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Fernando Requena Domenech Trabajo Fin de Máster Máster en Zootecnia y Gestión Sostenible: Septiembre de 2010 Ganadería Ecológica e Integrada

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ÍNDICE 1. INTRODUCCIÓN .........................................................5 2. MATERIAL Y MÉTODOS...........................................6

2.1. Animales: .................................................................6 2.1.1. Hembras..............................................................6 2.1.2. Machos................................................................6

2.2. Ecografía: .................................................................6

2.3. Sincronización de celos:...........................................6

2.4. Cubrición:.................................................................7

2.5. Diagnóstico de gestación:.........................................7

2.6. Análisis de los resultados: ........................................7

3. RESULTADOS..............................................................7 4. DISCUSIÓN ..................................................................8 5. CONCLUSIONES .........................................................9 6. BIBLIOGRAFÍA ...........................................................9 7. IMÁGENES Y TABLAS ............................................12

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RESUMEN El objetivo del presente estudio es evaluar la fertilidad y la distribución de celos en caprino con diferentes protocolos de sincronización de estros teniendo en cuenta la fase folicular o luteal del ciclo estral. Un total de 221 cabras de cruce entre las razas Malagueña y Florida, maduras sexualmente, en lactancia, clínicamente sanas, de edades comprendidas entre 2,5 y 5,5 años de edad y 45-55 kg. de peso fueron sometidas a una ecografía transrectal con un ecógrafo marca Aquila, Esaote-Pie medical, (Maastricht, Holanda) y un transductor de 8Mhz, para determinar el estado del aparato reproductor y descartar hembras que presentaran patología reproductivas. Se trataron con esponjas intravaginales impregnadas con 60mg de acetato de medroxiprogesterona (MAP) durante 11 días. En el momento de la retirada de la esponja fueron ecografiadas nuevamente para diferenciar entre animales que se encontraban en fase luteal (folículos <6mm y uno o varios cuerpos lúteos) o en fase folicular (estructuras foliculares ≥6 mm de diámetro o folículos preovulatorios). El grupo de animales que se encontraba en fase folicular fue tratado con 450 U.I. de gonadotropina coriónica equina (eCG);(GeCG) y el grupo que se encontraba en fase luteal con 52,5 microgramos de d-cloprostenol (GPg). Los dos grupos fueron puestos con los machos durante 6 días, en una proporción aproximada de 10 a 1. Los machos fueron pintados con lápiz de color especial para ganado en la zona ventral del tórax. Tres veces por día a intervalos regulares de tiempo se realizó observación visual del comportamiento de monta de los machos y se separaron todas las hembras que aparecían pintadas. Tras veintiocho días de la separación de las últimas hembras de los machos se realizó diagnóstico de gestación por ecografía transrectal. El grado de sincronización de celos para GPg fue de 93,75% y 92,66% para GeCG. No se encontraron diferencias significativas (P>0,05). El intervalo de muestra de celo para GPg fue de 56-120 horas de la retirada de la esponja y 40-80 horas para GeCG. La tasa de gestación fue de 81,25% y 85,32% para GPg y GeCG respectivamente. No se encontraron diferencias significativas (P>0,05). En conclusión, parece efectivo clasificar los animales que se encuentran en fase luteal o folicular para conseguir una alta eficiencia reproductiva cuando se practica la monta natural con una baja proporción de machos.

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ABSTRACT

The aim of this study was to evaluate fertility and estrus distribution in goats with different estrous synchronization protocols considering follicular or luteal phase of the estrous cycle. A total of 221 crossbred goats Malagueña x Florida, sexually mature, lactating, clinically healthy, aged between 2.5 and 5.5 years and 45-55 kg. were subjected to a transrectal ultrasound to determine the status of the female reproductive tract and discard reproductive pathologies. After that animals were treated with intravaginal sponges impregnated with 60 mg of medroxyprogesterone acetate (MAP) for 11 days. At the time of sponge withdraw ultrasonography were perform again to distinguish between animals that were in luteal phase (follicles <6 mm and one or more corpora lutea) or follicular phase (follicular structures ≥ 6 mm in diameter or preovulatory follicles). The group of animals in the follicular phase was treated with 450 IU equine chorionic gonadotropin (eCG), (GeCG) and the animals luteal phase was treated with 52.5 micrograms of d-cloprostenol (GPG.) Both groups of females were placed with males for 6 days in an approximate ratio of 10-1. To identify mounted females males were painted with special crayon won on the ventral thorax. Three times a day at regular intervals of time visual observation of breeding behavior of males and females was made and separated all females were painted. After twenty-eight days of the separation of females from males pregnancy diagnosis was carried out by transrectal ultrasound. The degree of synchronization of estrus for GPG was 93.75% and 92.66% for GeCG. The time interval between sponges withdrawal and estrus presentation was for GPG group 56 to 120 hours and 40 to80 hours for GeCG group. The pregnancy rate was 81.25% and 85.32% for GPG and GeCG respectively. In conclusion, it seems effective to classify the animals found in the luteal or follicular phase for high reproductive efficiency when natural mating is practiced with a low proportion of males.

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1. INTRODUCCIÓN En la Cuenca Mediterránea, la producción de leche y queso de caprino se ha convertido en una industria importante, que implica, tanto la utilización de razas de alto rendimiento sometidas a programas de selección, como un manejo productivo estratégico para optimizar las producciones, basado principalmente en el establecimiento de programas de sincronización de estros (López-Sebastian A. y cols., 2007). Estos programas se basan en el conocimiento de las fases folicular y luteal del ciclo estral. Así se puede utilizar la estrategia de acortar la fase luteal provocando la regresión del cuerpo lúteo existente, mediante la administración de prostaglandina, o la estrategia de prolongar la fase luteal proporcionando progesterona exógena (Wildeus, 2000).

Respecto a proporcionar progesterona exógena el protocolo más utilizado en la actualidad se basa en la aplicación de esponjas intravaginales impregnadas de acetato de medroxiprogesterona (MAP) o acetato de fluoroprogesterona (FGA) durante 9 o 18 días, seguido de la administración de gonadotrofina corionica equina (eCG) al momento de la retirada de las esponjas (Greyling, J. P. C. y Van Niekerk C. H., 1991; Baldasarre, 1995). Los tratamientos largos de 18 días con progestágenos se han asociado con una menor fertilidad. Al disminuir el tiempo de los tratamientos se facilita el manejo, se reduce al mínimo el posible flujo vaginal e infección y se incrementa la fertilidad (Viñoles C. y cols., 2001; Diskin M.G. y cols., 2002). Por esto, cada vez más se practican tratamiento cortos de 5-12 días más la administración de una dosis de prostaglandina y eCG desde la 48 horas antes de la retirada de las esponjas hasta en el mismo momento de la retirada (Wildeus S., 2000; Holtz W., 2005).

En los casos que se empleen tratamientos cortos con esponjas es imprescindible

emplear una dosis de un agente luteolítico, para que provoque la regresión del cuerpo lúteo en aquellos animales en los que no se haya producido de forma natural (Greyling, J. P. C. y Van Niekerk C. H., 1991).

La eCG es utilizada para mejorar la concentración de los celos, la maduración folicular, la fertilidad y la tasa ovulatoria, en dosis que varían de 200 a 600 UI., según raza, peso del animal, época del año, lactancia, efecto macho u otros factores ambientales (Maxwell W.M.C., 1986; Romano J.E. y cols., 1996; Wildeus S., 2000; Boscos C.M. y cols., 2002; Leboeuf, B., 2003). Además Boland M.P. y cols. (1981) probaron que la eCG aumenta el porcentaje de partos en pequeños rumiantes de una manera dependiente de la dosis por un incremento de la tasa de ovulación y del estro sincronizado. También hay autores que informan de una eficiencia reproductiva y unos índices de fecundidad significativamente superiores en tratamientos cortos con esponjas impregnadas con MAP o FGA más eCG frente a tratamientos con prostaglandina (Al-Merestani1 M.R., 2003). El objetivo del presente estudio es evaluar la fertilidad y la distribución de celos en caprino con diferentes protocolos de sincronización de estros teniendo en cuenta la fase folicular o luteal del ciclo estral.

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2. MATERIAL Y MÉTODOS

2.1. Animales:

2.1.1. Hembras El estudio se llevo a cabo durante los meses de octubre y noviembre de 2009, en estación reproductiva. Se utilizaron un total de 221 cabras de cruce entre las razas Malagueña y Florida, maduras sexualmente, en lactancia, clínicamente sanas, de edades comprendidas entre 2,5 y 5,5 años de edad y 45-55 kg. de peso. Los animales se encontraban en Casariche (37º29’N), población de Sevilla, que mantenía un sistema intensivo. Se alimentaban con pienso y forrajes de buena calidad.

2.1.2. Machos Fueron utilizados 20 machos disponibles, de raza malagueña, maduros sexualmente y de fertilidad probada, clínicamente sanos, de edades comprendidas entre 2,5 y 4 años y de 60-70 kg. de peso.

2.2. Ecografía: Previo a la puesta de esponjas las cabras fueron sometidas a una ecografía transrectal con un ecógrafo marca Aquila, Esaote-Pie medical, (Maastricht, Holanda) y un transductor de 8Mhz, para determinar el estado del aparato reproductor y descartar así hembras que presenten patologías reproductivas (quistes foliculares, hidrómetra, piómetra, etc.). Al momento de la retirada de las esponjas, se realizó otra ecografía transrectal para diferenciar entre animales que se encontraban en fase luteal o en fase folicular. El criterio empleado fue el siguiente: en fase folicular, aquellos animales que presentaban estructuras foliculares ≥6 mm de diámetro o folículos preovulatorios (Ginther O.J. y Kot K., 1994; de Castro T. y cols., 1999; Simões J. y cols., 2005; Cueto M. y cols., 2006) y en fase luteal, aquellos que presentaban folículos <6mm y uno o varios cuerpos lúteos (Menchaca A. y Rubianes E., 2002; Simões J. y cols., 2005; Simões J. y cols., 2007).

2.3. Sincronización de celos: Se trataron las 221 cabras con esponjas intravaginales impregnadas con 60mg de MAP (Sincrogest®, Laboratorios Ovejero S.A., España). Antes de insertar las esponjas, éstas se trataron con antibióticos (Framicas®, Laboratorios Ovejero S.A., España) y posteriormente se procedió a limpiar cuidadosamente la zona perivulvar de las hembras. Las esponjas se dejaron en el fondo de la vagina de las ovejas durante 11 días, mediante un aplicador, que previamente se desinfectaba con una solución de povidona iodada (Betadine®, Meda Pharma SAU, España) al 5%. Tras estos 11 días, se procedió a la retirada de las esponjas y a la administración vía intramuscular de 450 U.I. de eCG

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(Serigan®, Laboratorios Ovejero S.A. España) a los animales que estaban en fase folicular y 52,5 microgramos de d-cloprostenol (Galapán®, Invesa, España) a los que estaban en fase luteal.

2.4. Cubrición: Tras el retiro de las esponjas las cabras fueron puestas con los machos durante 6 días, en una proporción aproximada de 10 a 1. Los machos fueron pintados con lápiz de color especial para ganado en la zona ventral del tórax. Tres veces por día a intervalos regulares de tiempo se realizó observación visual del comportamiento de monta de los machos y se separaron todas las hembras que aparecían pintadas. Este procedimiento se realizó hasta que en un periodo de 24 horas no hubo ninguna hembra pintada ni ninguna manifestación externa de celo.

2.5. Diagnóstico de gestación: Transcurridos 28 días después de la separación de los machos, las cabras fueron sometidas a un examen ecográfico transrectal con un ecógrafo marca Aquila, Esaote-Pie medical, y un transductor de 6Mhz. (Ishwar A.K., 1995).

2.6. Análisis de los resultados: Los niveles de fertilidad de las cabras tratadas con eCG o d-cloprostenol (fase folicular o fase luteal) fueron expresados en porcentajes, y analizados mediante un test Chi-cuadrado de Pearson. Al igual que los porcentajes de hembras en celo.

3. RESULTADOS El porcentaje de sincronización de celos logrados fue de 93,75% para las cabras que se encontraban en fase luteal y recibieron prostaglandina y de 92,66% para las que se encontraban en fase folicular y recibieron eCG (Tabla 1). No se encontraron diferencias significativas entre ambos grupos de animales (P>0,05). Los animales tratados con prostaglandina mostraron los primeros celos a las 56 horas de la retirada de la esponja y dejaron de mostrar celo a las 120 horas de la retirada de la esponja. Y los animales tratados con eCG mostraron los primeros celos a las 40 horas y dejaron de mostrar los últimos celos a las 80 horas (Tabla 1). La fertilidad que se obtuvo fue de 81,25% para los animales tratados con prostaglandina y de 85,32% para los tratados con eCG (Tabla 2). No hubo diferencias significativas entre los dos grupos de animales (P>0,05).

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4. DISCUSIÓN El empleo de esponjas intravaginales impregnadas con 60 mg de MAP en tratamientos de 10-12 días en cabras ha demostrado ser un método eficiente para la sincronización de celos en cabras durante la época reproductiva. En este estudio se alcanzó un porcentaje de sincronización de celo del 93,75% para aquellas cabras que se encontraban en fase luteal (Imagen 1) y fueron tratadas con prostaglandina en el momento de la retirada de la esponja (Tabla 1). Resultados similares y superiores (100%) han sido obtenidos por diversos autores tanto al utilizar la prostaglandina en el momento de la colocación de la esponja como en el momento de la retirada (Romano J.E., 1996; Rubianes, E. y cols., 1999; Rubianes E. y Menchaca A., 2003). La función de la administración de la prostaglandina en este estudio fue provocar la luteolisis de cuerpo/s luteo/s para que no se secrete progesterona después de la retirada de la esponja y se obtenga una menor respuesta a la sincronización de estros (Corteel, J.M. y cols., 1988). En cambio se obtuvo un porcentaje de sincronización de celo del 92,66% para aquellos animales que se encontraban en fase folicular (Imagen 1) y se trataron con 450 U.I. de eCG en el momento de la retirada de la esponja (Tabla 1). Regueiro M. y cols., (1999) informan de un resultado superior (100%) con un tratamiento de esponjas impregnadas con MAP de 14 días, más la administración en el momento de la retirada de las esponjas de 500 UI de eCG. Con el mismo resultado que los anteriores investigadores y mismo tratamiento informan Greyling, J. P. C. y Van Niekerk C. H. (1991). Incluso con tratamientos de 6 días y una suave estimulación de eCG (200-300UI) se han obtenido similares resultados al presente estudio, en torno a un 90%(Ungerfeld, R. y Rubianes, E., 1999). En cuanto al intervalo de tiempo de inicio y fin de celos desde la retirada de la esponja hemos obtenido un intervalo de 56-120 horas para las cabras tratadas con prostaglandina y de 40-80 horas para las tratadas con eCG. Al-Merestani M.R. y cols., (2003) obtuvieron resultados similares en animales tratados con prostaglandina y diferencias con el presente estudio, en los animales tratados con eCG (12-48 horas).Tabla 1. Esta diferencia puede ser atribuida a la diferencia de razas, nutrición, épocas del año, utilización y tipo de gonadotrofina utilizadas por los distintos autores; factores estos que se describen como posibles influyentes en este parámetro (Baldasarre H., 1995; Ungerfeld, R. y Rubianes, E., 1999; Viñoles y cols., 2005; Kareta y cols., 2006). Los resultados de fertilidad obtenidos para cabras tratadas con prostaglandina o eCG fueron de 81,25% y 85,32% respectivamente (Tabla 2). Greyling, J. P. C., y Van Niekerk C. H., (1991) obtuvieron tras un tratamiento de 8 días de esponjas con MAP y administración de prostaglandina en el momento del retiro un resultado de 60%. Esta diferencia puede ser debida a que había animales en momentos distintos del ciclo estral, en cambio nosotros consideramos en el grupo solo los animales que se encontraban en fase luteal, según si presentaban folículos <6mm y uno o varios cuerpos lúteos (Menchaca A. y Rubianes E., 2002; Simões J. y cols., 2005; Simões J. y cols., 2007).

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Por otro lado Zaiem, I. y cols., (1996) obtuvieron datos muy parecidos a los nuestros (84,4%) utilizando espongas impregnadas con FGA y aplicando 450 UI de eCG en el momento de la retirada.

Viñoles, C. y cols., (2001) difieren de nuestros resultados, puesto que

encontraron un índice de fertilidad de 67% en pequeños rumiantes tratados con esponjas intravaginales impregnadas con MAP, más la administración de 250 UI de eCG en el momento de la retirada de la esponja. Esto podría deberse a que el crecimiento folicular fue más lento en la última fase del tratamiento, probablemente como consecuencia de la disminución de los niveles endógenos de progesterona y/o una menor tasa de absorción del progestágeno. Así como al empleo de diferente dosis de eCG (Catalano R. y cols., 2007).

5. CONCLUSIONES 1.- Un protocolo empleado en cabras de cruce Malagueña x Florida basado en el tratamiento con esponjas impregnadas con 60mg de MAP durante 11 días más la aplicación en el momento de la retirada, de prostaglandina, para las cabras que se encuentren en fase luteal, o eCG, para las que se encuentren en fase folicular, produce un grado de sincronización de estro efectivo y sin diferencias. 2.- El intervalo de muestra de celo a partir de la retirada de la esponja, es mucho mayor en las cabras que están en fase luteal y se tratan con prostaglandina, que en las que se encuentran en fase folicular y se tratan con eCG. 3.- Las tasas de gestación obtenidas en ambos grupos son efectivas y no muestran diferencias. 4.- Parece efectivo clasificar los animales que se encuentran en fase luteal o folicular para conseguir una alta eficiencia reproductiva cuando se practica la monta natural con una baja proporción de machos.

6. BIBLIOGRAFÍA Al-Merestani M.R., Zarkawi M. and Wardeh M.F. 2003. Improving the Reproductive Efficiency, Pregnancy Diagnosis and Monitoring the Resumption of Luteal Activity in Indigenous Damascus Goats. Reprod Dom Anim 38, 36–40. Baldasarre, H., 1995. Sincronización de celos en ovinos. Proc. Jornadas de Biotecnología de la reproducción en hembras de interés zootécnico, FCA-UNLZ. Argentina, Junio 15 y 16.

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7. IMÁGENES Y TABLAS Imagen 1: Ejemplos del estado ovárico en las distintas fases del ciclo estral; a) Fase Folicular: Ovario (círculo con línea discontinua blanca) con un foliculo ≥6 mm de diámetro (flecha roja). b) Fase Luteal: Ovario (círculo con línea discontinua blanca) con 3 folículos <4mm de diámetro y un cuerpo lúteo (flecha roja).

TABLA 1: Respuesta a la sincronización de celos con esponjas impregnadas con MAP durante 11 días, más la administración en el momento de la retirada, de prostaglandina, en cabras que se encontraban en fase luteal o eCG, en las que se encontraban en fase folicular.

Tratamientos de grupos

Hembras en celo (%)

Intervalo retiro esponjas-Inicio celo

(hs)

Intervalo retiro esponjas-Final celo

(hs)

Con prostaglandina

105/112 (93,75) 56 120

Con eCG 101/109 (92,66) 40 80

a) b)

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TABLA 2: Porcentajes de preñez obtenidos en cabras tratadas con esponjas impregnadas con MAP durante 11 días, más la administración en el momento de la retirada, de prostaglandina, en cabras que se encontraban en fase luteal o eCG, en las que se encontraban en fase folicular.

Tratamientos de grupos % Preñez

Con prostaglandina (91/112) 81,25

Con eCG ( 93/109) 85,32