Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/omilies/gatselis/...2013/12/14...
TRANSCRIPT
![Page 1: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/1.jpg)
Ηπατίτιδα δέλτα Γεώργιος Ν. Νταλέκος & Νικόλαος Κ. Γατσέλης
Παθολογική Κλινική & Οµώνυµο Ερευνητικό Εργαστήριο Πανεπιστηµίου Θεσσαλίας
Σχολείο Ηπατολογίας Ελληνική Εταιρεία Μελέτης Ήπατος
![Page 2: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/2.jpg)
Σύγκρουση συµφερόντων
Για τη συγκεκριµένη παρουσίαση
Καµία
Ερευνητική χρηµατοδότηση την τελευταία διετία
Υπο-ερευνητής σε διεθνή και ελληνικά
πρωτόκολλα: ROCHE, GILEAD, JANSSEN,
BAYERN
![Page 3: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/3.jpg)
Discovered in 1977 among HBV pa/ents, with serious episodes of acute liver disease
(Mario RizzeAo 1977, Turin, Italy)
![Page 4: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/4.jpg)
Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα
Dastgerdi, World J Virol 2012
Ø Παρόµοιος µηχανισµός εισόδου στο κύτταρο µε τον HBV
Ø Τα µόνα κύτταρα που προσβάλλονται από τον HDV in vivo είναι τα ηπατοκύτταρα
Ø Εξάρτηση από τον HBV (HBsAg) για τη συναρµολόγηση, είσοδο και έξοδο του HDV από το ηπατοκύτταρο
![Page 5: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/5.jpg)
Χαρακτηριστικά του ιού
RizzeAo et al, Gut 2000 & J Infect Dis 2000. Branch et al, Science 89. Wang et al, J Virol 91. Barrera et al, J Virol 2005.
• Ο µικρότερος γνωστός λοιµογόνος παράγοντας που προσβάλλει τον άνθρωπο (µήκος ≈1700 νουκλεοτίδια)
• Έχει µεγάλες οµοιότητες µε τα viroids και τα δορυφόρα RNA των φυτών
• Είναι λοιµογόνος σε 10-11
αραιώσεις σε ορούς HBsAg+
![Page 6: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/6.jpg)
Μεταγραφή & Πολλαπλασιασµός
• Κυλιόµενος-κυκλικός µηχανισµός αναπαραγωγής
• Ριβοένζυµα µε ιδιότητες αυτοδιαχωρισµού (self-cleaving) και αυτοσύνδεσης (self-ligation)
• Κωδικοποιεί το HD Ag
• Μεταγραφή εξαρτώµενη από πολυµεράση του ξενιστή Μεταγραφή:
RNA Polymerase II ξενιστή
Μόνο RNA κατευθυνόµενη RNA µεταγραφή χωρίς DNA διαµεσολάβηση
![Page 7: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/7.jpg)
Ο ρόλος του HDAg
A→G
24kDa 27kDa
Ø δAg-S: απαραίτητο για την έναρξη της σύνθεσης του HDVRNA και τουλάχιστον in vitro συµµετοχή στη µεταγραφή του RNA
Ø δAg-L: αναστολή της λειτουργίας του δAg-S και εποµένως της RNA σύνθεσης, απαραίτητο για τη µορφογένεση του ιού
Το HDAg µπορεί να ενορχηστρώνει τον κύκλο ζωής του ιού µε µετα-
µεταγραφικές τροποποιήσεις όπως: φωσφορυλίωση/ ακετυλίωση/
µεθυλίωση/ πρενυλίωση Chao et al, J Virol 1990
Yamagushi et al, Science 2001 Taylor, Advances in Virus Research 2009
ADAR-1
![Page 8: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/8.jpg)
ΤΡΟΠΟΙ ΜΕΤΑΔΟΣΗΣ ΤΟΥ HDV o ΠΑΡΕΝΤΕΡΙΚΑ όπως ο HBV
o Απαραίτητη προυπόθεση η ΣΥΝΥΠΑΡΞΗ ΜΕ ΤΟΝ HBV
Mele et al, Clin Inf Dis 2007
SEIEVA 1993 SEIEVA 1994-2004
Τουρκία: βασικός τρόπος µετάδοσης ενδοοικογενειακά (Yurdaydin, personal communication)
![Page 9: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/9.jpg)
Επιδηµιολογία
GENOTYPE 1
GENOTYPE 5-‐8 GENOTYPE
3
GENOTYPE 1 GENOTYPE 1,2,4
Radjef et al, JVirol 2004 Makuwa et al, J Clin Microbiol 2008
HDV-‐infec9on affects approximately 15-‐20 Million people world-‐wide
![Page 10: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/10.jpg)
Μείωση Επιπολασµού HDV Λοίµωξης: Έλεγχος HBV
ΒΕΛΤΙΩΣΗ ΤΩΝ ΚΟΙΝΩΝΙΚΟ-‐
ΟΙΚΟΝΟΜΙΚΩΝ ΣΥΝΘΗΚΩΝ ΚΑΙ ΤΩΝ ΣΥΝΘΗΚΩΝ
ΥΓΙΕΙΝΗΣ
ΚΑΘΟΛΙΚΟΣ ΕΜΒΟΛΙΑΣΜΟΣ
ΓΙΑ HBV τουλάχιστον από 1992 (Ελλάδα από 11/1998)
ΛΗΨΗ ΠΡΟΦΥΛΑΚΤΙΚΩΝ ΜΕΤΡΩΝ
ΓΙΑ ΤΟΝ HIV
Mele et al, Clin Inf Dis 2007
![Page 11: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/11.jpg)
Hepa99s Delta is s9ll here!
Smedile et al, Am J Epidemiol 1983. Sagnelli et al, J Hepatol 1992. Sagnelli et al, J Hepatol 1997. Gaeta et al, Hepatology 2000. Degertekin, Turk J Gastroenterol 2006. Cross et al, J Med Virol 2008. Wedemeyer et al, Hepatology 2007. Gaeta et al,
Hepatology 2007. Dalekos et al, EJGH 1995
1983-‐2006 1980-‐2005 2000-‐2006
24.6%
31%
23%
11%
18.6%14%
43.3%
6.8%8.1%
24%
8.5%
14% 12.7%
Italy% Turkey%% London%
Prevalence)(%))
Hanover 1992-‐2006
Greece 1995
![Page 12: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/12.jpg)
Dalekos et al. Prevalence of viral markers among refugees from southern Albania. EJGH 1995.
![Page 13: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/13.jpg)
Emerging HDV Epidemiology: Migra9on
![Page 14: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/14.jpg)
Μεταβολές στην επιδηµιολογία της ηπατίτιδας δέλτα
νεαροί, άρρενες, IVDU ^ηλικία, µετανάστες
Buti, J Viral Hepat 2011
![Page 15: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/15.jpg)
57%
35.30%
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
1997-2003 2004-2010
anti-HDV testing in Greece
4.2% 4.1% 4.4%
0.0%
2.0%
4.0%
6.0%
8.0%
10.0%
overall 1997-2003 2004-2010
anti-HDV prevalence in Greece
![Page 16: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/16.jpg)
2.8%
7.5% 7.8% 6.5%
Greek immigrants Balkan Eastern Europe,
Central Asia, Africa
anti-HDV prevalence in Greece (adults)
4.5% 15.6%
60.0%
Greek Balkan Eastern Europe, Central Asia,
Africa
anti-HDV prevalence in Greece (children)
![Page 17: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/17.jpg)
ΠΑΘΟΓΕΝΕΙΑ HDV ΛΟΙΜΩΞΗΣ
Άµεση HDV κυτταροτοξικότητα
Ανοσολογικά επαγόµενη
καταστροφή ηπατοκυττάρων
Ενδείξεις από παρατηρήσεις σε κλινικές περιπτώσεις ασθενών µε σοβαρή κεραυνοβόλο ηπατίτιδα από γονότυπο 3 στη Νότια Αµερική Nakano et al, J Gen Virol 2001
Ενδείξεις κυτταρικής ανοσολογικής απάντησης από περιορισµένο αριθµό µελετών που υποδεικνύουν ότι η ποιότητα και η ποσότητα της Τ-ανοσολογικής απόκρισης µάλλον σχετίζεται µε το βαθµό ελέγχου της λοίµωξης
Nisini et al, J Virol 2007 Aslan et al J Viral Hepat 2006 Huang et al, J Gen Virol 2004
εν πολλοίς άγνωστη !!!
![Page 18: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/18.jpg)
Παθογένεια HCV λοίµωξης
LHDAg (p27)
Ενεργοποίηση του µηχανισµού
οξειδωτικού stress
Ενεργοποίηση STAT-3 & NF-κB
Williams, J Viral Hepat 2012
![Page 19: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/19.jpg)
ΠΑΘΟΓΕΝΕΙΑ
70-‐90% καταστολή πολ/σμού του HBV (Raimodo et al, Hepatology 2006; Wu et al, JV 1991; Williams et al J Gen Virol 2009)
15-‐30% πολ/σμός & HBV (Wedemeyer, Nat Rev Gastroenterol Hepatol 2010)
HCV HBV
HBV+HDV+HCV 250.000 (1/3 Ευρωπαίων ασθενών με HDV λοίμωξη) Ο HDV μπορεί να καταστείλει και τον HCV σε τριπλή λοίμω-‐ξη (Wedemeyer, Hepatology 2001)
375 million
15-‐20 million
175 million HBV/HDV
HCV
![Page 20: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/20.jpg)
Fluctuating Patterns of Viral Dominance in Hepatitis D
Schaper et al. J Hepatology 2010 Follow-up: 5-8 έτη
![Page 21: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/21.jpg)
Κλινική εικόνα - Πορεία
![Page 22: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/22.jpg)
Οξεία HDV 95% κάθαρση
Συχνά σοβαρή/ κεραυνοβόλος
Οξεία HBV
HBV-‐HDV συν-‐λοίμωξη
HBV-‐HDV επι-‐λοίμωξη
Χρόνια HΒV
Οξεία HDV 90% χρόνια δέλτα Σοβαρότερη νόσος από τη
χρόνια HBV
Κίρρωση 60-‐70%
ΗΚΚ 3x
![Page 23: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/23.jpg)
Uzunalimoğlu et al, Dig Dis Sci 2001
HBV/HDV (48%)
Cryptogenic (16.3%)
Alcohol (6.6%)
HCV+Alcohol (3.1%)
HCV (16.7%)
HBV+HCV (3.5%) HBV+Alcohol
(6.2%)
Κλινική σημασία HDV λοίμωξης Η πιο σπάνια ΧΙΗ ΑΛΛΑ η πιο σοβαρή & ταχέως εξελισσόμενη
Causes of Hepatocellular Carcinoma in Turkey
![Page 24: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/24.jpg)
Κλινική εικόνα - Πορεία
72%
18% 3% 13%0
10
20
30
40
50
60
70
80
Σταθερή νόσος Ρήξη αντιρρόπησης ΗΚΚ Θάνατος
Bu9 et al J Viral Hepat 2010 follow-‐up period: 1983-‐2008
![Page 25: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/25.jpg)
28 ετών μελέτη της πορείας της χρόνιας HDV λοίμωξης: Παράγοντας κινδύνου για κίρρωση και ΗΚΚ
Ασθενείς HBsAg+/ an9-‐HDV+ Ν=299
(13 HCV+/ 13 HIV+)
Μη-‐κιρρωτικοί Ν=113
Κιρρωτικοί Ν=186 (62%)
Ζώντες Ν=75
Θανόντες Ν=9
Lost Ν=29
OLT Ν=10
Ζώντες Ν=25
Θανόντες Ν=21
OLT Ν=19
Ζώντες Ν=25
Θανόντες Ν=25
Lost Ν=4
ΗΚΚ Ν=46 (24.7%)
Ζώντες Ν=60
Θανόντες Ν=8
OLT Ν=18
Κλινική ρήξη αντιρρόπησης Ν=54 (29%)
Romeo et al, Gastroenterology 2009
Κλινική εικόνα - Πορεία
![Page 26: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/26.jpg)
J Hepatol 2013
HBV/HDV HBV/HDV
HBV HBV
![Page 27: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/27.jpg)
Κλινική εικόνα – Πορεία ΣΥΝΟΨΗ
• Ο HDV προκαλεί την πιο σοβαρή µορφή χρόνιας ιογενούς ηπατίτιδας οδηγώντας σε κίρρωση το ≈80% των ασθενών σε ≈10 έτη
• Αφού εγκατασταθεί η HDV σχετιζόµενη κίρρωση µπορεί να µείνει σταθερή για πολλά χρόνια αν και σηµαντικό ποσοστό των ασθενών πεθαίνουν από ηπατική ανεπάρκεια αν δε µεταµοσχευθούν
• Αυτόµατη ίαση συµβαίνει σπάνια
![Page 28: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/28.jpg)
Διάγνωση
![Page 29: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/29.jpg)
HDV Markers • HDV Ag
• HDV antibodies • Total HDV antibodies • HDV IgM
• HDV RNA +++
BuJ et al, Prog Clin Biol Res 1993. Negro et al, J Hepatol 1995. Huang et al, J Gastroenterol Hepatol 1998. Modahl et al, Crit Rev Clin Lab Sci 2000. Sakugawa et al, Am J Gastroenterol 1997.
BuJ et al, Prog Clin Biol Res 1993. Negro et al, J Hepatol 1995. Huang et al, J Gastroenterol Hepatol 1998. Modahl et al, Crit Rev Clin Lab Sci 2000. Sakugawa et al, Am J Gastroenterol 1997.
![Page 30: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/30.jpg)
Wedemeyer Liver Int 2011 & Lancet 2012
Διαγνωστικός αλγόριθµος
![Page 31: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/31.jpg)
Διαγνωστικές εξετάσεις για την εκτίµηση ασθενών µε HDV λοίµωξη
Wedemeyer, Nat Rev Gastroenterol Hepatol 2010
![Page 32: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/32.jpg)
• Iden9fy individuals with ac9ve hepa99s D
• Decision for treatment ini9a9on
• Monitor efficiency of an9viral treatment
• Individualiza9on of treatment dura9on
HDV RNA Need for quan9fica9on
Gatselis & Pawlotsky, J Hepatol 2011 (EASL poster)
![Page 33: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/33.jpg)
Technique A Lab A – Wedemeyer
Technique B Lab B – Gordien
LightMix kit HDV (Roche) Lab C -‐ Pawlotsky
Extrac9on of HDV RNA
Total Nucleic Acid Isola/on kit ,TNAI (Roche) Cobas Ampliprep Instrument (Roche) QIAamp MinElute virus vacuum (QIAGEN) QIAamp Viral RNA (QIAGEN)
Reverse transcrip9on one step
Random primes Rnasin (Promega) SuperScript Reverse Transcriptase (Life technologies)
Random Primers RnaseOUT (Invitrogen) SuperScript III Reverse Transcriptase
Purifica9on Montage PCR centrifugal filter devices (Millipore) Amicon Ultra – 0.5 (Millipore)
Primers & Probe
F1: TGGACGTKCGTCCTCCT (837-‐853) F2: TGGACGTCTGTCCTCCTT (837-‐854) R: TCTTCGGGTCGGCATGG (891-‐907) P: FAM-‐ATGCCCAGGTCGGAC-‐MGB (858-‐872)
Delta-‐F: GCATGGTCCCAGCCTCC (693-‐709) T3-‐Delta-‐F: GCATGGCCCCAGCCTCC (693-‐709) Delta-‐R: TCTTCGGGTCGGCATGG (891-‐907) Delta-‐P: FAM-‐ATGCCCAGGTCGGAC-‐MGB (858-‐872)
• amplifica/on of a 113bp fragment of HDV cDNA • amplifica/on of a 143bp fragment of IPC (internal posi/ve control) • hybridiza/on probes for HDV cDNA: LightCycler® Red 640 • hybridiza/on probes for IPC: LightCycler® Red 670
Standard cDNA clone in a pSVL expression vector pCRII-‐dFr45-‐R1 3.3 – 4.3 – 5.3 – 6.3 – 7.3 – 8.3 log10 c/ml
Reac9on Mix
10μl extracted RNA 15μl 5x virus master mix (Quan/Tect Virus kit, QIAGEN) 0.75μl virus RT mix (Quan/Tect Virus kit, QIAGEN) 0.4μM primers 0.2μM probe final volume: 75μl
10μl purified cDNA 25μl TaqMan Universal master mix (ABI) 0.3μM primers 0.2μM probe final volume: 50μl
5μl cDNA 2μl LightCycler® FastStart DNA Master HypProbe (ROCHE) 2.4μl Mg2+ solu/on 25mM 4μl reagent mix (HDV cDNA primers and probes) 4μl IPC mix (IPC primers and probes) 1μl IPC DNA final volume: 20μl
Pla orm TaqMan 48 (Roche) 7300 Real-‐Time PCR system (ABI) LightCycler® 2.0 Instrument
Cycling program
50oC – 20min 95oC – 5min 50cycles: 95oC – 15sec 60oC – 45sec
50oC – 2min 95oC – 10min 45 cycles: 95oC – 15sec 60oC – 1min
95oC – 10min 50 cycles: 95oC – 5sec 62oC – 5se 72oC – 15sec
≠ ≠ ≠
≠
≠
≠
≠ ≠ ≠
≠
≠
≠
≠
≠ ≠ ≠
LLD: 100 cp/mL
LR: 103-109 cp/mL
LLD: 15 cp/mL
LR: 102-108 cp/mL
LLD: 1000 cp/mL
LR: 103-108 cp/mL
![Page 34: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/34.jpg)
4
6
8
10
12 0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
0 2 4 6 8 10 12
Ct value
s
Log10 copies/ml
Evalua9on of primers, master mixes, real-‐9me PCR devices
Lab A technique
Lab A technique with Lab B primers
Lab A technique with TaqMan Universal master mix (ABI)
Lab A technique on 7300 Real-‐Time PCR system (ABI)
Gatselis & Pawlotsky, J Hepatol 2011 (EASL poster)
![Page 35: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/35.jpg)
Samples Genotype
LABORATORY & TECHNIQUE
LAB A LAB B LAB C Lab A
technique Lab B
technique Lab A
technique Lab B
technique Roche kit
Lab A samples
1 1 5.2 5.8 5.6 5.9 5.9 2 1 5.4 6.1 5.8 5.7 6.5 3 1 4.7 5.8 5.5 5.4 5.4 4 1 5 6.2 5.7 6.3 6.2 5 1 5.2 5.8 4.7 3.4 6 6 1 5.5 6.2 6.1 6.4 6.2 7 1 2.7 4.5 Neg 2.6 5 8 1 3.5 4.8 4 Neg 4.9 9 1 3.2 4.1 Neg Neg 4.3 10 1 3.4 4.5 Neg Neg 4 11 1 2.5 Low Pos Neg Neg 1.5 12 1 7 7.9 7.2 8.2 6.7
Lab B samples 13 7 5.9 7.7 6.3 6.1 2.2
14 1+7 3 5.3 Neg Neg 3.3 15 1 4.8 7.4 6 5.3 6.2 16 5 4.5 6 4.7 5 4.8 17 6 Neg 2 Neg Neg Neg 18 8 3.2 4.3 Neg Neg 2.4 19 nega9ve Neg Neg Neg Neg Neg
![Page 36: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/36.jpg)
![Page 37: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/37.jpg)
Cobas TaqMan 48 (Roche) TaqMan probe
Gatselis & Zachou 2012
![Page 38: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/38.jpg)
Χαρακτηριστικά απόδοσης της μεθόδου
1. Ευαισθησία: 10 copies / ml
2. Ειδικότητα: 100% 3. Δυναμικό εύρος ποσοτικοποίησης: 102-‐108 copies / ml
4. Inter-‐assay variability: 1.2-‐2.7 Log10 % CV (διακύμανση μεταξύ διαφορετικών πειραμάτων)
5. Intra-‐assay variability: 2.2-‐5.1 Log10 % CV (διακύμανση εντός
του ίδιου πειράματος) Gatselis & Zachou 2012
![Page 39: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/39.jpg)
Mederacke et al J Clin Microbiol 10, Zachou et al Liver Int 09, Gatselis & Zachou 2012 unpublished data
Διατήρηση σε θερμοκρασία περιβάλλοντος για 4-‐6 ημέρες
![Page 40: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/40.jpg)
HDV RNA & Ενεργότητα της νόσου
0%
20%
40%
60%
80%
100%
HDVRNA<120-‐6x10^4
HDVRNA6x10^4-‐1,6x10^6
HDVRNA>1,6x10^6
HB VDNA >10^5HB VDNA >10^3-‐10^5 HB VDNA >10^2-‐10^3HB VDNA >10-‐10^2HB VDNA 0-‐10
11/85
7/85
16/85 16/85
25/85
10/85
0
5
10
15
20
25
30
HDV-RNA<120
HDV-RNA120-10^4
HDV-RNA>10^4-10^5
HDV-RNA>10^5-10^6
HDV-RNA>10^6-10^7
HDV-RNA>10^7
No of patients
Zachou et al, Liver Int 2009
Καμία συσχέτιση δε βρέθηκε με δείκτες ενεργότητας της νόσου καθώς και το ιστολογικό στάδιο της νόσου
![Page 41: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/41.jpg)
anti-HDV IgM levels declined in:
• patients responding to antiviral therapy
Antivir Ther 2012
anti-HDV IgM levels correlated with:
• histological inflammatory activity
• ALT and γGT levels
![Page 42: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/42.jpg)
Θεραπεία
![Page 43: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/43.jpg)
Σύνοψη θεραπευτικών µελετών για την ηπατίτιδα δ
Nucleos(t)ide analogues = ineffective
IFNα = sustained biochemical response 0-36% treatment > 12m required treatment high doses associate with better survival PegIFN = SVR 17-43%
![Page 44: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/44.jpg)
Alpha-‐Interferon...the only available treatment
alpha-‐interferon pegylated -‐ IFNα
33
17
71 66
50 43
57
17 20
8 17
0 9
0
29
43
17 21
0
10
20
30
40
50
60
70
80 End of treatment End of follow-‐up
HDV -‐RNA clearance (%
)
N = 7-‐38/ study
HDV -‐RNA clearance (%
)
![Page 45: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/45.jpg)
NEJM 2011
![Page 46: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/46.jpg)
Combination Therapy shows more pronounced HBsAg decline !
NEJM 2011
![Page 47: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/47.jpg)
HiDiT-2 Study
Results:
ü prolonged administration of PEG-IFNα-2a±TDF is safe in HDV-infected patients
ü similar efficacy concerning HDV RNA suppression, HBsAg reduction, ALT normalization
ü more than one third of patients experience a post-treatment relapse
PEG-IFN+TDF PEG-IFN
47%
33%
EOT (wk96) HDV-RNA negativity
NS
Wedemeyer, AASLD 2013
![Page 48: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/48.jpg)
Meta-analysis: Antiviral treatment for hepatitis D
• Long-term suppression of HDV RNA by IFNα is not maintained despite an EOT response
• Adding lamivudine is not beneficial
• PEG-IFNα is superior to other medications with respect to EOT and EOFUP
• New RCTs should test combinations of PEG-IFNα and newest antivirals
Triantos, Aliment Pharmacol Ther 2012
![Page 49: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/49.jpg)
Θετικοί προγνωστικοί δείκτες ανταπόκρισης στη θεραπεία
1. naïve ασθενείς 2. χαµηλές τιµές γGT 3. µικρή διάρκεια της νόσου 4. απουσία κίρρωσης 5. αυξηµένα επίπεδα HDV
RNA (>2.2 x 107 c/ml) 6. anti-HDV IgM neg
Baseline
End of Treatment
Yurdaydin, J Hepatol 2002. Marzano, Ital J Gastroenterol 1992. Hughes, Hepatology 2009 (abstract). Yurdaydin, Hepatology 2009 (abstract).
![Page 50: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/50.jpg)
HDV-RNA
• Ασθενείς µε HDVRNA (+) στον 6ο µήνα θεραπείας είχαν ιολογική υποτροπή 6 µήνες µετά το τέλος της θεραπείας
• Ασθενείς µε HDVRNA (-) στον 6ο µήνα θεραπείας συνέχιζαν να έχουν HDVRNA (-) 6 µήνες µετά το τέλος της θεραπείας
• Ασθενείς µε HDVRNA (+) στον 6ο µήνα θεραπείας συνέχιζαν να είναι HDVRNA (+) στο τέλος και 6 µήνες µετά
Yurdaydin et al, JVH 2008
![Page 51: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/51.jpg)
EOT EOFU
19% 23%
29% 32%
Virologic Responses
non-cirrhotics cirrhotics
Δεν παρατηρήθηκε διαφορά στην
ανταπόκριση, ωστόσο παρουσίασαν συχνότερα ανεπιθύµητες ενέργειες
Turk J Gastroenterol 2012
![Page 52: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/52.jpg)
• ADV-containing treatment is associated with a significant decrease in estimated GFR of patients with HBV/HDV co-infection
• Addition of PEG-IFN to ADV did not lead to any further renal impairment
J Viral Hepat 2012
![Page 53: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/53.jpg)
Liver transplantation
• Rates of recurrent HBV-HDV infection are lower than 5% using low dose HBIg and antiviral prophylaxis in combination
• Rapid and Parallel Decline of HDV RNA and HBsAg after Liver Transplantation….
Mederacke, J Hepatol 2012. Samuel, Semin Liver Dis 2012.
![Page 54: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/54.jpg)
Liver transplantation
…but prolonged intrahepatic resistance of HDAg ! Mederacke, J Hepatol 2012
![Page 55: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/55.jpg)
changes in SW 196 L/S (rtM204I) of the small
HBsAg induced by Lamivudine
u prenylation inhibitors (in-vitro and in-vivo)
Glenn JS, 2006
u entry inhibitors (Myrcludex)
Lutgehetmann M, 2012
u Integrity of critical regions of the HBsAg
Vietheer PT, 2005
FUTURE THERAPIES
![Page 56: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/56.jpg)
Ηπατίτιδα δέλτα Σύνοψη I
1. Πρόκειται για µία λοίµωξη που απαιτεί πάντοτε τη συνύπαρξη του ιού της ηπατίτιδας Β
2. Μεταδίδεται παρεντερικά
3. Ο επιπολασµός έχει µειωθεί σηµαντικά στην Ευρώπη, αλλά παραµένει σοβαρό πρόβληµα δηµόσιας υγείας στον αναπτυσσόµενο κόσµο
4. Πρόκειται συνήθως για µετανάστες από ενδηµικές χώρες
5. Είναι η πιο σπάνια αλλά και η πιο σοβαρή µορφή χρόνιας ιογενούς ηπατίτιδας (80% αναπτύσσουν κίρρωση, 3πλάσιος κίνδυνος ανάπτυξης ΗΚΚ)
![Page 57: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/57.jpg)
Ηπατίτιδα δέλτα Σύνοψη II
6. Απαραίτητος ο έλεγχος για anti-HDV σε όλους τους ασθενείς µε ΧΗΒ
7. To HDV RNA είναι απαραίτητο στην εκτίµηση της ενεργότητας της νόσου και στην παρακολούθηση της ανταπόκρισης στη θεραπεία
8. Αποτελεί δύσκολο θεραπευτικό πρόβληµα
• Peg-IFNα: πρώτης γραµµής θεραπεία, αλλά δεν επιτυγχάνει µακροχρόνιες απαντήσεις
• Τα NUCs ως µονοθεραπεία δεν έχουν αποτέλεσµα
• Η µεταµόσχευση ήπατος αποτελεί σηµαντική αλλά τελευταία λύση
9. Έρευνα για την ανάπτυξη νεότερων θεραπειών (prenylation inhibitors)
![Page 58: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/58.jpg)
![Page 59: Ηπατίτιδα δέλτα83.212.32.147/internalmedicine/images/Omilies/Gatselis/...2013/12/14 · Ο κύκλος ζωής του ιού στα ηπατοκύτταρα Dastgerdi,](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022043021/5f3d0760b9adda613f38bf78/html5/thumbnails/59.jpg)
Ευχαριστώ για την προσοχή
σας!