1.- leucemias agudas i
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LEUCEMIAS AGUDAS, CLASIFICACION, DIAGNOSTICO, TRATAMIENTO Y APORTACION DE LAS NUEVAS TECNICAS DIAGNOSTICAS.
Ana Maria Gómez García
FIR 3º año Análisis Clínicos
CANCERES INFANTILES
LEUCEMIAS
LINFOBLASTICAS
AGUDASExpansión clonal de precursores hematopoyeticos
CRONICASExpansión de elementos maduros de MO
MIELOBLASTICAS
80% L.infantiles son LLA
15% son LMA
Restantes son indiferenciadas o cronicas(LMC, LMMC JUVENIL)
LEUCEMIAS AGUDAS EN LA INFANCIA
ANTECEDENTES HISTORICOS
� Virchow, 1845
� Ehrich, 1891 Citoquimica
� Farber, 1948 empleo Aminopterina
ESTRATEGIAS DE ESTUDIO DE LAS L.A:
L.A.
CLINICA
DATOS LABORATORIO
MORFOLOGIA
INMUNOFENOTIPO
CITOGENETICAFISH
BIOLOGIA MOLECULAR
Complejo diagnostico de las Leucemias en la Actualidad.
METODOS DE LABORATORIO PARA CARACTERIZAR BLASTOS LEUCEMICOS:
DEFINICION LEUCEMIA
� Proliferación neoplásica a partir de una célula hematopoyética inmadura que ha perdido la capacidad de diferenciarse.
� Disminución del tejido hematopoyetico normal en MO y posterior invasión de sangre periférica y otros órganos.
� Enfermedad oncológica más frecuente diagnosticada en menores de 15 años.
ETIOLOGIA
� La mayoría carecen de etiología clara� Factores predisponentes:� Factores genéticos� Anomalías cromosómicas� Inmunodeficiencias congénitas� Radiaciones ionizantes� Fármacos mielotóxicos.� Enfermedades inmunológicas� Virus
CLINICA
� SINTOMAS CONSTITUCIONALES : astenia, debilidad, perdida peso, sudoración nocturna.
� SINTOMAS POR INFILTRACION DE LA MO:
- desplazamiento serie roja : Anemia ( palidez)
- desplazamiento serie blanca : Fiebre (50%), infecciones 2ª a neutropenia.
- desplazamiento serie plaquetar : diátesis hemorrágicas
(petequias, sangrado) por la plaquetopenia.
CLINICA� SINTOMAS POR INFILTRACION DE ALGUN
ORGANO O TEJIDO:1. - 50-80% hepatoesplenomegalia2. - linfoadenopatias3. - 40% niños dolor óseo o articular4. - hipertrofia gingival5. - infiltración piel, mediastino y SNC (5-7% de
niños con L.A.)
DATOS DE LABORATORIO
� 95% Anemia normocítica, normocrómica y arregenerativa ( ret )
� Neutropenia.
� 90% Trombocitopenia.
� 16% carecen de blastos en SP.
El compromiso de 2 o mas series hematopoyeticas
MIELOGRAMA
CARACTERISTICAS SERICAS
� LDH elevada : Se correlaciona con la masa tumoral y la gravedad de la enfermedad
� Otras menos frecuentes� Hipercalcemia� Hiperuricemia� Aumento de transaminasas� Uremia
FROTIS SANGUINEO NORMAL
LINFOCITO
NEUTROFILO
MONOCITO
PLAQUETAS
AUTOANALIZADOR : ADVIA 120SISTEMA AUTOMATIZADO PARA ESTUDIO DEL HEMOGRAMA
ADVIA 120: AUTOANALIZADOR HEMATOLOGICO
� Autoanalizador por citometria de flujo.� Tres sistemas analíticos:1Citómetro de flujo con lámpara diodo laser para canales: RBC/PLAQBASOLOBULARIDADRETICULOCITOS
2.Citometro de flujo con lámpara tungsteno para canal de PEROXIDASA.
3.Colorimetro para medir HEMOGLOBINA.
Autoanalizador hematologico:Graficas serie blanca
tamaño
mieloperoxidasa Complejidad nuclear
Graficas serie roja
CONCENTRACION DE Hb
TAMAÑO
Serie plaquetar VOLUMEN
DENSIDAD
HEMOGRAMA AUTOMATIZADO DE SANGRE NORMAL
DIAGNOSTICO DIFERENCIAL
� Reacciones leucemoides linfocitarias: mononucleosis infecciosa, Bordetella Pertussis….
� Hiperplasia linfoide madura en niños< 2 años.
� Otros: Anemia aplasica, linfoma, neuroblastoma, síndromes hemorrágicos (purpuratrombocitopenica aguda), síndrome mielodisplasico…
MONONUCLEOSIS INFECCIOSA
�
MANUAL
AUTOMATIZADO
Atipias linfocitarias
LEUCEMIA AGUDA VISTA AL M.OPTICO
BLASTOS
LEUCEMIA AGUDA (SISTEMA AUTOMATIZADO:
LEUCEMIAS AGUDAS.CLASIFICACION FAB
British Journal of Hematology, 1976 Aug ; 33(4): 451-8
Proposals for the Classification of the Acute Leukaemias
FRENCH-AMERICAN-BRITISH (FAB) CO-OPERATIVE GROUP
Bennett JM , Catovsky D, Daniel MT , Flandrin G, Galton DA, Gralnick HR, Sultan C,
Accepted for publication 26 January 1976
PROBLEMAS CON LA CLASIFICACION FAB:
•No todas las L. Agudas tienen 30% blastos (traslocaciones especificas).
•Excluye leucemias bifenotipicas.
•No incluye L. multilínea u otras poco frecuentes
•Excluye información esencial para tto y pronostico.
CLASIFICACION MORFOLOGICA
FAB (1976)
MIELOBLÁSTICA
M0 minimamente diferenciadaM1 Sin maduraciónM2 Con maduraciónM3 promielociticaM4 mielomonociticaM5 monoblásticaM6 eritroleucemiaM7 megacarioblástica
LINFOBLÁSTICA
L1L2L3
Tamaño celularMorfología NuclearNucleolosBasofilia citoplasmáticaVacuolas citoplasmáticas
L1: cels pequeñas
L2: cels pequeñas y grandes
L3: tipo Burkitt.
LEUCEMIA AGUDA CLASIFICACION OMS ( 2001)
� L.MIELOIDES AGUDAS� L.LINFOIDES AGUDAS
� L.MIELOIDE CRONICA� L.LINFATICA CRONICA
De precursor de cel B
De precursor de cel T
De Burkit
LEUCEMIA AGUDA CLASIFICACION OMS ( 2001)
CLASIFICACION OMS:
L. AGUDA 20% BLASTOS
MORFOLOGIA GENETICA FENOTIPO
EGIL (1995)Mas usada
LINFOBLASTICAS AGUDAS
BIFENOTIPICAS AGUDAS
MIELOBLASTICAS AGUDAS
CLASIFICACION INMUNOFENOTIPICA
SCORE INMUNOFENOTIPICO DE LAS LEUCEMIAS BIFENOTIPICAS
Paneles de anticuerpos monoclonales empleados para el estudio inicial de las LAs (FITC/ PE/ ECD/ PC5/ PC7)
ESTUDIO INICIAL DE LA LEUCEMIA. ESTUDIO INICIAL DE LA LEUCEMIA. CITOMETRIA DE FLUJOCITOMETRIA DE FLUJO
cMPO/ cCD79a/ CD45/ cCD3nTdT/ cIgM/ CD45/ CD34CD45/ CD4/ CD8/ CD3/ CD19CD10/ CD20/ CD45/ CD34/ CD19CD38/ CD22/ CD45/ HLADR/ CD19CD15/ CD13/ CD45/ CD33/ CD19KOR-SA/ 7.1/ CD45/ CD24/ CD19IP (DNA)/ pan-B
cMPO/ cCD79a/ CD45/ cCD3nTdT/ cIgM/ CD45/ CD34CD45/ CD4/CD8/ CD3/ CD19CD7/ CD34/ CD3/ HLADR/ CD5CD7/ CD1a/ CD45/ CD33/ CD56CD7/ CD13/ CD45/ CD10/ CD2CD38/ TCRαβ/ CD45/ TCRγδ/ CD3
LLA de fenotipo B LLA de fenotipo T
INMUNOFENOTIPOS LEUCÉMICOS
LMA
cMPO/ cCD79a/ CD45/ cCD3nTdT/ cIgM/ CD45/ CD34CD45/ CD4/ CD8/ CD3/ CD19CD15/ CD13/ CD45/ CD33/ CD34CD7/ CD117/ CD45/ CD34/ CD56CD65/ CD135/ CD45/ CD2/ CD34CD64/ CD11b/ CD45/ CD14/ CD16HLADR/ CD235a/ CD45/ CD34/ CD41
LLA DE FENOTIPO B LLA DE FENOTIPO T LMA
LEUCEMIAS 2001-2005
LINFOIDES
MIELOIDES
LEUCEMIA TLEUCEMIA B
75% LINFOIDES
MIELOIDES 25%
LEUCEMIAS NIÑO JESUS 2005
MIELOIDE M5
LMMJ
LMC
MIELOIDE M4
MIELOIDE M3
MIELOIDE M0
LLA T PRO TLLA T
INTERMEDIA
LLA PROB
LLA B PROB-PREB
MIELOIDE M0 CD56+
LLA B COMUN
MIELOIDESLINFOIDES
LEUCEMIAS LINFOBLÁSTICAS AGUDAS B (EGIL):
SUBTIPOS MARCADORES INMUNOLOGICOS
LAL B1 o pro-B
CD79a+ y/o CD 22+ y/o CD19+,CD34+
LAL B2 o comun
CD79a+ y/o CD 22+ y/o CD19+,CD34±CD 10+
LAL B3 o pre- B
CD79a+ y/o CD 22+ y/o CD19+,
Cad µintracitoplasmatica
LAL B4 o maduros
CD79a+ y/o CD 22+ y/oCD19+,Ig Sup+
TdT +
CD34+
CD19+
CD22+
TdT+
CD34+/-
CD19+
CD22+
CD10++
IgM+
CD20++
CD19+
CD22+
CD10 +d
IgM+
Ig super+
CD20++
CD19+
CD22++
CD10+/-
5%
60%
15%
3%
FRECUENCIA
LEUCEMIAS LINFOBLÁSTICAS AGUDAS T (EGIL):
SUBTIPOS MARCADORES INMUNOLOGICOS
LAL T1 o pro-T
+ CD 7 Y CD3 citoplasmático, CD34+
LAL T2, pre-T
A lo anterior añadir + CD 2 y/o CD 5 y/o
CD8.
LAL T3, tímico-cortical
+ CD1a
LAL T4, madura
Demostración de la existencia de CD 3 de sup en ausencia de CD 1a.
TdT+
CD3+
CD34 +
CD7+
TdT+
CD3+
CD8+
CD5+
CD7+CD2+
TdT +
CD3+
CD2
CD5
CD7
CD4+
CD8+
CD1a+
TdT+
CD2+
CD5+
CD7+
CD3+
CD4 o
CD8
FRECUENCIA
15%
MASFRECUENTE
LEUCEMIAS LINFOBLASTICAS T
� Menos frecuentes ( 15% LAL pediátricas).� Mas agresivas (30% recaen a los dos
años).� Menos caracterizadas citogeneticamente
(25-50% presentan cariotipos alterados).� Menos información pronostica.� Ttos menos específicos.
CLASIFICACION INMUNOLOGICA-MORFOLOGICA
TIPO inmunolog
TdT HLADR
CD10CALLA
CD3 CD1a
CD7 CD2CD5CD8
CD19 CIg SIg Tipo
FAB
proB + + - - - - - + - - L1L2
COMUN + + + - - - - + - - L1L2
PreB + + ± - - - - + + - L1L2
B NEG + ± - - - - + - + L3
ProT + - ± +cit - + - - - - L1L2
PreT + - ± +cit - + + - - - L1L2
TIMICO CORTICAL
+ - - +cit POS + + - - - L1L2
TIMICO MADURO
- - - +sup NEG + + - - - L1L2
1. DIAGNOSTICO
2. TRATAMIENTO
3. TRANSPLANTE
4. EMR
LEUCEMIAS AGUDAS
COMO SE REALIZA UN DIAGNOSTICO?
� ANALIZADORES AUTOMATICOS.
� EXTENSION DE SANGRE PERIFERICA.
� EXTENSIONES DE MEDULA OSEA
� CITOQUIMICA DE EXTENSIONES MO.
� CITOMETRIA DE FLUJO DEL ASPIRADO DE MEDULA OSEA PARA TIPIFICAR LA LEUCEMIA
� CITOGENETICA Y BIOLOGIA MOLECULAR
FROTIS NORMAL MO
megacariocito
eritroblastos
MO PATOLOGICA
LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA LEUCEMIA LINFOIDE AGUDA
CONTRIBUCION DE LA CITOQUIMICA AL DIAGNOSTICO HEMATOLOGICO� La citoquímica estudia la composición qca. de las
células y hace posible detectar y precisar la localización de algunos principios inmediatos, enzimas y sust.inorgánicas (metales pesados).
� Compuestos:� Carbohidratos: reacción del ác peryódico de Shiff
o reacción del PAS.� Enzs oxidantes: reacción de las peroxidasas.� Enzs hidrolíticas: fosfatasas alcalinas, ácidas, ß-
glucuronidasa, muramidasa, N-acetil- ß-glucosaminidasa, esterasas inespecíficas.
� Componentes inorgánicos: hierro⇒azul de Prusia o de Perls.
CITOQUIMICA
Tipos FAB L1 L2 L3 MO M1 M2 M3 M4 M5 M6
PAS + GRANO
+ GRANO
- +
MPX - - - - + ++ +++ ++ -+ -
P acida +T +T -
Cloroacetatoesterasa
- - - - -+ ++ +++ -+ - -
ANAE
(� naftol acetato
estarasa)
+T +T - - - - - + ++ -
FOTOS CITOQUIMICA
ANAEPAcida
PAS
MPX
GRACIAS