НАЦИОНАЛЬНОЕ РУКОВОДСТВО … › wp-content › uploads › 2019 › 03 ›...

НАЦИОНАЛЬНОЕ РУКОВОДСТВО

ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИКРАТКОЕ ИЗДАНИЕ

Главные редакторы: академик РАН Н.Д. Ющук, академик РАЕН Ю.Я. Венгеров

2019

ОГЛАВЛЕНИЕПредисловие . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9Участники издания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10Список сокращений и условных обозначений . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15

Глава 1. Вакцинопрофилактика инфекционных болезней. Календарь прививок. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21

Раздел I. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39Глава 2. Лабораторные методы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40

Клинический анализ крови* О.Л. Тимченко . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40Клинический анализ мочи*. М.М. Гаджикулиева . . . . . . . . . . . . . . . . 40Биохимический анализ крови*. О.Л. Тимченко . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40Анализ желчи*. О.Л. Тимченко . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40Клинический анализ кала*. М.М. Гаджикулиева, О.Л. Тимченко . . . 40Исследование спинномозговой жидкости*. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . 40Специальные методы лабораторной диагностики.

И.П. Балмасова . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40Микроскопический метод . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40Микробиологический метод . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47Биологический метод . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 49Иммунологические методы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 49Молекулярно-биологические методы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 68

Глава 3. Инструментальные методы*. П.Г. Филиппов, Т.Э. Мигманов . . . 70Электрокардиография. П.Г. ФилипповРентгенография. Т.Э. Мигманов Электроэнцефалография. Т.Э. Мигманов Электронейромиография. Т.Э. Мигманов Компьютерная томография. Т.Э. Мигманов Магнитно-резонансная томография. Т.Э. Мигманов Ультразвуковая диагностика. Эхокардиография.

П.Г. Филиппов Эзофагогастродуоденоскопия. П.Г. Филиппов Ректороманоскопия, колоноскопия. П.Г. Филиппов

Раздел II. МЕТОДЫ ЛЕЧЕНИЯ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71Глава 4. Немедикаментозные методы лечения инфекционных

болезней*. О.Л. Тимченко . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 72Глава 5. Фармакотерапия . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73

5.1. Антибактериальные препараты. Этиотропная терапия инфекционных заболеваний. Е.А. Климова . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73

5.2. Лечебно-профилактические бактериофаги как средство антибактериальной терапии. О.С. Дарбеева . . . . . 85

* Материалы доступны в электронном виде по ссылке, указанной на по-следней странице книги.

4 Оглавление

5.3. Противогрибковые препараты. Е.А. Климова . . . . . . . . . . . . . . 885.4. Противовирусные препараты. К.Р. Дудина . . . . . . . . . . . . . . . . . 925.5. Противопаразитарные препараты. А.К. Токмалаев . . . . . . . . . 1205.6. Лекарственные взаимодействия. Е.А. Климова . . . . . . . . . . . . 1285.7. Биодоступность возбудителя. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . 1375.8. Побочное действие антимикробных препаратов.

Г.С. Архипов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1385.9. Иммунотерапия инфекционных болезней. А.В. Караулов . . . 151

Раздел III. КЛИНИЧЕСКИЕ СИНДРОМЫ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 161Глава 6. Лихорадочно-интоксикационный синдром. Ю.Я. Венгеров . . . 162Глава 7. Катарально-респираторный синдром. М.Г. Кулагина . . . . . 167Глава 8. Экзантемы, энантемы, первичный аффект.

И.В. Шестакова, Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 175Глава 9. Лимфаденопатия. Г.Н. Кареткина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 190Глава 10. Синдром желтухи. С.Л. Максимов, Ю.Я. Венгеров. . . . . . . 194Глава 11. Синдром поражения желудочно-кишечного тракта

при инфекционных болезнях. Н.Д. Ющук, А.Ю. Розенблюм . . . . . 201Глава 12. Гепатолиенальный синдром. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . 208Глава 13. Поражение почек при инфекционных болезнях.

М.М. Гаджикулиева . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 211Глава 14. Поражение центральной нервной системы

при инфекционных болезнях. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . 214Глава 15. Поражение периферической нервной системы

при инфекционных болезнях*. Н.Д. Ющук, О.Л. Тимченко . . . . . . 222

Раздел IV. КЛИНИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ЗАБОЛЕВАНИЯМ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 223

Глава 16. Бактериальные инфекции . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 224Сальмонеллезы. Д.Р. Ахмедов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 224

Брюшной тиф. Д.Р. Ахмедов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 225Паратифы А, В и С. Д.Р. Ахмедов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 234Сальмонеллез. Д.Р. Ахмедов, Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . 236

Шигеллез. Н.Д. Ющук, А.Ю. Розенблюм . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 241Эшерихиозы. Г.К. Аликеева . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 248Пищевые токсикоинфекции. А.Ю. Розенблюм. . . . . . . . . . . . . . . . . 256Холера. Г.С. Архипов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 262Заболевания, вызываемые НАГ-вибрионами*.

Я.М. Еремушкина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 271Иерсиниозы. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 271

Иерсиниоз. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 271Псевдотуберкулез. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 277Чума. Н.Д. Ющук, М.В. Нагибина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 286

Кампилобактериоз. И.И. Токин** . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 296


** Глава написана при участии Т.В. Сологуб.

5Оглавление

Листериоз. Г.Н. Кареткина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 301Бруцеллез. Д.Р. Ахмедов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 309Туляремия. Э.А. Кашуба, Т.Г. Дроздова, Н.В. Огошкова . . . . . . . . . 317Сибирская язва. М.В. Нагибина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 326Стрептококковые инфекции*. Н.И. Брико . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 336

Скарлатина. Н.И. Брико . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 336Рожа. А.А. Еровиченков . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 342

Пневмококковые инфекции. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 352Стафилококковые инфекции*. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . 357Менингококковая инфекция. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . . 357Сепсис. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 369Дифтерия. П.Г. Филиппов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 377Гемофильная инфекция. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 386Легионеллезы. М.Г. Кулагина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 391Возвратные тифы. Г.Н. Кареткина, Н.Д. Ющук . . . . . . . . . . . . . . . . 396

Эпидемический возвратный тиф вшиный. . . . . . . . . . . . . . . . . . 397Возвратный тиф клещевой (эндемический) . . . . . . . . . . . . . . . . 400

Лептоспироз. М.Г. Авдеева . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 403Иксодовые клещевые боррелиозы. И.В. Малов . . . . . . . . . . . . . . . 413Столбняк. В.В. Никифоров, М.З. Шахмарданов . . . . . . . . . . . . . . . . 420Ботулизм. В.В. Никифоров . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 427Лепра*. В.В. Дуйко, В.П. Цемба, Х.М. Галимзянов. . . . . . . . . . . . . . . 433Риккетсиозы. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 433

Сыпной тиф. Э.А. Кашуба, Т.Г. Дроздова, Л.В. Ханипова . . . . . . 433Эпидемический сыпной тиф . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 434Рецидивный сыпной тиф (болезнь Брилла) . . . . . . . . . . . . . 439

Эндемический (крысиный) сыпной тиф. Э.А. Кашуба, Т.Г. Дроздова, Ю.С. Чехова . . . . . . . . . . . . . . . . . 440

Марсельская лихорадка. Х.М. Галимзянов, Ю.В. Шерышева . . . 443Астраханская риккетсиозная лихорадка.

Х.М. Галимзянов, Ю.В. Шерышева . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 446Другие пятнистые риккетсиозные лихорадки.

Г.Н. Кареткина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 450Клещевой сыпной тиф Северной Азии . . . . . . . . . . . . . . . . . . 450Пятнистая лихорадка Скалистых гор . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 453Лихорадка цуцугамуши* . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 455Австралийский клещевой риккетсиоз* . . . . . . . . . . . . . . . . . . 455Везикулезный риккетсиоз* . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 455

Ку-лихорадка. Э.А. Кашуба, Т.Г. Дроздова, М.В. Антонова . . . 455Эрлихиозы. П.Г. Филиппов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 463Доброкачественный лимфоретикулез. Н.Д. Ющук, Т.Н. Ермак . . . 469

Орнитоз. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 473Респираторный микоплазмоз. Н.Д. Ющук, О.Л. Огиенко . . . . . . . . 478


6 Оглавление

Глава 17. Вирусные инфекции . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 484Вирусные гепатиты . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 484

Гепатит А. Г.Н. Кареткина. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 484Гепатит Е. С.Л. Максимов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 492Гепатит B. О.О. Знойко . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 495Гепатит D. О.О. Знойко . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 511Гепатит С. Е.А. Климова . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 517Гепатиты ни А ни G. С.Л. Максимов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 528

ВИЧ-инфекция. А.И. Мазус, Т.П. Бессараб . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 530Грипп. М.Г. Кулагина, Н.Д. Ющук . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 560Грипп птиц у человека. М.Г. Кулагина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 570Аденовирусная инфекция. М.Г. Кулагина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 575Риновирусная инфекция. М.Г. Кулагина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 579Коронавирусная инфекция. М.Г. Кулагина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 581Энтеровирусные инфекции. Т.Э. Мигманов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 586Полиомиелит. Н.Д. Ющук, Т.Э. Мигманов. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 595Диареи вирусной этиологии. А.А. Шульдяков, Е.П. Ляпина,

К.Х. Рамазанова . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 602Ротавирусная инфекция . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 602Норовирусная инфекция . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 608

Герпесвирусные инфекции*. Н.Д. Ющук, Т.К. Кускова . . . . . . . . . . 611Герпетическая инфекция. Т.К. Кускова . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 611Ветряная оспа. Я.М. Еремушкина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 619Опоясывающий лишай. Я.М. Еремушкина . . . . . . . . . . . . . . . . . . 624Вирусный инфекционный мононуклеоз,

Эпштейна–Барр вирусный инфекционный мононуклеоз, болезнь Филатова. Е.Г. Белова, Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . 629

Цитомегаловирусная инфекция. В.И. Шахгильдян . . . . . . . . . . 635Инфекция, вызванная вирусом герпеса человека 6-го типа.

Т.К. Кускова . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 646Инфекция, вызванная вирусом герпеса

человека 7-го типа. Т.К. Кускова . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 649Инфекция, вызванная вирусом герпеса

человека 8-го типа. Т.К. Кускова . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 650Корь. И.А. Зайцева, Е.В. Михайлова, Д.Ю. Левин . . . . . . . . . . . . . . . 652Краснуха. В.В. Цветков**. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 659Паротитная инфекция. А.В. Сундуков . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 663Натуральная оспа*. Г.С. Архипов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 670Оспа животных. Г.С. Архипов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 670

Оспа обезьян . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 671Коровья оспа . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 674


** Глава написана при участии Т.В. Сологуб.

7Оглавление

Геморрагические лихорадки. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . . 676Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом.

Д.А. Валишин . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 679Омская геморрагическая лихорадка. Д.А. Валишин . . . . . . . . . . 686Желтая лихорадка. А.В. Сундуков . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 690Лихорадка денге. Н.Д. Ющук, А.В. Сундуков . . . . . . . . . . . . . . . . 695Болезнь, вызванная вирусом Эбола.

В.В. Никифоров, М.З. Шахмарданов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 702Геморрагическая лихорадка Марбург. М.М. Гаджикулиева,

Н.Д. Ющук . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 706Геморрагическая лихорадка Ласса. Н.Д. Ющук,

М.М. Гаджикулиева . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 709Лихорадка Западного Нила. Ю.Я. Венгеров . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 713Лихорадка Зика. Н.Д. Ющук, О.В. Добронравова . . . . . . . . . . . . . . 719Бешенство. Е.А. Климова . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 721Клещевой энцефалит. И.В. Малов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 727Медленные инфекции центральной нервной системы*.

О.О. Знойко . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 737Глава 18. Протозоозы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 738

Амебиаз. А.К. Токмалаев . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 738Лямблиоз. А.К. Токмалаев . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 744Малярия. А.К. Токмалаев . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 747Токсоплазмоз. А.К. Токмалаев . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 763Криптоспоридиоз. Т.Н. Ермак . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 770Пневмоцистоз. Т.Н. Ермак . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 774

Глава 19. Гельминтозы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 782Трематодозы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 782

Описторхоз. Э.А. Кашуба, Т.Г. Дроздова, О.А. Любимцев . . . . . . . . . . 782Фасциолез. А.К. Токмалаев . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 788Шистосомозы. А.К. Токмалаев . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 791Церкариальный дерматит . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 798

Цестодозы. А.К. Токмалаев . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 799Дифиллоботриозы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 799Тениаринхоз . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 802Тениоз . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 804Цистицеркоз . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 806Эхинококкозы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 809

Нематодозы. А.К. Токмалаев . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 816Аскаридоз . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 816Трихоцефалез . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 820Энтеробиоз . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 822Стронгилоидоз . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 825Трихинеллез . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 829Токсокароз . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 837Дирофиляриозы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 843

Глава 20. Болезни, вызываемые членистоногими*. Ю.Я. Венгеров . . . . 846

* Материалы доступны в электронном виде по ссылке, указанной на последней странице книги.

Глава 2

Лабораторные методы

КЛИНИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ КРОВИ*

КЛИНИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ МОЧИ*

БИОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ КРОВИ*

АНАЛИЗ ЖЕЛЧИ*

КЛИНИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ КАЛА*

ИССЛЕДОВАНИЕ СПИННОМОЗГОВОЙ ЖИДКОСТИ*

СПЕЦИАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

Микроскопический метод Основной задачей микроскопического метода исследования явля-

ется индикация возбудителя в биологическом материале от больного и в ряде случаев — определение его видовой принадлежности.

В процессе микроскопического исследования выявляется морфо-логия возбудителя и его отношение к окраске, которые характеризуют его родовую принадлежность. В связи с этим микроскопия не позво-ляет в большинстве случаев определить вид возбудителя и поставить на этом основании диагноз заболевания.

Световая микроскопия позволяет исследовать как нативные пре-параты из биологического материала, так окрашенные препараты.

* Материалы доступны в электронном виде по ссылке, указанной на последней странице книги.

41Глава 2 Лабораторные методы

В нативных препаратах определяют не только морфологию возбу-дителя, но и его подвижность (спирохеты, амебы, холерные вибрио-ны и др.). В фиксированных и окрашенных красителями мазках выявляют тинкториальные свойства возбу дителя, то есть наличие у него определенных химических структур, приобретающих под воз-действием специального красителя определенную окраску. Наиболее распространенный способ окраски бактерий — окраска по Граму, которая позволяет выявлять в составе их клеточной стенки высо-кое содержание пептидогликана, усваивающего один из красите-лей. В результате бактерии с высоким содержанием пептидогликана окрашиваются в фиолетовый цвет — грамположительные бактерии, а с низким — в красный цвет — грамотрицательные бактерии. Такое разделение бактерий имеет очень важное значение в их систематике, оценке патогенных свойств и чувствительности к химиотерапевтиче-ским средствам. Например, патогенные грамположительные бактерии в большинстве случаев образуют экзотоксины, грамотрицательным бактериям присуще содержание липополисахарида (эндотоксина) в составе клеточной стенки.

В оптической микроскопической технике нашло применение и явление люминесценции микроскопических объектов, как есте-ственное, так и вызванное специальными красителями-флюорохрома-ми (люминесцентная микроскопия).

Световая микроскопия до настоящего времени используется в диагностике гельминтозов, инфекций, вызванных простейшими и грибами. Этот метод сохраняет свое значение при обнаружении в био-логическом материале бактерий и бактериеподобных микроорганиз-мов — микобактерий, вибрионов, бактерий кокковой группы, спирохет, актиномицетов, т.е. таких микробов, размеры которых, уникальные тинкториальные свойства или характерная подвижность позволяют оптически зарегистрировать их присутствие в материале от больного.

Комбинация световой микроскопии с иммунологическим методом в виде обработки микроскопических препаратов антите-лами, меченными флюорохромами к наиболее характерным видовым микробным антигенам, с последующей люминесцентной микроскопи-ей значительно повышает ее диагностическую значимость. Эти мето-ды еще будут охарактеризованы в последующем как разновидность иммуноанализа — иммунофлюоресцентный или иммуногистохи-мический методы.

Значительно реже в инфекционной практике используется элек-тронная или конфокальная микроскопия — микроскопический метод, в котором вместо светового потока для визуализации микроскопи-ческих объектов используется поток электронов или лазерные лучи, позволяющие тысячекратно увеличить разрешающую способность метода и обнаруживать в биологическом материале не только клеточ-ные микроорганизмы, но и вирусы.

Микроскопический метод может использоваться и в диагностике вирусных инфекций, но в этом случае обнаруживают не отдельного

42 Глава 2 Лабораторные методы

возбудителя, имеющего чрезвычайно малые размеры, а внутриклеточ-ные включения — скопления возбудителя в клетках макроорганизма или продуктов измененного метаболизма клетки. В табл. 2.1–2.3 пред-ставлены возможности микроскопической диагностики при инфекци-онных заболеваниях.

Таблица 2.1. Микроскопический метод в диагностике заболеваний, вызывае-

мых гельминтами

Гельмин тоз Возбуди тель Исследуемый материал

Препараты для

микроскопии

Объекты микро-скопического обнаружения

Нематодозы

Аскаридоз Ascaris lumbri-

coides

Кал Нативный

препарат

Оплодотворен ные

и неоплодо тво-

ренные яйца

Трихоцефа-

лез

Trichocephalus

trichiurus


препарат

Яйца

Энтеробиоз Enterobius

vermicularis

Соскоб с пери -

анальной

складки

Нативный

препарат

Яйца, возбудитель

Стронгилои-

доз

Strongyloides

stercoralis

Кал, дуоде наль-

ное содержимое

Нативный

препарат

Личинки

Трихинеллез Trichinella

spiralis

Мясные про-

дукты, биоптаты

мышечной

ткани,

секционный

материал

Нативный

препарат

Личинки

Токсокароз Toxocara canis Биопсийный

и секционный

материал

Нативный

препарат

Личинки

Цестодозы

Дифилло бот-

риоз

Diphyllobo-

thrium latum


препарат

Яйца, членики

Тениаринхоз Taeniarhyn-

chus saginatus

Кал, соскоб

с периа наль ной

складки

Нативный

препарат


Тениоз Taenia solium Кал Нативный

препарат


Цистицеркоз Cysticersus

cellulosae

Биопсийный

материал

Нативный

препарат

Личинки

(цистицерки)


Гельмин тоз Возбуди тель Исследуемый материал

Препараты для

микроскопии

Объекты микро-скопического обнаружения

Эхинококкоз Echinococcus

granulosus

Содержимое

пара зи тарной

кисты, мок-

рота, лаважная

жидкость,

желчь, био-

псийный

материал

Нативный

препарат

Протоско лексы,

ацефало кисты

Трематодозы

Описторхоз Opisthorchis

felineus

Кал, желчь Нативный

препарат

Яйца

Фасциолез Fasciola hepa-

tica, Fasciola

gigantica

Кал, желчь Нативный

препарат

Яйца

Шистосомоз

мочеполовой

и кишечный

Schistosoma

haematobium,

Schistosoma

mansoni

Моча, кал Нативный

препарат

Яйца


мых простейшими

Протозооз Возбудитель Исследуемый материал

Способ микроско-пического

обнаружения

Объекты микроскопи-

ческого обнаружения

Амебиаз Entamoeba

histolytica

Свежий кал Нативные

пре параты

(с добавле нием

раст вора Люголя

и ме тиле нового

си него) и ок-

рашенные мазки

Трофозоиты,

у реконвалес-

центов и

носителей —

просветная

форма, цисты

Лямблиоз Giardia intes-

tinalis

Желчь, кал Нативный

препарат


цисты

Малярия Plasmodium

vivax, Plasmo -

dium malariae,

Plasmodium

falciparum,

Plas modium

ovale

Кровь Мазок «толстая

капля» без

фиксации,

окраска по

Романов скому–

Гимзе


шизонты,

эритроцитар-

ные меро зоиты,

микрога ме-

то циты, мак-

рогаме то циты

Окончание табл. 2.1


Протозооз Возбудитель Исследуемый материал

Способ микро-

скопического обнаружения

Объекты микроскопиче-

ского обнаружения

Токсо плаз-

моз

Toxoplasma

gondii

Спинномозго-

вая, плеваль-

ная, около -

плодная

жид кость,

кровь, биоптаты

лимфати ческих

узлов

Фиксирован-

ные мазки

с окраской

по Романов-

скому–Гимзе


псевдоцисты,

в тканях —

цисты

Лейшма ниоз Leishmania

tropica, Leish-

mania donovani

и др. (около

20 видов)

Отделяемое

с кра ев язвы,

кровь, пунктаты

внутренних

орга нов,

лимфати ческих

узлов


ные мазки,

окрашенные

по Романов-

скому–Гимзе

Безжгутико-

вые формы

возбудителя

Трихомо-

ниаз

мочеполо-

вой,

кишечный

Trichomonas

vaginalis,

Trichomonas

hominis

Свежее

отделяемое

влагалища

и уретры, кал

Нативный

препарат

Возбудитель

Бабезиоз Babesia diver-

gens, Babesia

rodhaini, Babe-

sia micron

Кровь Мазок «тол-

стая капля»

без фиксации,

ок раска по


Гимзе


Трипано со-

моз

Trypanosoma

brucei,

Trypanosoma

cruzi

Пунктат

первичных

аффектов,

кровь

Фиксирован ный

мазок-отпечаток

и мазок

«толстая

капля» крови

без фиксации

с окраской по

Романовскому–

Гимзе


Баланти диаз Balantidium coli Кал Нативный

препарат


цисты




мых грибами

Микоз Возбуди тель Исследуемый материал

Способ микро-скопического обнаружения



Кератомикозы

Отрубевид-

ный лишай

Pityrosporum

obiculare

Чешуйки кожи Обработанный

щелочью натив-

ный препарат

Мицелий и

характерное

скопление

гифов гриба

Дерматофитии

Трихофи тия,

фавус

Trichophyton Чешуйки кожи,

волосы, соскобы

с ногтей

Обработанный

щелочью натив-

ный препарат

Характерные

споры грибов

(в волосах),

мицелий и

споры гриба

Микроспо рия Microsporum Чешуйки кожи,

волосы, соскобы

с ногтей


щелочью

нативный

препарат


споры грибов

(в волосах),

мицелий и


Эпидермо-

фития

Epidermo phy-

ton floccosum

Чешуйки кожи,

соскобы с

ногтей


щелочью

нативный

препарат


мицелий и


Кандидозы

Кандидоз

кожи,

сли зистых

оболочек,

инвазив ный

кандидоз

Candida albi-

cans, Сandi da

tropicalis,

Сandida

cate-nulara,

Сandida cij-

ferrii, Сandida

guilliermondii

и др.

Соскобы кожи,

налет слизистых

оболочек, моча,

мокрота, кал,

кровь, пунктаты


органов

Нативные

препараты,

фиксирован-

ные препараты


Граму и др.

окраски

Дрожжевые

почкующиеся

клетки, псев-

домице лий

Оппортунистические микозы

Криптокок коз Cryptococcus

neoformans

Мокрота, гной,

соскобы язв,

СМЖ, моча,

биоптаты тканей

Нативные

препараты,

фиксирован ные

мазки, окрашен-

ные тушью

Округлые или

яйцевидные

клетки, окру -

женные слизис -

той желтоватой

капсулой


Микоз Возбуди тель Исследуемый материал

Способ микро-скопического обнаружения



Плесниев ые

микозы

Asper-

gillu spp.,

Mucor spp.,

Penicilli-

um spp.,

Fusarium spp.

Соскобы с

кожи, ногтей,

отделяемое

пазух носа,

наружного

слухового

прохода,

мокрота, гной,

кал, биоптаты

тканей


ные препараты


Граму

Характерное

расположе ние

мицеллия и

конидио спор

Пневмоцис-

тоз

Pneumocystis

jiroveci

Мокрота,

лаважная

жидкость,

биоптаты

легочной ткани


ные мазки



Гимзе


Глубокие микозы

Кокцидио-

идозCoccidioides

immitis

Гной, мокрота,

кровь, ликвор,

биопсийный

материал

Нативные пре-

параты, фикси-

рован ные пре -

параты с

окраской по

Граму

Сферула как

тканевая форма

Гистоплаз моз Histoplasma

capsulatum,

Histoplasma

duboisii

Гной, мокрота,

кровь, моча,

ликвор,

пунктаты


органов


ные мазки с

окраской по


Гимзе

Овальные

дрожжепо-

доб ные клетки

внеклеточно или

внутри

моноцитов/

макрофагов

Бластоми коз Blastomyces

dermatitidis

Гной из свищей

и абсцессов,

ликвор,

мокрота,

моча, пунктат

лимфатичес ких

узлов


щелочью

нативный

препарат

Круглые или

овальные

крупные

дрожжевые

клетки с

двухконтур-

ной клеточной

стенкой



Микробиологический метод Микробиологический метод заключается в выделении чистой куль-

туры возбудителя из материала от больного с его последующей иден-тификацией.

Наиболее часто микробиологический метод используется в диагно-стике бактериальных инфекций (бактериологический метод), мико-зов (микологический метод), в этом случае чистую культуру получают путем посева на искусственные питательные среды.

Выделить чистую культуру вирусов путем посева на искусственные питательные среды не удается, так как вирусы размножаются только в живых клетках. Для выделения культуры вируса используют культуры тканей, куриные эмбрионы, что входит в понятие вирусологического метода диагностики.

Бактериологический метод Бактериологический метод служит одним из самых широко исполь-

зуемых методов в диагностике бактериальных инфекций.Эффективность бактериологического метода диагностики зависит

от ряда обстоятельств.Во-первых, необходимо учитывать сроки отдельных стадий пато-

генеза инфекционного процесса, которые влияют на присутствие возбудителя в исследуемом биологическом материале. Например, при брюшном тифе чаще всего удается выделить гемокультуру воз-будителя в первые дни лихорадки, поскольку в последующие дни интенсивность бактериемии значительно снижается, в то же время на 2–3-й неделе болезни резко повышается возможность получения копрокультуры возбудителя. При менингококковой инфекции бак-териемия наиболее интенсивна в первые часы болезни, а в течение вторых и третьих суток падает даже в отсутствие антибактериальной терапии.

Во-вторых, существенное значение для эффективности бактери-ологической диагностики имеет соблюдение правил забора мате-риала для исследования. Забор крови, мочи, слизи, кала должен осуществляться в посуду, стерилизованную путем термической обра-ботки. При этом очень важно производить забор биологического материала из места наиболее вероятного нахождения возбудителя — краев налетов на миндалинах, кожных поражений, язв кишечника, спинномозговой жидкости, пунктата гнойных очагов. Наружные покровы в месте забора материала (из вены, артерии, местного очага) должны быть тщательно обработаны (настойкой йода, 96% этиловым спиртом) во избежание попадания в просвет иглы аутоф-лоры.

Очень важное значение имеет отсутствие в исследуемом материале ингибиторов роста бактерий, прежде всего антибиотиков, которые


резко снижают (не менее чем в 2–3 раза) вероятность высева воз-будителя. По этой причине бактериологическое исследование нужно стремиться производить до назначения антибиотиков.

Наилучшими способами предупредить гибель предполагаемого возбудителя является посев на основную или транспортную среду у постели больного. В остальных случаях следует максимально сокра-тить сроки доставки материала в лабораторию, предохранить его от загрязнения, охлаждения и высыхания. Для этого взятый для исследо-вания материал хранится в стерильной посуде с герметичной крышкой в термостате при 37 °С, перевозится при той же температуре в термосе или другом транспортном обогревателе.

Очень важной составляющей частью бактериологической диагно-стики является определение чувствительности возбудителя к антибиотикам, способы которого довольно разнообразны.

Особый интерес вызывают автоматизированные способы опреде-ления чувствительности возбудителя к антибиотикам, которые позво-ляют работать не только с чистой культурой, но и с исходным био-логическим материалом. В этом случае определение лекарственной устойчивости возбудителя происходит автоматически без выяснения видовой принадлежности возбудителя и исследование занимает от 2 до 6 ч.

Микологический метод Микологический метод, применяемый в диагностике грибковых

инфекций и также основанный на использовании искусственных пита-тельных сред (Сабуро, Чапека и др.).

Вирусологический метод Вирусологический метод отличается тем, что биологический мате-

риал, предположительно содержащий вирусы, используется для зара-жения куриного эмбриона, культуры клеток или культуры органов лабораторных животных.

Если исследуемый материал содержит постороннюю микрофлору, его предварительно обрабатывают антибиотиками. Культивирование куриных эмбрионов после их заражения осуществляется в течение 5–8 дней, культур тканей — в течение 5–6 дней, а общая продолжи-тельность вирусологического исследования составляет до 3 нед, что в большинстве случаев позволяет поставить лишь ретроспективный диагноз. В связи с этим вирусологический метод чаще используют для мониторинга циркулирующих штаммов различных вирусов, в частно-сти вирусов гриппа, гепатитов.

Завершается вирусологический метод идентификацией вируса с помощью таких серологических реакций, как реакция нейтрали-зации (РН) действия вируса на живую ткань, реакция торможения


гемагглютинации (РТГА) куриных эритроцитов, реакция связыва-ния комплемента (РСК), реакция иммунофлюоресценции (РИФ), ИФА.

Биологический метод Биологический метод (биопроба) заключается в выделении возбу-

дителя из биологического материала или идентификации его токсинов путем заражения лабораторных животных, высоковосприимчивых к данному возбудителю или чувствительных к действию его токсинов. В современных условиях метод биопроб применяется преимуществен-но как первый этап обнаружения и идентификации возбудителей особо опасных инфекций.

Биологический метод имеет ведущее значение при идентифика-ции бактериальных экзотоксинов (ботулинического, столбняч-ного).

На основе биопробы можно воспроизводить такие серологические реакции, как РН токсина или РН вируса, которые позволяют не толь-ко идентифицировать возбудителя, но и способствуют обнаружению антител к экзотоксинам или вирусам.

Иммунологические методы

Методы иммунодиагностикиСероиндикация — обнаружение возбудителя в биологическом

материале от больного на основе применения специфических антител к его видовым антигенам. Как диагностическое направление сероин-дикация широко используется при экспресс-диагностике различных инфекционных заболеваний, а ее значение в верификации диагноза определяется качеством препарата из специфических антител и спосо-бом регистрации результата исследования.

Сероидентификация не является самостоятельным методом диа-гностики инфекционных заболеваний, а этапом бактериологического или вирусологического методов, связанным с определением вида организма по его видовым антигенам. Этому исследованию пред-шествует выделение чистой культуры возбудителя, а сам процесс идентификации включает использование препаратов специфических видов антител.

Серодиагностика — постановка диагноза путем обнаружения антител к возбудителю в сыворотке крови и других биологических жидкостях как специфических биомаркеров инфекционного про-цесса. Методическая основа такого диагностического исследования не очень однозначна в интерпретации. Она требует учета возмож-ности попадания возбудителя и, соответственно, выработки антител к нему в анамнезе, а также факта высокой вероятности присутствия


в организме больного «нормальных» антител, способных давать перекрестные реакции с антигенами искомого патогенного микро-организма. Несмотря на это, современная серодиагностика составляет значительную часть исследований по верификации диагноза в клини-ке инфекционных болезней.

Среди серологических методов наиболее доступны методы, осно-ванные на феномене агглютинации.

Сущность реакции агглютинации заключается в том, что в присут-ствии электролита иммунные комплексы, содержащие корпускуляр-ные частицы антигена и антитела, сшиваются между собой и выпадают в виде зернистого или хлопьевидного осадка, что регистрируется визуально.

Наиболее часто РА используется в диагностике бактериальных инфекций. Если в состав иммунных комплексов при данной реакции входят бактериальные клетки, то это собственно агглютинация. В РА могут участвовать различные поверхностные антигены бактерий: компоненты их клеточной стенки (О-антигены), жгутики бактерий (Н-антигены), элементы капсулы (К-антигены).

Если микробные антигены искусственно адсорбированы на поверх-ности эритроцитов, то такая реакция носит название пассивной (или непрямой) гемагглютинации (РПГА или РНГА). Если микробные антигены адсорбированы на поверхности латекса — это латекс-агглютинация.

РА широко используется не только для сероидентификации бакте-рий, но и для серодиагностики бактериальных инфекций. При этом РПГА и латекс-агглютинации применяются исключительно для серо-диагностики. Для предотвращения ложноположительных результатов реакции из-за наличия в сыворотке больного «нормальных» антител введено понятие диагностического титра.

Величина диагностического титра зависит от возбудителя, а также вида серологической реакции. Так, например, для брюшного тифа диа-гностический титр РА составляет 1:200, для сыпного тифа 1:100, а для РПГА при брюшном тифе 1:40 и т.д. (табл. 2.4). Основанием для того, чтобы считать ту или иную реакцию положительной, является превы-шение диагностического титра при постановке реакции не менее чем в 2–4 раза.

В то же время, если человек уже болел тем инфекционным забо-леванием, диаг ностика которого проводится в настоящий момент, для исключения ложноположительного результата исследование проводят с парными сыворотками, полученными с интервалом от 7 до 14 дней. Диагностически значимым считается нарастание титра антител при исследовании парных сывороток не менее чем в 4 раза или снижение титра при постановке реакции в поздние сроки болезни.

51Глава 2 Лабораторные методыТа

блиц

а 2.

4. И

мм

уно

ло

гичес

кий

мет

од

в д

иаг

но

сти

ке б

акте

ри

альн

ых

ин

фек

ци

й

Бакт

ерио

зы

и во

збуд

ител

иСе

роло

гиче

с кая

pеа

кция

, на

знач

ение

Особ

енно

сти

пост

анов

ки П

олож

ител

ьны

й ре

зуль

тат

и сп

особ

его

оце

нки

Бр

юш

но

й т

иф

Sal

mo

nel

la t

yph

i, п

арат

иф

ы

A, B

, C

Сер

ои

ден

ти ф

ика

ци

я Р

А

Сер

од

иаг

но

с ти

ка

РА

Ви

дал

я

Реа

кци

я п

асси

вн

ой

Vi-

гем

аггл

ю ти

нац

ии

(Р

ПГА

)

Оп

ред

елен

ие

ви

да

во

збуд

ите

ля

В к

он

це

пер

во

й н

едел

и

бо

лез

ни

с О

- и

Н-в

ид

о вы

ми

ди

агн

ост

ику

мам

и

У р

еко

нвал

есц

ен то

в и

ли

ц с

по

до

зрен

ием

на

но

сите

льст

во

По

ло

жи

тел

ьн

ая р

еакц

ия,

соо

твет

ствую

щая

ти

тру

ви

до

во

й

сыво

ро

тки

Ди

агн

ост

ичес

кий

ти

тр 1

:200 с

О-а

нти

ген

ом

пр

и

во

змо

ж н

ост

и д

иф

фе р

енц

ир

оват

ь т

екущ

ую и

нф

екц

ию

с «п

ри

ви

во

ч н

ой

» и

ли

ан

амн

ести

чес

кой

реа

к ци

ей:

О-а

нти

тел

а о

бн

а руж

иваю

тся в

раз

гар

бо

лез

ни

, а

зате

м

исч

езаю

т, Н

-ан

ти те

ла

по

яв л

яю

тся п

озд

нее

и о

стаю

тся н

а

дл

ите

льн

ый

ср

ок

Ди

агн

ост

ичес

кий

ти

тр 1

:40.

Vi-

анти

тел

а о

бн

аруж

иваю

т ся у

рек

он

вал

есц

енто

в и

но

сите

лей

бр

юш

но

го т

иф

а

Сал

ьм

он

ел л

ез

Sal

mo

nel

la

Сер

ои

ден

ти ф

ика

ци

я

РА

с О

-гр

упп

овы

ми

и Н

-ви

до

вы

ми

сыво

ро

ткам

и

Сер

од

иаг

но

с ти

ка

РП

ГА

Оп

ред

елен

ие

груп

по

во

й и

ви

до

во

й п

ри

над

леж

но

сти

сал

ьм

он

елл

, вы

дел

енн

ых

в

чи

сто

й к

ульту

ре

С и

спо

льзо

ван

ием

ком

пл

ексн

ого

и г

руп

по

вы

х

ди

агн

ост

ику

мо

в

На

пер

вом

эта

пе

с по м

ощ

ью с

ыво

рото

к к

О-а

нти

генам

опред

еля е

тся

груп

пова

я при

над

леж

ност

ь са

льм

онел

, а

зате

м в

нут

ри

груп

пы

с п

ом

ощ

ью Н

-сы

ворото

к —

ви

д

Ди

агн

ост

ичес

кий

ти

тр 1

:32.

Пр

и п

ол

учен

ии

по

ло

жи

-

тел

ьн

ой

реа

к ци

и с

ко

мп

лек

сны

м э

ри

т ро

ци

тар

ны

м

ди

агн

ост

ику

мо

м с

та вят

реа

кци

и с

отд

ель н

ым

и

груп

по

вы

ми

О-д

иаг

но

сти

кум

ами

Ши

гел

лез

Sh

igel

la

Сер

ои

нд

ика

ци

я Р

ИФ

Сер

ои

ден

ти ф

и ка

ци

я Р

А

Сер

од

иаг

но

с ти

ка Р

ПГА

РС

К

Об

нар

ужен

ие

ви

до

в ш

иге

лл

Оп

ред

елен

ие

ви

да

ши

гел

л

Об

нар

ужен

ие

ви

до

спе ц

иф

и-

чес

ких

анти

тел

Экс

пр

есс-

ди

агн

ост

ика

ши

гел

лез

а

По

ло

жи

тел

ьн

ая р

еакц

ия,

соо

твет

ствую

щая

ти

тру

ви

до

во

й

сыво

ро

тки

Ди

агн

ост

ичес

кий

ти

тр 1

:160,

всп

ом

ога

тел

ьн

ый

мет

од

ди

агн

ост

ики


Бакт

ерио

зы

и во

збуд

ител

иСе

роло

гиче

ская

pеа

кция

, на

знач

ение

Особ

енно

сти

пост

анов

ки П

олож

ител

ьны

й ре

зуль

тат

и сп

особ

его

оце

нки

Эш

ери

хио

з

Esc

her

ich

ia c

oli

• эн

тер

ото

кси

ген

ны

е,

• эн

тер

оп

ато

ген

ны

е,

• эн

терои

нва

зивн

ые,

• эн

тер

оге

мо

рр

аги

чес

кие

Сер

ои

ден

тиф

ика

ци

я

Реа

кци

я а

ггл

юти

нац

ии

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РА

,

РП

ГА,

ИФ

А

Реа

кци

я н

а ст

екл

е с

ком

п-

лек

сно

й э

шер

ихи

озн

ой

ОК

-сы

во

ро

тко

й,

раз

вер

нут

ая р

еакц

ия ж

иво

й

кул

ьту

ры

с г

руп

по

во

й О

К-

сыво

ро

тко

й,

раз

вер

нут

ая

реа

кци

я г

рет

ой

кул

ьту

ры

(без

К-а

нти

ген

а) с

ти

по

вы

ми

О-с

ыво

ро

ткам

и

В п

арн

ых

сыво

ро

тках

Оп

ред

елен

ие

IgM

и Ig

G

анти

тел

к э

шер

ихи

ям

Оп

ред

елен

ие

ви

до

во

й п

ри

над

леж

но

сти

во

збуд

ите

ля

Оп

ред

елен

ие

груп

по

во

й п

ри

над

леж

но

сти

ки

шеч

но

й

пал

очки

Оп

ред

елен

ие

в р

амка

х гр

упп

ово

й п

ри

над

леж

но

сти

пат

оге

нн

ого

сер

овар

а ки

шеч

но

й п

ало

чки

по

О-а

нти

ген

у

Нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

чер

ез 7

–10 с

ут н

е м

енее

чем

в

4 р

аза

Нал

ичи

е Ig

M-а

нти

тел

сви

дет

ельст

вуе

т о

б о

стр

ой

ин

фек

-

ци

и,

нал

ичи

е Ig

G-а

нти

тел

— о

бак

тер

ио

но

сите

льст

ве

Ли

стер

ио

з Lis

teri

a m

on

ocy

-

tog

enes

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РА

, Р

ПГА

, Р

СК

Ан

тите

ла

вы

раб

аты

ваю

тся

на

нев

ысо

ком

ур

овн

е

Всп

ом

ога

тел

ьн

ый

мет

од

.

Ди

агн

ост

ичес

кий

ти

тр Р

А 1

:250

Иер

син

ио

з

Yer

sin

ia e

nte

roco

litic

a.

Псе

вд

оту

бер

кул

ез

Yer

sin

ia р

seud

otu

ber

culo

sis

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РП

ГА

ИФ

А

В п

арн

ых

сыво

ро

тках

(пер

вы

й з

або

р 1

–3 c

ут)

Нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

чер

ез 7

–10 с

ут н

е м

енее

чем

в

4 р

аза

Чум

а

Yer

sin

ia p

esti

s

Сер

ои

нд

ика

ци

я

Реа

кци

я л

атек

с-

аггл

юти

нац

ии

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РП

ГА

Об

нар

ужен

ие

во

збуд

ите

ля в

мат

ери

але

от

бо

льн

ого

Об

нар

ужен

ие

анти

тел

к ка

псу

льн

ом

у ан

тиге

ну

Экс

пр

есс-

ди

агн

ост

ика

чум

ы

Рет

ро

спек

тивн

ый

ди

агн

оз

чум

ы

Пр

од

ол

жен

ие

таб

л.

2.4


Бакт

ерио

зы

и во

збуд

ител

иСе

роло

гиче

ская

pеа

кция

, на

знач

ение

Особ

енно

сти

пост

анов

ки П

олож

ител

ьны

й ре

зуль

тат

и сп

особ

его

оце

нки

Хо

лер

а

Vib

rio

ch

ole

rae

Сер

ои

нд

ика

ци

я

РИ

Ф, р

еакц

ия

им

мо

би

ли

зац

ии

хол

ерн

ых

ви

бр

ио

но

в

ви

до

вы

ми

сы

во

ро

ткам

и

Сер

ои

ден

тиф

ика

ци

я

Реа

кци

я

аггл

юти

нац

ии

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РП

ГА,

РН

ИФ

Об

нар

ужен

ие

хол

ерн

ых

ви

бр

ио

но

в в

мат

ери

але

от

бо

льн

ого

Реа

кци

я н

а ст

екл

е с

хол

ер-

ны

ми

сы

во

ро

ткам

и О

-1,

О-1

39 и

RO

;

реа

кци

я н

а ст

екл

е с

сыво

-

ро

ткам

и О

гава

и И

наб

а;

раз

вер

нут

ая р

еакц

ия

с хо

лер

ны

ми

сы

во

ро

т кам

и

О-1

, О

-139 и

RO

В п

арн

ых

сыво

ро

тках

(за

бо

р

пер

во

й с

ыво

ро

т ки

— н

а 3-й

ден

ь б

ол

езн

и)

Экс

пр

есс-

ди

агн

ост

ика

хо

лер

ы

Оп

ред

елен

ие

пр

ин

адл

ежн

ост

и в

иб

ри

он

ов к

гр

упп

е

во

збуд

ите

лей

хо

лер

ы.

Оп

ред

елен

ие

сер

овар

а V

. ch

ole

rae

O1

Оп

ред

елен

ие

ви

да

и б

ио

вар

ов в

озб

уди

тел

ей п

ри

по

ло

жи

-

тел

ьн

ой

реа

кци

и н

е м

енее

чем

в 1

/2 т

итр

а сы

во

ро

тки

Всп

ом

ога

тел

ьн

ый

мет

од

.

Нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

чер

ез 6

–8 с

ут н

е м

енее

чем

в

4 р

аза

Бр

уцел

лез

Bru

cella

Сер

ои

ден

тиф

ика

ци

я

РА

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РА

Рай

та

РА

Хед

дл

ьсо

на,

РП

ГА, Р

СК

, Р

ИФ

Реа

кци

я К

умб

са

Ал

лер

год

иаг

но

сти

ка

Пр

об

а Б

юр

не

Опред

елен

ие

принад

леж

-

ност

и к

роду

бруц

елл

Чер

ез н

едел

ю о

т н

ачал

а

заб

ол

еван

ия

Чер

ез н

едел

ю о

т н

ачал

а

заб

ол

еван

ия

По

око

нчан

ии

ост

ро

го

пер

ио

да

По

око

нчан

ии

ост

ро

го

пер

ио

да

По

ло

жи

тел

ьн

ая р

еакц

ия,

соо

твет

ствую

щая

ти

тру

ди

агн

ост

ичес

кой

сы

во

ро

тки

Ди

агн

ост

ичес

кий

ти

тр 1

:200 в

теч

ени

е н

еско

льки

х л

ет

По

ло

жи

тел

ьн

ая р

еакц

ия в

теч

ени

е за

бо

лев

ани

я

Ин

ди

кац

ия н

епо

лн

ых

анти

тел

у р

еко

нвал

ес ц

енто

в и

пр

и

рет

ро

спек

тивн

ом

ди

агн

озе

По

ло

жи

тел

ьн

ая п

ро

ба

у р

еко

нвал

есц

енто

в,

вак

ци

ни

ро

-

ван

ны

х и

пр

и р

етр

осп

екти

вн

ом

д

иаг

но

зе

Пр

од

ол

жен

ие

таб

л.

2.4


Бакт

ерио

зы

и во

збуд

ител

иСе

роло

гиче

ская

pеа

кция

, на

знач

ение

Особ

енно

сти

пост

анов

ки П

олож

ител

ьны

й ре

зуль

тат

и сп

особ

его

оце

нки

Тул

яр

еми

я

Fran

cise

lla t

ula

ren

sis

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РА

, Р

ПГА

Кр

овян

о-к

апел

ьн

ая

пр

об

а

Ал

лер

год

иаг

но

сти

ка

Пр

об

а с

тул

яр

ин

ом

На

вто

ро

й н

едел

е

заб

ол

еван

ия

Нач

ин

ая с

3–5-г

о д

ня

заб

ол

еван

ия

с 3–5-г

о д

ня з

або

лев

ани

я

Ди

агн

ост

ичес

кий

ти

тр Р

А 1

:100

Экс

пр

есс-

ди

агн

ост

ика

тул

яр

еми

и

Ди

агн

оз

теку

щей

ин

фек

ци

и и

рет

ро

спек

тивн

ый

ди

агн

оз

Си

би

рск

ая я

зва

Bac

illus

antr

acis

Сер

ои

нд

ика

ци

я

Реа

кци

я п

рец

ип

ита

ци

и

по

Аск

ол

и,

РИ

Ф

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РП

ГА, И

ФА

Ал

лер

год

иаг

но

сти

ка

Вн

утр

ико

жн

ая п

ро

ба

с

антр

акси

но

м

Об

нар

ужен

ие

во

збу д

ите

ля

на

об

ъек

тах

вн

ешн

ей с

ред

ы,

в м

атер

иал

е о

т б

ол

ьн

ого

На

вто

ро

й н

едел

е за

бо

ле-

ван

ия

Нач

ин

ая с

3–5-г

о д

ня

заб

ол

е ван

ия

Ко

льц

о п

рец

ип

ита

та п

ри

нал

ичи

и с

по

р в

озб

уди

тел

я

Экс

пр

есс-

ди

агн

ост

ика

си

би

рск

ой

язв

ы

Рет

ро

спек

тивн

ый

ди

агн

оз

сиб

ир

ско

й я

звы

Ди

агн

оз

теку

щей

ин

фек

ци

и и

рет

ро

спек

тивн

ый

ди

агн

оз

Ста

фи

ло

кокк

овая

ин

фек

ци

я

Sta

ph

ylo

cocc

us

aure

us

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РП

ГА,

ИФ

А

В п

арн

ых

сыво

ро

тках

с и

спо

льзо

ван

ием

ауто

анти

ген

ов

Нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

чер

ез 7

–10 с

ут н

е м

енее

чем

в 4

раз

а

Стр

епто

кокк

овая

ин

фек

ци

я

Str

epto

-co

ccus

spp

.С

еро

ин

ди

кац

ия

Реа

кци

я п

рец

ип

ита

ци

и

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РС

К

Об

нар

ужен

ие

анти

ген

ов

стр

епто

кокк

а в м

оче

бо

ль -

но

го с

по

мо

щью

гр

упп

о вы

х

стр

епто

кокк

овы

х сы

во

ро

ток

Об

раз

ован

ие

пр

еци

пи

тата

сви

дет

ельст

вуе

т о

нал

ичи

и с

треп

токо

кка

в б

ио

ло

гичес

ком

мат

ери

але

и е

го п

ри

над

леж

но

сти

к с

оо

твет

ствую

щей

гр

упп

е

стр

епто

кокк

ов (

А,

В,

С,

D,

F, G

)

Пр

од

ол

жен

ие

таб

л.

2.4


Бакт

ерио

зы

и во

збуд

ител

иСе

роло

гиче

ская

pеа

кция

, на

знач

ение

Особ

енно

сти

пост

анов

ки П

олож

ител

ьны

й ре

зуль

тат

и сп

особ

его

оце

нки

РН

ан

тите

лам

и с

ыво

-

ро

тки

кр

ови

бо

льн

ого

гем

ол

ити

чес

кой

акти

вн

ост

и с

треп

то -

кокк

ово

го с

треп

тол

и-

зин

а-О

(А

СЛ

О)

Исс

лед

ован

ие

пар

ны

х

сыво

ро

ток

Од

но

крат

но

(7–14-й

дн

и

бо

лез

ни

)

В п

арн

ых

сыво

ро

тках

Нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

чер

ез 1

0–14 с

уто

к н

е м

енее

чем

в 4

раз

а

Вы

ше

250 А

ЕS

tO —

ост

рая

стр

епто

кокк

овая

ин

фек

ци

я

Отс

утст

ви

е сн

иж

ени

я в

теч

ени

е 6 м

ес о

т н

ачал

а

заб

ол

еван

ия —

во

змо

жн

ост

ь р

еци

ди

ва

ил

и о

сло

жн

ени

й

Пн

евм

око

кко

вая

ин

фек

ци

я

Str

epto

cocc

us

pneu

monia

e

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РП

ГА,

ИФ

А

В п

арн

ых

сыво

ро

тках

(пер

вы

й з

або

р к

ро

ви

— п

ри

по

ступ

лен

ии

в с

тац

ио

нар

)

Нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

чер

ез 7

–10 с

ут н

е м

енее

чем

в

4 р

аза

Гем

оф

ил

ьн

ая и

нф

екц

ия

Hae

mo

ph

ilus

infl

uen

zae

Лег

ио

нел

лез

Leg

ion

ella

pn

eum

op

hila

Ди

фте

ри

я

Сo

ryn

ebac

te-r

ium

dip

hth

eria

e

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РП

ГА,

ИФ

А

В п

арн

ых

сыво

ро

тках

(пер

вы

й з

або

р 1

–3 c

утки

)

Нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

чер

ез 7

–10 с

ут н

е м

енее

чем

в

4 р

аза

Мен

ин

гоко

кко

вая

ин

фек

ци

я

Nei

sser

ia m

enin

git

idis

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РП

ГА,

ИФ

А

В п

арн

ых

сыво

ро

тках

(пер

вы

й з

або

р 1

–3 c

утки

)

Нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

чер

ез 7

–10 с

ут н

е м

енее

чем

в

4 р

аза

Леп

ра

Myc

obac

teri

um

lep

rae

Ал

лер

год

иаг

но

сти

ка

Леп

ро

ми

но

вая

пр

об

а

Учет

рез

ульта

тов ч

ерез

2–4 н

ед

Ди

агн

оз

теку

щей

ин

фек

ци

и

Пр

од

ол

жен

ие

таб

л.

2.4


Бакт

ерио

зы

и во

збуд

ител

иСе

роло

гиче

ская

pеа

кция

, на

знач

ение

Особ

енно

сти

пост

анов

ки П

олож

ител

ьны

й ре

зуль

тат

и сп

особ

его

оце

нки

Во

звр

атн

ый

ти

ф:

эпи

дем

ичес

кий

Вo

rrel

ia r

ecurr

enti

s

энд

еми

чес

кий

В. d

utt

on

i, В

. p

ersi

ca

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РС

К,

реа

кци

я н

агр

узки

спи

ро

хет

тро

мб

оц

ита

ми

Оп

ред

елен

ие

анти

тел

в с

ыво

ро

тке

кро

ви

бо

ль н

ого

Всп

ом

ога

тел

ьн

ый

мет

од

Ди

агн

ост

ика

тек

ущег

о з

або

лев

ани

я

Икс

од

овы

е кл

ещев

ые

бо

рр

ели

озы

Bo

rrel

ia b

urg

do

rfer

i,

B. af

zelii

, B

. g

arin

ii

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РН

ИФ

,

ИФ

А

Оп

ред

елен

ие

анти

тел

в с

ыво

ро

тке

кро

ви

и

син

ови

альн

ой

жи

дко

сти

бо

льн

ого

Ди

агн

ост

ика

тек

ущег

о з

або

лев

ани

я

Леп

тосп

ир

озы

Lep

tosp

ira

inte

rro

gat

e

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РП

ГА,

pеа

кци

я а

ггл

юти

нац

ии

и

ли

зиса

В п

арн

ых

сыво

ро

тках

(в р

азга

р з

або

лев

ани

я

и в

пер

ио

д

рек

он

вал

есц

енц

ии

)

Нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

не

мен

ее ч

ем в

4 р

аза

Эр

ли

хио

зы

Еrl

ich

ia c

haf

feen

sis,

Е. ca

ms

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РН

ИФ

В п

арн

ых

сыво

ро

тках

с

оп

ред

елен

ием

Ig

M и

Ig

G

анти

тел

Ди

агн

ост

ика

заб

ол

еван

ия н

а 2-й

нед

еле

с

по

дтв

ерж

ден

ием

на

4–6-й

нед

елеП

ро

до

лж

ени

е та

бл

. 2

.4


Бакт

ерио

зы

и во

збуд

ител

иСе

роло

гиче

ская

pеа

кция

, на

знач

ение

Особ

енно

сти

пост

анов

ки П

олож

ител

ьны

й ре

зуль

тат

и сп

особ

его

оце

нки

Ри

ккет

сио

зы.

Эп

ид

еми

чес

кий

сы

пн

ой

тиф

Ric

kett

sia

pro

waz

ekii

Сер

од

иаг

но

сти

каР

А,

РС

К,

РТ

ГА,

РН

ИФ

,И

ФА

Оп

ред

елен

ие

ви

до

вы

х ан

тите

л в

сы

во

ро

тке

кро

ви

б

ол

ьн

ого

Ди

агн

ост

ика

заб

ол

еван

ия с

ид

енти

фи

кац

ией

во

збуд

ите

ля

Эн

дем

ичес

кий

кр

ыси

ны

й

сып

но

й т

иф

R. ty

ph

i

Мар

сел

ьск

ая л

ихо

рад

каR

. сo

no

rii

Аст

рах

анск

ая р

икк

етси

оз-

ная

ли

хор

адка

R. co

no

ri v

ar. ca

sp.

Ор

ни

тоз

Ch

lam

ydia

psi

ttac

iС

еро

ин

ди

кац

ия

РИ

Ф,

ИФ

АС

еро

ди

агн

ост

ика

ИФ

А,

РН

ИФ

Об

нар

ужен

ие

хлам

ид

ий

в м

атер

иал

е о

т б

ол

ьн

ого

Нео

дн

окр

атн

ое

оп

ред

елен

ие

IgM

, Ig

G и

Ig

A а

нти

тел

Исп

ол

ьзо

ван

ие

анти

ген

ов

хлам

ид

ий

раз

ли

чн

ых

сер

оти

по

в

Экс

пр

есс-

ди

агн

ост

ика

хл

ами

ди

оза

Ig

М-а

нти

тел

а св

ид

етел

ьст

вуе

т о

нач

альн

ом

эта

пе

и а

кти

вн

ост

и

хлам

ид

ио

за.

Чер

ез 2

–3 н

ед п

оявл

яю

тся Ig

G-а

нти

тел

а в

вы

соко

м т

итр

е (1

:4000).

Ig

А а

нти

тел

сви

дет

ельст

вуе

т о

тяж

ело

м т

ечен

ии

заб

ол

еван

ия и

вы

раж

енн

ом

ау

тои

мм

унн

ом

пр

оц

ессе

(си

нд

ро

м Р

ейте

ра)

. О

тсут

стви

е ан

тите

л н

е о

знач

ает

отс

утст

ви

я х

лам

ид

ио

за (

50%

)О

бн

аруж

ени

е ан

тите

л к

хл

ами

ди

ям

раз

ли

чн

ых

сер

оти

по

в

Ур

оге

ни

тал

ьн

ый

хл

ами

ди

-о

з, т

рах

ом

а, в

енер

ичес

кий

л

им

фо

гран

улем

ато

з и

др

.C

hla

myd

ia t

rach

om

atis

Пн

евм

охл

ами

ди

оз

Ch

lam

ydia

pn

eum

on

iae

Ми

коп

лаз

мо

з M

yco

pla

sma

pn

eum

on

iae,

Myc

op

lasm

a h

om

inis

Сер

ои

нд

ика

ци

яР

ИФ

Сер

од

иаг

но

сти

каИ

ФА

, Р

СК

,Р

ПГА

Об

нар

ужен

ие

ми

ко п

лаз

м

в л

аваж

но

й ж

ид

кост

и,

соск

об

ах с

о с

ли

зист

ых

об

ол

очек

В п

арн

ых

сыво

ро

тках

(п

ервы

й з

або

р 1

–6 c

ут)

Экс

пр

есс-

ди

агн

ост

ика

ми

коп

лаз

мен

но

й и

нф

екц

ии

Нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

чер

ез 1

0–14 с

ут н

е м

енее

чем

в 4

раз

а

Ур

еап

лаз

мо

зU

reap

lasm

a ure

alit

ica

Око

нчан

ие

таб

л.

2.4


В некоторых случаях, например при бруцеллезе, антитела сыво-ротки больного не дают феномена агглютинации — так называемые неполные антитела. Для их выявления реакцию ставят в два этапа. На первом этапе к сыворотке больного добавляют, как обычно, бактериальный диагностикум (взвесь бруцелл), а на втором этапе в тест-систему вносят сыворотку, полученную иммунизацией живот-ных иммуноглобулинами человека. После соответствующей очистки эта сыворотка содержит в своем составе антитела к иммуноглобули-нам человека, способные давать в случае формирования иммунного комплекса феномен агглютинации. В результате, если в сыворотке больного содержатся неполные антитела, то они присоединяются к бруцеллам в составе диагностикума, а к ним, в свою очередь, анти-тела к иммуноглобулинам человека. В конечном итоге эти «тройные» комплексы в физрастворе объединяются между собой и выпадают в осадок. Такая реакция по выявлению неполных антител получила название реакции Кумбса.

РА в различных вариантах ее постановки может использоваться не только при бактериальных инфекциях, но также при некоторых мико-зах и заболеваниях, вызванных простейшими (табл. 2.4–2.6).

При заболеваниях вирусной природы постановка РА невозможна из-за мелких размеров вируса. В то же время при вирусных инфек-циях используют один из вариантов реакции, связанных с явле-нием гемагглютинации куриных эритроцитов вирусами. В основе такой серологической реакции лежит способность противовирус-ных антител блокировать у вируса гемагглютинирующие свойства, а сам диагностический прием носит название РТГА. Эту реакцию вос производят как для идентификации вируса, полученного при вирусологическом исследовании, так и для серодиагностики вирус-ных инфекций путем обнаружения антител в сыворотке больного (табл. 2.6).

В число методов с использованием феномена перекрестного взаи-модействия иммунных комплексов входит и реакция преципитации с тем отличием от описанных выше методов, что антиген в ней имеет молекулярную форму и образует прозрачный раствор. В присутствии антител и электролита иммунные комплексы сшиваются в конгло-мераты и вызывают помутнение среды. Чтобы зарегистрировать это помутнение, существует несколько способов — реакция кольце-преципитации, реакция преципитации в геле, с помощью прибора нефелометра, позволяющего зарегистрировать даже слабую степень помутнения среды.

Среди методов с использованием феномена комплементар-ного лизиса наибольшей известностью пользуется РСК, учет которой производится по феномену гемолиза и которая широко используется для диагностики инфекций как бактериальной, так и небактериальной этиологии.

59Глава 2 Лабораторные методыТа

блиц

а 2.

5. И

мм

уно

ло

гичес

кий

мет

од

в д

иаг

но

сти

ке п

ро

тозо

он

озн

ых

и п

араз

ита

рн

ых

ин

фек

ци

й

Прот

озоо

з и

возб

удит

ель

Серо

логи

ческ

ая

реак

ция

и ее

на

знач

ение

Особ

енно

сти

пост

анов

киПо

лож

ител

ьны

й ре

зуль

тат

и сп

особ

его

оце

нки

Ам

еби

аз

En

tam

oeb

a h

ysto

litic

aС

еро

ди

агн

ост

ика

РП

ГА,

ИФ

А

В п

арн

ых

сыво

ро

тках

Нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

чер

ез 1

0–14 с

ут н

е м

енее

чем

в 4

раз

а п

ри

вн

еки

шеч

но

м а

меб

иаз

е и

нал

ичи

и

ткан

евы

х ф

ор

м

То

ксо

пл

азм

оз

Toxo

pla

sma

go

nd

iiС

еро

ди

агн

ост

ика

РН

ИФ

ИФ

А

В п

арн

ых

сыво

ро

тках

с

оп

ред

елен

ием

Ig

M

и Ig

G а

нти

тел

, а

такж

е

ави

дн

ост

и Ig

G а

нти

тел

Нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

чер

ез 1

0–14 с

ут н

е м

енее

чем

в 4

раз

а го

во

ри

т о

нал

ичи

и т

окс

оп

лаз

мо

за,

но

не

но

сите

льст

ва.

Оп

ред

елен

ие

IgM

ан

тите

л п

ри

мен

яет

ся

дл

я д

иаг

но

сти

ки о

стр

ого

то

ксо

пл

азм

оза

. А

нти

тел

а Ig

G

по

явл

яю

тся в

пер

ио

д р

еко

нвал

есц

енц

ии

и с

охр

аняю

тся

до

10 л

ет.

Ни

зкая

ави

дн

ост

ь Ig

G а

нти

тел

го

во

ри

т,

что

от

мо

мен

та з

араж

ени

я п

ро

шл

о н

е б

ол

ее 1

6 н

ед,

вы

сока

я а

ви

дн

ост

ь —

бо

льш

ий

ср

ок

Кр

ип

тосп

ор

ид

ио

з

Cry

pto

spo

rid

ium

par

vum

Сер

ои

нд

ика

ци

я

РИ

Ф

ИФ

А

Об

нар

ужен

ие

оо

ци

ст

во

збуд

ите

ля в

кал

е

Экс

пр

есс-

ди

агн

ост

ика

кр

ип

тосп

ор

ид

ио

за

Мал

яр

ия

Pla

smo

diu

m v

ivax

,

P. m

alar

iae,

P. o

vale

,

P. fa

lcip

arum

Сер

ои

нд

ика

ци

я

РИ

Ф

Сер

од

иаг

но

сти

ка

РН

ИФ

РП

ГА

ИФ

А

Об

нар

ужен

ие

мал

яр

ий

ны

х

пл

азм

од

иев

Чер

ез н

едел

ю о

т н

ачал

а

заб

ол

еван

ия

Экс

пр

есс-

ди

агн

ост

ика

мал

яр

ия

Ди

агн

ост

ичес

кий

ти

тр 1

:80,

в с

луч

ае P

. fa

lcip

arum

сви

дет

ельст

вуе

т о

свеж

ей и

нваз

ии

Лям

бл

ио

з

Lam

blia

in

test

inal

is

(Gia

rdia

lam

blia

)

Сер

од

иаг

но

сти

ка

ИФ

А

Об

нар

ужен

ие

IgM

ан

тите

лН

али

чи

е Ig

M а

нти

тел

сви

дет

ельст

вуе

т о

лям

бл

ио

зе,

но

не

о н

оси

тел

ьст

ве


Прот

озоо

з и

возб

удит

ель

Серо

логи

ческ

ая

реак

ция

и ее

на

знач

ение

Особ

енно

сти

пост

анов

киПо

лож

ител

ьны

й ре

зуль

тат

и сп

особ

его

оце

нки

То

ксо

кар

оз

Toxo

cara

can

isС

еро

ди

агн

ост

ика

РП

ГА,

ИФ

А

Об

нар

ужен

ие

анти

тел

к

во

збуд

ите

лю

Осн

овн

ой

мет

од

ди

агн

ост

ики

пр

и н

ево

змо

жн

ост

и

об

нар

ужи

ть в

озб

уди

тел

я

Ши

сто

сом

оз

Sch

isto

som

a h

aem

ato

biu

m,

S. m

anso

ni

Тр

ихи

нел

лез

Tric

hin

ella

sp

iral

is

Табл

ица

2.6.

Им

мун

ол

оги

чес

кие

мет

од

ы в

ди

агн

ост

ике

ви

рус

ны

х и

нф

екц

ий

Виру

сная

инф

екци

яСе

роло

гиче

ские

м

арке

ры

Хара

ктер

ика

мар

керо

вД

иагн

ости

ческ

ое

знач

ение

ВГB

HB

sAg

По

вер

хно

стн

ый

ан

тиге

н

ви

рус

а ге

пат

ита

В (

HB

V)

Ин

фи

ци

ро

ван

но

сть H

BV

HB

eAg

Ан

тиге

н и

нф

екц

ио

нн

ост

и

HB

V

Реп

ли

кац

ия H

BV

в г

епат

оц

ита

х, в

ысо

кая

ин

фек

ци

он

но

сть к

ро

ви

HB

cAg

Сер

дц

еви

нн

ый

ан

тиге

н H

BV

Реп

ли

кац

ия H

BV

в г

епат

оц

ита

х, в

кр

ови

в с

во

бо

дн

ом

ви

де

не

вы

явл

яет

ся

анти

-НВ

с (t

ota

l)

(НВ

сАg

)

Сум

мар

ны

е ан

тите

ла

к H

BcA

gР

етр

осп

екти

вн

ая д

иаг

но

сти

ка Г

B,

осо

бен

но

в о

тсут

стви

е

HB

sAG

и п

ри

нев

ери

фи

ци

ро

ван

ны

х ге

пат

ита

х

D а

нти

-НВ

с (Н

ВсА

g Ig

M)

Ан

тите

ла

клас

са М

к

сер

дц

еви

нн

ом

у ан

тиге

ну

Ран

ни

й с

ыво

ро

точн

ый

мар

кер

ГB

, ук

азы

вае

т н

а о

стр

ую

ин

фек

ци

ю,

пр

и Х

ГB м

арки

руе

т р

епл

ика

ци

ю H

BV

и а

кти

вн

ост

ь п

ро

цес

са в

печ

ени

Око

нчан

ие

таб

л.

2.5


Виру

сная

инф

екци

яСе

роло

гиче

ские

м

арке

ры

Хара

ктер

ика

мар

керо

вД

иагн

ости

ческ

ое з

наче

ние

Ан

ти-Н

Ве

(HB

eAb)

Ан

тите

ла

к ан

тиге

ну

ин

фек

ци

он

но

сти

Нач

ало

ста

ди

и р

еко

нвал

есц

енц

ии

(и

скл

ючен

ие

—

мут

антн

ая ф

ор

ма

HB

V)

Ан

ти-H

Bs

(HB

sАb)

Пр

оте

кти

вн

ые

анти

тел

а к

по

вер

хно

стн

ом

у ан

тиге

ну

HB

V

Пер

енес

енн

ая и

нф

екц

ия и

ли

нал

ичи

е о

ствак

ци

нал

ьн

ых

анти

тел

; о

бн

аруж

ени

е ан

тите

л в

пер

вы

е н

едел

и Г

B

пр

огн

ози

руе

т р

азви

тие

фул

ьм

ин

антн

ого

геп

ати

та

Ви

рус

ны

й г

епат

ит

D

(ВГD

)

IgM

ан

ти-H

DV

Ан

тите

ла

клас

са М

к H

DV

Реп

ли

кац

ия в

ир

уса

геп

ати

та D

(H

DV

) в о

рга

ни

зме

IgG

ан

ти-H

DV

Ан

тите

ла

клас

са G

к H

DV

Во

змо

жн

ая и

нф

иц

ир

ован

но

сть H

DV

ил

и п

ерен

есен

ная

ин

фек

ци

я

HD

Ag

Ан

тиге

н H

DV

Мар

кер

нал

ичи

я H

DV

в о

рга

ни

зме

Ви

рус

ны

й г

епат

ит

С

(ВГC

)

Ан

ти-H

CV

Ig

GА

нти

тел

а кл

асса

G к

ви

рус

у

геп

ати

та С

(H

CV

)

Во

змо

жн

ая и

нф

иц

ир

ован

но

сть H

CV

ил

и п

ерен

есен

ная

ин

фек

ци

я

Ан

ти-H

CV

co

re Ig

MА

нти

тел

а кл

асса

М

к се

рд

цев

ин

ны

м б

елка

м H

CV

Тек

ущая

ин

фек

ци

я (

ост

рая

ил

и х

ро

ни

чес

кая в

фаз

е

реа

кти

вац

ии

)

Ан

ти-H

CV

co

re Ig

GА

нти

тел

а кл

асса

G

к се

рд

цев

ин

ны

м б

елка

м H

CV

Ин

фи

ци

ро

ван

но

сть H

CV

ил

и п

ерен

есен

ная

ин

фек

ци

я

Ан

ти-H

CV

NS

Ан

тите

ла

к н

естр

укту

рн

ым

бел

кам

HC

V

Хр

он

ичес

кая с

тад

ия г

епат

ита

С (

ГC)

ВГA

IgM

ан

ти-H

AV

Ан

тите

ла

клас

са М

к H

AV

Ост

рая

ин

фек

ци

я

IgG

ан

ти-H

AV

Ан

тите

ла

клас

са G

к H

AV

Пер

енес

енн

ая и

нф

екц

ия,

сохр

аняю

тся п

ож

изн

енн

о

ВГE

IgM

ан

ти-H

EV

Ан

тите

ла

клас

са М

к H

EV

Ост

рая

ин

фек

ци

я

IgG

ан

ти-H

EV

Ан

тите

ла

клас

са G

к H

EV

Пер

енес

енн

ая и

нф

екц

ия

Пр

од

ол

жен

ие

таб

л.

2.6


Виру

сная

инф

екци

яСе

роло

гиче

ские

м

арке

ры

Хара

ктер

ика

мар

керо

вД

иагн

ости

ческ

ое з

наче

ние

ВИ

Ч-и

нф

екц

ия

р24

Сер

дц

еви

нн

ый

бел

ок

ВИ

Ч2–8 н

ед п

осл

е за

раж

ени

я,

мар

кер

раз

ви

тия С

ПИ

Да

IgM

an

ti-p

24

Ан

тите

ла

клас

са М

к б

елку

р24 В

ИЧ

Пер

вы

е м

есяц

ы п

осл

е за

раж

ени

я В

ИЧ

IgG

an

ti-p

24

Ан

тите

ла

клас

са G

к б

елку

р24 В

ИЧ

Тек

ущая

ВИ

Ч-и

нф

екц

ия

IgG

an

ti-g

p41

IgG

an

ti-g

p120

IgG

an

ti-g

p160

Ан

тите

ла

клас

са G

к п

овер

хно

стн

ым

ан

тиге

нам

ВИ

Ч

Тек

ущая

ВИ

Ч-и

нф

екц

ия ч

ерез

3–6 м

ес п

осл

е за

раж

ени

я

Гри

пп

Вы

явл

ени

е ан

тите

л в

РС

К, Р

ТГА

с и

спо

льзо

ван

ием

пар

ны

х сы

во

ро

ток

Рет

ро

спек

тивн

ый

ди

агн

оз,

нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

не

мен

ее ч

ем в

4 р

аза

Вы

явл

ени

е ан

тите

л в

реа

кци

и р

ади

альн

ого

гем

ол

иза

Экс

пр

есс-

ди

агн

ост

ика

гр

ип

па

Кр

асн

уха

IgМ

-, Ig

G-

Отс

утст

ви

е ан

тите

л (

ИФ

А)

Отс

утст

ви

е за

бо

лев

ани

я в

нас

тоящ

ее в

рем

я и

в а

нам

нез

е

IgМ

-, Ig

G+

Нал

ичи

е ан

тите

л

вто

ри

чн

ого

отв

ета

Пер

енес

енн

ое

заб

ол

еван

ие

в а

нам

нез

е

IgМ

+, Ig

G-

Нал

ичи

е ан

тите

л

пер

ви

чн

ого

отв

ета

Заб

ол

еван

ие

в р

анн

ей с

тад

ии

, п

ери

од

об

ост

рен

ия

IgМ

+, Ig

G+

Нал

ичи

е ан

тите

л

пер

ви

чн

ого

и в

тор

ичн

ого

отв

ета

Пер

ио

д о

бо

стр

ени

я

Пр

од

ол

жен

ие

таб

л.

2.6


Виру

сная

инф

екци

яСе

роло

гиче

ские

м

арке

ры

Хара

ктер

ика

мар

керо

вД

иагн

ости

ческ

ое з

наче

ние

Ко

рь

Оп

ред

елен

ие

IgM

и Ig

G а

нти

тел

мет

од

ом

ИФ

АН

али

чи

е Ig

M а

нти

тел

пр

и о

тсут

стви

и Ig

G х

арак

тер

но

дл

я

ост

ро

го п

ери

од

а (п

ери

од

а вы

сып

ани

й)

Оп

ред

елен

ие

анти

тел

в п

арн

ых

сыво

ро

тках

мет

од

ами

РТ

ГА, Р

СК

Рет

ро

спек

тивн

ый

ди

агн

оз,

нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

не

мен

ее ч

ем в

4 р

аза

Эп

ид

еми

чес

кий

пар

оти

тО

пр

едел

ени

е Ig

M и

Ig

G а

нти

тел

мет

од

ом

ИФ

АН

али

чи

е Ig

M а

нти

тел

пр

и о

тсут

стви

и Ig

G х

арак

тер

но

дл

я

ост

ро

го п

ери

од

а

По

ли

ом

иел

ит

Вы

явл

ени

е ан

тите

л в

сы

во

ро

тке

кро

ви

в р

еакц

ии

пр

еци

пи

тац

ии

, Р

СК

Вы

явл

ени

е ан

тите

л с

о 2

–3-й

нед

ели

заб

ол

еван

ия

Эн

тер

ови

рус

ная

ин

фек

ци

я

ЭВ

-сп

еци

фи

-

чес

кие

IgM

Нал

ичи

е ан

тите

л

пер

ви

чн

ого

отв

ета

Вы

явл

яю

тся в

ср

оки

от

пер

во

й н

едел

и з

або

лев

ани

я д

о

6 м

ес о

т н

ачал

а и

нф

екц

ии

Ви

рус

ны

е д

иар

еи

(ро

тови

рус

ная

и н

ор

ови

рус

ная

ин

фек

ци

я

Оп

ред

елен

ие

анти

ген

ов в

ир

усо

в в

кал

е с

по

мо

щью

ИФ

АЭ

ксп

рес

с-д

иаг

но

сти

ка в

ир

усн

ых

ди

арей

(о

сно

вн

ой

мет

од

)

Оп

ред

елен

ие

ви

до

вы

х ан

тите

л к

ви

рус

ам

в с

ыво

ро

тке

кро

ви

с п

ом

ощ

ью

ИФ

А, Р

СК

Всп

ом

ога

тел

ьн

ый

мет

од

ОР

ВИ

Вы

явл

ени

е ви

до

вы

х ан

тите

л в

РС

К, И

ФА

с и

спо

льзо

ван

ием

пар

ны

х сы

во

ро

ток

Нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

не

мен

ее ч

ем в

4 р

аза

Гер

пет

ичес

кая

ин

фек

ци

я

Вы

явл

ени

е ан

тите

л к

ви

рус

у ге

рп

еса

пр

ост

ого

ти

па

1 и

2

в п

арн

ых

сыво

ро

тках

кр

ови

мет

од

ом

ИФ

А

Об

ост

рен

ие

ин

фек

ци

и п

ри

нар

аста

ни

и т

итр

а ан

тите

л н

е

мен

ее ч

ем в

4 р

аза

Вет

рян

ая о

спа

Оп

ред

елен

ие

уро

вн

я Ig

M а

нти

тел

к H

erp

es z

ost

er

мет

од

ом

ИФ

А

Ост

ры

й п

ери

од

ин

фек

ци

и п

ри

нал

ичи

и Ig

M

Ци

том

егал

ови

рус

ная

ин

фек

ци

я (

ЦМ

ВИ

)

Оп

ред

елен

ие

уро

вн

я Ig

M а

нти

тел

к ц

ито

мег

ало

ви

рус

у

(ЦМ

В)

мет

од

ом

ИФ

А с

исп

ол

ьзо

ван

ием

пар

ны

х

сыво

ро

ток

Нар

аста

ни

е ти

тра

IgM

ан

тите

л п

ри

об

ост

рен

ии

ин

фек

ци

и

не

ран

ее 4

-й н

ед з

або

лев

ани

я

Пр

од

ол

жен

ие

таб

л.

2.6


Виру

сная

инф

екци

яСе

роло

гиче

ские

м

арке

ры

Хара

ктер

ика

мар

керо

вД

иагн

ости

ческ

ое з

наче

ние

Ин

фек

ци

он

ны

й

мо

но

нук

лео

з (в

ир

ус

Эп

ште

йн

а–Б

арр

)

Реа

кци

я Г

оф

фа–

Бау

ерр

а —

нес

пец

иф

ичес

кая

сер

ол

оги

чес

кая р

еакц

ия г

етер

оге

маг

глю

тин

аци

и

эри

тро

ци

тов л

ош

ади

со 2

-й н

едел

и з

або

лев

ани

я

Ор

иен

тир

ово

чн

ая д

иаг

но

сти

ка и

нф

екц

ио

нн

ого

мо

но

нук

лео

за п

ри

ди

агн

ост

ичес

ком

ти

тре

1:3

2

Оп

ред

елен

ие

уро

вн

я Ig

M и

Ig

G а

нти

тел

к ви

рус

у Э

пш

тей

на–

Бар

р м

ето

до

м И

ФА

Ост

ры

й п

ери

од

ин

фек

ци

и п

ри

нал

ичи

и Ig

M

Нат

урал

ьн

ая о

спа

Вы

явл

ени

е ан

тите

л в

РТ

ГА, Р

СК

, Р

Н н

а ку

ри

ны

х

эмб

ри

он

ах и

в к

ульту

рах

кл

ето

к

Рет

ро

спек

тивн

ый

ди

агн

оз

Гем

ор

раг

ичес

кие

ли

хор

адки

Вы

явл

ени

е ви

до

вы

х ан

тите

л в

РС

К, Р

Н,

РИ

А

(рад

ио

им

мун

ны

й а

нал

из)

с п

арн

ым

и с

ыво

ро

ткам

и

Нар

аста

ни

е ти

тра

анти

тел

не

мен

ее ч

ем в

4 р

аза

Кл

ещев

ой

эн

цеф

али

тО

пр

едел

ени

е сп

еци

фи

чес

ких

анти

тел

кл

ассо

в Ig

M и

Ig

G

в с

ыво

ро

тке

кро

ви

мет

од

ами

ИФ

А и

ли

РН

ИФ

, а

такж

е

ави

дн

ост

и Ig

G

Нал

ичи

е ан

тите

л к

лас

са Ig

M и

ни

зко

ави

дн

ых

IgG

явл

яет

ся п

ока

зате

лем

ост

ро

й и

нф

екц

ии

. П

ри

отс

утст

ви

и с

им

пто

мат

ики

со

сто

ро

ны

ЦН

С о

сно

ван

ием

дл

я п

ост

ано

вки

ди

агн

оза

явл

яет

ся о

дн

овр

емен

но

е

об

нар

ужен

ие

IgM

- и

Ig

G-а

нти

тел

ли

бо

4-к

рат

но

е

увел

ичен

ие

кон

цен

трац

ии

Ig

G-а

нти

тел

в о

бр

азц

е, в

зято

м

чер

ез 2

–3 н

ед

Око

нчан

ие

таб

л.

2.6


Реакция основана на том, что антитела в составе иммунных ком-плексов приобретают новое свойство — активировать систему компле-мента, которая в процессе активации формирует мембрано-атакую-щий комплекс и вызывает лизис антигена, находящегося в комплексе с антителами.

Система комплемента используется при диагностике лептоспироза на основе РА и лизиса лептоспир. При постановке этой реакции учет результатов проводят под микроскопом, наблюдая при положитель-ном тесте не только процесс агглютинации живой культуры лепто-спир, но и их комплементарный лизис.

В арсенале иммунодиагностики есть также методы, основан-ные на нейтрализующем действии антител, например, реакция нейтрализации (РН) воспроизводится на живых объектах, восприим-чивых к действию бактериальных экзотоксинов или вирусов. В соот-ветствии с этим различают РН токсина и РН вирусов. Суть реакции заключается в том, что антитела, взаимодействуя с токсином или вирусом, препятствуют проявлению их патогенного воздействия на живой объект. РН можно использовать для индикации бактериальных токсинов в биологическом материале, идентификации вирусов, для серодиагностики вирусных инфекций.

Очень близкими к реакциям нейтрализации по механизму воспро-изведения служат реакции иммобилизации, которые используют для идентификации возбудителей, обладающих подвижностью. Этот лабораторный прием применяют в диагностике сифилиса (реакция иммобилизации трепонем), а также холеры (иммобилизация холер-ного вибриона).

Еще один вариант — нейтрализация антителами сыворотки крови больного гемолитической активности стрептококкового стрепто-лизина-О (АСЛО). Этот тест используется для диагностики инфекций, ассоциированных с гемолитическим стрептококком группы А.

Аллергодиагностика основана на ориентировочном диагностиро-вании инфекционного процесса путем регистрации местной аллерги-ческой реакции, развивающейся на коже в месте введения микробного аллергена. Тем не менее при некоторых видах инфекционной патоло-гии этот метод до настоящего времени не потерял своего диагностиче-ского значения как скринингового теста.

Аллергическая проба. Для ее постановки человеку чаще всего внутрикожно вводится раствор микробных антигенов. Антигены взаи-модействуют с эпителиальными клетками в месте введения, что способ-ствует выделению хемокинов и привлечению к месту введения аллерге-на различных клеток иммунного ответа и прежде всего Т-лимфоцитов, которые под воздействием микробных антигенов выделяют провос-палительные цитокины. Все это в совокупности в течение 48 ч дает основные проявления положительной аллергической реакции — лим-фоидно-макрофагального инфильтрата в месте введения аллергена.

Аллергические пробы, хотя и носят лишь ориентировочный харак-тер, очень удобны при массовых обследованиях на наличие таких


инфекционных заболеваний, как туберкулез, бруцеллез, токсопламоз. В этих случаях положительная аллергическая проба указывает на инфицированность организма и необходимость более точной диагно-стики инфекционного процесса.

К числу современных методов диагностики инфекционных заболе-ваний относятся методы иммуноанализа. Это особая группа мето-дов, основанная на использовании меченых моноклональных антител. Моноклональные антитела получают с использованием так назы-ваемых гибридомных технологий, они высокоспецифичны, поскольку способны к взаимодействию только с одной наиболее характерной антигенной детерминантой среди всего набора видовых микробных антигенов. Моноклональные антитела обычно метятся с помощью красителей-флюорохромов. Такие антитела, присоединяясь к специ-фичному для них объекту — искомому микроорганизму в составе биологического материала, вызывают его свечение в ультрафиолето-вом свете, что может быть зарегистрировано, например, с помощью люминесцентного микроскопа. Этот способ обнаружения микробных возбудителей получил названия прямого иммунофлюоресцентного анализа (РИФ).

Этот способ используется не только для обнаружения возбуди-телей в составе материала от больного, но и для выявления антител к возбудителю в сыворотке крови (серодиагностика). В последнем случае убитую культуру возбудителя обрабатывают сывороткой боль-ного с последующим добавлением в систему меченных флюорохро-мом антител к IgG человека. Наблюдаемое в последующем свечение микроорганизма говорит о возникновении сложного иммунного ком-плекса — микроб + антитела из сыворотки больного класса IgG + люминесцирующие анти-IgG МКАТ. Такую реакцию называют реак-цией непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ).

Другой способ иммуноанализа — радиоиммунный анализ. Он основан на использовании моноклональных антител, меченных радио изотопом. Присоединение таких антител к специфичному им объекту придает последнему радиоактивность, что может быть опре-делено с помощью специальных приборов.

Высокоперспективный способ мечения моноклональных антител — с помощью фермента. В качестве последнего чаще всего используют растительный фермент — пероксидазу хрена. Обработка изучаемого объекта такими антителами требует последующего нанесения «хро-могена» — субстрата для фермента, меняющего цвет при образовании перекиси. В результате объект для специфического присоединения меченых антител приобретает окрашивание, которое может быть заре-гистрировано спектрофотометром, а метод получил название ИФА.

ИФА, как и описанный выше иммунофлюоресцентный анализ, можно воспроизводить в виде прямого (выявление антигенов возбу-дителя в биологическом материале) и непрямого (выявление антител в сыворотке больного) методов. В конечном итоге с помощью ИФА


можно обнаруживать микроорганизмы в материале от больного, противомикробные антитела и антитела к другим веществам анти-генной природы.

С введением в клиническую практику аппаратного ИФА диагно-стические возможности врача-инфекциониста значительно возросли. Особенно это касается серодиагностики, поскольку появилась воз-можность устанавливать не только наличие антител к тому или иному возбудителю в сыворотке крови больного, но и определять принад-лежность антител к тому или иному классу иммуноглобулинов, что повышает качество диагностики инфекционного заболевания. Дело в том, что антитела, принадлежащие разным классам иммуноглобули-нов, выполняют различные функции (рис. 2.1).

Определение уровня IgA-антител имеет значение при исследова-нии секретов слизистых оболочек в тех случаях, когда последние слу-жат входными воротами инфекции. IgA-антитела начинают вырабаты-ваться одновременно с IgG, и около 80% из них поступают в секреты слизистых оболочек. После исчезновения инфекционного агента из организма IgA-антитела еще в течение 2–4 мес продолжают секретиро-ваться, а затем исчезают. Если же микроб продолжает персистировать в организме, IgA-антитела продолжают регистрироваться в секретах. В связи с этой особенностью обнаружение IgA-антител в отсутствие клинических проявлений заболевания или через полгода после их исчезновения считают признаком хронического инфицирования.

Рост в сыворотке крови IgE-антител к тому или иному антигену, как правило, является свидетельством развития IgЕ-опосредованной аллергии к нему. В инфекционной практике подобное состояние осо-бенно часто сопутствует инфекционно-аллергическим осложнениям (кардит, полиартрит), а также грибковым инфекциям и гельминтозам и сопровождается развитием клинических признаков аллергического процесса.

Сыворотка крови,спинномозговаяжидкость, моча,околоплодная

жидкость

Секреты:слюна, слезы,молоко и др.

Антителап е р в и ч н о г о

иммунного ответа

Антителав т о р и ч н о г о

иммунного ответа

Антителас е к р е т о р н о г оиммунного ответа

АнтителаIgЕ-опосредованной

а л л е р г и и

Сыворотка крови(адсорбированына поверхноститучных клетоки базофилов)

Сывороткакрови

IgA IgEIgGIgM

Рис. 2.1. Диагностически значимые классы антител и их функции


Молекулярно-биологические методы К молекулярно-биологическим методам диагностики инфекцион-

ных заболеваний относятся генетический анализ, протеомный анализ, липидный анализ, комбинированные методы.

К методам генетического анализа относятся полимеразно-цепная ПЦР, которая наиболее широко применяется в инфекционной практике.

Суть ПЦР заключается в обнаружении в биологическом материале участков дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), специфичных для представителей того или иного вида микроорганизмов. ПЦР облада-ет очень высокой специфичностью и чувствительностью и позволяет обнаружить даже минимальные количества генетического материала, поскольку в содержание метода входит его селективная репликация до такого объема, когда он может быть зарегистрирован специальны-ми приемами. Первоначально использовался качественный вариант. В последующем был разработан количественный метод ПЦР (ПЦР в режиме реального времени), который позволяет в условных единицах (число копий искомого гена в 1 мл исследуемого материала или МЕ) определять количество микроорганизма (микробную нагрузку). Этот количественный тест оказался очень полезным во врачебной практике при мониторинге больных хроническими вирусными инфекциями — хроническими вирусными гепатитами, ВИЧ-инфекцией и др. ПЦР в настоящее время является основным методом индикации возбудителей в организме инфекционного больного независимо от природы этих воз-будителей — простейших, грибов, бактерий и бактериеподобных микро-организмов, вирусов. Для исследования используются в зависимости от преимущественной локализации возбудителя кровь, СМЖ, моча, кал, экссудаты и т.д.

Как правило, используются наборы праймеров, соответствующие характеру инфекционного процесса. Например, для диагностики бак-терий используют праймеры грамм+кокков и грамм-палочек.

Определять наличие какого-либо микроорганизма в биологическом материале можно методами рестрикционного анализа, молекуляр-ной гибридизации, риботипирования, опосредованной транскрипцией амплификации рРНК, секвенированием ампликонов, рестрикционно-го анализа, молекулярной гибридизации, опосредованной транскрип-цией амплификации рРНК, высокопроизводительного секвенирова-ния ампликонов.

Все описанные способы генетического анализа обладают очень важ-ным преимуществом перед остальными методами — они позволяют выяв-лять даже те виды микроорганизмов, которые невозможно культивиро-вать ни одним из описанных выше способов. Разработка этих методов находится на этапе изучения и внедрения в практику. Перспективными методами диагностики являются протеомный и липидный анализ.

Комбинированные методыК комбинированным методам молекулярной диагностики относит-

ся, в частности, иммуноблоттинг. Этот метод сочетает в себе прин-


ципы молекулярной биологии и способа иммунодиагностики, как это показано на рис. 2.2.

Метод иммуноблоттинга востребован в тех случаях, когда врачу требуется информация не просто о наличии того или иного микро-организма в материале от больного, а о наличии и количестве каждого антигена организма или антител к нему в биологическом материале. Такие сведения бывают необходимы при мониторинге больных неко-торыми хроническими инфекционными заболеваниями, например ВИЧ-инфекцией. В этом случае врач, получая информацию о динами-ке того или иного антигена ВИЧ, может прогнозировать наступление следующей стадии инфекционного процесса.

Что касается самой методики осуществления иммуноблоттинга, то она основана на том принципе, что каждый белковый субстрат обладает уникальной для него электрофоретической подвижностью. В связи с этим на первом этапе исследования биологический материал от больного подвергают электрофорезу в геле, в результате каждый вирусный белок «продвигается» в геле на разное расстояние. Затем с геля делается «нитроцеллюлозный слепок», который обрабатывается иммуноферметным методом с помощью меченных ферментом моно-клональных антител к каждому вирусному белку. В результате получа-ют нитроцеллюлозную полоску, на которой, как показано на рисунке, образуются цветовые фрагменты, при этом каждому вирусному белку соответствует свое расстояние от начала полоски.

Ориентируясь на наличие и ширину каждого цветного фрагмента, получают представление не только о наличии в организме, например, ВИЧ, но и том, сколько каждого вирусного белка или антител к нему циркулирует в организме. Так, например, высокое содержание белка каписида ВИЧ (р24) свидетельствует об активном прогрессировании вирусного процесса в стадию первичных проявлений, а динамика антител к р24 и другому поверхностному белку ВИЧ gp120 позволяет прогнозировать развитие СПИДа или переход в терминальную стадию инфекционного процесса.

10 11 12 13 14 15 16 17 18

gp160gp120

gp41

p31

p24

p17

p66p55p51

III этап

Перенос белковс полиакриламидного геля

на нитроцеллюлозныеполоски и обработка

их меченными ферментомантителами,

специфичными к искомомуантигену, или меченными

антителамик иммуноглобулинам

человека с последующейобработкой

хромогеном (ИФА)

II этапI этап

Электрофорезбиологического

материала,способствующийраспределению

белковв полиакриламидномгеле в соответствии

с их электро-форетическойподвижностью

Рис. 2.2. Этапы выполнения и результат иммуноблоттинга

НАЦИОНАЛЬНОЕ РУКОВОДСТВО … › wp-content › uploads › 2019 › 03 ›...

Documents