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B i o c h e m . J . ( 1 9 8 8 ) 2 5 5 , 1 0 6 1 ( P r i n t e d i n G r e a t B r i t a i n )B U t t E 0 C L E T T E R SURSALiI-nATP a n d t h e b i n d i n g o f I 3 H l i n o s i t o l 1 , 4 , 5 -t r i s p h o s p h a t e t o i t s r e c e p t o r

T h e r e are now s e v e r a l r e p o r t s o f t h e s p e c i f i c r e v e r s i b l eb i n d i n g o f i n o s i t o l 1 , 4 , 5 - t r i s p h o s p h a t e ( I n s P 3 ) t o per-m e a b i l i z e d c e l l s or p a r t i c u l a t e p r e p a r a t i o n s o f s e v e r a lt i s s u e s [ 1 , 2 , 3 , 4 ] . I n some [ 1 , 2 , 3 ] , t h o u g h n o t a l l [ 4 ] , o ft h e s e p r e p a r a t i o n s , e q u i l i b r i u m d i s s o c i a t i o n c o n s t a n t s( K D ) f o r I n s P 3 b i n d i n g h a v e b e e n r e p o r t e d t o b e i n t h el o w n a n o m o l a r range, w h e r e a s e f f e c t i v e c o n c e n t r a t i o n st o r e l e a s e C a 2 " f r o m i n t r a c e l l u l a r s t o r e s , o f t e n f r o m t h esame p r e p a r a t i o n , are on e t o two o r d e r s o f m a g n i t u d eg r e a t e r . T h i s c o u l d s u g g e s t t h a t t h e b i n d i n g s i t e a n d s i t e sa s s o c i a t e d w i t h C a 2 + r e l e a s e are d i f f e r e n t or t h a t t h ec o n d i t i o n s o f t h e assays s u b s t a n t i a l l y a l t e r t h e b i n d i n ga f f i n i t y o f I n s P .

I n t h i s c o n t e x t we h a v e r e p o r t e d t h a t A T P , w h i c h i sg e n e r a l l y p r e s e n t i n m i l l i m o l a r c o n c e n t r a t i o n s i n C a 2 + -r e l e a s e assays, i n h i b i t e d t h e s p e c i f i c b i n d i n g o f [ 3 H ] I n s -( 1 , 4 , 5 ) P 3 t o a p a r t i c u l a t e s i t e p r e p a r e d f r o m r a t c e r e b e l l u m[ I C 5 0 ( c o n c e n t r a t i o n p r o d u c i n g 5 0%i n h i b i t i o n ) 5 1 / t M ][ 5 ] . S i n c e t h e s e s i t e s h a v e b e e n c h a r a c t e r i z e d f o r s t e r e o -a n d p o s i t i o n a l s p e c i f i c i t y and p o s s e s s q u a l i t a t i v e prop-e r t i e s i n t h i s r e s p e c t very s i m i l a r t o t h o s e a s s o c i a t e d w i t hC a 2 ' r e l e a s e [ 6 ] , we c o n s i d e r e d t h a t t h e d i f f e r e n c e i na p p a r e n t a f f i n i t y b e t w e e n t h e s y s t e m s c o u l d r e l a t e t o t h epresence o f ATP i n t h e C a 2 ' a s s a y s . I n h i b i t o r y e f f e c t s o fATP on I n s P 3 b i n d i n g h a v e b e e n c o n f i r m e d i n o t h e rs y s t e m s [ 1 , 3 ] , b u t a r e c e n t l e t t e r t o t h i s j o u r n a l [ 7 ]s u g g e s t e d t h a t t h i s i n h i b i t o r y e f f e c t was n o t r e l a t e d t oATP i t s e l f b u t t o some i m p u r i t y i n c e r t a i n p r e p a r a t i o n s .I n p a r t i c u l a r , i t was r e p o r t e d t h a t ATP f r o m P h a r m a c i a( t y p e 2 7 - 1 0 0 6 - 0 ) i s i n a c t i v e on I n s P 3 b i n d i n g t o p i t u i t a r ymicrosomes.U s i n g our c e r e b e l l a r membrane p r e p a r a t i o n , w h i c hh a s b e e n c a r e f u l l y e v a l u a t e d f o r s t e r e o - and p o s i t i o n a ls p e c i f i c i t y [ 5 ] , we h a v e f a i l e d t o r e p r o d u c e t h e s e r e s u l t s .F o r e x a m p l e , i n our h a n d s ATP ( S i g m a A 2 3 8 3 ) and ATP( P h a r m a c i a , t y p e 2 7 - 1 0 0 6 - 0 ) p r o d u c e s u p e r i m p o s i b l ei n h i b i t i o n curves a g a i n s t 1 5 n M - [ 3 H ] I n s ( 1 , 4 , 5 ) P 3 w i t h I C 5 0v a l u e s o f 7 . 9 ( + . 6 7 ) x 1 0 - Ma n d 7 . 6 ( 0 . 8 0 ) x 1 0 - M

r e s p e c t i v e l y . F u r t h e r m o r e , ATP p r e p a r a t i o n s f r o ms e v e r a l o t h e r c o m m e r c i a l s o u r c e s w e r e i d e n t i c a l i n t h i sr e s p e c t . AMP a n d ADP p o s s e s s e d I C 5 0 v a l u e s i n e x c e s so f 5x 1 0 - 3 M .I t i s n o t c l e a r why t h e s e d a t a d i f f e r f r o m t h o s e i np i t u i t a r y m i c r o s o m e s , o r i n d e e d i f t h e i n h i b i t i o n b y ATPi s c o m p e t i t i v e ; h o w e v e r , i t s t i l l r e m a i n s p o s s i b l e t h a t t h ed i s c r e p a n c y b e t w e e n t h e e f f e c t i v e n e s s o f I n s ( 1 , 4 , 5 ) P 3 i nr e l e a s i n g C a 2 " a n d i t s a f f i n i t y f o r r e c e p t o r b i n d i n g r e l a t e st o t h e p r e s e n c e o f g r e a t e r - t h a n - m i l l i m o l a r c o n c e n t r a t i o n so f ATP i n many o f t h e f o r m e r s y s t e m s . I n t h i s c o n t e x t i ts h o u l d b e n o t e d t h a t a v e r y r e c e n t r e p o r t [ 8 ] h a s s h o w nt h a t , i n t h e a b s e n c e o f A T P , I n s ( 1 , 4 , 5 ) P 3 c a n r e l e a s eC a 2 " f r o m i n t r a c e l l u l a r s t o r e s o f p e r m e a b i l i z e d r a t b a s o -p h i l i c l e u k a e m i c c e l l s i n a h i g h l y c o - o p e r a t i v e m a n n e r i nt h e 4 - 4 0 nm c o n c e n t r a t i o n r a n g e .A l a n L . WILLCOCKS a n d S t e f a n R . NAHORSKID e p a r t m e n t o f P h a r m a c o l o g y a n d T h e r a p e u t i c s , U n i v e r s i t y o fL e i c e s t e r , P . O . B o x 1 3 8 , M e d i c a l S c i e n c e s B u i l d i n g , U n i v e r s i t yR o a d , L e i c e s t e r LEI 9HN, U . K .

1 . G u i l l e m e t t e , G . , B a l l a , T . , B a u k a l , A . J . & C a t t , K . J .( 1 9 8 7 ) P r o c . N a t l . A c a d . S c i . U . S . A . 8 4 , 8 1 9 5 - 8 1 9 92 . S p a t , A . , B r a d f o r d , P . G . , M c K i n n e y , J . S . , R u b i n , R . P . &P u t n e y , J . W. ( 1 9 8 6 ) N a t u r e ( L o n d o n ) 3 1 9 , 5 1 4 - 5 1 63 . G u i l l e m e t t e , G . , B a l l a , T . , B a u k a l , A . J . & C a t t , K . J .( 1 9 8 8 ) J . B i o l . C h e m . 2 6 3 , 4 5 4 1 - 4 5 4 84 . W o r l e y , P . F . , B a r a b a n , J . M . , C o l v i n , J . S . & S n y d e r ,S . H . ( 1 9 8 7 ) N a t u r e ( L o n d o n ) 3 2 5 , 1 5 9 - 1 6 15 . W i l l c o c k s , A . L . , C o o k e , A . M . , P o t t e r , B . V . L . & N a h o r -s k i , S . R . ( 1 9 8 7 ) B i o c h e m . B i o p h y s . R e s . Commun. 1 4 6 ,1 0 7 1 - 1 0 7 86 . S t r u p i s h , J . , C o o k e , A . M . , P o t t e r , B . V . L . , G i g g , R . &N a h o r s k i , S . R . ( 1 9 8 8 ) B i o c h e m . J . 2 5 3 , 9 0 1 - 9 0 57 . E b e r h a r d t , I . , K i e s e l , L . & S p a t , A . ( 1 9 8 8 ) B i o c h e m . J . 2 5 0 ,3 1 18 . M e y e r , T . , H o l o w k a , D . & S t r y e r , L . ( 1 9 8 8 ) S c i e n c e 2 4 0 ,6 5 3 - 6 5 6

R e c e i v e d 2 8 J u l y 1 9 8 8

V o l . 2 5 5

1 0 6 1