2. técnica histologica

TECNICA HISTOLOGICA

Dra. Isabel García Peláez

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO

FACULTAD DE MEDICINA

DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA CELULAR Y TISULAR

jueves 8 de agosto de 2013

TOMA DE MUESTRA

Cadáver. NECROPSIA

Persona viva

CITOLOGIA EXFOLIATIVA: se toman células que fácilmente se descaman

BIOPSIA: se toma una muestra de tejido

POR PUNCION: se toma con una aguja que se clava en la lesiónINCISIONAL: se toma con instrumental quirúrgico parte de la lesión

EXCISIONAL: se extrae toda la lesión y se toman muestras


TECNICA HISTOLOGICA PARA LA MICROSCOPIA OPTICA


FIJACION DE LA MUESTRA

•La fijación es esencialmente un método para la preservación de la morfología y composición química de la célula.

•La fijación detiene el metabolismo celular y evita la autólisis.•Los fijadores son de dos tipos

§Físicos: Congelación§Químicos: El fijador químico más utilizado es el formaldehído. El formaldehido es un gas que se presenta para su uso diluido al 37 % en agua, y esta dilución se le denomina formol o formalina. Para la fijación las muestras se sumergen en formol al 10% en agua.


INCLUSION EN PARAFINA

1. EXTRACIÓN DEL FIJADOR. Se lava la muestra con agua.

2. DESHIDRATACION. Se sumerge la muestra en etanol comenzando por concentraciones bajas hasta llegar a etanol absoluto.

3. ACLARAMIENTO. Se sumerge la muestra en xileno

4. INFILTRACION. Se sumerge la muestra en parafina líquida

5. INCLUSION. Se sumerge la muestra infiltrada en un molde lleno de parafina líquida y se deja enfriar. La muestra queda incluida en un bloque de parafina.


INCLUSION EN PARAFINA


CORTES EN PARAFINA

• El bloque de parafina se coloca en un microtomo.

• En el microtomo el bloque se desliza por una cuchilla de acero y así se obtiene el corte de la muestra.

• Los cortes se extienden en un baño de flotación con agua caliente y se recogen en un portaobjetos


CORTES EN PARAFINA


CORTES POR CONGELACION

• El tejido fijado con formol o no, dependiendo de la técnica, se congela.

• En este caso se puede cortar directamente sin necesidad de incluirlo en parafina.

• Los cortes se realizan en un aparato que es el criostato y se corta de la misma forma que en parafina pero en frío.

• En el cristato la muestra congelada se desliza por una cuchilla de acero y así se obtiene el corte de la muestra.

• Los cortes se recogen directamente con el portaobjetos


CORTES POR CONGELACION


TINCION

1. DESPARAFINACION. Se realiza con xileno.2. HIDRATACION. Se realiza con etanol desde etanol absoluto,

pasando por soluciones menos concentradas hasta llegar al agua pura.

3. TINCIÓN. Con diferentes colorantes. 4. DESHIDRATACION. Con concentraciones crecientes de

etanol. 5. ACLARAMIENTO. Con xileno.6. MONTAJE. Con resinas naturales o sintéticas.

CORTES EN PARAFINA. Los portaobjetos en los que están adheridos los cortes infiltrados en parafina se sumergen en diferentes líquidos para realizar la tinción y completar la preparación de la muestra.


TINCION


TINCIONCORTES POR CONGELACION.

•Los cortes por congelación se utilizan cuando se necesita hacer un diagnóstico rápido como en una biopsia intraoperatoria, o para no alterar determinadas moléculas con los solventes o el calor como en algunas técnicas de: histoquímoica, histoquímica enzimática o inmunohistoquímica. • Los cortes no están infiltrados en parafina y están hidratados por lo que pueden pasar directamente a los colorantes.•El resto de la técnica es semejante a la de los cortes en parafina.


TINCION

HEMATOXILINA/EOSINA

•Se utilizan dos colorantesvLa HEMATOXINA que es un colorante “BASICO”, de color morado, que tiñe moléculas o estructuras ACIDAS que se denominan BASOFILASvLa EOSINA que es un colorante ACIDO, de color rosa anaranjado, que tiñe moléculas o estructuras BASICAS que se denominan ACIDOFILASvEl núcleo de las células se tiñe con HEMATOXILINA y el citoplasma con EOSINA. Estructuras basófilas del citoplasma como los ribosomas y el retículo endoplásmico rugoso también se tiñen con HEMATOXILINA


HEMATOXILINA / EOSINA


TINCION

TRICROMICOS

•TRICROMICO DE MASSON. vNúcleo. Morado/cafévCitoplasma y fibras musculares. RojovFibras de colágena. Azul

•TRICROMICO DE GALLEGO.vNúcleo. Morado/cafévCitoplasma y células musculares. Verde clarovFibras de colágena. Verde obscuro


TRICROMICO DE MASSON

TRICROMICO DE GALLEGO


WRIGHT


IMPREGNACIONES METALICAS


TINCION

METACROMASIA. Es el cambio del color original del colorante al unirse a un determinado compuesto. Es por la unión de varias moléculas de un colorante básico que al unirse a una molécula polianónica (muchas cargas negativas) cambia su color.

AZUL DE TOLOUIDINA


HISTOQUIMICA

Mediante la histoquímica se localizan determinados compuestos químicos en la célula o el tejido


HISTOQUIMICA

PAS• Esta técnica se utiliza para la localización de

macromoléculas ricas en carbohidratos: Glucógeno o glucoproteínas

• Se utiliza§ Acido peryodico : PA§ Reactivo de Shiff: S

• Cuando estás moléculas están presentes se tiñen de e color rosa fucsia y se dice que son PAS+


HISTOQUIMICA DE CARBOHIDRATOSPAS

MUCICARMIN DE MAYER CARMIN DE BEST


HISTOQUIMICA

FEULGEN• Esta técnica se utiliza para la localización del ADN. • Se utiliza§ Hidrólisis suave § Reactivo de Shiff

• El ADN se tiñe de color rosa fucsia

METODO DE FEULGEN


HISTOQUIMICA

DETERMINACION DE LIPIDOS• Las muestras se fijan con formol• Los cortes se hacen por congelación• La coloración se puede

realizar con

ROJO OLEOSO: TriglicéridosSUDAN ROJO: TriglicéridosSUDAN NEGRO: LipoproteínasTETRAOXIDO DE OSMIO: Lípidos en general

TETRAOXIDO DE OSMIO


HISTOQUIMICA ENZIMATICA

• Se utiliza para la localización de enzimas específicas en células y tejidos

• Las muestras se fijan con fijadores químicos débiles o se congelan directamente

• Los cortes se hacen por congelación

ATPasa PEROXIDASA


INMUNOCITOQUÍMICA

• Es la técnica que permite la localición de moléculas específicas como proteínas.

• La localización es porque estas moléculas se unen específicamente a un anticuerpo al que se le ha unido:

• Un fluorocromo: INMUNOFLOURESCENCIA

• Una enzima: INMUNOHISTOQUÍMICA ENZIMÁTICA.


INMUNOFLUORESCENCIA


INMUNOHISTOQUÍMICA ENZIMATICA

INMUNOFLUORESCENCIA

anti-Insulina anti-Vimentina

anti-tubulina anti-Citomegalovirus


2. técnica histologica

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