التحلل الحيويBiodegradation

حفظ األحياء الدقيقة التي تم

تنقيتها

الدرس العملي الثالث

بعد عزل وتنقية األحياء الدقيقة , يتم حفظها بطرق

مختلفة وذلك من أجل تعريفها أو استخدامها في

الدراسات المختلفة ألغراض طبية , أو صناعية وغيرهما.

متى تكون وسيلة الحفظ مناسبة ؟

على ماذا تعتمد عملية الحفظ للمزارع

الميكروبية؟

حفظ المزارع البكتيرية:بعد عزل البكتيريا في مزرعة نقية

Pure Culture يمكن حفظها لفترة زمنية حسب نوع الميكروب

المعزول والهدف من الحفظ.ويوجد العديد من طرق الحفظ التي

تستخدم لحفظ البكتيريا لفترات ..قصيرة أو طويلة المدى

اآلجار العميق و اآلجار المائل

أوال: طرق الحفظ لفترات قصيرة :

ـ طريقة الحفظ باستخدام أنابيب اآلجار 1المائل

( Slant Agar:)

تستخدم أنابيب اآلجار المائل لحفظالبكتيريا بعد تلقيحها بالميكروب النقي

وتحضينها عند درجة الحرارة المناسبة لمدة ساعة, ثم تحفظ األنابيب عند درجة 24

° .4حرارة dم

( تعتبر طريقة اآلجار المائلSlant Agar التي )تستخدم في زراعة الكائنات الدقيقة على

المزارع الصلبة من الطرق الشائعة في حفظ ( Maintaining stock culturesالمزارع الميكروبية )

.

لماذا ال يتم حفظ المستعمرة البكتيرية النقية على بيئة اآلجار الصلب في

؟أطباق بتري

مميزات الحفظ في أنابيب اآلجار المائل:

فرص التلوث في األنابيب أقل. -1 سهولة التداول والنقل. -2 تشغل مساحة أقل في الثالجة. -3 جفاف البيئة في األنابيب أقل من -4

جفافها في أطباق بتري.

Glycerolالحفظ باستخدام الجلسرول ( 2Preservation in:

يتم حفظ المزارع البكتيرية في محلول معقم %, 40-10من الجلسرين يتراوح تركيزه من

°(. وفى هذه 20عند درجة حرارة ) - م<الطريقة يتم تجميع النمو البكتيري النقي باإلبرة المعقمة ثم يوضع في أنبوبة بها جلسرين معقم

وبعض الحبيبات الزجاجية الصغيرة حتى تمنع تكون بلورات ثلجية أثناء الحفظ.

ثانيا: طرق الحفظ لفترات طويلة ::Lypholization Preservation byالحفظ باستخدام التجفيد ( 1

( حيث Lypholizerتتم عملية التجفيد باستخدام جهاز )يوضع الميكروب في أنابيب ذات فوهة كبيرة في

الجهاز, ثم يتم سحب الماء تدريجيا تحت التبريد الشديد. في النهاية نحصل على الميكروب في صورة

بودر. Liquid nitrogenالحفظ باستخدام النيتروجين السائل( 2

Preservation in :يتم حفظ الميكروب النقي تحت النيتروجين السائل

لمنع عملية التلوث, ومن ثم يتم الحفظ عند درجة °(.20حرارة) - dم

Sterilized soilالحفظ باستخدام التربة المعقمة ( 3Preservation in:

يمكن حفظ البكتيريا وخاصة التي تنمو في التربة باستخدام قليل من التربة المعقمة. وفى هذه

الطريقة يؤخذ بواسطة اإلبرة المعقمة النمو البكتيري النقي ويوضع في أنبوبة تحتوى على القليل من

التربة المعقمة, حيث يتم الخلط جيدا تحت ظروف التعقيم ومن ثم الحفظ في درجة حرارة المعمل.

(Lypholizerجهاز التجفيد )

حفظ المزارع الفطرية:يجب أن تحـفظ الفطرـيات حـية وبـصورة نقـية ـطوال ـفترة الدراـسة وابـسط الـطرق لحـفظ الفطرـيات هي نقـــل المســـتعمرات باســـتمرار إلى بيئـــة جديـــدة ومعقمــة في أنبوبــة اختبــار ويمكن حفــظ األنــابيب ة( حيث أن رارة منخفضـة )في الثالـج ات ـح في درـجالفطرـيات تـظل حـية إذا ـما وـفرت لـها درـجات ـحرارة د دث إال بـع تعمرة ال يـح اف المـس ذلك جـف بة , ـك مناـس

فترة طويلة.ــة ــير فوه ــتعمرة يمكن تطه ــاف المس ولتجنب جفاألنبوـبة ـباللهب ثم نـسدها بـسدادة قطنـية ثم تغطى بعــد ذلــك بســدادة معدنيــة أو بالســتيكية محكمــة أو

تغطى بشمع البارافين.ومن الـجدير باـلذكر أن الفطرـيات تختـلف في الـمدة د المزرـعة الفطرـية وذـلك على حـسب الالزـمة لتجدـي

ة لـمدة ) ات تبقى حـي وع الفـطر فبعض الفطرـي 9-8ـنأشــهر( دون الحاجــة إلى نقلهــا إلى أنبوبــة جديــدة وبعضها يجب أن ينقل كل ثالثة أسابيع على األكثر.

أنابيب آجار مغذى)مائل( - إبرة التلقيح ذات العقدة - مزرعة نقية سواء كانت )بكتيرية،

فطرية(.

تحت ظروف التعقيم, لقحي سطح آجار . 1األنبوبة األولى بالمزرعة البكتيرية النقية

باستخدام إبرة التلقيح. حركي اإلبرة برفق على سطح اآلجار من أسفل إلى أعلى.

حاذري من الضغط على اإلبرة حتى ال . 2تجرحي اآلجار أو تقطعيه.

وبنفس الطريقة لقحي سطح األنبوبة . 3 الثانية بالمزرعة الفطرية.

تحضن أنابيب اآلجار المائل على درجة . 4 ساعة.48-24حرارة مالئمة لمدة

األدوات المستخدمة:

طريقة العمل :

طريقة تخطيط أنبوبة اآلجار المائل )لحفظ .Slant inoculation الكائنات الدقيقة(

 

شكل النمو على بيئة اآلجار المائل.

 

أكتبي تقرير للتجارب السابقة:�متضمنا

.أسم التجربة.الهدف منها وصف المزرعة التي نمت من حيث

عدد المستعمرات وأشكالها وألوانها التي ظهرت لك مع إرفاق صور لكل

تجربة. ذكر نتيجة كل تجربة والتعليق

عليها.

أجيبي

Thanks 4 your attention

الدوسري. منيرة أ

ظهير ابو الله عبد منيرةalmonerah.ksu.edu.sa