSM)
Co-orientador Prof Dr Miguel Acircngelo Hyppolito (USP- Ribeiratildeo Preto)
Santa Maria RS Brasil 2013
3
Ficha catalograacutefica elaborada atraveacutes do Programa de Geraccedilatildeo Automaacutetica da Biblioteca Central da UFSM com os dados fornecidos pelo(a) autor(a)
_______________________________________________________________ copy 2013 Todos os direitos autorais reservados a Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo A reproduccedilatildeo de partes ou do todo deste trabalho soacute poderaacute ser feita com autorizaccedilatildeo por escrito do autor Endereccedilo Av Monsenhor Pascoal Gomes Libreloto n 199 Bairro Parque Dom Antocircnio Reis Santa Maria RS 97065-290 Fone (55) 32119183 Cel (055) 99484920 End Eletr liciacogohotmailcom _______________________________________________________________
Assunccedilatildeo Cogo Liacutecia
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo-2013
71 p 30cm
Orientador Aron Ferreira da Silveira
Coorientador Miguel Acircngelo Hyppolito
Dissertaccedilatildeo (mestrado) - Universidade Federal de Santa
Maria Centro de Ciecircncias da Sauacutede Programa de Poacutes-
Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana RS 2013
1 Equiliacutebrio Postural 2 Sistema Vestibular 3
Inseticida Organofosforado 4 Praguicida 5 Toxicidade
I Ferreira da Silveira Aron II Acircngelo Hyppolito
Miguel III Tiacutetulo
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Universidade Federal de Santa Maria Centro de Ciecircncias da Sauacutede
Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana
A Comissatildeo Examinadora abaixo assinada aprova a Dissertaccedilatildeo de Mestrado
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
elaborada por
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
como requisito parcial para obtenccedilatildeo do grau de Mestre em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana
Comissatildeo Examinadora
Prof Dra Maristela Julio Costa (UFSM)
(Presidente)
Prof Dra Valdete Alves Valentis dos Santos Filha (UFSM)
Prof Dra Pricila Sleifer (UFRGS)
Santa Maria 01 de marccedilo de 2013
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Dedico este trabalho aacute minha famiacutelia que sempre me apoiou
para que eu realizasse os meus sonhos
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AGRADECIMENTOS
A Deus
Aos meus pais Clauacutedio e Mara pela oportunidade de continuar me aperfeiccediloando apoio amor e dedicaccedilatildeo de sempre
Ao meu irmatildeo Joatildeo Vitor pela paciecircncia
Ao meu namorado Guilherme e sua famiacutelia pelo apoio e por estar sempre ao meu
lado nas horas difiacuteceis
Ao meu orientador Prof Aron pelos ensinamentos e pelo incentivo de sempre continuar buscando aprimoramento
Ao co-orientador Prof Miguel pela acolhida em Ribeiratildeo Preto e a oportunidade de
realizar a coleta de dados em um centro de excelecircncia em pesquisa
Aos teacutecnicos que me auxiliaram na coleta Maria Adriana Dani Chico
Agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de Microscopia Eletrocircnica do
Departamento de Biologia Celular e Molecular e Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo pela
colaboraccedilatildeo nesta pesquisa
Agrave Universidade Federal de Santa Maria
Agraves minhas colegas de poacutes-graduaccedilatildeo Carolina Veloso Letiacutecia Kunst Samantha Marques Maiara Gonccedilalves Enma Ortiz e Dayane Didonet pelo apoio e acolhida na
aacuterea da audiccedilatildeo e equiliacutebrio
Aos alunos que por mim passaram nas disciplinas de docecircncia
Aos professores do Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana pela acolhida
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ldquoA gente sempre deve sair agrave rua como quem foge de casa Como se estivessem abertos diante de noacutes todos os caminhos do mundo
Natildeo importa que os compromissos as obrigaccedilotildees estejam ali Chegamos de longe de alma aberta e coraccedilatildeo cantandordquo
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Maacuterio Quintana RESUMO
Dissertaccedilatildeo de Mestrado
Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana Universidade Federal de Santa Maria RS Brasil
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA
VESTIBULAR DE COBAIAS
AUTORA LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO ORIENTADOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA
CO-ORIENTADOR MIGUEL AcircNGELO HYPPOLITO
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado muitos danos ao ser humano e
ao meio ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos
do tipo agrotoacutexicos frequentemente considerados como responsaacuteveis por
intoxicaccedilotildees a trabalhadores tornando isto um problema de sauacutede puacuteblica O
objetivo geral deste estudo consistiu em verificar se o organofosforado clorpirifoacutes
teve influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda Tratou-se de
uma pesquisa experimental A pesquisa utilizou 18 cobaias albinas da espeacutecie Cavia
porcellus divididas em trecircs grupos sendo o grupo I o controle dos demais utilizando
aacutegua destilada e contendo cinco animais No grupo II com seis animais foi
administrada a dose de 05mgkgdia de agrotoacutexico clorpirifoacutes e no grupo III com
sete animais a dose de 1mgkgdia do mesmo agrotoacutexico Os trecircs grupos estiveram
sob experimento durante 10 dias Para anaacutelise dos resultados foi realizada a anaacutelise
funcional do sistema vestibular atraveacutes da eletronistagmografia (prova caloacuterica ndash
com aacutegua gelada) e a anaacutelise histopatoloacutegica atraveacutes da microscopia eletrocircnica de
varredura Os resultados natildeo demonstraram diferenccedila estatiacutestica significante para as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmo e velocidade angular da
componente lenta na eletronistagmografia e no nuacutemero de tufos ciliares na anaacutelise
histopatoloacutegica por microscopia eletrocircnica de varredura Concluiu-se que o
organofosforado clorpirifoacutes natildeo ocasionou dano ao sistema vestibular das cobaias
nas doses testadas em exposiccedilatildeo aguda
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
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ABSTRACT
MasterrsquosThesis Post Graduation Program in Human Communication Disturbance
Universidade Federal de Santa Maria RS Brazil
THE INFLUENCE OF ORGANOPHOSPHATE CHLORPYRIFOS VESTIBULAR SYSTEM OF GUINEA PIGS
AUTHOR LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO
ADVISOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA CO-ADVISOR MIGUEL ANGELO HYPPOLITO
Some chemicals have caused much damage to humans and the environment
Among these substances are chemical compounds like pesticides often considered
responsible for poisoning the workers making it a public health problem The aim of
this study was to verify whether the organophosphate chlorpyrifos was influential in
the vestibular system of guinea pigs in acute exposure This was an experimental
research The research used 18 albino guinea pigs of the species Cavia porcellus
divided into three groups with group I control the other using distilled water and
containing five animals In Group II six animals were administered 05 mg kg day
of pesticide chlorpyrifos and group III with seven animals at a dose of 1mgkgday of
the same pesticide The three groups were under experiment for 10 days For
analysis of the results was performed functional analysis of the vestibular system by
electronystagmography (caloric test - with ice water) and histopathological analysis
by scanning electron microscopy The results showed no statistically significant
difference for the variable frequency of appearance of nystagmus and angular
velocity of the slow component in electronystagmography and the number of ciliary
tufts histologically by scanning electron microscopy It was concluded that the
organophosphate chlorpyrifos did not cause damage to the vestibular system of the
guinea pigs at the doses tested in acute exposure
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
10
LISTA DE FIGURAS
ARTIGO 1
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia 37
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos de cobaia do grupo controle 37
11
LISTA DE TABELAS
ARTIGO 1
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de
nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II III
39
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente
lenta (degs) de nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II
III
39
ARTIGO 2
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e
utriacuteculo entre os Grupos I II III
51
12
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
Ache Acetilcolinesterase
ANVISA Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria
CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento do Ensino Superior
CETEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
COBEA Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal
CONCEA Conselho Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal
EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias
ENG Eletronistagmografia
et al E colaboradores
FMRP Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto
Ltda Limitada
MAPA Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento
MEV Microscopia Eletrocircnica de Varredura
OD Orelha Direita
OE Orelha Esquerda
OF Organofosforado
PVC Policloreto de Vinila
RVE Reflexo vestiacutebulo-espinhal
RVO Reflexo vestiacutebulo-ocular
SA Sociedade Anocircnima
SBCAL Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de Laboratoacuterio
SINITOX Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-farmacoloacutegicas
SNC Sistema Nervoso Central
UFSM Universidade Federal de Santa Maria
USP Universidade de Satildeo Paulo
VACL Velocidade Angular da Componente Lenta
VENG Vectoeletronistagmografia
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LISTA DE SIacuteMBOLOS ordmC Graus Celsius
cm Centiacutemetro
CO2 Dioacutexido de Carbono
DL 50 Dose Letal 50
Fn Frequecircncia de nistagmos
g Grama
Kg Kilograma
M Molar
mg Miligrama
ml Mililitros
reg Marca Registrada
Por cento
pH Potencial de Hidrogecircnio
us Unidade por segundo
ordms Graus por segundo
ordm Grau
+ Positivo
- Negativo
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LISTA DE ANEXOS
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo
Animal
66
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
32
Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
33
globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
35
utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
40
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
45
LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
46
SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
47
4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
48
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
49
Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
50
Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
51
Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
53
submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
55
equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
56
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
57
durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
58
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
63
Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
2
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA
VESTIBULAR DE COBAIAS
por
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Dissertaccedilatildeo apresentada ao Curso de Mestrado do Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana Aacuterea de
Concentraccedilatildeo em Audiccedilatildeo e Equiliacutebrio da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM RS) como requisito parcial para a obtenccedilatildeo do
grau de Mestre em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana
Orientador Prof Dr Aron Ferreira da Silveira (UFSM)
Co-orientador Prof Dr Miguel Acircngelo Hyppolito (USP- Ribeiratildeo Preto)
Santa Maria RS Brasil 2013
3
Ficha catalograacutefica elaborada atraveacutes do Programa de Geraccedilatildeo Automaacutetica da Biblioteca Central da UFSM com os dados fornecidos pelo(a) autor(a)
_______________________________________________________________ copy 2013 Todos os direitos autorais reservados a Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo A reproduccedilatildeo de partes ou do todo deste trabalho soacute poderaacute ser feita com autorizaccedilatildeo por escrito do autor Endereccedilo Av Monsenhor Pascoal Gomes Libreloto n 199 Bairro Parque Dom Antocircnio Reis Santa Maria RS 97065-290 Fone (55) 32119183 Cel (055) 99484920 End Eletr liciacogohotmailcom _______________________________________________________________
Assunccedilatildeo Cogo Liacutecia
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo-2013
71 p 30cm
Orientador Aron Ferreira da Silveira
Coorientador Miguel Acircngelo Hyppolito
Dissertaccedilatildeo (mestrado) - Universidade Federal de Santa
Maria Centro de Ciecircncias da Sauacutede Programa de Poacutes-
Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana RS 2013
1 Equiliacutebrio Postural 2 Sistema Vestibular 3
Inseticida Organofosforado 4 Praguicida 5 Toxicidade
I Ferreira da Silveira Aron II Acircngelo Hyppolito
Miguel III Tiacutetulo
4
Universidade Federal de Santa Maria Centro de Ciecircncias da Sauacutede
Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana
A Comissatildeo Examinadora abaixo assinada aprova a Dissertaccedilatildeo de Mestrado
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
elaborada por
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
como requisito parcial para obtenccedilatildeo do grau de Mestre em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana
Comissatildeo Examinadora
Prof Dra Maristela Julio Costa (UFSM)
(Presidente)
Prof Dra Valdete Alves Valentis dos Santos Filha (UFSM)
Prof Dra Pricila Sleifer (UFRGS)
Santa Maria 01 de marccedilo de 2013
5
Dedico este trabalho aacute minha famiacutelia que sempre me apoiou
para que eu realizasse os meus sonhos
6
AGRADECIMENTOS
A Deus
Aos meus pais Clauacutedio e Mara pela oportunidade de continuar me aperfeiccediloando apoio amor e dedicaccedilatildeo de sempre
Ao meu irmatildeo Joatildeo Vitor pela paciecircncia
Ao meu namorado Guilherme e sua famiacutelia pelo apoio e por estar sempre ao meu
lado nas horas difiacuteceis
Ao meu orientador Prof Aron pelos ensinamentos e pelo incentivo de sempre continuar buscando aprimoramento
Ao co-orientador Prof Miguel pela acolhida em Ribeiratildeo Preto e a oportunidade de
realizar a coleta de dados em um centro de excelecircncia em pesquisa
Aos teacutecnicos que me auxiliaram na coleta Maria Adriana Dani Chico
Agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de Microscopia Eletrocircnica do
Departamento de Biologia Celular e Molecular e Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo pela
colaboraccedilatildeo nesta pesquisa
Agrave Universidade Federal de Santa Maria
Agraves minhas colegas de poacutes-graduaccedilatildeo Carolina Veloso Letiacutecia Kunst Samantha Marques Maiara Gonccedilalves Enma Ortiz e Dayane Didonet pelo apoio e acolhida na
aacuterea da audiccedilatildeo e equiliacutebrio
Aos alunos que por mim passaram nas disciplinas de docecircncia
Aos professores do Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana pela acolhida
7
ldquoA gente sempre deve sair agrave rua como quem foge de casa Como se estivessem abertos diante de noacutes todos os caminhos do mundo
Natildeo importa que os compromissos as obrigaccedilotildees estejam ali Chegamos de longe de alma aberta e coraccedilatildeo cantandordquo
8
Maacuterio Quintana RESUMO
Dissertaccedilatildeo de Mestrado
Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana Universidade Federal de Santa Maria RS Brasil
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA
VESTIBULAR DE COBAIAS
AUTORA LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO ORIENTADOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA
CO-ORIENTADOR MIGUEL AcircNGELO HYPPOLITO
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado muitos danos ao ser humano e
ao meio ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos
do tipo agrotoacutexicos frequentemente considerados como responsaacuteveis por
intoxicaccedilotildees a trabalhadores tornando isto um problema de sauacutede puacuteblica O
objetivo geral deste estudo consistiu em verificar se o organofosforado clorpirifoacutes
teve influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda Tratou-se de
uma pesquisa experimental A pesquisa utilizou 18 cobaias albinas da espeacutecie Cavia
porcellus divididas em trecircs grupos sendo o grupo I o controle dos demais utilizando
aacutegua destilada e contendo cinco animais No grupo II com seis animais foi
administrada a dose de 05mgkgdia de agrotoacutexico clorpirifoacutes e no grupo III com
sete animais a dose de 1mgkgdia do mesmo agrotoacutexico Os trecircs grupos estiveram
sob experimento durante 10 dias Para anaacutelise dos resultados foi realizada a anaacutelise
funcional do sistema vestibular atraveacutes da eletronistagmografia (prova caloacuterica ndash
com aacutegua gelada) e a anaacutelise histopatoloacutegica atraveacutes da microscopia eletrocircnica de
varredura Os resultados natildeo demonstraram diferenccedila estatiacutestica significante para as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmo e velocidade angular da
componente lenta na eletronistagmografia e no nuacutemero de tufos ciliares na anaacutelise
histopatoloacutegica por microscopia eletrocircnica de varredura Concluiu-se que o
organofosforado clorpirifoacutes natildeo ocasionou dano ao sistema vestibular das cobaias
nas doses testadas em exposiccedilatildeo aguda
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
9
ABSTRACT
MasterrsquosThesis Post Graduation Program in Human Communication Disturbance
Universidade Federal de Santa Maria RS Brazil
THE INFLUENCE OF ORGANOPHOSPHATE CHLORPYRIFOS VESTIBULAR SYSTEM OF GUINEA PIGS
AUTHOR LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO
ADVISOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA CO-ADVISOR MIGUEL ANGELO HYPPOLITO
Some chemicals have caused much damage to humans and the environment
Among these substances are chemical compounds like pesticides often considered
responsible for poisoning the workers making it a public health problem The aim of
this study was to verify whether the organophosphate chlorpyrifos was influential in
the vestibular system of guinea pigs in acute exposure This was an experimental
research The research used 18 albino guinea pigs of the species Cavia porcellus
divided into three groups with group I control the other using distilled water and
containing five animals In Group II six animals were administered 05 mg kg day
of pesticide chlorpyrifos and group III with seven animals at a dose of 1mgkgday of
the same pesticide The three groups were under experiment for 10 days For
analysis of the results was performed functional analysis of the vestibular system by
electronystagmography (caloric test - with ice water) and histopathological analysis
by scanning electron microscopy The results showed no statistically significant
difference for the variable frequency of appearance of nystagmus and angular
velocity of the slow component in electronystagmography and the number of ciliary
tufts histologically by scanning electron microscopy It was concluded that the
organophosphate chlorpyrifos did not cause damage to the vestibular system of the
guinea pigs at the doses tested in acute exposure
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
10
LISTA DE FIGURAS
ARTIGO 1
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia 37
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos de cobaia do grupo controle 37
11
LISTA DE TABELAS
ARTIGO 1
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de
nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II III
39
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente
lenta (degs) de nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II
III
39
ARTIGO 2
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e
utriacuteculo entre os Grupos I II III
51
12
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
Ache Acetilcolinesterase
ANVISA Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria
CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento do Ensino Superior
CETEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
COBEA Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal
CONCEA Conselho Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal
EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias
ENG Eletronistagmografia
et al E colaboradores
FMRP Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto
Ltda Limitada
MAPA Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento
MEV Microscopia Eletrocircnica de Varredura
OD Orelha Direita
OE Orelha Esquerda
OF Organofosforado
PVC Policloreto de Vinila
RVE Reflexo vestiacutebulo-espinhal
RVO Reflexo vestiacutebulo-ocular
SA Sociedade Anocircnima
SBCAL Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de Laboratoacuterio
SINITOX Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-farmacoloacutegicas
SNC Sistema Nervoso Central
UFSM Universidade Federal de Santa Maria
USP Universidade de Satildeo Paulo
VACL Velocidade Angular da Componente Lenta
VENG Vectoeletronistagmografia
13
LISTA DE SIacuteMBOLOS ordmC Graus Celsius
cm Centiacutemetro
CO2 Dioacutexido de Carbono
DL 50 Dose Letal 50
Fn Frequecircncia de nistagmos
g Grama
Kg Kilograma
M Molar
mg Miligrama
ml Mililitros
reg Marca Registrada
Por cento
pH Potencial de Hidrogecircnio
us Unidade por segundo
ordms Graus por segundo
ordm Grau
+ Positivo
- Negativo
14
LISTA DE ANEXOS
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo
Animal
66
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
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Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
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globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
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curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
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utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
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A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
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especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
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Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
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I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
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Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
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AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
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avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
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Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
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do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
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LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
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SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
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4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
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Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
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Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
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Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
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Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
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submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
55
equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
56
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
57
durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
58
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
63
Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
3
Ficha catalograacutefica elaborada atraveacutes do Programa de Geraccedilatildeo Automaacutetica da Biblioteca Central da UFSM com os dados fornecidos pelo(a) autor(a)
_______________________________________________________________ copy 2013 Todos os direitos autorais reservados a Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo A reproduccedilatildeo de partes ou do todo deste trabalho soacute poderaacute ser feita com autorizaccedilatildeo por escrito do autor Endereccedilo Av Monsenhor Pascoal Gomes Libreloto n 199 Bairro Parque Dom Antocircnio Reis Santa Maria RS 97065-290 Fone (55) 32119183 Cel (055) 99484920 End Eletr liciacogohotmailcom _______________________________________________________________
Assunccedilatildeo Cogo Liacutecia
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo-2013
71 p 30cm
Orientador Aron Ferreira da Silveira
Coorientador Miguel Acircngelo Hyppolito
Dissertaccedilatildeo (mestrado) - Universidade Federal de Santa
Maria Centro de Ciecircncias da Sauacutede Programa de Poacutes-
Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana RS 2013
1 Equiliacutebrio Postural 2 Sistema Vestibular 3
Inseticida Organofosforado 4 Praguicida 5 Toxicidade
I Ferreira da Silveira Aron II Acircngelo Hyppolito
Miguel III Tiacutetulo
4
Universidade Federal de Santa Maria Centro de Ciecircncias da Sauacutede
Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana
A Comissatildeo Examinadora abaixo assinada aprova a Dissertaccedilatildeo de Mestrado
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
elaborada por
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
como requisito parcial para obtenccedilatildeo do grau de Mestre em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana
Comissatildeo Examinadora
Prof Dra Maristela Julio Costa (UFSM)
(Presidente)
Prof Dra Valdete Alves Valentis dos Santos Filha (UFSM)
Prof Dra Pricila Sleifer (UFRGS)
Santa Maria 01 de marccedilo de 2013
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Dedico este trabalho aacute minha famiacutelia que sempre me apoiou
para que eu realizasse os meus sonhos
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AGRADECIMENTOS
A Deus
Aos meus pais Clauacutedio e Mara pela oportunidade de continuar me aperfeiccediloando apoio amor e dedicaccedilatildeo de sempre
Ao meu irmatildeo Joatildeo Vitor pela paciecircncia
Ao meu namorado Guilherme e sua famiacutelia pelo apoio e por estar sempre ao meu
lado nas horas difiacuteceis
Ao meu orientador Prof Aron pelos ensinamentos e pelo incentivo de sempre continuar buscando aprimoramento
Ao co-orientador Prof Miguel pela acolhida em Ribeiratildeo Preto e a oportunidade de
realizar a coleta de dados em um centro de excelecircncia em pesquisa
Aos teacutecnicos que me auxiliaram na coleta Maria Adriana Dani Chico
Agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de Microscopia Eletrocircnica do
Departamento de Biologia Celular e Molecular e Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo pela
colaboraccedilatildeo nesta pesquisa
Agrave Universidade Federal de Santa Maria
Agraves minhas colegas de poacutes-graduaccedilatildeo Carolina Veloso Letiacutecia Kunst Samantha Marques Maiara Gonccedilalves Enma Ortiz e Dayane Didonet pelo apoio e acolhida na
aacuterea da audiccedilatildeo e equiliacutebrio
Aos alunos que por mim passaram nas disciplinas de docecircncia
Aos professores do Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana pela acolhida
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ldquoA gente sempre deve sair agrave rua como quem foge de casa Como se estivessem abertos diante de noacutes todos os caminhos do mundo
Natildeo importa que os compromissos as obrigaccedilotildees estejam ali Chegamos de longe de alma aberta e coraccedilatildeo cantandordquo
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Maacuterio Quintana RESUMO
Dissertaccedilatildeo de Mestrado
Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana Universidade Federal de Santa Maria RS Brasil
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA
VESTIBULAR DE COBAIAS
AUTORA LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO ORIENTADOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA
CO-ORIENTADOR MIGUEL AcircNGELO HYPPOLITO
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado muitos danos ao ser humano e
ao meio ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos
do tipo agrotoacutexicos frequentemente considerados como responsaacuteveis por
intoxicaccedilotildees a trabalhadores tornando isto um problema de sauacutede puacuteblica O
objetivo geral deste estudo consistiu em verificar se o organofosforado clorpirifoacutes
teve influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda Tratou-se de
uma pesquisa experimental A pesquisa utilizou 18 cobaias albinas da espeacutecie Cavia
porcellus divididas em trecircs grupos sendo o grupo I o controle dos demais utilizando
aacutegua destilada e contendo cinco animais No grupo II com seis animais foi
administrada a dose de 05mgkgdia de agrotoacutexico clorpirifoacutes e no grupo III com
sete animais a dose de 1mgkgdia do mesmo agrotoacutexico Os trecircs grupos estiveram
sob experimento durante 10 dias Para anaacutelise dos resultados foi realizada a anaacutelise
funcional do sistema vestibular atraveacutes da eletronistagmografia (prova caloacuterica ndash
com aacutegua gelada) e a anaacutelise histopatoloacutegica atraveacutes da microscopia eletrocircnica de
varredura Os resultados natildeo demonstraram diferenccedila estatiacutestica significante para as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmo e velocidade angular da
componente lenta na eletronistagmografia e no nuacutemero de tufos ciliares na anaacutelise
histopatoloacutegica por microscopia eletrocircnica de varredura Concluiu-se que o
organofosforado clorpirifoacutes natildeo ocasionou dano ao sistema vestibular das cobaias
nas doses testadas em exposiccedilatildeo aguda
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
9
ABSTRACT
MasterrsquosThesis Post Graduation Program in Human Communication Disturbance
Universidade Federal de Santa Maria RS Brazil
THE INFLUENCE OF ORGANOPHOSPHATE CHLORPYRIFOS VESTIBULAR SYSTEM OF GUINEA PIGS
AUTHOR LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO
ADVISOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA CO-ADVISOR MIGUEL ANGELO HYPPOLITO
Some chemicals have caused much damage to humans and the environment
Among these substances are chemical compounds like pesticides often considered
responsible for poisoning the workers making it a public health problem The aim of
this study was to verify whether the organophosphate chlorpyrifos was influential in
the vestibular system of guinea pigs in acute exposure This was an experimental
research The research used 18 albino guinea pigs of the species Cavia porcellus
divided into three groups with group I control the other using distilled water and
containing five animals In Group II six animals were administered 05 mg kg day
of pesticide chlorpyrifos and group III with seven animals at a dose of 1mgkgday of
the same pesticide The three groups were under experiment for 10 days For
analysis of the results was performed functional analysis of the vestibular system by
electronystagmography (caloric test - with ice water) and histopathological analysis
by scanning electron microscopy The results showed no statistically significant
difference for the variable frequency of appearance of nystagmus and angular
velocity of the slow component in electronystagmography and the number of ciliary
tufts histologically by scanning electron microscopy It was concluded that the
organophosphate chlorpyrifos did not cause damage to the vestibular system of the
guinea pigs at the doses tested in acute exposure
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
10
LISTA DE FIGURAS
ARTIGO 1
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia 37
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos de cobaia do grupo controle 37
11
LISTA DE TABELAS
ARTIGO 1
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de
nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II III
39
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente
lenta (degs) de nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II
III
39
ARTIGO 2
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e
utriacuteculo entre os Grupos I II III
51
12
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
Ache Acetilcolinesterase
ANVISA Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria
CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento do Ensino Superior
CETEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
COBEA Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal
CONCEA Conselho Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal
EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias
ENG Eletronistagmografia
et al E colaboradores
FMRP Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto
Ltda Limitada
MAPA Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento
MEV Microscopia Eletrocircnica de Varredura
OD Orelha Direita
OE Orelha Esquerda
OF Organofosforado
PVC Policloreto de Vinila
RVE Reflexo vestiacutebulo-espinhal
RVO Reflexo vestiacutebulo-ocular
SA Sociedade Anocircnima
SBCAL Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de Laboratoacuterio
SINITOX Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-farmacoloacutegicas
SNC Sistema Nervoso Central
UFSM Universidade Federal de Santa Maria
USP Universidade de Satildeo Paulo
VACL Velocidade Angular da Componente Lenta
VENG Vectoeletronistagmografia
13
LISTA DE SIacuteMBOLOS ordmC Graus Celsius
cm Centiacutemetro
CO2 Dioacutexido de Carbono
DL 50 Dose Letal 50
Fn Frequecircncia de nistagmos
g Grama
Kg Kilograma
M Molar
mg Miligrama
ml Mililitros
reg Marca Registrada
Por cento
pH Potencial de Hidrogecircnio
us Unidade por segundo
ordms Graus por segundo
ordm Grau
+ Positivo
- Negativo
14
LISTA DE ANEXOS
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo
Animal
66
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
32
Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
33
globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
35
utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
40
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
45
LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
46
SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
47
4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
48
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
49
Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
50
Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
51
Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
53
submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
55
equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
56
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
57
durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
58
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
63
Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
4
Universidade Federal de Santa Maria Centro de Ciecircncias da Sauacutede
Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana
A Comissatildeo Examinadora abaixo assinada aprova a Dissertaccedilatildeo de Mestrado
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
elaborada por
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
como requisito parcial para obtenccedilatildeo do grau de Mestre em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana
Comissatildeo Examinadora
Prof Dra Maristela Julio Costa (UFSM)
(Presidente)
Prof Dra Valdete Alves Valentis dos Santos Filha (UFSM)
Prof Dra Pricila Sleifer (UFRGS)
Santa Maria 01 de marccedilo de 2013
5
Dedico este trabalho aacute minha famiacutelia que sempre me apoiou
para que eu realizasse os meus sonhos
6
AGRADECIMENTOS
A Deus
Aos meus pais Clauacutedio e Mara pela oportunidade de continuar me aperfeiccediloando apoio amor e dedicaccedilatildeo de sempre
Ao meu irmatildeo Joatildeo Vitor pela paciecircncia
Ao meu namorado Guilherme e sua famiacutelia pelo apoio e por estar sempre ao meu
lado nas horas difiacuteceis
Ao meu orientador Prof Aron pelos ensinamentos e pelo incentivo de sempre continuar buscando aprimoramento
Ao co-orientador Prof Miguel pela acolhida em Ribeiratildeo Preto e a oportunidade de
realizar a coleta de dados em um centro de excelecircncia em pesquisa
Aos teacutecnicos que me auxiliaram na coleta Maria Adriana Dani Chico
Agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de Microscopia Eletrocircnica do
Departamento de Biologia Celular e Molecular e Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo pela
colaboraccedilatildeo nesta pesquisa
Agrave Universidade Federal de Santa Maria
Agraves minhas colegas de poacutes-graduaccedilatildeo Carolina Veloso Letiacutecia Kunst Samantha Marques Maiara Gonccedilalves Enma Ortiz e Dayane Didonet pelo apoio e acolhida na
aacuterea da audiccedilatildeo e equiliacutebrio
Aos alunos que por mim passaram nas disciplinas de docecircncia
Aos professores do Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana pela acolhida
7
ldquoA gente sempre deve sair agrave rua como quem foge de casa Como se estivessem abertos diante de noacutes todos os caminhos do mundo
Natildeo importa que os compromissos as obrigaccedilotildees estejam ali Chegamos de longe de alma aberta e coraccedilatildeo cantandordquo
8
Maacuterio Quintana RESUMO
Dissertaccedilatildeo de Mestrado
Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana Universidade Federal de Santa Maria RS Brasil
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA
VESTIBULAR DE COBAIAS
AUTORA LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO ORIENTADOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA
CO-ORIENTADOR MIGUEL AcircNGELO HYPPOLITO
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado muitos danos ao ser humano e
ao meio ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos
do tipo agrotoacutexicos frequentemente considerados como responsaacuteveis por
intoxicaccedilotildees a trabalhadores tornando isto um problema de sauacutede puacuteblica O
objetivo geral deste estudo consistiu em verificar se o organofosforado clorpirifoacutes
teve influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda Tratou-se de
uma pesquisa experimental A pesquisa utilizou 18 cobaias albinas da espeacutecie Cavia
porcellus divididas em trecircs grupos sendo o grupo I o controle dos demais utilizando
aacutegua destilada e contendo cinco animais No grupo II com seis animais foi
administrada a dose de 05mgkgdia de agrotoacutexico clorpirifoacutes e no grupo III com
sete animais a dose de 1mgkgdia do mesmo agrotoacutexico Os trecircs grupos estiveram
sob experimento durante 10 dias Para anaacutelise dos resultados foi realizada a anaacutelise
funcional do sistema vestibular atraveacutes da eletronistagmografia (prova caloacuterica ndash
com aacutegua gelada) e a anaacutelise histopatoloacutegica atraveacutes da microscopia eletrocircnica de
varredura Os resultados natildeo demonstraram diferenccedila estatiacutestica significante para as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmo e velocidade angular da
componente lenta na eletronistagmografia e no nuacutemero de tufos ciliares na anaacutelise
histopatoloacutegica por microscopia eletrocircnica de varredura Concluiu-se que o
organofosforado clorpirifoacutes natildeo ocasionou dano ao sistema vestibular das cobaias
nas doses testadas em exposiccedilatildeo aguda
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
9
ABSTRACT
MasterrsquosThesis Post Graduation Program in Human Communication Disturbance
Universidade Federal de Santa Maria RS Brazil
THE INFLUENCE OF ORGANOPHOSPHATE CHLORPYRIFOS VESTIBULAR SYSTEM OF GUINEA PIGS
AUTHOR LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO
ADVISOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA CO-ADVISOR MIGUEL ANGELO HYPPOLITO
Some chemicals have caused much damage to humans and the environment
Among these substances are chemical compounds like pesticides often considered
responsible for poisoning the workers making it a public health problem The aim of
this study was to verify whether the organophosphate chlorpyrifos was influential in
the vestibular system of guinea pigs in acute exposure This was an experimental
research The research used 18 albino guinea pigs of the species Cavia porcellus
divided into three groups with group I control the other using distilled water and
containing five animals In Group II six animals were administered 05 mg kg day
of pesticide chlorpyrifos and group III with seven animals at a dose of 1mgkgday of
the same pesticide The three groups were under experiment for 10 days For
analysis of the results was performed functional analysis of the vestibular system by
electronystagmography (caloric test - with ice water) and histopathological analysis
by scanning electron microscopy The results showed no statistically significant
difference for the variable frequency of appearance of nystagmus and angular
velocity of the slow component in electronystagmography and the number of ciliary
tufts histologically by scanning electron microscopy It was concluded that the
organophosphate chlorpyrifos did not cause damage to the vestibular system of the
guinea pigs at the doses tested in acute exposure
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
10
LISTA DE FIGURAS
ARTIGO 1
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia 37
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos de cobaia do grupo controle 37
11
LISTA DE TABELAS
ARTIGO 1
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de
nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II III
39
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente
lenta (degs) de nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II
III
39
ARTIGO 2
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e
utriacuteculo entre os Grupos I II III
51
12
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
Ache Acetilcolinesterase
ANVISA Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria
CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento do Ensino Superior
CETEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
COBEA Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal
CONCEA Conselho Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal
EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias
ENG Eletronistagmografia
et al E colaboradores
FMRP Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto
Ltda Limitada
MAPA Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento
MEV Microscopia Eletrocircnica de Varredura
OD Orelha Direita
OE Orelha Esquerda
OF Organofosforado
PVC Policloreto de Vinila
RVE Reflexo vestiacutebulo-espinhal
RVO Reflexo vestiacutebulo-ocular
SA Sociedade Anocircnima
SBCAL Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de Laboratoacuterio
SINITOX Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-farmacoloacutegicas
SNC Sistema Nervoso Central
UFSM Universidade Federal de Santa Maria
USP Universidade de Satildeo Paulo
VACL Velocidade Angular da Componente Lenta
VENG Vectoeletronistagmografia
13
LISTA DE SIacuteMBOLOS ordmC Graus Celsius
cm Centiacutemetro
CO2 Dioacutexido de Carbono
DL 50 Dose Letal 50
Fn Frequecircncia de nistagmos
g Grama
Kg Kilograma
M Molar
mg Miligrama
ml Mililitros
reg Marca Registrada
Por cento
pH Potencial de Hidrogecircnio
us Unidade por segundo
ordms Graus por segundo
ordm Grau
+ Positivo
- Negativo
14
LISTA DE ANEXOS
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo
Animal
66
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
32
Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
33
globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
35
utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
40
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
45
LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
46
SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
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4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
48
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
49
Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
50
Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
51
Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
53
submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
55
equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
56
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
57
durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
58
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
63
Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
5
Dedico este trabalho aacute minha famiacutelia que sempre me apoiou
para que eu realizasse os meus sonhos
6
AGRADECIMENTOS
A Deus
Aos meus pais Clauacutedio e Mara pela oportunidade de continuar me aperfeiccediloando apoio amor e dedicaccedilatildeo de sempre
Ao meu irmatildeo Joatildeo Vitor pela paciecircncia
Ao meu namorado Guilherme e sua famiacutelia pelo apoio e por estar sempre ao meu
lado nas horas difiacuteceis
Ao meu orientador Prof Aron pelos ensinamentos e pelo incentivo de sempre continuar buscando aprimoramento
Ao co-orientador Prof Miguel pela acolhida em Ribeiratildeo Preto e a oportunidade de
realizar a coleta de dados em um centro de excelecircncia em pesquisa
Aos teacutecnicos que me auxiliaram na coleta Maria Adriana Dani Chico
Agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de Microscopia Eletrocircnica do
Departamento de Biologia Celular e Molecular e Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo pela
colaboraccedilatildeo nesta pesquisa
Agrave Universidade Federal de Santa Maria
Agraves minhas colegas de poacutes-graduaccedilatildeo Carolina Veloso Letiacutecia Kunst Samantha Marques Maiara Gonccedilalves Enma Ortiz e Dayane Didonet pelo apoio e acolhida na
aacuterea da audiccedilatildeo e equiliacutebrio
Aos alunos que por mim passaram nas disciplinas de docecircncia
Aos professores do Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana pela acolhida
7
ldquoA gente sempre deve sair agrave rua como quem foge de casa Como se estivessem abertos diante de noacutes todos os caminhos do mundo
Natildeo importa que os compromissos as obrigaccedilotildees estejam ali Chegamos de longe de alma aberta e coraccedilatildeo cantandordquo
8
Maacuterio Quintana RESUMO
Dissertaccedilatildeo de Mestrado
Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana Universidade Federal de Santa Maria RS Brasil
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA
VESTIBULAR DE COBAIAS
AUTORA LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO ORIENTADOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA
CO-ORIENTADOR MIGUEL AcircNGELO HYPPOLITO
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado muitos danos ao ser humano e
ao meio ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos
do tipo agrotoacutexicos frequentemente considerados como responsaacuteveis por
intoxicaccedilotildees a trabalhadores tornando isto um problema de sauacutede puacuteblica O
objetivo geral deste estudo consistiu em verificar se o organofosforado clorpirifoacutes
teve influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda Tratou-se de
uma pesquisa experimental A pesquisa utilizou 18 cobaias albinas da espeacutecie Cavia
porcellus divididas em trecircs grupos sendo o grupo I o controle dos demais utilizando
aacutegua destilada e contendo cinco animais No grupo II com seis animais foi
administrada a dose de 05mgkgdia de agrotoacutexico clorpirifoacutes e no grupo III com
sete animais a dose de 1mgkgdia do mesmo agrotoacutexico Os trecircs grupos estiveram
sob experimento durante 10 dias Para anaacutelise dos resultados foi realizada a anaacutelise
funcional do sistema vestibular atraveacutes da eletronistagmografia (prova caloacuterica ndash
com aacutegua gelada) e a anaacutelise histopatoloacutegica atraveacutes da microscopia eletrocircnica de
varredura Os resultados natildeo demonstraram diferenccedila estatiacutestica significante para as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmo e velocidade angular da
componente lenta na eletronistagmografia e no nuacutemero de tufos ciliares na anaacutelise
histopatoloacutegica por microscopia eletrocircnica de varredura Concluiu-se que o
organofosforado clorpirifoacutes natildeo ocasionou dano ao sistema vestibular das cobaias
nas doses testadas em exposiccedilatildeo aguda
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
9
ABSTRACT
MasterrsquosThesis Post Graduation Program in Human Communication Disturbance
Universidade Federal de Santa Maria RS Brazil
THE INFLUENCE OF ORGANOPHOSPHATE CHLORPYRIFOS VESTIBULAR SYSTEM OF GUINEA PIGS
AUTHOR LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO
ADVISOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA CO-ADVISOR MIGUEL ANGELO HYPPOLITO
Some chemicals have caused much damage to humans and the environment
Among these substances are chemical compounds like pesticides often considered
responsible for poisoning the workers making it a public health problem The aim of
this study was to verify whether the organophosphate chlorpyrifos was influential in
the vestibular system of guinea pigs in acute exposure This was an experimental
research The research used 18 albino guinea pigs of the species Cavia porcellus
divided into three groups with group I control the other using distilled water and
containing five animals In Group II six animals were administered 05 mg kg day
of pesticide chlorpyrifos and group III with seven animals at a dose of 1mgkgday of
the same pesticide The three groups were under experiment for 10 days For
analysis of the results was performed functional analysis of the vestibular system by
electronystagmography (caloric test - with ice water) and histopathological analysis
by scanning electron microscopy The results showed no statistically significant
difference for the variable frequency of appearance of nystagmus and angular
velocity of the slow component in electronystagmography and the number of ciliary
tufts histologically by scanning electron microscopy It was concluded that the
organophosphate chlorpyrifos did not cause damage to the vestibular system of the
guinea pigs at the doses tested in acute exposure
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
10
LISTA DE FIGURAS
ARTIGO 1
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia 37
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos de cobaia do grupo controle 37
11
LISTA DE TABELAS
ARTIGO 1
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de
nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II III
39
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente
lenta (degs) de nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II
III
39
ARTIGO 2
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e
utriacuteculo entre os Grupos I II III
51
12
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
Ache Acetilcolinesterase
ANVISA Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria
CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento do Ensino Superior
CETEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
COBEA Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal
CONCEA Conselho Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal
EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias
ENG Eletronistagmografia
et al E colaboradores
FMRP Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto
Ltda Limitada
MAPA Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento
MEV Microscopia Eletrocircnica de Varredura
OD Orelha Direita
OE Orelha Esquerda
OF Organofosforado
PVC Policloreto de Vinila
RVE Reflexo vestiacutebulo-espinhal
RVO Reflexo vestiacutebulo-ocular
SA Sociedade Anocircnima
SBCAL Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de Laboratoacuterio
SINITOX Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-farmacoloacutegicas
SNC Sistema Nervoso Central
UFSM Universidade Federal de Santa Maria
USP Universidade de Satildeo Paulo
VACL Velocidade Angular da Componente Lenta
VENG Vectoeletronistagmografia
13
LISTA DE SIacuteMBOLOS ordmC Graus Celsius
cm Centiacutemetro
CO2 Dioacutexido de Carbono
DL 50 Dose Letal 50
Fn Frequecircncia de nistagmos
g Grama
Kg Kilograma
M Molar
mg Miligrama
ml Mililitros
reg Marca Registrada
Por cento
pH Potencial de Hidrogecircnio
us Unidade por segundo
ordms Graus por segundo
ordm Grau
+ Positivo
- Negativo
14
LISTA DE ANEXOS
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo
Animal
66
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
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Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
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globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
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utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
40
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
45
LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
46
SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
47
4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
48
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
49
Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
50
Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
51
Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
53
submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
55
equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
56
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
57
durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
58
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
63
Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
6
AGRADECIMENTOS
A Deus
Aos meus pais Clauacutedio e Mara pela oportunidade de continuar me aperfeiccediloando apoio amor e dedicaccedilatildeo de sempre
Ao meu irmatildeo Joatildeo Vitor pela paciecircncia
Ao meu namorado Guilherme e sua famiacutelia pelo apoio e por estar sempre ao meu
lado nas horas difiacuteceis
Ao meu orientador Prof Aron pelos ensinamentos e pelo incentivo de sempre continuar buscando aprimoramento
Ao co-orientador Prof Miguel pela acolhida em Ribeiratildeo Preto e a oportunidade de
realizar a coleta de dados em um centro de excelecircncia em pesquisa
Aos teacutecnicos que me auxiliaram na coleta Maria Adriana Dani Chico
Agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de Microscopia Eletrocircnica do
Departamento de Biologia Celular e Molecular e Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo pela
colaboraccedilatildeo nesta pesquisa
Agrave Universidade Federal de Santa Maria
Agraves minhas colegas de poacutes-graduaccedilatildeo Carolina Veloso Letiacutecia Kunst Samantha Marques Maiara Gonccedilalves Enma Ortiz e Dayane Didonet pelo apoio e acolhida na
aacuterea da audiccedilatildeo e equiliacutebrio
Aos alunos que por mim passaram nas disciplinas de docecircncia
Aos professores do Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana pela acolhida
7
ldquoA gente sempre deve sair agrave rua como quem foge de casa Como se estivessem abertos diante de noacutes todos os caminhos do mundo
Natildeo importa que os compromissos as obrigaccedilotildees estejam ali Chegamos de longe de alma aberta e coraccedilatildeo cantandordquo
8
Maacuterio Quintana RESUMO
Dissertaccedilatildeo de Mestrado
Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana Universidade Federal de Santa Maria RS Brasil
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA
VESTIBULAR DE COBAIAS
AUTORA LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO ORIENTADOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA
CO-ORIENTADOR MIGUEL AcircNGELO HYPPOLITO
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado muitos danos ao ser humano e
ao meio ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos
do tipo agrotoacutexicos frequentemente considerados como responsaacuteveis por
intoxicaccedilotildees a trabalhadores tornando isto um problema de sauacutede puacuteblica O
objetivo geral deste estudo consistiu em verificar se o organofosforado clorpirifoacutes
teve influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda Tratou-se de
uma pesquisa experimental A pesquisa utilizou 18 cobaias albinas da espeacutecie Cavia
porcellus divididas em trecircs grupos sendo o grupo I o controle dos demais utilizando
aacutegua destilada e contendo cinco animais No grupo II com seis animais foi
administrada a dose de 05mgkgdia de agrotoacutexico clorpirifoacutes e no grupo III com
sete animais a dose de 1mgkgdia do mesmo agrotoacutexico Os trecircs grupos estiveram
sob experimento durante 10 dias Para anaacutelise dos resultados foi realizada a anaacutelise
funcional do sistema vestibular atraveacutes da eletronistagmografia (prova caloacuterica ndash
com aacutegua gelada) e a anaacutelise histopatoloacutegica atraveacutes da microscopia eletrocircnica de
varredura Os resultados natildeo demonstraram diferenccedila estatiacutestica significante para as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmo e velocidade angular da
componente lenta na eletronistagmografia e no nuacutemero de tufos ciliares na anaacutelise
histopatoloacutegica por microscopia eletrocircnica de varredura Concluiu-se que o
organofosforado clorpirifoacutes natildeo ocasionou dano ao sistema vestibular das cobaias
nas doses testadas em exposiccedilatildeo aguda
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
9
ABSTRACT
MasterrsquosThesis Post Graduation Program in Human Communication Disturbance
Universidade Federal de Santa Maria RS Brazil
THE INFLUENCE OF ORGANOPHOSPHATE CHLORPYRIFOS VESTIBULAR SYSTEM OF GUINEA PIGS
AUTHOR LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO
ADVISOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA CO-ADVISOR MIGUEL ANGELO HYPPOLITO
Some chemicals have caused much damage to humans and the environment
Among these substances are chemical compounds like pesticides often considered
responsible for poisoning the workers making it a public health problem The aim of
this study was to verify whether the organophosphate chlorpyrifos was influential in
the vestibular system of guinea pigs in acute exposure This was an experimental
research The research used 18 albino guinea pigs of the species Cavia porcellus
divided into three groups with group I control the other using distilled water and
containing five animals In Group II six animals were administered 05 mg kg day
of pesticide chlorpyrifos and group III with seven animals at a dose of 1mgkgday of
the same pesticide The three groups were under experiment for 10 days For
analysis of the results was performed functional analysis of the vestibular system by
electronystagmography (caloric test - with ice water) and histopathological analysis
by scanning electron microscopy The results showed no statistically significant
difference for the variable frequency of appearance of nystagmus and angular
velocity of the slow component in electronystagmography and the number of ciliary
tufts histologically by scanning electron microscopy It was concluded that the
organophosphate chlorpyrifos did not cause damage to the vestibular system of the
guinea pigs at the doses tested in acute exposure
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
10
LISTA DE FIGURAS
ARTIGO 1
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia 37
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos de cobaia do grupo controle 37
11
LISTA DE TABELAS
ARTIGO 1
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de
nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II III
39
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente
lenta (degs) de nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II
III
39
ARTIGO 2
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e
utriacuteculo entre os Grupos I II III
51
12
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
Ache Acetilcolinesterase
ANVISA Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria
CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento do Ensino Superior
CETEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
COBEA Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal
CONCEA Conselho Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal
EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias
ENG Eletronistagmografia
et al E colaboradores
FMRP Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto
Ltda Limitada
MAPA Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento
MEV Microscopia Eletrocircnica de Varredura
OD Orelha Direita
OE Orelha Esquerda
OF Organofosforado
PVC Policloreto de Vinila
RVE Reflexo vestiacutebulo-espinhal
RVO Reflexo vestiacutebulo-ocular
SA Sociedade Anocircnima
SBCAL Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de Laboratoacuterio
SINITOX Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-farmacoloacutegicas
SNC Sistema Nervoso Central
UFSM Universidade Federal de Santa Maria
USP Universidade de Satildeo Paulo
VACL Velocidade Angular da Componente Lenta
VENG Vectoeletronistagmografia
13
LISTA DE SIacuteMBOLOS ordmC Graus Celsius
cm Centiacutemetro
CO2 Dioacutexido de Carbono
DL 50 Dose Letal 50
Fn Frequecircncia de nistagmos
g Grama
Kg Kilograma
M Molar
mg Miligrama
ml Mililitros
reg Marca Registrada
Por cento
pH Potencial de Hidrogecircnio
us Unidade por segundo
ordms Graus por segundo
ordm Grau
+ Positivo
- Negativo
14
LISTA DE ANEXOS
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo
Animal
66
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
32
Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
33
globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
35
utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
40
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
45
LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
46
SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
47
4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
48
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
49
Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
50
Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
51
Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
53
submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
55
equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
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Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
57
durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
58
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
63
Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
7
ldquoA gente sempre deve sair agrave rua como quem foge de casa Como se estivessem abertos diante de noacutes todos os caminhos do mundo
Natildeo importa que os compromissos as obrigaccedilotildees estejam ali Chegamos de longe de alma aberta e coraccedilatildeo cantandordquo
8
Maacuterio Quintana RESUMO
Dissertaccedilatildeo de Mestrado
Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana Universidade Federal de Santa Maria RS Brasil
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA
VESTIBULAR DE COBAIAS
AUTORA LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO ORIENTADOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA
CO-ORIENTADOR MIGUEL AcircNGELO HYPPOLITO
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado muitos danos ao ser humano e
ao meio ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos
do tipo agrotoacutexicos frequentemente considerados como responsaacuteveis por
intoxicaccedilotildees a trabalhadores tornando isto um problema de sauacutede puacuteblica O
objetivo geral deste estudo consistiu em verificar se o organofosforado clorpirifoacutes
teve influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda Tratou-se de
uma pesquisa experimental A pesquisa utilizou 18 cobaias albinas da espeacutecie Cavia
porcellus divididas em trecircs grupos sendo o grupo I o controle dos demais utilizando
aacutegua destilada e contendo cinco animais No grupo II com seis animais foi
administrada a dose de 05mgkgdia de agrotoacutexico clorpirifoacutes e no grupo III com
sete animais a dose de 1mgkgdia do mesmo agrotoacutexico Os trecircs grupos estiveram
sob experimento durante 10 dias Para anaacutelise dos resultados foi realizada a anaacutelise
funcional do sistema vestibular atraveacutes da eletronistagmografia (prova caloacuterica ndash
com aacutegua gelada) e a anaacutelise histopatoloacutegica atraveacutes da microscopia eletrocircnica de
varredura Os resultados natildeo demonstraram diferenccedila estatiacutestica significante para as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmo e velocidade angular da
componente lenta na eletronistagmografia e no nuacutemero de tufos ciliares na anaacutelise
histopatoloacutegica por microscopia eletrocircnica de varredura Concluiu-se que o
organofosforado clorpirifoacutes natildeo ocasionou dano ao sistema vestibular das cobaias
nas doses testadas em exposiccedilatildeo aguda
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
9
ABSTRACT
MasterrsquosThesis Post Graduation Program in Human Communication Disturbance
Universidade Federal de Santa Maria RS Brazil
THE INFLUENCE OF ORGANOPHOSPHATE CHLORPYRIFOS VESTIBULAR SYSTEM OF GUINEA PIGS
AUTHOR LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO
ADVISOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA CO-ADVISOR MIGUEL ANGELO HYPPOLITO
Some chemicals have caused much damage to humans and the environment
Among these substances are chemical compounds like pesticides often considered
responsible for poisoning the workers making it a public health problem The aim of
this study was to verify whether the organophosphate chlorpyrifos was influential in
the vestibular system of guinea pigs in acute exposure This was an experimental
research The research used 18 albino guinea pigs of the species Cavia porcellus
divided into three groups with group I control the other using distilled water and
containing five animals In Group II six animals were administered 05 mg kg day
of pesticide chlorpyrifos and group III with seven animals at a dose of 1mgkgday of
the same pesticide The three groups were under experiment for 10 days For
analysis of the results was performed functional analysis of the vestibular system by
electronystagmography (caloric test - with ice water) and histopathological analysis
by scanning electron microscopy The results showed no statistically significant
difference for the variable frequency of appearance of nystagmus and angular
velocity of the slow component in electronystagmography and the number of ciliary
tufts histologically by scanning electron microscopy It was concluded that the
organophosphate chlorpyrifos did not cause damage to the vestibular system of the
guinea pigs at the doses tested in acute exposure
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
10
LISTA DE FIGURAS
ARTIGO 1
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia 37
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos de cobaia do grupo controle 37
11
LISTA DE TABELAS
ARTIGO 1
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de
nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II III
39
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente
lenta (degs) de nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II
III
39
ARTIGO 2
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e
utriacuteculo entre os Grupos I II III
51
12
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
Ache Acetilcolinesterase
ANVISA Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria
CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento do Ensino Superior
CETEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
COBEA Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal
CONCEA Conselho Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal
EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias
ENG Eletronistagmografia
et al E colaboradores
FMRP Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto
Ltda Limitada
MAPA Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento
MEV Microscopia Eletrocircnica de Varredura
OD Orelha Direita
OE Orelha Esquerda
OF Organofosforado
PVC Policloreto de Vinila
RVE Reflexo vestiacutebulo-espinhal
RVO Reflexo vestiacutebulo-ocular
SA Sociedade Anocircnima
SBCAL Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de Laboratoacuterio
SINITOX Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-farmacoloacutegicas
SNC Sistema Nervoso Central
UFSM Universidade Federal de Santa Maria
USP Universidade de Satildeo Paulo
VACL Velocidade Angular da Componente Lenta
VENG Vectoeletronistagmografia
13
LISTA DE SIacuteMBOLOS ordmC Graus Celsius
cm Centiacutemetro
CO2 Dioacutexido de Carbono
DL 50 Dose Letal 50
Fn Frequecircncia de nistagmos
g Grama
Kg Kilograma
M Molar
mg Miligrama
ml Mililitros
reg Marca Registrada
Por cento
pH Potencial de Hidrogecircnio
us Unidade por segundo
ordms Graus por segundo
ordm Grau
+ Positivo
- Negativo
14
LISTA DE ANEXOS
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo
Animal
66
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
32
Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
33
globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
35
utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
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Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
45
LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
46
SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
47
4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
48
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
49
Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
50
Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
51
Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
53
submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
55
equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
56
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
57
durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
58
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
63
Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
8
Maacuterio Quintana RESUMO
Dissertaccedilatildeo de Mestrado
Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana Universidade Federal de Santa Maria RS Brasil
A INFLUEcircNCIA DO ORGANOFOSFORADO CLORPIRIFOacuteS NO SISTEMA
VESTIBULAR DE COBAIAS
AUTORA LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO ORIENTADOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA
CO-ORIENTADOR MIGUEL AcircNGELO HYPPOLITO
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado muitos danos ao ser humano e
ao meio ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos
do tipo agrotoacutexicos frequentemente considerados como responsaacuteveis por
intoxicaccedilotildees a trabalhadores tornando isto um problema de sauacutede puacuteblica O
objetivo geral deste estudo consistiu em verificar se o organofosforado clorpirifoacutes
teve influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda Tratou-se de
uma pesquisa experimental A pesquisa utilizou 18 cobaias albinas da espeacutecie Cavia
porcellus divididas em trecircs grupos sendo o grupo I o controle dos demais utilizando
aacutegua destilada e contendo cinco animais No grupo II com seis animais foi
administrada a dose de 05mgkgdia de agrotoacutexico clorpirifoacutes e no grupo III com
sete animais a dose de 1mgkgdia do mesmo agrotoacutexico Os trecircs grupos estiveram
sob experimento durante 10 dias Para anaacutelise dos resultados foi realizada a anaacutelise
funcional do sistema vestibular atraveacutes da eletronistagmografia (prova caloacuterica ndash
com aacutegua gelada) e a anaacutelise histopatoloacutegica atraveacutes da microscopia eletrocircnica de
varredura Os resultados natildeo demonstraram diferenccedila estatiacutestica significante para as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmo e velocidade angular da
componente lenta na eletronistagmografia e no nuacutemero de tufos ciliares na anaacutelise
histopatoloacutegica por microscopia eletrocircnica de varredura Concluiu-se que o
organofosforado clorpirifoacutes natildeo ocasionou dano ao sistema vestibular das cobaias
nas doses testadas em exposiccedilatildeo aguda
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
9
ABSTRACT
MasterrsquosThesis Post Graduation Program in Human Communication Disturbance
Universidade Federal de Santa Maria RS Brazil
THE INFLUENCE OF ORGANOPHOSPHATE CHLORPYRIFOS VESTIBULAR SYSTEM OF GUINEA PIGS
AUTHOR LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO
ADVISOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA CO-ADVISOR MIGUEL ANGELO HYPPOLITO
Some chemicals have caused much damage to humans and the environment
Among these substances are chemical compounds like pesticides often considered
responsible for poisoning the workers making it a public health problem The aim of
this study was to verify whether the organophosphate chlorpyrifos was influential in
the vestibular system of guinea pigs in acute exposure This was an experimental
research The research used 18 albino guinea pigs of the species Cavia porcellus
divided into three groups with group I control the other using distilled water and
containing five animals In Group II six animals were administered 05 mg kg day
of pesticide chlorpyrifos and group III with seven animals at a dose of 1mgkgday of
the same pesticide The three groups were under experiment for 10 days For
analysis of the results was performed functional analysis of the vestibular system by
electronystagmography (caloric test - with ice water) and histopathological analysis
by scanning electron microscopy The results showed no statistically significant
difference for the variable frequency of appearance of nystagmus and angular
velocity of the slow component in electronystagmography and the number of ciliary
tufts histologically by scanning electron microscopy It was concluded that the
organophosphate chlorpyrifos did not cause damage to the vestibular system of the
guinea pigs at the doses tested in acute exposure
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
10
LISTA DE FIGURAS
ARTIGO 1
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia 37
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos de cobaia do grupo controle 37
11
LISTA DE TABELAS
ARTIGO 1
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de
nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II III
39
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente
lenta (degs) de nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II
III
39
ARTIGO 2
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e
utriacuteculo entre os Grupos I II III
51
12
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
Ache Acetilcolinesterase
ANVISA Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria
CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento do Ensino Superior
CETEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
COBEA Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal
CONCEA Conselho Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal
EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias
ENG Eletronistagmografia
et al E colaboradores
FMRP Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto
Ltda Limitada
MAPA Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento
MEV Microscopia Eletrocircnica de Varredura
OD Orelha Direita
OE Orelha Esquerda
OF Organofosforado
PVC Policloreto de Vinila
RVE Reflexo vestiacutebulo-espinhal
RVO Reflexo vestiacutebulo-ocular
SA Sociedade Anocircnima
SBCAL Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de Laboratoacuterio
SINITOX Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-farmacoloacutegicas
SNC Sistema Nervoso Central
UFSM Universidade Federal de Santa Maria
USP Universidade de Satildeo Paulo
VACL Velocidade Angular da Componente Lenta
VENG Vectoeletronistagmografia
13
LISTA DE SIacuteMBOLOS ordmC Graus Celsius
cm Centiacutemetro
CO2 Dioacutexido de Carbono
DL 50 Dose Letal 50
Fn Frequecircncia de nistagmos
g Grama
Kg Kilograma
M Molar
mg Miligrama
ml Mililitros
reg Marca Registrada
Por cento
pH Potencial de Hidrogecircnio
us Unidade por segundo
ordms Graus por segundo
ordm Grau
+ Positivo
- Negativo
14
LISTA DE ANEXOS
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo
Animal
66
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
32
Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
33
globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
35
utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
40
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
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LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
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SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
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4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
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Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
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Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
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Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
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Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
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submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
55
equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
56
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
57
durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
58
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
63
Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
9
ABSTRACT
MasterrsquosThesis Post Graduation Program in Human Communication Disturbance
Universidade Federal de Santa Maria RS Brazil
THE INFLUENCE OF ORGANOPHOSPHATE CHLORPYRIFOS VESTIBULAR SYSTEM OF GUINEA PIGS
AUTHOR LIacuteCIA ASSUNCcedilAtildeO COGO
ADVISOR ARON FERREIRA DA SILVEIRA CO-ADVISOR MIGUEL ANGELO HYPPOLITO
Some chemicals have caused much damage to humans and the environment
Among these substances are chemical compounds like pesticides often considered
responsible for poisoning the workers making it a public health problem The aim of
this study was to verify whether the organophosphate chlorpyrifos was influential in
the vestibular system of guinea pigs in acute exposure This was an experimental
research The research used 18 albino guinea pigs of the species Cavia porcellus
divided into three groups with group I control the other using distilled water and
containing five animals In Group II six animals were administered 05 mg kg day
of pesticide chlorpyrifos and group III with seven animals at a dose of 1mgkgday of
the same pesticide The three groups were under experiment for 10 days For
analysis of the results was performed functional analysis of the vestibular system by
electronystagmography (caloric test - with ice water) and histopathological analysis
by scanning electron microscopy The results showed no statistically significant
difference for the variable frequency of appearance of nystagmus and angular
velocity of the slow component in electronystagmography and the number of ciliary
tufts histologically by scanning electron microscopy It was concluded that the
organophosphate chlorpyrifos did not cause damage to the vestibular system of the
guinea pigs at the doses tested in acute exposure
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
10
LISTA DE FIGURAS
ARTIGO 1
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia 37
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos de cobaia do grupo controle 37
11
LISTA DE TABELAS
ARTIGO 1
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de
nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II III
39
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente
lenta (degs) de nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II
III
39
ARTIGO 2
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e
utriacuteculo entre os Grupos I II III
51
12
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
Ache Acetilcolinesterase
ANVISA Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria
CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento do Ensino Superior
CETEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
COBEA Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal
CONCEA Conselho Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal
EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias
ENG Eletronistagmografia
et al E colaboradores
FMRP Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto
Ltda Limitada
MAPA Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento
MEV Microscopia Eletrocircnica de Varredura
OD Orelha Direita
OE Orelha Esquerda
OF Organofosforado
PVC Policloreto de Vinila
RVE Reflexo vestiacutebulo-espinhal
RVO Reflexo vestiacutebulo-ocular
SA Sociedade Anocircnima
SBCAL Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de Laboratoacuterio
SINITOX Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-farmacoloacutegicas
SNC Sistema Nervoso Central
UFSM Universidade Federal de Santa Maria
USP Universidade de Satildeo Paulo
VACL Velocidade Angular da Componente Lenta
VENG Vectoeletronistagmografia
13
LISTA DE SIacuteMBOLOS ordmC Graus Celsius
cm Centiacutemetro
CO2 Dioacutexido de Carbono
DL 50 Dose Letal 50
Fn Frequecircncia de nistagmos
g Grama
Kg Kilograma
M Molar
mg Miligrama
ml Mililitros
reg Marca Registrada
Por cento
pH Potencial de Hidrogecircnio
us Unidade por segundo
ordms Graus por segundo
ordm Grau
+ Positivo
- Negativo
14
LISTA DE ANEXOS
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo
Animal
66
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
32
Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
33
globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
35
utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
40
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
45
LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
46
SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
47
4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
48
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
49
Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
50
Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
51
Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
53
submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
55
equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
56
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
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durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
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Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
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Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
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seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
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Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
10
LISTA DE FIGURAS
ARTIGO 1
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia 37
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos de cobaia do grupo controle 37
11
LISTA DE TABELAS
ARTIGO 1
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de
nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II III
39
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente
lenta (degs) de nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II
III
39
ARTIGO 2
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e
utriacuteculo entre os Grupos I II III
51
12
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
Ache Acetilcolinesterase
ANVISA Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria
CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento do Ensino Superior
CETEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
COBEA Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal
CONCEA Conselho Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal
EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias
ENG Eletronistagmografia
et al E colaboradores
FMRP Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto
Ltda Limitada
MAPA Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento
MEV Microscopia Eletrocircnica de Varredura
OD Orelha Direita
OE Orelha Esquerda
OF Organofosforado
PVC Policloreto de Vinila
RVE Reflexo vestiacutebulo-espinhal
RVO Reflexo vestiacutebulo-ocular
SA Sociedade Anocircnima
SBCAL Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de Laboratoacuterio
SINITOX Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-farmacoloacutegicas
SNC Sistema Nervoso Central
UFSM Universidade Federal de Santa Maria
USP Universidade de Satildeo Paulo
VACL Velocidade Angular da Componente Lenta
VENG Vectoeletronistagmografia
13
LISTA DE SIacuteMBOLOS ordmC Graus Celsius
cm Centiacutemetro
CO2 Dioacutexido de Carbono
DL 50 Dose Letal 50
Fn Frequecircncia de nistagmos
g Grama
Kg Kilograma
M Molar
mg Miligrama
ml Mililitros
reg Marca Registrada
Por cento
pH Potencial de Hidrogecircnio
us Unidade por segundo
ordms Graus por segundo
ordm Grau
+ Positivo
- Negativo
14
LISTA DE ANEXOS
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo
Animal
66
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
32
Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
33
globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
35
utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
40
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
45
LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
46
SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
47
4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
48
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
49
Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
50
Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
51
Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
53
submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
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equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
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Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
57
durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
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Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
63
Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
11
LISTA DE TABELAS
ARTIGO 1
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de
nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II III
39
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente
lenta (degs) de nistagmos (us) entre o preacute e poacutes- experimento nos Grupos I II
III
39
ARTIGO 2
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e
utriacuteculo entre os Grupos I II III
51
12
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
Ache Acetilcolinesterase
ANVISA Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria
CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento do Ensino Superior
CETEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
COBEA Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal
CONCEA Conselho Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal
EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias
ENG Eletronistagmografia
et al E colaboradores
FMRP Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto
Ltda Limitada
MAPA Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento
MEV Microscopia Eletrocircnica de Varredura
OD Orelha Direita
OE Orelha Esquerda
OF Organofosforado
PVC Policloreto de Vinila
RVE Reflexo vestiacutebulo-espinhal
RVO Reflexo vestiacutebulo-ocular
SA Sociedade Anocircnima
SBCAL Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de Laboratoacuterio
SINITOX Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-farmacoloacutegicas
SNC Sistema Nervoso Central
UFSM Universidade Federal de Santa Maria
USP Universidade de Satildeo Paulo
VACL Velocidade Angular da Componente Lenta
VENG Vectoeletronistagmografia
13
LISTA DE SIacuteMBOLOS ordmC Graus Celsius
cm Centiacutemetro
CO2 Dioacutexido de Carbono
DL 50 Dose Letal 50
Fn Frequecircncia de nistagmos
g Grama
Kg Kilograma
M Molar
mg Miligrama
ml Mililitros
reg Marca Registrada
Por cento
pH Potencial de Hidrogecircnio
us Unidade por segundo
ordms Graus por segundo
ordm Grau
+ Positivo
- Negativo
14
LISTA DE ANEXOS
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo
Animal
66
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
32
Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
33
globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
35
utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
40
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
45
LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
46
SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
47
4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
48
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
49
Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
50
Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
51
Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
53
submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
55
equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
56
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
57
durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
58
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
63
Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
12
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
Ache Acetilcolinesterase
ANVISA Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria
CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento do Ensino Superior
CETEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
COBEA Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal
CONCEA Conselho Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal
EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias
ENG Eletronistagmografia
et al E colaboradores
FMRP Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto
Ltda Limitada
MAPA Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento
MEV Microscopia Eletrocircnica de Varredura
OD Orelha Direita
OE Orelha Esquerda
OF Organofosforado
PVC Policloreto de Vinila
RVE Reflexo vestiacutebulo-espinhal
RVO Reflexo vestiacutebulo-ocular
SA Sociedade Anocircnima
SBCAL Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de Laboratoacuterio
SINITOX Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-farmacoloacutegicas
SNC Sistema Nervoso Central
UFSM Universidade Federal de Santa Maria
USP Universidade de Satildeo Paulo
VACL Velocidade Angular da Componente Lenta
VENG Vectoeletronistagmografia
13
LISTA DE SIacuteMBOLOS ordmC Graus Celsius
cm Centiacutemetro
CO2 Dioacutexido de Carbono
DL 50 Dose Letal 50
Fn Frequecircncia de nistagmos
g Grama
Kg Kilograma
M Molar
mg Miligrama
ml Mililitros
reg Marca Registrada
Por cento
pH Potencial de Hidrogecircnio
us Unidade por segundo
ordms Graus por segundo
ordm Grau
+ Positivo
- Negativo
14
LISTA DE ANEXOS
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo
Animal
66
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
32
Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
33
globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
35
utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
40
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
45
LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
46
SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
47
4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
48
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
49
Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
50
Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
51
Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
53
submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
55
equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
56
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
57
durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
58
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
63
Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
13
LISTA DE SIacuteMBOLOS ordmC Graus Celsius
cm Centiacutemetro
CO2 Dioacutexido de Carbono
DL 50 Dose Letal 50
Fn Frequecircncia de nistagmos
g Grama
Kg Kilograma
M Molar
mg Miligrama
ml Mililitros
reg Marca Registrada
Por cento
pH Potencial de Hidrogecircnio
us Unidade por segundo
ordms Graus por segundo
ordm Grau
+ Positivo
- Negativo
14
LISTA DE ANEXOS
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo
Animal
66
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
32
Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
33
globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
35
utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
40
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
45
LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
46
SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
47
4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
48
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
49
Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
50
Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
51
Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
53
submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
55
equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
56
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
57
durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
58
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
63
Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
14
LISTA DE ANEXOS
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo
Animal
66
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
32
Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
33
globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
35
utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
40
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
45
LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
46
SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
47
4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
48
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
49
Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
50
Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
51
Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
53
submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
55
equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
56
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
57
durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
58
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
63
Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
15
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 19
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio 19
22 Agrotoacutexicos organofosforados 22
23 Eletronistagmografia 24
3 ARTIGO 1 ndash AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO
DA PROVA CALOacuteRICA
27
Resumo 29
Abstract 30
Introduccedilatildeo 31
Materiais e meacutetodos 33
Resultados 37
Discussatildeo 39
Conclusatildeo 41
Referecircncias bibliograacuteficas 42
4 ARTIGO 2 ndash ANAgraveLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR
DE COBAIAS INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
46
Resumo 48
Abstract 49
Introduccedilatildeo 50
Materiais e meacutetodos 51
Resultados 54
Discussatildeo 55
Conclusatildeo 57
Referecircncias bibliograacuteficas 57
5 DISCUSSAtildeO GERAL 60
6 CONCLUSAtildeO 63
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 64
ANEXOS 70
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
32
Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
33
globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
35
utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
40
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
45
LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
46
SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
47
4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
48
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
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Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
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Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
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Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
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Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
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na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
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submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
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A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
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equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
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Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
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durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
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Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
63
Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
64
6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
65
REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
71
ANEXOS
72
Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
16
Anexo A ndash Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em
Experimentaccedilatildeo Animal
71
17
1 INTRODUCcedilAtildeO
Existem substacircncias quiacutemicas que causam danos aos seres humanos e ao
meio ambiente A degradaccedilatildeo do meio ambiente e o impacto na sauacutede humana tecircm
se dado devido ao contato excessivo de forma aguda ou gradativa com tais
substacircncias (HOSHINO et al 2008)
Dentre estas substacircncias encontram-se os compostos quiacutemicos do tipo
agrotoacutexicos Alguns por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente
considerados como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees agrave trabalhadores que entram em
contato com estes compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento
(TEIXEIRAAUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO et al 2008)
De acordo com Silva et al (2005) os agrotoacutexicos representam um dos mais
importantes fatores de risco para a sauacutede humana Estes produtos satildeo utilizados em
grande escala por vaacuterios setores produtivos e mais intensamente pelo setor
agropecuaacuterio
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre estes as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (Sistema Nacional
de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas ndash SINITOX 2009)
O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte dos usuaacuterios desses
produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo
satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo dessa situaccedilatildeo como um
desafio de sauacutede puacuteblica
No ano de 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas superando os 700 milhotildees de toneladas ultrapassando os Estados
Unidos (646 milhotildees de toneladas) Nesse ano as vendas com agrotoacutexicos no Brasil
significaram 7125 bilhotildees de doacutelares Deste montante os inseticidas representaram
29 do consumo (GUAZZELLI 2009)
No grupo dos inseticidas encontramos os agrotoacutexicos organofosforados (OF)
amplamente utilizados Os OF satildeo compostos anticolinesteraacutesicos que causam
variado grau de toxicidade para o ser humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico
para o sucesso do plantio o trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos
na sauacutede para quem entra em contato com o produto (KOumlRBES 2009)
18
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que natildeo satildeo
detectadas pelos marcadores bioloacutegicos e que silenciosamente alteram a vida do
trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo em grandes doses por um curto periacuteodo
causa os chamados efeitos agudos Este quadro agudo varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte (SILVA et al 2005
HOSHINO et al 2008)
Em estudo realizado por Hoshino et al(2008) a tontura foi o sintoma de maior
destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos
Os pesquisadores sugerem que a mesma deve ser avaliada e detectada durante a
anamnese especiacutefica do trabalhador rural bem como devidamente investigada pelas
equipes de sauacutede e responsaacuteveis pelo atendimento meacutedico nas localidades
O sistema vestibular eacute responsaacutevel por informar sobre a posiccedilatildeo e o
movimento da cabeccedila provendo-nos do sentido de equiliacutebrio auxiliando na
coordenaccedilatildeo dos movimentos da cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura
corporal Quando sua funccedilatildeo eacute perturbada surgem sensaccedilotildees desagradaacuteveis como
vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos
incontrolaacuteveis dos olhos (BEAR CONNORS e PARADISO 2002 AFIFI e
BERGMAN 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
Um aspecto relevante no trabalho rural brasileiro eacute a participaccedilatildeo de crianccedilas
e adolescentes nas atividades de trabalho agropecuaacuterio principalmente na faixa
etaacuteria abaixo de 14 anos Essa faixa da populaccedilatildeo eacute especialmente afetada tanto
pelos aspectos teacutecnicos dos processos de trabalho (exposiccedilatildeo aos agrotoacutexicos agraves
radiaccedilotildees solares ao ruiacutedo agrave vibraccedilatildeo etc) como tambeacutem aqueles ligados agrave
organizaccedilatildeo do trabalho (jornada ritmo conteuacutedo das tarefas etc) Aleacutem disso eacute
preciso considerar o comprometimento do processo de socializaccedilatildeo infantil e da
escolarizaccedilatildeo (SILVA et al 2005)
19
No que diz respeito agraves crianccedilas uma variaacutevel importante a ser considerada
satildeo os distuacuterbios de aprendizagem que podem estar relacionados aos distuacuterbios do
sistema aacuteudio-vestibular Zeiglboim e colaboradores (2006) avaliaram crianccedilas com
distuacuterbios de aprendizagem e distuacuterbios vestibulares e sugeriam existir relaccedilatildeo
entre estas duas condiccedilotildees Este fato reforccedila a relevacircncia de pesquisas com
substacircncias que causam sintomas aacuteudio-vestibulares jaacute que no Brasil o trabalho
infantil ainda estaacute fortemente relacionado agrave agricultura familiar
Koumlrbes et al (2010) afirma ser necessaacuterio outras pesquisas para que se
possa melhor entender a associaccedilatildeo entre a exposiccedilatildeo a agrotoacutexicos e a ocorrecircncia
de alteraccedilotildees em vias auditivas e vestibulares Moraes (1999) ressalta a importacircncia
das pesquisas para que se possam sensibilizar as autoridades de sauacutede com
relaccedilatildeo aos riscos causados por estes produtos Silva et al (2005) tambeacutem fomenta
a importacircncia de pesquisar os efeitos agudos relacionados aos piretroacuteides
fungicidas e herbicidas
O agrotoacutexico pode trazer prejuiacutezos natildeo soacute ao agricultor que aplica o produto
mas a populaccedilatildeo vizinha em torno agrave lavoura e agraves pessoas que mantecircm um contato
direto com ele ou com seus pertences contaminados tornando assim a intoxicaccedilatildeo
por agrotoacutexico um tema mais abrangente que envolve uma questatildeo de sauacutede
puacuteblica Os estudos sugerem a relaccedilatildeo entre a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico e sintomas
vestibulares poreacutem natildeo esclarecem onde ocorre o dano
Diante do exposto justifica-se a realizaccedilatildeo de pesquisas que venham a
esclarecer a relaccedilatildeo entre os distuacuterbios ocasionados no sistema vestibular e a
intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexicos principalmente os organofosforados
Focando o tema como uma questatildeo de sauacutede puacuteblica cabe a atuaccedilatildeo de
uma equipe multiprofissional para assistir o sujeito intoxicado ou que mantecircm
contato com o agrotoacutexico Dentro da equipe encontra-se dentre outros profissionais
o profissional de fisioterapia trabalhando desde a prevenccedilatildeo dos problemas de
sauacutede a utilizaccedilatildeo dos equipamentos de proteccedilatildeo individual bem como a
reabilitaccedilatildeo deste indiviacuteduo poacutes-intoxicaccedilatildeo caso necessaacuterio
O objetivo do presente estudo foi identificar se o organofosforado clorpirifoacutes
tem influecircncia no sistema vestibular de cobaias em exposiccedilatildeo aguda analisando sua
accedilatildeo de forma funcional e morfoloacutegica
20
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 Sistema vestibular e equiliacutebrio
A orelha compreende trecircs compartimentos orelha externa meacutedia e interna
Na porccedilatildeo petrosa do osso temporal aloja-se a orelha interna formada por espaccedilos
denominados vestiacutebulo (saacuteculo e utriacuteculo) e canais semicirculares tambeacutem
denominados aparelho vestibular (ENDERLE 2004)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores do movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) especificamente ao complexo nuclear vestibular e ao cerebelo sobre a
velocidade angular da cabeccedila a aceleraccedilatildeo linear e a orientaccedilatildeo cefaacutelica em
relaccedilatildeo ao eixo gravitacional (HERDMAN 2002)
Este sistema detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Contecircm uma rede de tubos
ossos e cacircmaras chamado labirinto oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos
membranosos chamado labirinto membranoso a parte funcional do sistema
vestibular (GUYTON 1992)
O labirinto membranoso eacute uma estrutura complexa localizada no interior do
labirinto oacutesseo Esta estrutura consiste do ducto coclear que eacute o oacutergatildeo sensorial
auditivo bem como de trecircs canais semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os
oacutergatildeos sensoriais vestibulares A maior parte do labirinto membranoso eacute preenchida
com endolinfa um fluido extracelular que em sua constituiccedilatildeo iocircnica eacute semelhante
ao fluido intracelular A perilinfa eacute um fluido semelhante ao fluido extracelular e ao
liacutequor e preenche o espaccedilo existente entre o labirinto membranoso e o labirinto
oacutesseo (MARTIN 1998)
As doenccedilas que acometem o utriacuteculo e o saacuteculo produzem uma sensaccedilatildeo de
inclinaccedilatildeo e levitaccedilatildeo (AFIFI e BERGMAN 2008) Segundo Bear Connors e
Paradiso (2002) a maacutecula do saacuteculo estaacute orientada verticalmente e a do utriacuteculo
horizontalmente
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares (denominadas ampolas) no saacuteculo e no utriacuteculo (denominadas
21
maacuteculas) estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002) Os
receptores vestibulares (ceacutelulas sensoriais) satildeo ativados pelo deslocamento dos
estereociacutelios localizados nas suas superfiacutecies apicais Contudo estas propriedades
mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos receptores a sensaccedilatildeo de
movimento As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares registram o movimento
angular da cabeccedila ao passo que aquelas do utriacuteculo e do saacuteculo registram o
movimento linear (MARTIN 1998)
O mecanismo que ativa os receptores vestibulares eacute diferente daquele dos
receptores auditivos As ceacutelulas ciliadas dos canais semicirculares satildeo cobertas por
uma massa gelatinosa (denominada cuacutepula) na qual os estereociacutelios estatildeo
embebidos Movimentos angulares da cabeccedila induzem a endolinfa do interior dos
canais a fluir deslocando a massa gelatinosa que por sua vez desvia os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais O utriacuteculo e o saacuteculo tambeacutem possuem um
revestimento gelatinoso sobre as ceacutelulas sensoriais nas suas maacuteculas Cristais de
carbonato de caacutelcio embebidos num material gelatinoso repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios O saacuteculo e o
utriacuteculo satildeo chamados de oacutergatildeos de otoacutelitos porque o termo otoacutelito eacute usado para
denominar os cristais de carbonato de caacutelcio Os canais semicirculares utriacuteculo e
saacuteculo possuem cada um deles uma orientaccedilatildeo espacial diferente em relaccedilatildeo agrave
cabeccedila conferindo assim uma sensibilidade seletiva a movimentaccedilatildeo nas diferentes
direccedilotildees (MARTIN 1998)
As terminaccedilotildees nervosas que chegam as ceacutelulas ciliadas das maacuteculas e das
cristas satildeo aferecircncias dos neurocircnios sensoriais bipolares que se situam no gacircnglio
de Scarpa os axocircnios destes neurocircnios formam o ramo vestibular do VIII par
craniano (BEAR CONNORS PARADISO 2002 NISHIDA 2012) A partir deste
local seguem pelo conduto auditivo interno junto com o ramo coclear e o nervo
facial Ao sair do conduto o ramo vestibular atravessa a aacuterea do acircngulo ponto-
cerebelar e chega ao bulbo terminando nos nuacutecleos vestibulares localizados no
assoalho do IV ventriacuteculo Os nuacutecleos vestibulares jaacute fazem parte do sistema
vestibular central (MARTIN 1998)
Bear Connors e Paradiso (2002) explicam que pelo fato dos canais de
ambos os lados da cabeccedila serem aproximadamente paralelos uns aos outros eles
22
funcionam juntos de forma reciacuteproca Os dois canais horizontais trabalham juntos
enquanto cada um dos anteriores eacute emparelhado Quando o movimento cefaacutelico
ocorre em um plano especiacutefico para um par de canais um canal eacute excitado e o canal
emparelhado oposto eacute hiperpolarizado
A vascularizaccedilatildeo do sistema vestibular se daacute pela arteacuteria cerebelar acircntero-
inferior ramo da arteacuteria basilar que supre o sistema vestibular perifeacuterico atraveacutes da
arteacuteria labiriacutentica (LOPES et al 2008)
Os sensores de movimento do sistema vestibular perifeacuterico enviam
informaccedilotildees ao SNC Este processa os sinais e combina-os com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica O sistema vestibular central produz
uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e a medula espinhal para preparar os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO)
e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os movimentos dos olhos que manteacutem a
visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O RVE gera um movimento corpoacutereo de
compensaccedilatildeo com o objetivo de manter a estabilidade cefaacutelica e postural ele
consiste em uma montagem de vaacuterios reflexos O desempenho do RVO e do RVE eacute
monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute reajustado (HERDMAN 2002)
Os neurocircnios de resposta motora para o RVO satildeo os neurocircnios dos nuacutecleos
motores oculares que orientam os muacutesculos extraoculares Estes muacutesculos satildeo
dispostos em pares e orientados em planos proacuteximos aos dos canais semicirculares
Esta disposiccedilatildeo permite que um uacutenico par de canais seja ligado principalmente a um
uacutenico par de muacutesculos extraoculares O resultado eacute um movimento conjugado dos
olhos no mesmo plano que o movimento da cabeccedila Os neurocircnios de resposta
motora para o RVE satildeo as ceacutelulas do corno anterior da substacircncia cinzenta da
medula espinhal que comandam os muacutesculos esqueleacuteticos (HERDMAN 2002)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas por
exemplo Quando ocorre uma alteraccedilatildeo visual proprioceptiva ou vestibular surgem
alteraccedilotildees que caracterizam o desequiliacutebrio Se a alteraccedilatildeo eacute de origem vestibular
ocorrem sintomas que entre outros a tontura eacute o mais comum e o que mais afeta a
qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
O mesmo autor afirma que em decorrecircncia das alteraccedilotildees que a afecccedilatildeo
labiriacutentica provoca os pacientes podem se sentir inseguros e depressivos levando-
os ao isolamento e limitaccedilotildees nas atividades diaacuterias e sociais
23
Aleacutem de tontura as lesotildees vestibulares centrais ou perifeacutericas provocam
tambeacutem o nistagmo um movimento involuntaacuterio oscilante dos olhos seguindo um
padratildeo horizontal vertical ou rotatoacuterio Os nistagmos perifeacuterico e central satildeo
diferentes um do outro as seguintes caracteriacutesticas podem diferenciaacute-los fixaccedilatildeo
dos olhos suprime o nistagmo perifeacuterico mas natildeo o central o nistagmo vertical puro
eacute geralmente central (AFIFI e BERGMAN 2008)
A posiccedilatildeo do corpo o movimento dos olhos e a percepccedilatildeo espacial satildeo
controlados pelo sistema vestibular com o objetivo de manter o equiliacutebrio corporal
O sistema proprioceptivo-vestibular constitui o ponto inicial de contato do ser
humano com o ambiente (GANANCcedilA et al 1998)
Gananccedila et al (2000) concluem que o equiliacutebrio corporal eacute fundamental para
que os seres humanos possam adotar posturas e realizar movimentos com
harmonia e conforto fiacutesico e mental
22 Agrotoacutexicos organofosforados
Segundo a Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 regulamentada pelo
Decreto 4074 de 04 de janeiro de 2002 os agrotoacutexicos satildeo substacircncias ou
misturas de natureza quiacutemica destinadas a prevenir destruir ou repelir direta ou
indiretamente qualquer forma de agente patogecircnico ou de vida animal ou vegetal
que seja nociva agraves plantas e animais seus produtos e subprodutos e ao homem
A utilizaccedilatildeo de agrotoacutexicos na agricultura teve seu iniacutecio na deacutecada de 1920
tendo sua aplicaccedilatildeo se expandido por ocasiatildeo da 2ordf Guerra Mundial quando foram
utilizados como arma quiacutemica
Os inseticidas do grupo quiacutemico dos OF satildeo compostos orgacircnicos derivados
do aacutecido fosfoacuterico e apresentam uma meia-vida curta variando entre minutos a 72
horas (GONCcedilALVES 2008) Satildeo inseticidas amplamente utilizados na agricultura
pecuaacuteria e no controle de vetores sendo comercializados em formulaccedilotildees com
diferentes apresentaccedilotildees como poacute liacutequido gracircnulo e soluccedilotildees concentradas etc
(MANUAL DE DIAGNOacuteSTICO E TRATAMENTO EM ACIDENTES COM
AGROTOacuteXICOS 2000)
A forma de absorccedilatildeo dos OF pode ser pela pele ingestatildeo e inalaccedilatildeo Estes
satildeo substacircncias lipossoluacuteveis distribuem-se e armazenam-se principalmente no
tecido adiposo atravessam a barreira hematoencefaacutelica e placentaacuteria A elevaccedilatildeo da
24
temperatura atmosfeacuterica eacute um fator de influecircncia na absorccedilatildeo desses produtos ou
seja esses se tornam mais volaacuteteis determinando uma elevaccedilatildeo da pressatildeo de
vapor Com isso se elevam a capacidade de inalaccedilatildeo e a velocidade de circulaccedilatildeo
sanguiacutenea (GONCcedilALVES 2008)
O mesmo autor afirma que os OF satildeo inibidores irreversiacuteveis da
acetilcolinesterase (AchE) no SNC nos gloacutebulos vermelhos no plasma e em outros
oacutergatildeos e provocam um acuacutemulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e
consequentes efeitos parassimpaticomimeacuteticos Natildeo se acumulam no organismo
mas satildeo responsaacuteveis por efeitos retardados
A AchE eacute a enzima responsaacutevel pela degradaccedilatildeo da acetilcolina em aacutecido
aceacutetico e colina substacircncias inertes A acetilcolina eacute o mais importante
neurotransmissor do impulso nervoso nas junccedilotildees sinaacutepticas Os OF ao inibirem a
accedilatildeo da AchE provocam um excesso de acetilcolina nas terminaccedilotildees nervosas o
que inicialmente excitaraacute e depois paralisaraacute a transmissatildeo nas sinapses
colineacutergicas que incluem o SNC terminaccedilotildees nervosas parassimpaacuteticas e umas
poucas terminaccedilotildees simpaacuteticas como glacircndulas sudoriacuteparas (efeitos muscariacutenicos)
nervos somaacuteticos e sinapses ganglionares (efeitos nicotiacutenicos) A reaccedilatildeo entre o OF
e o siacutetio ativo da AchE resulta na formaccedilatildeo de uma enzima estaacutevel fosforilada e natildeo
reativa o que a torna ldquoirreversivelmente inibidardquo (MANUAL DE DIAG E TRAT EM
ACIDENTES COM AGROT 2000)
Aleacutem do efeito de neurotoxicidade em animais expostos a OF o mesmo pode
provocar geraccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio levando ao estresse oxidativo e
consequente dano celular (QIAO et al 2002 AZEVEDO 2009)
A principal via de eliminaccedilatildeo deste composto do organismo eacute a urinaacuteria A
vida meacutedia do OF e de seus produtos eacute relativamente curta poreacutem seu efeito toacutexico
eacute prolongado (MANUAL DE DIAG E TRAT EM ACIDENTES COM AGROT 2000)
De acordo com a classificaccedilatildeo da EMBRAPA (2006) estes produtos satildeo
classificados toxicologicamente em quatro classes
-Classe I Extremamente toacutexicos
-Classe II Altamente toacutexicos
-Classe III Medianamente toacutexicos
-Classe IV Pouco ou muito pouco toacutexicos
Incluso na classificaccedilatildeo toxicoloacutegica I encontra-se o agrotoacutexico inseticida
organofosforado Clorpirifoacutes Sua composiccedilatildeo quiacutemica eacute O O ndash diethyl O-3 56 ndash
25
trichloro -2- pyridylphosphorothioate com foacutermula bruta C9H11Cl3NO3PS Eacute
utilizado como inseticida nas lavouras de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate O produto pode ser absorvido pelo trato gastrointestinal e em
menor extensatildeo por via deacutermica e inalatoacuteria eacute rapidamente metabolizado e
excretado pela urina e fezes Este OF causa efeitos agudos como sintomas de
sonolecircncia cefaleia tontura tremores naacuteuseas sudorese visatildeo turva dificuldade
respiratoacuteria incontinecircncia e convulsotildees bem como efeitos crocircnicos que atraveacutes de
exposiccedilotildees repetidas ou prolongadas podem resultar em prejuiacutezo de memoacuteria e
concentraccedilatildeo depressatildeo severa irritabilidade cefaleia sonambulismo ou insocircnia
(MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO 2010)
Os equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados para uso do produto
em aplicaccedilatildeo na lavoura satildeo maacutescaras com filtro de carvatildeo ativado cobrindo nariz e
boca luvas de borracha ou material impermeaacutevel cobrindo as matildeos oacuteculos de
seguranccedila para produtos quiacutemicos macacatildeo de mangas compridas impermeaacuteveis
botas de PVC e chapeacuteu de aba larga (VIDE BULA PYRINEX 480 EC)
Tambeacutem de acordo com a bula do produto o intervalo de reentrada na
lavoura onde foi aplicado o produto eacute de no miacutenimo 24 horas apoacutes a aplicaccedilatildeo
23 Eletronistagmografia
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para este estudo foi a prova caloacuterica dentro
do espectro do exame de eletronistagmografia (ENG) A ENG em suas diferentes
modalidades eacute a maneira mais adequada de avaliar os achados oculares eou
vestibulares Esta consiste no registro da movimentaccedilatildeo ocular estes movimentos
fisioloacutegicos ou induzidos por estimulaccedilotildees visuais representam o elemento principal
na investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA et al 1998
MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A ENG eacute um meacutetodo de inscriccedilatildeo dos movimentos oculares baseados na
captaccedilatildeo por meio de eletrodos de superfiacutecie da variaccedilatildeo do potencial eleacutetrico entre
a coacuternea (+) e a retina (-) que ocorre quando os olhos se movimentam Destina-se
ao registro do nistagmo (GANANCcedilA et al 1998)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares o que contribui para manter a orientaccedilatildeo
26
dos globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999)
O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na ENG
As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova caloacuterica
(em que a estimulaccedilatildeo labiriacutentica dos canais semicirculares laterais eacute efetuada em
cada ouvido independentemente) Esta prova permite classificar as disfunccedilotildees em
perifeacutericas e centrais Aleacutem disso as disfunccedilotildees vestibulares podem ainda ser
classificadas como irritativas (quando a prova caloacuterica mostrar preponderacircncia
direcional do nistagmo ou hiperreflexia) ou deficitaacuterias (quando a prova caloacuterica
revelar hiporreflexia ou arreflexia) (GANANCcedilA et al 1998)
A exploraccedilatildeo semioloacutegica do RVO exige uma calibraccedilatildeo preacutevia dos
movimentos oculares (GANANCcedilA et al 1998)
O mecanismo de accedilatildeo do labirinto a estimulaccedilatildeo eacute complexo mas se admite
que a teoria hidrodinacircmica desenvolvida por Barany ainda eacute correta De acordo com
o autor a irrigaccedilatildeo fria do conduto auditivo externo iraacute produzir um resfriamento da
parede do canal semicircular lateral que na posiccedilatildeo vertical (paciente deitado em
decuacutebito dorsal com a cabeccedila fletida para frente de 25 a 30ordm) determinaraacute um
movimento dos liacutequidos labiriacutenticos e consequentemente um desvio da cuacutepula e
portanto nistagmos desvios segmentares e tonturas A irrigaccedilatildeo com aacutegua quente
provoca nistagmo na direccedilatildeo da orelha irrigada enquanto que a aacutegua fria provoca o
nistagmo na direccedilatildeo oposta da orelha irrigada (PESSOcircA 1999 MOR FRAGOSO
2012)
A estimulaccedilatildeo da prova caloacuterica da ENG pode ser realizada por aacutegua ou por
ar em diferentes temperaturas O uso do ar eacute indicado em casos de perfuraccedilatildeo
timpacircnica ou para minimizar os sintomas neurovegetativos Este meacutetodo exige o uso
de equipamentos especiais e natildeo possui uma rotina cliacutenica bem descrita como a da
aacutegua Jaacute a aacutegua eacute um procedimento jaacute padronizado Esta provoca mais sintomas
neurovegetativos todavia produz uma resposta mais robusta ao exame (PESSOcircA
1999 MOR FRAGOSO 2012)
O exame com aacutegua eacute realizado nas temperaturas quente fria e gelada
Segundo o protocolo de Fitzgerald amp Hallpike (1942) as temperaturas utilizadas
seriam de 44ordm C e 30ordmC com 240 ml de aacutegua irrigaccedilatildeo durante 40 segundos e
intervalo de cinco minutos entre as irrigaccedilotildees na seguinte sequecircncia 30ordmC-OD
27
30ordmC-OE 44ordmC-OE e 44ordmC-OD Este protocolo sofreu algumas alteraccedilotildees com o
passar dos anos O protocolo usual atualmente eacute a estimulaccedilatildeo a aacutegua com canais
semicirculares laterais verticalizados utilizando-se 240 ml de aacutegua durante 40
segundos de irrigaccedilatildeo e na seguinte sequecircncia 44ordmC-OD 44ordmC-OE 30ordmC-OE e
30ordmC-OD com intervalo de trecircs minutos entre as provas (MOR FRAGOSO 2012)
Quando tais temperaturas natildeo produzem respostas adequadas podemos
realizar a prova a 18ordmC ou ateacute mesmo a 0ordmC (PESSOcircA 1999) Estes protocolos satildeo
utilizados em humanos o valor de temperatura estabelecido neste trabalho foi de
10ordmC segundo o protocolo de Marsellian Grellet e Colafecircmina de 1969 (OLIVEIRA
CICILINI SOUZA ANDRADE 1979)
A prova fria assim como a prova gelada produzem estiacutemulos ampuliacutepedos
por isto o nistagmo neste caso bate para o lado oposto ao estiacutemulo jaacute na prova
quente o estiacutemulo eacute ampuliacutefugo e o nistagmo iraacute bater para o mesmo lado
(PESSOcircA 1999)
28
3 ARTIGO 1
AVALIACcedilAtildeO FUNCIONAL DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO POR MEIO DA PROVA CALOacuteRICA
Functional evaluation system of guinea pigs vestibular poisoned by organophosphate
through caloric
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora ndash Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4 Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
29
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
30
Resumo
A manutenccedilatildeo do equiliacutebrio corporal eacute realizada pelo funcionamento conjunto
do sistema vestibular da visatildeo e do sistema proprioceptivo O sistema vestibular
produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica que eacute transmitida aos muacutesculos
extraoculares e produz o reflexo vestiacutebulo-ocular A eletronistagmografia avalia de
maneira adequada a integraccedilatildeo viacutesuo-vestibular Os compostos organofosforados
causam danos agrave sauacutede sendo a tontura um dos sintomas referidos por pessoas
expostas a estes agentes Objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do
sistema vestibular de cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma
aguda por meio da prova caloacuterica da eletronistagmografia A pesquisa do tipo
experimental realizou a eletronistagmografia de cobaias expostas a organofosforado
durante 10 dias consecutivos nas doses 05mgkgdia e 10mgkgdia por via
intraperitoneal e comparadas com grupo controle que recebeu administraccedilatildeo de
aacutegua destilada Foi realizada prova caloacuterica gelada (10ordmC) e comparadas as
variaacuteveis frequecircncia de aparecimento de nistagmos em 10 segundos (us) e
velocidade angular da componente lenta (ordms) Os resultados natildeo demonstraram
diferenccedila estatisticamente significativa na comparaccedilatildeo das variaacuteveis entre os
grupos Conclui-se que nas doses testadas o agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes
natildeo causou danos funcionais detectaacuteveis na prova caloacuterica
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
Praguicida Toxicidade
31
Abstract
Maintaining body balance is held by the joint operation of the vestibular
system vision and proprioceptive system The vestibular system produces a
response to head movement is transmitted to the extraocular muscles and produces
the vestibular-ocular reflex Electronystagmography adequately assesses visual-
vestibular integration Organophosphate compounds cause health damage being one
of the dizziness symptoms reported by people exposed to these agents This study
aimed to assess the functioning of the vestibular system of guinea pigs exposed to
the organophosphate chlorpyrifos acutely through caloric electronystagmography
The research conducted an experimental electronystagmography of guinea pigs
exposed to organophosphate for 10 consecutive days at doses 05 mg kg day and
10 mg kg day intraperitoneally and compared with a control group that received
distilled water administration We performed caloric ice (10 ordm C) and compared the
variables frequency of appearance of nystagmus in 10 seconds (u s) and angular
velocity of the slow component (ordm s) The results showed no statistically significant
difference in the comparison of variables between groups We conclude that the
tested doses of the pesticide organophosphate chlorpyrifos caused no detectable
functional damage in the caloric test
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
Pesticides Toxicity
32
Introduccedilatildeo
O equiliacutebrio corporal eacute mantido pelo funcionamento conjunto de trecircs
estruturas o sistema vestibular o sistema visual e o sistema proprioceptivo A
manutenccedilatildeo do equiliacutebrio geral eacute realizada pelo sistema vestibular esse sistema
detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio auxiliando na coordenaccedilatildeo dos movimentos da
cabeccedila e dos olhos e nos ajustes da postura corporal Disfunccedilotildees neste sistema
podem resultar sensaccedilotildees desagradaacuteveis como vertigem naacuteusea e uma sensaccedilatildeo
de desequiliacutebrio acompanhada de movimentos incontrolaacuteveis dos olhos o nistagmo
(GUYTON 1992 BEAR CONNORS PARADISO 2002 AFIFI amp BERGMAN 2008)
O sistema vestibular nos seres humanos eacute composto por trecircs componentes
fundamentais um sistema sensorial perifeacuterico um processador central e um
mecanismo de resposta motora O sistema perifeacuterico eacute constituiacutedo de um conjunto
de sensores de movimento os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central
(SNC) O SNC processa esses sinais e os combina com outras informaccedilotildees
sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002) Sua estrutura
anatocircmica eacute composta de uma rede de tubos ossos e cacircmaras chamados labirinto
oacutesseo e dentro dele uma rede de tubos membranosos chamados labirinto
membranoso a parte funcional do sistema vestibular (GUYTON 1992)
O sistema vestibular central produz uma resposta agrave movimentaccedilatildeo cefaacutelica
que eacute transmitida aos muacutesculos extraoculares e a medula espinhal desencadeando
os reflexos vestiacutebulo-ocular (RVO) e vestiacutebulo-espinhal (RVE) O RVO gera os
movimentos dos olhos que manteacutem a visatildeo estaacutevel durante o movimento cefaacutelico O
desempenho dos reflexos eacute monitorizado pelo SNC e quando necessaacuterio eacute
reajustado (HERDMAN 2002)
A eletronistagmografia (ENG) em suas diferentes modalidades eacute a maneira
mais adequada de avaliar os achados oculares eou vestibulares Esta consiste no
registro da movimentaccedilatildeo ocular que representa o elemento principal na
investigaccedilatildeo e na avaliaccedilatildeo dos distuacuterbios vestibulares (GANANCcedilA VIEIRA
CAOVILLA 1998 MUNARO SLEIFER PEDROSO 2009)
A resposta padratildeo para o exame eacute o nistagmo pois toda vez que se estimula
o sistema vestibular ele aparece como resposta Isso se deve a um desequiliacutebrio
entre as forccedilas antagocircnicas vestibulares que contribui para manter a orientaccedilatildeo dos
33
globos oculares Da mesma maneira uma patologia no sistema perifeacuterico ou em
suas conexotildees centrais pode determinar o aparecimento do nistagmo (PESSOcircA
1999) O nistagmo constitui-se no elemento fundamental de anaacutelise do RVO na
ENG As anormalidades do RVO podem ser encontradas na pesquisa da prova
caloacuterica (GANANCcedilA VIEIRA CAOVILLA 1998)
Algumas substacircncias quiacutemicas tecircm causado danos ao ser humano e ao meio
ambiente Dentre estas substacircncias encontram-se os agrotoacutexicos alguns
conhecidos por suas propriedades neurotoacutexicas satildeo frequentemente considerados
como responsaacuteveis por intoxicaccedilotildees a trabalhadores que entram em contato com
esses compostos principalmente nos paiacuteses em desenvolvimento (TEIXEIRA
AUGUSTO MORATA 2003 HOSHINO PACHECO-FERREIRA TAGUCHI
TOMITA 2008) Os agrotoacutexicos satildeo um importante fator de risco para a sauacutede
humana Estes produtos satildeo utilizados em grande escala por vaacuterios setores
produtivos e mais intensamente pelo setor agropecuaacuterio (SILVA SILVA FARIA
2005)
No Brasil foram registrados 101086 casos de intoxicaccedilatildeo humana em 2009
Dentre esses as intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos de uso agriacutecola totalizaram 5253
casos 1058 soacute no Sul do paiacutes regiatildeo de forte produccedilatildeo agriacutecola (SINITOX 2009)
Em 2008 os dados mostravam 806 casos na regiatildeo o que revela que os casos de
intoxicaccedilatildeo vecircm crescendo O difiacutecil acesso agraves informaccedilotildees e agrave educaccedilatildeo por parte
dos usuaacuterios desses produtos bem como o baixo controle sobre sua produccedilatildeo
distribuiccedilatildeo e utilizaccedilatildeo satildeo alguns dos principais determinantes na constituiccedilatildeo
dessa situaccedilatildeo como um dos principais desafios de sauacutede puacuteblica
Em 2008 o Brasil tornou-se o maior consumidor mundial de venenos
agriacutecolas neste ano as vendas com agrotoacutexicos no paiacutes significaram 7125 bilhotildees
de doacutelares No total os herbicidas representaram cerca de 45 das vendas os
inseticidas 29 e os fungicidas 21(GUAZZELLI 2009 IBAMA 2010)
Entre os inseticidas encontramos os organofosforados (OF) que satildeo
compostos anticolinesteraacutesicos que causam variado grau de toxicidade para o ser
humano Em razatildeo do benefiacutecio do agrotoacutexico para o sucesso do plantio o
trabalhador tem a tendecircncia de subestimar seus efeitos na sauacutede de quem entra em
contato com o produto (KOumlRBES 2009)
Diversas vezes essa exposiccedilatildeo causa alteraccedilotildees cliacutenicas que
silenciosamente alteram a vida do trabalhador Sabe-se que a exposiccedilatildeo por um
34
curto periacuteodo causa os chamados efeitos agudos Este quadro varia de intensidade
podendo ser caracterizado por naacuteusea vocircmito cefaleia tontura desorientaccedilatildeo
hiperexcitabilidade parestesias irritaccedilatildeo de pele e mucosas fasciculaccedilatildeo muscular
dificuldade respiratoacuteria hemorragia convulsotildees coma e morte A tontura eacute um
sintoma de destaque considerada uma das expressotildees cliacutenicas da exposiccedilatildeo aos
agrotoacutexicos (SILVA SILVA FARIA 2005 HOSHINO PACHECO-FERREIRA
TAGUCHI TOMITA 2008)
Faz-se importante ressaltar que a populaccedilatildeo exposta ao agrotoacutexico natildeo se
limita somente ao trabalhador mas tambeacutem a sua famiacutelia que convive proacutexima a
plantaccedilatildeo Este fato evidencia a necessidade de pesquisas que aprofundem
metodologias para avaliaccedilatildeo da exposiccedilatildeo aos agentes toacutexicos e os riscos
associados a estes produtos tanto nos casos de intoxicaccedilatildeo aguda como na
exposiccedilatildeo em longo prazo ao agrotoacutexico (KOumlRBES 2009)
O objetivo da pesquisa foi avaliar o funcionamento do sistema vestibular de
cobaias expostas ao organofosforado clorpirifoacutes de forma aguda por meio da
eletronistagmografia
Materiais e meacutetodos
A pesquisa caracterizou-se como do tipo experimental de corte prospectivo
(SEVERINO 2008) A mesma foi realizada de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na
Experimental Animal adotados pela Sociedade Brasileira de Ciecircncia em Animais de
Laboratoacuterio (SBCAL) e com a Lei nordm 11794 de 8 de outubro de 2008 do Conselho
Nacional de Controle de Experimentaccedilatildeo Animal (CONCEA) que estabelece os
procedimentos para o uso cientiacutefico de animais e foi aprovada pela Comissatildeo de
Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto da
Universidade de Satildeo Paulo sob o nordm 1352011 em 08 de novembro de 2011
Para este estudo foram utilizadas 18 cobaias albinas machos espeacutecie Cavia
porcellus linhagem inglesa com peso entre 300 e 500g com Reflexo de Preyer
presente e que natildeo apresentavam sinais de otite externa eou meacutedia ausecircncia de
perfuraccedilatildeo timpacircnica agrave otoscopia O Reflexo de Preyer eacute avaliado por observaccedilatildeo de
pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo auricular da cobaia quando a
mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia intensidade Tal reflexo eacute
35
utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores (JERO COLING LALWANI
2001)
Os animais ficaram alojados no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina-USP em
gaiolas coletivas de acordo com o grupo com maravalha em regime claroescuro de
12 horas temperatura e umidade controladas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para a intoxicaccedilatildeo as cobaias receberam pela via intraperitoneal o agrotoacutexico
OF Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA que tem como
princiacutepio ativo o clorpirifoacutes O Pyrinex 480 CEreg eacute um inseticida OF com accedilatildeo de
contato e ingestatildeo recomendado para o controle de pragas nas culturas de algodatildeo
batata cafeacute citros feijatildeo maccedilatilde milho soja tomate rasteiro para fins industriais e
trigo O produto estaacute registrado no Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e
Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
A via intraperitoneal foi a via escolhida por garantir a absorccedilatildeo da dose jaacute
que por outras via corria-se o risco de natildeo sabermos a exata dose absorvida
As cobaias foram divididas em trecircs grupos no grupo I (controle) foi realizada
a administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal em dose uacutenica diaacuteria no mesmo
volume correspondente aacute dose de agrotoacutexico para o peso da cobaia no grupo II foi
administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose uacutenica diaacuteria de 05
mgkgdia e no grupo III foi administrado o agrotoacutexico por via intraperitoneal na dose
uacutenica diaacuteria de 10 mgkgdia todos durante dez dias consecutivos As cobaias
tiveram seu peso controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do
agrotoacutexico a ser utilizada O controle era composto por cinco cobaias e os grupos
tratados II e III por seis e sete cobaias respectivamente
Para o manejo dos animais e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50
36
A avaliaccedilatildeo funcional selecionada para ser realizada neste estudo foi a prova
caloacuterica gelada (aacutegua agrave 10ordmC) conforme o protocolo de Marseillan Grellet e
Colafeacutemina (1969) dentro do espectro do exame de ENG As variaacuteveis selecionadas
foram frequecircncia de aparecimento de nistagmos (Fn) em 10 segundos de registro
mensurada em unidades por segundo (us) e velocidade angular da componente
lenta (VACL) medida em graus por segundo (ordms)
A ENG foi realizada 24 horas antes de se iniciar o experimento e 24 horas
apoacutes a uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico e de aacutegua destilada no grupo controle O
primeiro exame foi realizado para que pudesse ser usado como paracircmetro de
comparaccedilatildeo da situaccedilatildeo do sistema vestibular das cobaias previamente a
intoxicaccedilatildeo e poacutes-intoxicaccedilatildeo O segundo procedimento foi realizado para avaliaccedilatildeo
do efeito do agrotoacutexico no sistema vestibular destas cobaias atraveacutes de uma prova
funcional analisando assim o reflexo vestiacutebulo-ocular das mesmas
A teacutecnica a ser utilizada para o estudo das respostas vestibulares ao estiacutemulo
teacutermico foi a desenvolvida por Marseillan Grellet e Colafeacutemina em 1969 Essa
teacutecnica baseia-se no registro eletronistagmograacutefico das reaccedilotildees oculares ao
estiacutemulo teacutermico em cobaias preparadas para experimentos crocircnicos com eletrodos
permanentes (OLIVEIRA CICILINI SOUZA ANDRADE 1979) Todas as cobaias
selecionadas foram submetidas a um procedimento ciruacutergico asseacuteptico para a
implantaccedilatildeo de um eletrodo subcutacircneo na regiatildeo frontal e dois eletrodos
subcutacircneos nas regiotildees periorbiculares (esquerda e direita) sob anestesia com
cloridrato de Xilazina 2 (05 mlKg ndash Dopaserreg Laboratoacuterios Calier do Brasil Ltda)
e cloridrato de Quetamina 10 (09mlKg - Ketaminreg 50mgml Laboratoacuterio
Cristaacutelia) via intramuscular
Apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do ferimento ciruacutergico as cobaias foram contidas em
caixas adequadas para o registro do nistagmo provocado pela irrigaccedilatildeo com 20 ml
de aacutegua gelada a 10ordmC no conduto auditivo externo
Concluiacutedos os dez dias de administraccedilatildeo do agrotoacutexico as cobaias foram
submetidas a um novo registro do nistagmo (Figura 1) provocado novamente pela
irrigaccedilatildeo do conduto auditivo externo com 20 ml de aacutegua agrave 10ordmC
Para o registro do exame foi utilizado o equipamento Nistagmocilreg
monocanal que eacute um eletronistagmoacutegrafo para registro de nistagmos provocados
pelo meacutetodo de RALPAC (estimulaccedilatildeo teacutermica a ar ou aacutegua) eacute portaacutetil e de simples
manejo constituiacutedo por um sistema de registro acrescido de preacute-amplificadores
37
especiais acoplados por meio de capacitores que registram variaccedilotildees dos potenciais
coacuterneo-retinianos mas que natildeo registram os valores absolutos desses potenciais
Foram utilizados dois eleacutetrodos ativos um em cada canto externo das
cavidades orbitaacuterias para registro dos movimentos horizontais e um eletrodo
indiferente na linha meacutedia nasal a 2 cm da ponta nasal
Os preacute-amplificadores foram regulados para uma excursatildeo de 2 cm da pena
inscritora no papel de registro Os eleacutetrodos satildeo polarizados de maneira que o olhar
para a direita ocasione o desvio da pena para cima e o olhar para a esquerda cause
um desvio da pena inscritora para baixo
A calibraccedilatildeo dos movimentos deu-se a partir da estabilizaccedilatildeo da pena e
permanecircncia da cobaia com a cabeccedila em posiccedilatildeo estaacutevel
Figura 1 ndash Fotografia dos equipamentos e registro da Eletronistagmografia
38
Figura 2 ndash Fotografia do registro dos nistagmos para a direita de cobaia do Grupo Controle estimulo
oferecido na orelha esquerda
Os valores da frequecircncia de aparecimento de nistagmo (Fn) foram obtidos a
partir da contagem do nuacutemero de nistagmos presentes em 10 segundos de registro
do exame com base na velocidade do papel no equipamento utilizado de 25 mms
Para a obtenccedilatildeo dos valores da velocidade angular da componente lenta
(VACL) foram realizadas trecircs medidas de nistagmos com bases iguais em trecircs
locais diferentes no iniacutecio meio e fim do registro O valor considerado para VACL
para cada orelha de cobaia foi a meacutedia entre os nove valores mensurados
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 Os dados coletados foram submetidos ao teste de
normalidade de Lilliefors Para os dados normais intragrupos foi utilizado o teste t de
Student para variaacuteveis dependentes Jaacute para os dados intergrupos foi realizado o
teste ANOVA Foi considerado o niacutevel de significacircncia de 5
Resultados
Os resultados da ENG quando comparados intragrupos demonstraram que
natildeo existe diferenccedila significante entre as orelhas em nenhum dos grupos o que nos
mostra que existe semelhanccedila entre as orelhas tanto na variaacutevel Fn como na
variaacutevel VACL O teste de comparaccedilatildeo no momento preacute-experimento entre os grupo
39
I II e III demonstrou que natildeo existia diferenccedila significativa entre eles portanto os
grupos eram homogecircneos
Tais testes foram realizados para garantir a homogeneidade entre as orelhas
e entre os grupos Este fato permite-nos comparar os resultados no momento poacutes-
experimento considerando que antes eles eram estatisticamente semelhantes
As meacutedias das Fn e da VACL para as orelhas dos animais em cada grupo
estatildeo explicitadas nas Tabelas 1 e 2
Tabela 1- Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das frequecircncias do aparecimento de nistagmos (us)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III ()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 518plusmn112 408plusmn129 028
OE 478plusmn070 428plusmn139 037
G II (n= 6)
OD 495plusmn204 396plusmn118 016
OE
463plusmn098 408plusmn130 020
G III (n= 7)
OD
OE
442plusmn152
445plusmn127
394plusmn077
504plusmn079
047
037
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias us - unidadesegundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos - ANOVA
40
Tabela 2 - Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios das velocidades angulares da componente lenta (degs)
entre o preacute e poacutes-experimento dos Grupos I II e III()
Grupo Preacute Experimento
Poacutes Experimento
p-valor
G I (n= 5)
OD 5975plusmn1919 6321plusmn2139 079
OE 5559plusmn2325 7339plusmn2270 009
G II (n= 6)
OD 5905plusmn1742 5734plusmn1574 076
OE 4431plusmn1437 5286plusmn1119 036
G III (n= 7)
OD
OE
5585plusmn2317
6266plusmn1671
6945plusmn2418
6831plusmn2569
017
054
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo
OD - orelha direita OE - orelha esquerda n - nuacutemero de cobaias ordm s - grau por segundo
Teste intragrupo ndash Teste t de Student Teste intergrupos ndash ANOVA
A comparaccedilatildeo entre os grupos no poacutes-experimento natildeo demonstrou diferenccedila
estatisticamente significante nas variaacuteveis Fn e VACL
Discussatildeo
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MENDES 1995 MORAES 1999)
Este fato revela que o agrotoacutexico OF clorpirifoacutes nas doses administradas de
05mgkgdia e 1mgkgdia durante 10 dias natildeo ocasionou dano que fosse detectado
em exame funcional do sistema vestibular das cobaias
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (MANJABOSCO
MORATA MARQUES 2004 ARAUacuteJO et al 2007 LISBOA SENA DUTRA 2007
FARIA ROSA FACCHINI 2009 HOSHINO et al 2009 MAGALHAtildeES 2010
41
AZEVEDO 2010 SOUZA 2011) Os resultados mostraram a tontura como sendo
um sintoma recorrente referido por esses trabalhadores O que sugere um
comprometimento funcional poreacutem neste estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas atraveacutes da prova
caloacuterica
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
O estudo que avaliou as alteraccedilotildees morfoloacutegicas do aparelho vestiacutebulo-
coclear de cobaias expostas a OF encontrou evidecircncias de alteraccedilotildees atraveacutes da
microscopia eletrocircnica de varredura nas coacutecleas saacuteculos e utriacuteculos Este resultado
que evidencia uma alteraccedilatildeo morfoloacutegica pode sugerir um distuacuterbio funcional
(KOumlRBES 2010) No entanto na presente pesquisa ainda natildeo houve manifestaccedilatildeo
de sintomas funcionais isto pode ter ocorrido em virtude da diferenccedila do princiacutepio
ativo testado apesar de pertencer agrave classe dos compostos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre as variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
em seres humanos como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos
fechados e em superfiacutecie macia sugerindo efeito subcliacutenico do agrotoacutexico sob os
sistemas vestibular e proprioceptivo (HOSHINO et al 2008) Tambeacutem discorda da
pesquisa que analisou a Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF
cronicamente que encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas
alteraccedilotildees traduziram-se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto
aqui avaliamos os efeitos agudos deste organofosforado (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001)
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
42
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico princiacutepio ativo Por tal motivo o
estudo experimental torna-se uma alternativa de se pesquisar o efeito isolado de um
princiacutepio ativo
Os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em pesquisa
realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como amostra 301
crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo evidenciou-se a
presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina poreacutem natildeo
encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUODONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias A pesquisa encontrou
alteraccedilotildees nas ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF
poreacutem esta lesatildeo morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema
auditivo perifeacuterico das cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas
Produto de Distorccedilatildeo e potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES
2009)
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
Conclusatildeo
O agrotoacutexico organofosforado clorpirifoacutes nas doses testadas natildeo demonstrou
dano funcional ao sistema vestibular das cobaias intoxicadas de forma aguda
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
43
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a CAPES pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale
44
do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO A C H et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt IBAMA - Instituto Brasileiro de Meio Ambiente e Recursos Naturais Renovaacuteveis Produtos agrotoacutexicos e afins comercializados em 2009 no Brasil uma abordagem ambiental Rafaela Maciel Rebelo et al ndash Brasiacutelia Ibama 2010 JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt
45
LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 MAGALHAtildeES M A S Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MAPA - MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PESSOcircA K S Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 SEVERINO A J Metodologia Cientiacutefica Satildeo Paulo Cortez 2008
46
SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA J L N C O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23 Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
47
4 ARTIGO 2
ANAacuteLISE MORFOLOacuteGICA DO SISTEMA VESTIBULAR DE COBAIAS
INTOXICADAS POR ORGANOFOSFORADO
Morphological Analysis of Vestibular System of Guinea Pigs Poisoned to
Organophosphate
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo1 Adriana de Andrade Batista Murashima2 Valdete Alves
Valentins dos Santos Filha 3 Miguel Angelo Hyppolito4 e Aron Ferreira da Silveira5
1 Fisioterapeuta Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Distuacuterbios da
Comunicaccedilatildeo Humana da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria ndash RS
Brasil liciacogohotmailcom
2 Bioacuteloga Mestranda do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Oftalmologia
Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
adrimurashimafmarpuspbr
3Fonoaudioacuteloga Professora - Doutora Adjunta do Departamento de Fonoaudiologia
da Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria - RS Brasil
valdetevhotmailcom
4Meacutedico Otorrinolaringologista Professor-Doutor Docente do Departamento de
Oftalmologia Otorrinolaringologia e Cirurgia de Cabeccedila e Pescoccedilo da Faculdade de
Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo Ribeiratildeo Preto ndash SP Brasil
mhyppolitouolcombr
5 Meacutedico Veterinaacuterio Professor-Doutor Titular do Departamento de Morfologia da
Universidade Federal de Santa Maria e orientador do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo
em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana da UFSM Santa Maria ndash RS Brasil
aronfergmailcom
48
Dados do Responsaacutevel
Liacutecia Assunccedilatildeo Cogo
Endereccedilo Av Mons Pascoal Gomes Libreloto 199 Parque Dom Antocircnio Reis
Santa Maria ndash RS CEP 97065-290
Telefone 55- 99484920
E-mail liciacogohotmailcom
Fonte de auxiacutelio CAPES
Declaro natildeo existir conflito de interesse neste manuscrito
49
Resumo
O sistema vestibular eacute responsaacutevel pelo equiliacutebrio corporal Existem
substacircncias que o danificam causando tontura Estas satildeo chamadas
vestibulotoacutexicas Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo da ototoxicidade
a partir de pesquisas que apontaram a tontura como um sintoma recorrente entre as
queixas de produtores rurais O objetivo constitui-se em avaliar a histopatologia do
sistema vestibular de cobaias expostas a organofosforados identificando os efeitos
destes compostos nesse sistema O estudo eacute do tipo experimental Foram utilizadas
18 cobaias sendo seis intoxicadas com organofosforado clorpirifoacutes nas doses de 05
mgkgdia sete na dose de 1mgkgdia e grupo controle composto por cinco cobaias
expostas a aacutegua destilada durante 10 dias consecutivos Posteriormente realizou-se
a contagem dos tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos atraveacutes
Microscopia Eletrocircnica de Varredura Na comparaccedilatildeo dos dados intergrupos para a
variaacutevel saacuteculo realizou-se o Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 jaacute
para a variaacutevel utriacuteculo utilizou-se o Teste Kruskal-Wallis que apresentou como
resultado p= 08958 revelando natildeo haver diferenccedila entre os grupos em ambas as
variaacuteveis Conclui-se que a anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias
expostas agudamente ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila
para a quantidade de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos nas doses
testadas neste experimento
Palavras-chave Equiliacutebrio Postural Sistema Vestibular Inseticida Organofosforado
PraguicidaToxicidade
50
Abstract
The vestibular system is responsible for body balance There are substances
that damage causing dizziness These are called vestibulotoxicas Pesticides have
become the object of investigation of ototoxicity from research that showed dizziness
as a symptom of recurrent complaints among farmers The objective is to evaluate
the histopathology in vestibular system of guinea pigs exposed to organophosphates
identifying the effects of these compounds in this system The study is the
experimental type 18 guinea pigs were used six organophosphate intoxicated with
chlorpyrifos at doses of 05 mg kg day seven dose of 1mgkgday and control
group of five guinea pigs exposed to distilled water for 10 consecutive days Later
there was the counting of ciliary tufts in macules of saccules and utricles by Scanning
Electron Microscopy In intergroup comparison of data for the variable saccule held
the one-way ANOVA test resulted in p = 00569 whereas for the variable utricle we
used the Kruskal-Wallis test showed that as a result p = 08958 revealed no
differences between groups in both variables It is concluded that the histopathologic
analysis of the vestibular system of guinea pigs acutely exposed to organophosphate
pesticides showed no difference in the amount of the ciliary tufts macules saccules
and utricles of the doses tested in this experiment
Key-words Postural Balance Vestibular System Insecticide Organophosphate
PesticidesToxicity
51
Introduccedilatildeo
O sistema vestibular eacute constituiacutedo por trecircs partes principais um sistema
sensorial perifeacuterico um processador central e um mecanismo de resposta motora O
sistema sensorial perifeacuterico eacute composto de um conjunto de sensores do movimento
os quais enviam informaccedilotildees ao sistema nervoso central (SNC) O SNC eacute
responsaacutevel pelo processamento desses sinais e os combina com outras
informaccedilotildees sensoriais para estimar a orientaccedilatildeo cefaacutelica (HERDMAN 2002)
Este sistema perifeacuterico eacute composto de um labirinto oacutesseo e um labirinto
membranoso (GUYTON 1992) O componente membranoso eacute a parte funcional do
sistema que detecta as sensaccedilotildees de equiliacutebrio Esta contecircm trecircs canais
semicirculares saacuteculo e utriacuteculo constituindo os oacutergatildeos sensoriais vestibulares
(MARTIN 1998)
As ceacutelulas receptoras vestibulares estatildeo localizadas em regiotildees dos canais
semicirculares denominadas ampolas jaacute no saacuteculo e no utriacuteculo satildeo chamadas de
maacuteculas Estas ceacutelulas satildeo sensores bioloacutegicos que convertem o deslocamento
provocado pelo movimento cefaacutelico em uma descarga neural (HERDMAN 2002)
Contudo estas propriedades mecacircnicas do labirinto vestibular conferem aos
receptores a sensaccedilatildeo de movimento As ceacutelulas ciliadas do utriacuteculo e do saacuteculo
registram o movimento linear Estes oacutergatildeos possuem um revestimento gelatinoso
sobre as ceacutelulas sensoriais das suas maacuteculas com cristais de carbonato de caacutelcio
embebidos na superfiacutecie do material gelatinoso estes repousam sobre os
estereociacutelios das ceacutelulas sensoriais Esta gelatina sofre uma deformaccedilatildeo causada
pelos movimentos da cabeccedila que acabam desviando os estereociacutelios (MARTIN
1998)
O equiliacutebrio corporal pelo qual o sistema vestibular eacute um dos responsaacuteveis eacute
uma complexa interaccedilatildeo entre o sensorial e o motor que nos previne de quedas
permite-nos adotar posturas e realizar movimentos com harmonia (GANANCcedilA
MUNHOZ CAOVILLA SILVA 2000) Quando ocorre uma alteraccedilatildeo vestibular
ocorrem sintomas de desequiliacutebrio que entre outros a tontura eacute o mais comum e o
que mais afeta a qualidade de vida do indiviacuteduo (POPPER 2001)
Existem substacircncias que tem a capacidade de danificar ou perturbar o
sistema vestibular causando tontura Tais substacircncias que influenciam
negativamente o sistema ocasionando perda da funccedilatildeo vestibular ou lesatildeo celular
52
na orelha interna satildeo chamadas de ototoacutexicas ou vestibulotoacutexicas (JOHNSON
1993) O grau com que esta substacircncia vai influenciar no indiviacuteduo depende da
predisposiccedilatildeo individual da dose administrada do tempo de duraccedilatildeo da via de
administraccedilatildeo da idade da tendecircncia familiar eou de eventual dano preacutevio agrave orelha
interna (ZOCOLI REICHOW ZOCOLI 2003)
Diversas substacircncias ototoacutexicas vecircm sendo estudadas dentre elas antibioacuteticos
aminoglicosiacutedeos aspartame aacutecido saliciacutelico medicaccedilotildees oncoloacutegicas agrotoacutexicos
entre outros
Os agrotoacutexicos tornaram-se objeto de investigaccedilatildeo na linha de ototoxicidade a
partir de pesquisas realizadas com produtores rurais que apontaram a tontura eou
vertigem como sendo um sintoma recorrente entre as queixas desta populaccedilatildeo
(DICK STEENLAND KRIEG HINES 2001 ARAUacuteJO et al 2007 HOSHINO et al
2008 FARIA ROSA FACCHINI 2009)
As pesquisas com seres humanos permitem-nos identificar os sintomas
poreacutem natildeo nos permitem avaliar o impacto morfoloacutegico que estes sintomas causam
no sistema vestibular do indiviacuteduo Por isso o objetivo desta pesquisa constitui-se
em analisar a histopatologia do sistema vestibular de cobaias expostas a
organofosforados identificando os efeitos destes compostos nesse sistema
Materiais e Meacutetodos
Esta pesquisa foi submetida agrave Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CETEA) da FMRP-USP aprovada sob protocolo nuacutemero 1352011 (Anexo 1) e esta
de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos na Experimentaccedilatildeo Animal adotados pelo
Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo Animal (COBEA)
No presente estudo foram utilizadas dezoito cobaias albinas adultas machos
da espeacutecie Cavia porcellus selecionadas no Bioteacuterio Central da Universidade de Satildeo
Paulo Campus de Ribeiratildeo Preto com peso entre 300 e 500 gramas Foram
incluiacutedas no estudo as que apresentaram Reflexo de Preyer presente reflexo este
avaliado por observaccedilatildeo de pequenos movimentos de contratura do pavilhatildeo
auricular da cobaia quando a mesma eacute estimulada com sons de pequena e meacutedia
intensidade Tal reflexo eacute utilizado para avaliar a funccedilatildeo auditiva em roedores
(JERO COLING LALWANI 2001) Na seleccedilatildeo inicial as cobaias foram avaliadas e
53
submetidas agrave otoscopia manual Natildeo foram incluiacutedas no experimento aquelas que
apresentaram sinais de otite externa eou meacutedia e perfuraccedilatildeo timpacircnica
Os animais foram mantidos no Bioteacuterio do Laboratoacuterio de Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de
Ribeiratildeo Preto da Universidade de Satildeo Paulo (FMRP-USP) em gaiolas coletivas
separadas de acordo com o grupo experimental com maravalha em regime
claroescuro de 12 horas raccedilatildeo proacutepria e aacutegua ad libitum
Para realizaccedilatildeo do estudo as cobaias foram divididas em trecircs grupos sendo o
grupo I o controle
-Grupo I cinco cobaias com administraccedilatildeo de aacutegua destilada intraperitoneal
em dose uacutenica diaacuteria no mesmo volume correspondente agrave dose de agrotoacutexico para
o peso da cobaia durante 10 dias
-Grupo II seis cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 05 mgkgdia durante 10 dias consecutivos
-Grupo III sete cobaias com administraccedilatildeo intraperitoneal de agrotoacutexico na
dose uacutenica diaacuteria de 1mgkgdia durante 10 dias consecutivos
As dezoito cobaias totalizavam trinta e seis orelhas considerando-se trinta e
seis saacuteculos e trinta e seis utriacuteculos
O nuacutemero de cobaias por grupo foi definido de acordo com as normas da
Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA 2009) para realizaccedilatildeo de estudos
toxicoloacutegicos sendo o miacutenimo de cinco animais para cada dose testada no
experimento
O modelo experimental escolhido foi cobaia albina pois segundo estudo de
Albuquerque et al (2009) este modelo mostrou-se o melhor animal na etapa de
microdissecccedilatildeo em comparaccedilatildeo com o rato As vantagens deste modelo estatildeo no
tamanho e rigidez do osso temporal que permite uma maior facilidade para a retirada
do material anatocircmico para anaacutelise
Para a intoxicaccedilatildeo das cobaias foi administrado o agrotoacutexico organofosforado
Pyrinex 480 CEreg comercializado pela Milenia Agrociecircncias SA O Pyrinex 480 ECreg
eacute um inseticida organofosforado com accedilatildeo de contato e ingestatildeo recomendado para
o controle de pragas nas culturas de algodatildeo batata cafeacute citros feijatildeo maccedila
milho soja tomate rasteiro para fins industriais e trigo O produto estaacute registrado no
Ministeacuterio da Agricultura Pecuaacuteria e Abastecimento ndash MAPA sob nordm 09298
54
A dose do agrotoacutexico escolhido foi baseada na DL 50 oral para ratos do
Pyrinex 480 CEreg encontrada na bula do produto que eacute de 300 mgKg e considerou
as normas da ANVISA de natildeo exceder 80 da DL 50 As cobaias tiveram seu peso
controlado diariamente para o caacutelculo adequado da dose do agrotoacutexico a ser
utilizada
Para o manejo das cobaias e administraccedilatildeo do agrotoacutexico foram utilizados os
equipamentos de proteccedilatildeo individual recomendados na bula do produto
Apoacutes 24 horas da uacuteltima administraccedilatildeo do agrotoacutexico os animais foram
anestesiados com Tionembutal (25 mgkg) na dose 6 mgkg de peso corporal via
intraperitoneal e eutanasiados pelo meacutetodo de decapitaccedilatildeo Imediatamente apoacutes o
sacrifiacutecio do animal os ossos temporais contendo as bulas timpacircnicas foram
removidos As bulas timpacircnicas foram abertas e removeram-se os oacutergatildeos
vestibulares
Posteriormente a eutanaacutesia dos animais para dissecccedilatildeo microscoacutepica as
peccedilas anatocircmicas foram perfundidas com soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3
a 4ordmC e mantidas na soluccedilatildeo por 24 horas Atraveacutes da janela redonda foi injetada
para fixaccedilatildeo uma soluccedilatildeo de glutaraldeiacutedo a 3 em tampatildeo fosfato 01M pH = 74
por 4 horas a 4ordmC lavadas trecircs vezes por cinco minutos com o mesmo tampatildeo Em
seguida foram fixadas com tetroacutexido de oacutesmio 1 por 2 horas a 4ordmC e a seguir
submetidas agrave desidrataccedilatildeo
A desidrataccedilatildeo das estruturas foi realizada com banhos sucessivos de etanol
em concentraccedilotildees crescentes de 50 70 90 e 95 durante 10 minutos cada
em temperatura ambiente A seguir utilizou-se etanol a 100 em trecircs banhos de 20
minutos cada deixando-se as estruturas imersas no uacuteltimo banho agrave temperatura
ambiente por 12 horas A secagem da aacutegua ainda presente nas amostras apoacutes
desidrataccedilatildeo foi realizada utilizando-se o equipamento BAL-TEC ndash CPD 030 ndash
Critical Point Dryer (Balzers 40 Liechtenstein) atraveacutes do processo de ponto criacutetico
sendo as amostras transferidas para a cacircmara do aparelho e recobertas por dioacutexido
de carbono (CO2) liacutequido
Para a adequada observaccedilatildeo agrave Microscopia Eletrocircnica de Varredura (MEV)
as peccedilas dissecadas e parcialmente preparadas foram fixadas em um porta-
espeacutecime ciliacutendrico de metal com pasta condutiva de carbono Colloidal Graphite
(Electron Microscopy Sciences ndash Hatfield PA) As estruturas foram cobertas por uma
camada fina de ouro 24 quilates atraveacutes do processo de vaporizaccedilatildeo com o
55
equipamento BAL-TEC ndash SCD 050 ndash Sputter Coater (Balzers Liechtenstein)
tornando-se eletricamente condutivas
A anaacutelise morfoloacutegica das estruturas vestibulares foi realizada atraveacutes da
Microscopia Eletrocircnica de Varredura no microscoacutepio eletrocircnico JEOL Scanning
Electron Microscope - JSM 5200 Procedeu-se o registro fotograacutefico das imagens
com aumento de 3500 vezes Apoacutes o registro fotograacutefico as fotografias foram
transferidas para o software IMAGE Jreg para que se processasse a avaliaccedilatildeo
Realizou-se uma avaliaccedilatildeo microscoacutepica dos tufos ciliares das maacuteculas do
saacuteculo e do utriacuteculo bilateralmente para cada animal incluso no experimento Esta
avaliaccedilatildeo se deu por meio da contagem do nuacutemero de tufos ciliares na regiatildeo da
estriacuteola presentes por campo fotograacutefico O aumento de 3500 vezes foi padronizado
para todas as fotografias
Para a anaacutelise estatiacutestica foi obtida a meacutedia ponderada do nuacutemero de tufos de
estereociacutelios presentes em cada orelha Os oacutergatildeos vestibulares que apresentaram agrave
MEV artefatos que pudessem interferir na contagem dos tufos ciliares como lesotildees
das estruturas durante a dissecccedilatildeo ou montagem do material foram excluiacutedos do
estudo
Os dados encontrados foram tratados estatisticamente atraveacutes do programa
Statiacutestica versatildeo 90 considerando-se um niacutevel de significacircncia de 5 A
normalidade dos dados foi testada pelo Teste de Lilliefors Foi realizada a anaacutelise
descritiva dos dados Conforme o resultado do teste de normalidade os dados
normais foram comparados entre grupos pelo Teste ANOVA one-way e os dados
natildeo-normais foram comparados atraveacutes do Teste Kruskal-Wallis
Resultados
Ao final das anaacutelises perderam-se seis saacuteculos e trecircs utriacuteculos os quais
foram considerados nos itens ldquonrdquo das tabelas
O Teste de Lilliefors acusou normalidade para os dados da variaacutevel saacuteculo e
natildeo-normalidade para a variaacutevel utriacuteculo Foi realizada a anaacutelise descritiva dos
dados para o nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e utriacuteculo nos grupos I II e III
conforme Tabela 1
56
Tabela 1 ndash Comparaccedilatildeo dos valores meacutedios do nuacutemero de tufos ciliares do saacuteculo e do utriacuteculo entre
os Grupos I II e III ()
Grupo Meacutedia Miacutenimo Maacuteximo
G I
Saacuteculo (n = 9) 2544plusmn650 1400 3500
Utriacuteculo (n = 10) 2486plusmn351 1700 2800
G II
Saacuteculo (n = 9) 2670plusmn554 2000 3800
Utriacuteculo (n = 11)
2645plusmn450 1800 3400
G III
Saacuteculo (n = 12)
Utriacuteculo (n = 12)
3141plusmn535
2797plusmn377
2250
2366
4200
3750
() Os dados foram apresentados como a meacutedia plusmn desvio padratildeo n ndash nuacutemero de saacuteculo e de utriacuteculo
Para comparar os dados intergrupos para a variaacutevel saacuteculo foi realizado o
Teste ANOVA one-way que resultou em p= 00569 demonstrando natildeo haver
diferenccedila entre os valores dos grupos I II e III para a variaacutevel testada Jaacute para a
variaacutevel utriacuteculo a comparaccedilatildeo entre os grupos foi analisada atraveacutes do Teste
Kruskal-Wallis que apresentou como resultado p= 08958 revelando natildeo haver
diferenccedila entre os grupos
Os resultados dos testes comparativos entre o grupo controle e as diferentes
doses de agrotoacutexico organofosforado testadas natildeo causaram danos histopatoloacutegicos
as ceacutelulas ciliadas do saacuteculo e do utriacuteculo das cobaias envolvidas neste estudo
durante o periacuteodo de dez dias quando analisadas pela MEV
Discussatildeo
A meacutedia do grupo I foi menor do que os demais mas natildeo eacute possiacutevel afirmar
que houve diferenccedila significativa entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II e III
estatildeo de acordo com os valores meacutedios encontradas por outros autores que
realizaram MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada
57
durante 30 dias e outro soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011
MARQUEZINI 2011)
Os resultados da presente pesquisa natildeo evidenciaram diferenccedila estatiacutestica
significativa entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias intoxicadas com
as diferentes doses de organofosforado Isto vai de encontro aos resultados de
outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias intoxicadas por
organofosforados durante sete dias nas doses de 03 e 3mgkgdia e que
encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES SILVEIRA
HYPPOLITO 2010) Conveacutem ressaltar que a referida pesquisa utilizou doses e
princiacutepio ativo diferentes da atual
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinje e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN MIRANDA JIMEacuteNEZ
2006) Em pesquisa que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados
por organofosforado foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex
cerebral e que pode levar agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais
(PELEGRINO et al 2006 PEREZ et al 2006) poreacutem este natildeo foi objetivo de nossa
pesquisa que avaliou tufos ciliares em ceacutelulas sensoriais das maacuteculas do saacuteculo e
utriacuteculo
Pesquisa realizada com trabalhadores rurais que entraram em contato com
organofosforado clorpirifoacutes e posteriormente realizaram testes para avaliaccedilatildeo
sensoacuterio-motora demonstraram alteraccedilotildees principalmente nas medidas de oscilaccedilatildeo
postural com os olhos fechados e em superfiacutecie macia Este resultado sugere um
efeito subcliacutenico envolvendo os sistemas proprioceptivo e vestibular (HOSHINO et
al 2008)
Avaliaccedilatildeo funcional atraveacutes da Vectoeletronistagmografia de trabalhadores
expostos a organofosforados revelou que a grande maioria dos sujeitos apresentou
alteraccedilatildeo do tipo Disfunccedilatildeo Vestibular Perifeacuterica Irritativa (ARAUacuteJO et al 2007)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-ototoacutexico
poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo seguros para
estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede
58
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK STEENLAND
KRIEG HINES 2001 HOSHINO et al 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar
a origem morfoloacutegica especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa
uacutenica ou esta seria multifatorial
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
Conclusatildeo
A anaacutelise histopatoloacutegica do sistema vestibular de cobaias expostas de forma
aguda ao agrotoacutexico organofosforado natildeo demonstrou diferenccedila para a quantidade
de tufos ciliares nas maacuteculas dos saacuteculos e dos utriacuteculos nas doses testadas neste
experimento
Agradecimentos
Agradecemos agraves equipes do Laboratoacuterio de Teacutecnica Ciruacutergica e Cirurgia
Experimental do Departamento de Cirurgia e Anatomia do Laboratoacuterio de
Microscopia Eletrocircnica do Departamento de Biologia Celular e Molecular e
Bioagentes Patogecircnicos da Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade
de Satildeo Paulo pela colaboraccedilatildeo nesta pesquisa e a Capes pelo apoio financeiro
Referecircncias Bibliograacuteficas
ALBUQUERQUE A A S ROSSATO M OLIVEIRA J A A HYPPOLITO MA Conhecimento da anatomia da orelha de cobaias e ratos e sua aplicaccedilatildeo na pesquisa otoloacutegica baacutesica Rev Bras Otorrinolaringologia Satildeo Paulo vol75 nordm1 JanFev 2009 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr
59
ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevel em lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24 HOSHINO A C H et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt JERO J COLING D E LALWANI A K The use of Preyers reflex inevaluation of hearing in miceActaOtolaryngol 121(5) 585-589 2001 JOHNSON A C The ototoxic effect of toluene and the influence of noise acetylsalicylic acid or genotype a study in rats and mice ScandinavianAudiology 1993 (30) 1-40 KOumlRBES D SILVEIRA A F HYPPOLITO M A MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44
60
Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt MARQUEZINI R M S Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos EcotoxicolEnvironSaf 200664(2)251-5 PEREZ N M CALORE E E VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO E S PUGA F R Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes Rev Inst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QUILODRAacuteN J MIRANDA J P JIMEacuteNEZ L EfectodelagropesticidaCiper-metrinaendosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo delratoacuten Int J Morphol 2006245-113 SILVEIRA S C R Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 ZOCOLI R REICHOW SL ZOCOLI A M F Emissotildees otoacuacutesticas x cisplatina detecccedilatildeo precoce da ototoxicidade em pacientes oncoloacutegicos Rev Bras Otorrinolaringol 2003 69 (2) 222-225
61
5 DISCUSSAtildeO GERAL
Pesquisadores advertem que a grande maioria dos acidentes graves e fatais
causados por agrotoacutexicos incluindo a exposiccedilatildeo acidental profissional e a ingestatildeo
em caso de suiciacutedio eacute devida aos inseticidas OF e carbamatos altamente toacutexicos
(MORAES 1999 MENDES 1995)
Diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar o impacto do uso
de agrotoacutexicos OF na sauacutede humana Tais estudos utilizaram como metodologia a
entrevista com trabalhadores rurais expostos a estes compostos (ARAUacuteJO
2007AZEVEDO 2009 FARIA et al 2009 HOSHINO et al 2009 LISBOA et al
2007 MAGALHAtildeES 2010 MANJABOSCO et al 2004 SOUZA 2011) Os
resultados mostraram a tontura como sendo um sintoma recorrente referido por
esses trabalhadores Poreacutem no presente estudo natildeo se encontrou diferenccedila
significante entre as cobaias intoxicadas e as natildeo intoxicadas
Ainda com a ressalva de que a entrevista com trabalhadores eacute uma avaliaccedilatildeo
subjetiva e portanto natildeo possui a mesma confiabilidade do exame funcional
realizado neste estudo Exame este que confere um resultado mensuraacutevel do efeito
causado pela exposiccedilatildeo agrave substacircncia em questatildeo Em contraponto com esta
pesquisa os estudos referidos avaliam os sintomas crocircnicos enquanto a amostra
dessa pesquisa foi exposta por um periacuteodo breve onde se avaliou o efeito agudo e
em animais
Os resultados da presente pesquisa natildeo mostraram diferenccedila estatiacutestica
significativa nas variaacuteveis pesquisadas Isto estaacute em desacordo com outros
pesquisadores que encontraram alteraccedilotildees funcionais em testes sensoacuterio-motores
como mudanccedila na medida de oscilaccedilatildeo postural com olhos fechados e em superfiacutecie
macia em trabalhadores rurais que entraram em contato com OF clorpirifoacutes Tal
achado sugere efeito subcliacutenico do agrotoacutexico nos sistemas vestibular e
proprioceptivo (HOSHINO 2008) Tambeacutem discorda da pesquisa que analisou a
Vectoeletronistagmografia de trabalhadores expostos a OF cronicamente que
encontraram alteraccedilotildees em 50 dos casos analisados estas alteraccedilotildees traduziram-
se em hiperreflexia na prova caloacuterica da VENG entretanto aqui avaliamos os efeitos
agudos de um organofosforado (DICK et al 2001)
Isto evidencia que o agrotoacutexico organofosforado tem potencial neuro-
ototoacutexico poreacutem natildeo se pode ainda afirmar qual a dose e o tempo de exposiccedilatildeo
62
seguros para estes compostos natildeo causarem danos agrave sauacutede o que vem de
encontro aos limiares de doses aqui testadas e que natildeo mostraram diferenccedila
estatiacutestica significativa
O estudo com trabalhadores rurais expostos de forma aguda torna-se difiacutecil jaacute
que a grande maioria destes sujeitos esteve anteriormente exposta a estas
substacircncias por longos periacuteodos Outra limitante do estudo com seres humanos eacute de
que raramente os mesmos estatildeo expostos a um soacute agente o que dificulta a
avaliaccedilatildeo dos efeitos especiacuteficos de um uacutenico tipo de princiacutepio ativo o que justifica a
utilizaccedilatildeo de animais de laboratoacuterio de forma experimental
Ainda os achados dessa pesquisa satildeo similares agravequeles encontrados em
pesquisa realizada na China paiacutes de forte produccedilatildeo agriacutecola que utilizou como
amostra 301 crianccedilas com idade entre 23-25 meses expostas a OF Neste estudo
evidenciou-se a presenccedila de altos niacuteveis de metaboacutelitos OF nos testes de urina
poreacutem natildeo encontrou relaccedilatildeo entre este dado e os niacuteveis de desenvolvimento infantil
(GUADONG et al 2012) Este fato reforccedila a ideia de que mesmo na presenccedila do
composto no organismo muitas vezes natildeo encontramos correlaccedilatildeo funcional com
este achado
Exposiccedilotildees agudas a organofosforados podem natildeo ser capazes de
representar alteraccedilotildees em exames funcionais como mostra o estudo que avaliou os
efeitos destes compostos no sistema auditivo de cobaias com alteraccedilotildees nas
ceacutelulas ciliadas externas da coacuteclea poacutes-intoxicaccedilatildeo aguda por OF poreacutem esta lesatildeo
morfoloacutegica natildeo se traduziu em alteraccedilatildeo funcional no sistema auditivo perifeacuterico das
cobaias avaliadas pelos testes de Emissotildees Otoacuacutesticas Produto de Distorccedilatildeo e
Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefaacutelico (KOumlRBES 2009) No entanto
nessa pesquisa que objetivou avaliar os tufos ciliares nas maacuteculas das ceacutelulas
sensoriais estas natildeo mostraram alteraccedilotildees morfoloacutegicas pela MEV e nem funcionais
atraveacutes da ENG Todavia as doses e princiacutepio ativo foram diferentes apesar de ser
um composto da classe dos organofosforados
Os resultados da presente pesquisa demonstraram que a meacutedia do grupo I foi
menor do que os demais com relaccedilatildeo a variaacutevel nuacutemero de tufos ciliares mas natildeo eacute
possiacutevel afirmar que houve diferenccedila entre os grupos pois as meacutedias dos grupos II
e III estatildeo de acordo com as meacutedias encontradas por outros autores que realizaram
MEV em cobaias utilizando em seus grupos controles aacutegua destilada durante 30
dias e soro fisioloacutegico durante 10 dias (SILVEIRA 2011 MARQUEZINI 2011)
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Os resultados da presente pesquisa que natildeo evidenciaram diferenccedila
estatiacutestica significante entre o nuacutemero de tufos ciliares dos grupos de cobaias
intoxicadas com as diferentes doses de organofosforado vatildeo de encontro aos
resultados de outros pesquisadores que avaliaram o sistema vestibular de cobaias
intoxicadas por organofosforados durante 7 dias nas doses de 03 e 3mgkgdia os
quais encontraram alteraccedilotildees ciliares nos saacuteculos e utriacuteculos (KOumlRBES et al 2010)
Conveacutem ressaltar que tal pesquisa utilizou doses e princiacutepio ativo diferentes da
atual
Estudos funcionais comprovam que a intoxicaccedilatildeo por agrotoacutexico causa tontura
eou vertigem em trabalhadores expostos a estes compostos (DICK et al 2001
HOSHINO 2008) poreacutem ainda natildeo foi possiacutevel elucidar a origem morfoloacutegica
especiacutefica deste sintoma nem mesmo se existe uma causa uacutenica ou esta seria
multifatorial
Os danos morfoloacutegicos em animais exposto a organofosforados vem sendo
amplamente pesquisados Estudo que avaliou de forma aguda os efeitos de um
organofosforado no sistema nervoso observou alteraccedilatildeo estrutural no cerebelo
caracterizada por apoptose nas ceacutelulas de Purkinge e dano estrutural ao
citoesqueleto dos animais sobreviventes (QUILODRAacuteN et al 2006) Em pesquisa
que avaliou os efeitos crocircnicos no SNC de animais intoxicados por organofosforado
foi observada a hipertrofia da camada molecular do coacutertex cerebral e que pode levar
agrave perda ou afilamento das ramificaccedilotildees neurais (PELEGRINO et al 2006 PEREZ et
al 2006) dados estes que reforccedilam e justificam os objetivos da presente pesquisa
em avaliar possiacuteveis injuacuterias celulares embora em locais diferentes como nas
maacuteculas dos saacuteculos e utriacuteculos
Ainda satildeo necessaacuterios estudos que possam determinar as doses e tempo de
exposiccedilatildeo seguros para os agrotoacutexicos organofosforados Portanto vale ressaltar
que em qualquer dose a ser utilizada e em eventual contato com estes compostos
utilize-se os equipamentos de proteccedilatildeo individual indicados para tal
O periacuteodo agudo de exposiccedilatildeo e avaliaccedilatildeo pode ter sido o fator determinante
dos resultados natildeo significativos neste estudo apontando para a necessidade de se
realizar estudos com diferentes doses e por um periacuteodo de tempo mais prolongado
para que se possa determinar com maior seguranccedila a utilizaccedilatildeo desta substacircncia
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6 CONCLUSAtildeO
Conclui-se com este estudo que o organofosforado clorpirifoacutes nas doses
testadas de 05mgkgdia e 1mgkgdia natildeo teve influecircncia no sistema vestibular das
cobaias intoxicadas de forma aguda durante 10 dias pois os resultados da avaliaccedilatildeo
funcional atraveacutes da eletronistagmografia e da avaliaccedilatildeo morfoloacutegica por
microscopia eletrocircnica de varredura natildeo demonstraram diferenccedila para a frequecircncia
de aparecimento de nistagmos VACL e para o nuacutemero tufos ciliares nas maacuteculas
dos saacuteculos e utriacuteculos respectivamente
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REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
AFIFI AK BERGMAN RA Neuroanatomia Funcional texto e atlas 2ordf ed Satildeo Paulo Roca 2008p 354 ANVISA ndash Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Metodologias utilizadas para a realizaccedilatildeo de estudos toxicoloacutegicos Brasiacutelia 2009 Disponiacutevel em wwwanvisagovbr ARAUacuteJO AJet al Exposiccedilatildeo muacuteltipla a agrotoacutexicos e efeitos agrave sauacutede estudo transversal em amostra de 102 trabalhadores rurais Nova Friburgo RJCiecircnc sauacutede coletiva Rio de Janeiro vol12 nordm1 JanMar 2007 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophppid=S141381232007000100015ampscript=sci_arttextgt AZEVEDO K A A Neurotoxicidade perinatal por caacutedmio em ratos Wistar e interaccedilatildeo com clorpirifoacutes Tese de doutorado em Cliacutenica Veterinaacuteria UNESP 2009 BEAR MF CONNORS B W PARADISO MA Neurociecircncias DesvendandoSistema Nervoso 2ordf ed Porto Alegre Artmed 2002 p 350-395 BRASIL Decreto Nordm 4074 de 4 de janeiro de 2002 Regulamenta a Lei nordm 7802 Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03decreto2002d4074htmgt BRASIL Lei Federal nordm 7802 de 11 de julho de 1989 dispotildee sobre a pesquisa a experimentaccedilatildeo a produccedilatildeo a embalagem e rotulagem o transporte o armazenamento a comercializaccedilatildeo a propaganda comercial a utilizaccedilatildeo a importaccedilatildeo a exportaccedilatildeo o destino final dos resiacuteduos e embalagens o registro a classificaccedilatildeo o controle a inspeccedilatildeo e a fiscalizaccedilatildeo de agrotoacutexicos seus componentes e afins e daacute outras providecircncias Disponiacutevel em lthttpwwwplanaltogovbrccivil_03LeisL7802htmgt BULA PYRINEX 480 EC Disponiacutevel em lthttpwwwseabprgovbrarquivosFiledefisDFIBulasInseticidasPYRINEX_480_ECpdfgt DICK RB STEENLAND K KRIEG EF HINES CJ Evaluation of acute sensoryndashmotor effects and test sensitivity using termiticide workers exposed to chlorpyrifos Neurotoxicology and Teratology Vol 23 issue 4 July-August 2001 Pages 381-393 Disponiacutevelem lthttpwwwsciencedirectcomsciencegt
66
EMBRAPA ndash Empresa Brasileira de Pesquisas Agropecuaacuterias Normas gerais sobre o uso de agrotoacutexicos Sistemas de Produccedilatildeo no 7 setembro 2006 Disponiacutevel em lthttpsistemasdeproducaocnptiaembrapabrFontesHTMLArrozArrozTerrasAltasMatoGrossonormas_gerais_uso_agrotoxicoshtmgt ENDERLE MS Abordagem Fisioterapecircutica na reabilitaccedilatildeo Vestibular Monografia (Curso de Fisioterapia) ndash UNIOESTE ndash Cascavel 2004
FARIA NMX ROSA JAR FACCHINI LA Intoxicaccedilotildees por agrotoacutexicos entre trabalhadores rurais de fruticultura Bento Gonccedilalves RS Rev Sauacutede Puacuteblica Satildeo Paulo vol43 no2 Apr 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrpdfrsp2009nahead7200pdfgt
GANANCcedilA M M VIEIRA R M CAOVILLA H H Princiacutepios de Otoneurologia Volume 1 Satildeo Paulo Atheneu 1998 p1-3 23-43 GANANCcedilA M M MUNHOZ M S L CAOVILLA H H SILVA M L G Estrateacutegias Terapecircuticas em Otoneurologia Volume 4 Satildeo Paulo Atheneu 2000 GONCcedilALVES GMS Agrotoacutexicos sauacutede e ambiente na etnia Xukuru do Ororubaacute ndash Pernambuco Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) -Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz Centro de pesquisas Aggeu Magalhatildees Recife 2008 GUAZZELLI MJ Brasil o maior consumidor de agrotoacutexicos [Entrevista concedida IHU On-line Instituto HumanitasUnisinos ndash IHU da Universidade do Vale do Rio dos Sinos ndashUnisinos em Satildeo Leopoldo RS] Junho 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwecodebatecombr20090609brasil-o-maior-consumidor-de-agrotoxicos-entrevista-especial-com-maria-jose-guazzelligt GUODONG D PEI W YING T JUN Z YU G XIAOJIN W et al Organophosphate pesticide exposure and neurodevelopment in young Shanghai children EnvironSci Technol Mar 2012 46(5) 2911-7 GUYTON A C Tratado de Fisiologia Meacutedica 8 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 1992 p 583-548 HERDMAN S J Reabilitaccedilatildeo Vestibular 2ordf ed Barueri Manole 2002 p 3-24
67
HOSHINO ACH et al Estudo da ototoxicidade em trabalhadores expostos a organofosforadosRev Bras Otorrinolaringol Satildeo Paulovol74 no6 NovDez 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S003472992008000600015gt HOSHINO ACH et al A auto-percepccedilatildeo da sauacutede auditiva e vestibular de trabalhadores expostos a organofosforados Rev CEFAC 2009 Out-Dez 11(4)681-687 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophppid=S1516-18462009000800017ampscript=sci_abstractamptlng=pt KOumlRBES D Toxicidade de agrotoacutexico organofosforado no sistema auditivo perifeacuterico de cobaias estudo anatocircmico e funcional Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Distuacuterbios da Comunicaccedilatildeo Humana) UFSM 2009 KOumlRBES D SILVEIRA AF HYPPOLITO MA MUNARO G Ototoxicidade por organofosforados descriccedilatildeo dos aspectos ultraestruturais do sistema vestibulococlear de cobaias Braz J Otorhinolaryngol 201076(2)238-44 Disponiacutevel em lthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S1808-86942010000200015gt LISBOA R SENA J DUTRA T Uso de agrotoacutexicos na produccedilatildeo de hortaliccedilas da Bacia Hidrograacutefica do Natuba afluente do Tapacuraacute ndash PE e consequecircncias sobre o meio ambiente e sauacutede dos agricultores Artigo apresentado no II Congresso de Pesquisa e Inovaccedilatildeo da Rede Norte e Nordeste de Educaccedilatildeo Tecnoloacutegica Joatildeo Pessoa PB 2007 LOPES KC et al Manifestaccedilotildees Otoneuroloacutegicas do Acidente Vascular de Tronco Encefaacutelico O que o Otorrinolaringologista precisa saberActa ORL Satildeo Paulo v26 n2 p 89-93 AbrMaiJun ndash 2008 Disponiacutevel em lthttpwwwactaorlcombrdetalhe_artigoaspid=242gt MAGALHAtildeES MAS Exposiccedilatildeo A Agrotoacutexicos Na Atividade Agriacutecola Um Estudo De Percepccedilatildeo De Riscos Aacute Sauacutede Dos Trabalhadores Rurais No Distrito De Pau Ferro ndash Salgueiro ndash PE (Dissertaccedilatildeo) Mestrado Profissional em Sauacutede Puacuteblica do Centro de Pesquisa Aggeu MagalhatildeesRecife Fundaccedilatildeo Osvaldo Cruz 2010 MANJABOSCO C W MORATA T C MARQUES J M Perfil Audiomeacutetrico de Trabalhadores Agriacutecolas Arq Otorrinolaringol Satildeo Paulo v8 n4 p 285-295 2004 Disponiacutevel emlthttpwwwarquivosdeorlorgbrconteudoacervo_portaspid=293gt
68
Manual de Diagnoacutestico e Tratamento em Acidentes com Agrotoacutexicos ndash CITRS 2000 MARQUEZINI RMS Ototoxicidade vestibular provocada pelo uso sistecircmico de aminoglicosiacutedeos em cobaias [Dissertaccedilatildeo] Mestrado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 MARTIN JH Neuroanatomia Texto e atlas 2ordm ed Artes Meacutedicas Porto Alegre 1998 MINISTEacuteRIO DA AGRICULTURA PECUAacuteRIA E ABASTECIMENTO Disponiacutevel em lthttpwwwagriculturagovbrgt MORAES ACL Contribuiccedilatildeo para o estudo da intoxicaccedilatildeo humana por carbamatos o problema do ldquochumbinhordquo no Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo (Mestrado em Sauacutede Puacuteblica) - FIOCRUZ 1999 MENDES R Patologia do Trabalho Rio de Janeiro Athneu 1995 p 504 MOR R FRAGOSO M Vestibulometria na praacutetica fonoaudioloacutegica Pulso Editorial Satildeo Paulo 2012 MUNARO G SLEIFER P PEDROSO F S Anaacutelise da influecircncia do nistagmo espontacircneo e preacute-caloacuterico na Vectoeletronistagmografia Rev CEFAC Vol11 nordm 2 Satildeo Paulo AprJun 2009 Disponiacutevel emlthttpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S151618462009000200019gt NISHIDA S M Curso de Fisiologia Ciclo de Neurofisiologia Departamento de Fisiologia IB Unesp-Botucatu 2012 OLIVEIRA J A A CICILINI G A SOUZA M L ANDRADE M H Efeitos do aacutecido etacriacutenico sobre o sistema vestibular Rev Bras de Otorrinolaringol JanAbr 1979 45(1) p 8-16 PELEGRINO JR CALORE EE SALDIVA PHN ALMDEIDA VF PERES NM VLILELA-DE-ALMEIDA L Morphometric studies of specific brain regions of rats chronically intoxicated with the organophosphate methamidophos Ecotoxicol Environ Saf 200664(2)251-5
69
PEREZ NM CALORE EE VILELA-DE-ALMEIDA L NARCISO ES PUGA FR Aspectos morfoloacutegicos e morfomeacutetricos do ceacuterebro de ratos na intoxicaccedilatildeo crocircnica pelo organofosforado metamidofoacutes RevInst Adolfo Lutz 200665(1)50-3 PESSOcircA KS Avaliaccedilatildeo Otoneuroloacutegica Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica) ndash CEFAC Rio de Janeiro 1999 POPPER VM A Reabilitaccedilatildeo Vestibular na Vertigem Monografia (Especializaccedilatildeo em Audiologia Cliacutenica)CEFAC Itajaiacute 2001 QIAO D SEIDLER F J PADILLA S SLOTKIN T A Developmental Neurotoxicity of Chlorpyrifos What Is the Vulnerable Period Environmental Health PerspectivesVol110 nordm 11Nov 2002 Disponiacutevel em lthttpwwwncbinlmnihgovpmcarticlesPMC1241065gt QUILODRAacuteN J MIRANDA JP JIMEacuteNEZ L Efecto del agropesticida Ciper-metrina en dosis uacutenica intraperitoneal sobre el cerebelo del ratoacuten Int J Morphol2006245-113 SILVA J M SILVA E N FARIA H P PINHEIRO T M M Agrotoacutexico e trabalho uma combinaccedilatildeo perigosa para a sauacutede do trabalhador ruralCiecircncia e Sauacutede Coletiva 10(4)891-903 2005 Disponiacutevel em httpwwwscielobrscielophpscript=sci_arttextamppid=S141381232005000400013 SILVEIRA SCR Estreptomicina ndash ototoxicidade e autoproteccedilatildeo [Tese] Doutorado em Ciecircncias Meacutedicas Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo Paulo 2011 SINITOX - Sistema Nacional de Informaccedilotildees Toacutexico-Farmacoloacutegicas 2009 Disponiacutevel em lthttpwwwfiocruzbrsinitoxgt SOUZA JLNC O uso de agrotoacutexicos entre produtores de hortaliccedilas na localidade rural de Passo do Vigaacuterio ViamatildeoRS (Trabalho de Conclusatildeo de Curso) Graduaccedilatildeo Tecnoloacutegico em Planejamento e Gestatildeo para o Desenvolvimento Rural ndash PLAGEDER da Faculdade de Ciecircncias Econocircmicas Balneaacuterio Pinhal UFRGS 2011 TEIXEIRA CF AUGUSTO LGS MORATA TC Sauacutede auditiva de trabalhadores expostos a ruiacutedo e inseticidas Rev Sauacutede Puacuteblica200337(4)417-23Disponiacutevel emlthttpwwwscielosporgpdfrspv37n416775pdfgt
70
ZEIGELBOIM B Set alAvaliaccedilatildeo vestibular em crianccedilas com distuacuterbio de aprendizagemPediatria Moderna Nordm 5 SetOut2006 Disponiacutevel em lthttpwwwmoreirajrcombrrevistasaspfase=r003ampid_materia=3429gt
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ANEXOS
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Anexo A
Comprovante de aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal