100 años de cultivos celulares
TRANSCRIPT
![Page 1: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/1.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Introducción a los Cultivos Celulares
![Page 2: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/2.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Un poco de historia
• 1880-1910: Primeros ensayos de sobrevida de células fuera de organismos enteros (Roux, Haberlandt, etc.)
• 1912: Burrows y Carrel establecen las primeras líneas celulares. Desarrollan técnicas asépticas de trabajo y material específico
![Page 3: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/3.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Un poco de historia
• 1920-1940: Se establecen líneas celulares de diversos órganos animales• 1940-1955:
– Se replican virus sobre células cultivadas– Se producen las primeras vacunas virales en cultivos celulares– Se definen las condiciones para congelar células en nitrógeno líquido (Alan
Parks, 1949)– Se establece la línea HeLa (1ª de origen humano, 1952)– Se desarrollan los primeros medios de cultivo químicamente definidos– Se cultivan las primeras células de insectos
![Page 4: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/4.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Un poco de historia
• 1960’s: Se desarrollan las técnicas de hibridización en cultivos• 1970’s:
– Los cultivos celulares se incorporan a la ingeniería genética– Desarrollo de grandes reactores de cultivos en suspensión
• Reciente:– Modificación genética controlada de células– Desarrollo de medios de cultivo libres de suero– Desarrollo de medios de cultivo libres de componentes animales
![Page 5: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/5.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Cultivos celulares
• Propagación de células fuera del organismo de origen
• Pueden ser de origen vegetal o animal, y dentro de éstas, pueden provenir de distintos tejidos de vertebrados o invertebrados
• Los cultivos celulares producen clones, por lo que todas las células de un cultivo poseen el mismo genotipo, excepto que se produzcan mutaciones durante el proceso
![Page 6: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/6.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
¿Para qué cultivar células in vitro ?
• Investigación– Comprender la fisiología celular– Toxicología, virología, etc.
• Ingeniería de tejidos– Piel, hígado– Hueso y cartílago
• Producción de biológicos– Anticuerpos monoclonales– Hormonas (FSH)– Enzimas– Vacunas virales (polio, aftosa, parvo, moquillo, etc.)
![Page 7: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/7.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Ventajas• Un solo tipo bien definido de células en cada cultivo• Fácil de manipular, condiciones controladas• Establecimiento de líneas internacionales de fácil
acceso• Alternativa al uso de animales
– Sistema para estudiar principios fisiológicos– Chequeo posterior en un número reducido de animales
• Pueden obtenerse grandes cantidades de células• Permite trabajar en pequeña, media y gran escala• Las células pueden mantenerse congeladas por
largos períodos de tiempo con mínima pérdida de viabilidad
![Page 8: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/8.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Sin embargo...
• Cuidado que no son animales enteros– Las células no están organizados en verdaderos
tejidos– No hay interrelación con otros tejidos– El comportamiento es distinto a la organización
tridimensional• El entorno es distinto• Las condiciones de crecimiento son distintas• Las conclusiones de los ensayos deben ser
debidamente acotadas
![Page 9: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/9.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Componentes de un cultivo
CÉLULAS
![Page 10: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/10.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Tipos de cultivo• Cultivo primario: células, tejidos u órganos tomados
directamente de un animal.• Cultivo de órganos, explantes: mantenimiento de
órganos o parte de órganos in vitro.• Cultivo de tejidos: mantenimiento de tejidos in vitro.• Cultivo de células: mantenimiento de células dispersas.• Líneas celulares: células mantenidas por subcultivos
sucesivos comenzando por un cultivo primario.• Cultivos continuos: células que han logrado sobrevivir a
muchos subcultivos. Expectativa de vida “infinita”.
![Page 11: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/11.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Líneas celulares continuas: algunos ejemplos
• BHK: Fibroblastos de riñón de hamster sirio dorado• CrFK: Fibroblastos de riñón de gato doméstico• MDCK: Epitelio de riñón canino (Cocker Spaniel)• CHO: Epitelio de ovario de hamster chino• VERO: Fibroblastos de riñón de mono verde africano• HeLa: Epitelio tumoral de cuello uterino humano• MDBK: Epitelio de riñón de bovino adulto• HUVEC: Endotelio de vena umbilical humana• FHBE: Endotelio de corazón fetal bovino• Etc., etc., etc.
![Page 12: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/12.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Colecciones internacionales más importantes
Sigla Nombre u organismo Ciudad, país Nº de cultivos
ATCC American Type Culture Collection
Human and Animal CellCultures
European Collection of CellCultures
Istituto Giannina Gaslini
Minassas, USA
DSMZ Braunschweig, Alemania
≈500
ECACC Salisbury, Wiltshire, UK
≈1000
GEIMM
≈800
Genova, Italia ≈2300
Fuente: www.biotech.ist.unige.it/cldb/indexes.html
![Page 13: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/13.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Banco de células español
• El Banco Nacional de Líneas Celulares se configuracomo una estructura en red con varios nodoscoordinados por un central, que tendrá como objetivogarantizar en todo el territorio nacional la disponibilidadde líneas de células troncales humanas embrionarias y adultas para la investigación biomédica.
• El Banco de Líneas Celulares está adscrito a la Subdirección General de Investigación en TerapiaCelular y Medicina Regenerativa del Instituto de SaludCarlos III,
• Link a la Web del Banco Nacional de Células:– http://www.cultek.com/link/link.asp?link=http://www.isciii.es/htdoc
s/terapia/terapia_bancocelular.jsp
![Page 14: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/14.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
SOPORTE
Componentes de un cultivo
CELULAS
![Page 15: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/15.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Soporte
• Líquido: Células en suspensión
![Page 16: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/16.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Bioreactores
![Page 17: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/17.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Soporte
• Sólido: Células adheridas a superficies plásticas, membranas, polímeros, vidrio etc.
![Page 18: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/18.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Otros soportes de Cultivo
![Page 19: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/19.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
SoporteTitulación de virus en microplacas con tinción final
![Page 20: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/20.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Soporte
• Superficies cubiertas con sustancias que favorecen el crecimiento celular
![Page 21: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/21.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Microcarriers
![Page 22: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/22.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Extraído de “From Space to the Clinical Bedside”
En Internet: slsd.jsc.nasa.gov/bso/resources/ lectures/npLectureMechCulture.pdf
![Page 23: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/23.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
FASE GASEOSASOPORTE
Componentes de un cultivo
CELULAS
![Page 24: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/24.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Fase gaseosa
• La concentración de oxígeno necesaria depende de los requisitos de las células
• La concentración de dióxido de carbono depende de la capacidad buffer del medio de cultivo
• Usualmente el equilibrio dióxido de carbono (en la fase gaseosa) - bicarbonato (en la fase líquida) actúa como buffer del cultivo
![Page 25: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/25.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Materiales
FASE GASEOSASOPORTE
Componentes de un cultivo
CELULAS
![Page 26: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/26.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Medios de cultivo celularesCUALIDADES:
• Específico para la célula a cultivar• Nutritivo• pH adecuado• Capacidad buffer• Isotónico• Estéril
![Page 27: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/27.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Componentes de los medios de cultivo
• Agua• Sales• Glucosa• Ácidos grasos• Vitaminas• Suero• Péptidos
• Micro y oligoelementos• Aminoácidos esenciales• Factores de crecimiento• Otro regulador de pH• Indicador de pH• Antiespumante• ¿Antibióticos?
![Page 28: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/28.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Organización de un subcultivo
• El objetivo de un subcultivo (pasaje) es mantener las células en condiciones de replicación normal.
• En el subcultivo se renueva el medio de cultivo y se lleva la relación células/medio/superficie de soporte, a la inicial.
• Las células adheridas a soportes sólidos deben ser primero despegadas de este soporte y separadas enzimáticamente (tripsina). Luego se resuspenden, se tiñen con colorante vital (Azul Tripan) y se cuentan en cámara de Neubauer.
• Si se parte de un cultivo de células en suspensión directamente se procede a contar las células.
![Page 29: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/29.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Organización de un sub-cultivo• Una vez conocida la concentración de células
en el material de origen, se definen las condiciones del subcultivo deseado y se realiza el pasaje.– Ejemplo
• Material de origen: 2x106 cél/ml• Destino: tres botellas de 175 cm2 con una concentración
inicial de 35000 cél/cm2
• Necesidad: 3 x 175 x 35000 = 1.8x107 células• 1.8x107 células / 2x106 cél/ml = 9 ml ( 3 ml / botella )
![Page 30: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/30.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Factores críticos
• Suero:– Ventajas: Gran aporte de nutrientes básicos,
proteínas, factores de crecimiento, hormonas, promotores de adhesión, inhibidores enzimáticos, etc.
– Desventajas: Composición indefinida, variabilidad entre lotes, interferente en procesos de purificación de proteínas, interferente en procesos de multiplicación viral, vehículo de entrada de contaminaciones, etc.
![Page 31: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/31.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Factores críticos
• Temperatura de cultivo: depende del origen de las células. Mamíferos: 37ºC, peces e insectos: 18-22ºC, aves: 38.5ºC, etc.
• Contaminaciones: gran complicación en los laboratorios de cultivos celulares, principalmente a escala industrial. Pueden ser por levaduras, hongos miceliares, virus, bacterias, micoplasmas, otras células, etc.
![Page 32: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/32.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Factores críticos no biológicos
• Orden• Limpieza• Higiene personal• Vigilancia microscópica• Estudio adecuado de los problemas• Análisis de problemas potenciales• Trazabilidad de los cultivos• Protocolización exhaustiva
![Page 33: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/33.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Equipamiento
• Además del equipamiento usual de cualquier laboratorio, se requiere:– Microscopio invertido– Cámara de conteo de células– Flujo laminar de características adecuadas al trabajo a
desarrollar– Sistema de filtración esterilizante de soluciones, líquidos y
medios de cultivo– Material de soporte estéril– Espacio frío de 4, -20, -75 y –196ºC– Estufas de cultivo con o sin atmósfera de CO2
![Page 34: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/34.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Materiales
FASE GASEOSASOPORTE
Componentes de un cultivo
CELULAS
Catálogo
![Page 35: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/35.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Medios de cultivo
• Medios para Cultivo Celular– Hyclone, pinche aquí– Biochrom, pinche aquí.
![Page 36: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/36.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Agitación(pinche sobre imagen)
![Page 37: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/37.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Cabinas de flujo laminar (pinche sobre imagen)
![Page 38: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/38.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Incubadores de CO2 (pinche sobre imagen)
![Page 39: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/39.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Manejo de líquidos(pinche sobre imagen)
![Page 40: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/40.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Materiales
FASE GASEOSASOPORTE
CELULAS
Catálogo Aplicacionesactuales
![Page 41: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/41.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Hibridomas: producción Anticuerpos Monoclonales(pinche sobre imagen)
![Page 42: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/42.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Celulas Madre (Stem Cells)(pinche sobre imagen)
![Page 43: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/43.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Fertilización In Vitro(pinche sobre imagen)
![Page 44: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/44.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Soporte técnico(pinche sobre imagen)
• Manuales• Protocolos• Referencias• Guías de ususario• Artículos técnicos
![Page 45: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/45.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Nuestras marcas
![Page 46: 100 años de Cultivos Celulares](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022081802/58a308371a28ab8e608c34c8/html5/thumbnails/46.jpg)
100 años de Cultivos Celulares www.cultek.com
Seminarios conmemorativos del Centenario de las técnicas de Cultivo Celular
Seminarios conmemorativos del Centenario de Cultivos Celulares(pinche para ver el programa)