Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом...
DESCRIPTION
Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии. Научный центр педиатрии и детской хирургии, г. Алматы. Согласно мировой статистике, 3,3-4,7 детей из 100 тысяч заболевают лейкемией в возрасте до 15 лет. Около 40-46 % случаев приходится на детей 2-6 лет. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом
проточной цитометрии
Научный центр педиатрии и детской хирургии, г. Алматы
• Согласно мировой статистике, 3,3-4,7 детей из 100 тысяч заболевают лейкемией в возрасте до 15 лет. Около 40-46 % случаев приходится на детей 2-6 лет.
• В Казахстане ежегодно заболевают 130 детей.
• Хромосомные изменения обнаруживают приблизительно у 60-70 % больных.
• неблагоприятные факторы внешней среды: ионизирующее излучение, действие электромагнитного поля, химических веществ, бензола, медикаментов, в состав которых входят алкилирующие соединения.
• вирусы (HTLV-I - Т-клеточный лйкоз/лимфома взрослых; вирус Эпштейна-Барр – лимфома Беркитта, Лимфома Ходжкина)
! Особенно чувствительны к воздействию электромагнитного излучения дети школьного возраста, организм которых еще не сформировался: даже всего несколько часов в неделю, проведенных около компьютера, опасны для их здоровья. В 1997 году в США опубликованы данные по увеличению количества заболеваний детей лейкозом, которые более 2 часов в день играли на компьютере и в видео игры.
• Основной клинической симптоматикой ОЛ служат процессы гиперплазии опухолевой ткани (бластная трансформация костного мозга, увеличение лимфатических узлов, органов, появление опухолевых инфильтратов и т.д,) и признаки подавления нормального кроветворения.
Клиническая симптоматика развернутой стадии ОЛ складывается из 5 основных синдромов:
• 1. гиперпластического
• 2. геморрагического
• 3. анемического
• 4. интоксикационного
• 5. инфекционных осложнений
• Л.- опухолевые клональные заболевания кроветворной системы с первичным поражением костного мозга. Мишенью опухолевой трансформации являются стволовые кроветворные клетки и коммитированные клетки-предшественники. Субстрат опухоли представлен бластами.
FAB-классификация, 1976
• Лф: L1, L2, L3• Миело: М0, М1,
М2, М3,М4, М5,М6, М7
Иммунофенотипирование
• CD – кластер дифференцировки• Антитела (мембранные гликопротеины,
карбогидраты, гликолипиды)• Проточная цитометрия является
современной технологией быстрого оптического измерения параметров клетки, ее органелл и происходящих в ней процессов.
Образцы для проточной цитометрии
• кровь• костный мозг• ликвор• суставная жидкость• плевральная жидкость• асцитическая жидкость• клетки тканей (например, опухолей)
Проточные цитофлюориметры
• Концепция соответствия фенотипа злокачественной клетки фенотипу нормального клеточного аналога на каждом уровне дифференцировки. В большинстве случаев ОЛ бласты имеют иммунофенотип, сравнимый с нормальными гемопоэтическими клетками аналогичных стадий дифференцировки.
Иммунологическая идентификация включает:
• Определение линейной принадлежности злокачественных клеток
• Анализ клеточного созревания, т.е. уровня дифференцировки, степени гетерогенности популяции злокачественных клеток
• Аберрантности, т.е. отличия от нормальных аналогов• Клональности • Определение количества гемопоэтических клеток• Контроль и мониторинг эффективности терапии • Выявление минимальной остаточной болезни
• Лейкемические клетки можно отличить от их нормальных аналогов по ряду критериев. К основным типам аберрантности фенотипа л.клеток относятся:
• Коэкспрессия антигенов нескольких линий
• Асинхронная экспрессия антигена• Избыточная экспрессия антигенов• Отсутствие экспрессии или низкий
уровень экспрессии антигена• Фенотипический профиль,
практически не встречающийся в норме
Структура иммунологических вариантов острых лейкозов НЦПиДХ
ОЛЛ
ОМЛ
бифенотипы73,8%
24,6%
1,6%
Частота выявления различных фенотипических вариантов ОЛ1,91%
4,8%1,6%
4,0%
12,7%
6,4%
5,6%
54,0%9,5%
В1
В2
В3
Т
М0
М1-2
М3
М4
Иммунологическая диагностика бифенотипического лейкоза
• 1995, 2009• Балльная оценка экспрессии маркеров проводится для
того, чтобы отличить БОЛ от ОЛ с коэкспрессией маркеров «чужих» линий, если в популяции бластов не менее 20% клеток одновременно несут м. и л. маркеры. Диагноз БФЛ устанавливатся, если маркеры и м. и л. линии набирают более 2 баллов. Учитывается также СИФ.
Иммунологическая диагностика бифенотипического лейкоза
БаллыБаллы Маркеры В рядаМаркеры В ряда Маркеры Т рядаМаркеры Т ряда Маркеры Маркеры миелорядамиелоряда
22 CD79aCD79acyIgMcyIgMcyCD22cyCD22
CD3cy/memCD3cy/memTCRTCRαβαβTCRTCRγδγδ
MPOMPO
11 CD19CD19CD10CD10CD20CD20
CD2CD2CD5CD5CD8CD8
CD13CD13CD33CD33
0,50,5 TdTTdTCD24CD24
TdTTdTCD7CD7CD1aCD1a
CD14CD14CD15CD15CD64CD64CD117CD117
За последние 5 лет в НЦПиДХ было выявлено 6 бифенотипических лейкозов, причем 3 из них имели фенотип Т-линейной и миелоидной направлений дифференцировки, и 3 случая В-линейной и миелоидной направлений дифференцировки.
Суммарный иммунофенотип
Т+миело: CD7+mCD3+CD2+CD117+CD13+CD15+HLA-DR+CD34+MPO+
В+миело:CD19+CD22+CD79а+CD13+CD33+CD117+CD15+HLA-DR+CD34+MPO+TdT+
100 101 102 103 104
CD45 PerCP
R1
100 101 102 103 104
CD7 FITC100 101 102 103 104
CD2 FITC
100 101 102 103 104
CD45 PerCP
R1
100 101 102 103 104
CD22 FITC
100 101 102 103 104
CD10 FITC
100 101 102 103 104
CD22 FITC
Мегакариоцитарный лейкоз (М7)
• С 2010 по 2014гг - 12 больных: 6 – м, 6 – д, с-м Дауна - 3
• CD42a+CD42b+CD41+CD33+HLA-DR-CD34-MPO-
• CD33+CD41a+CD42a+CD42b+CD61+HLA-DR-CD34-MPO-,
• Коэкспрессия CD4, CD7, CD56
Мегакариоцитарный лейкоз (М7)07.12.10-Muhtarzhanova-pk.456
100 101 102 103 104
CD42a FITC
07.12.10-Muhtarzhanova-pk.458
100 101 102 103 104
CD37 FITC
07.12.10-Muhtarzhanova-pk.449
100 101 102 103 104
CD20 FITC
07.12.10-Muhtarzhanova-pk.444
100 101 102 103 104
CD45 PerCP
R1
Эритробластный лейкоз (М6)26.02.10-Atakulaev.334
0 200 400 600 800 1000FSC-Height
26.02.10-Atakulaev.334
100 101 102 103 104
CD45 PerCP
R1
26.02.10-Atakulaev.344
100 101 102 103 104
CD38 FITC
Плазмобластный лейкоз15.02.10-Soltanbaev.216
100 101 102 103 104
CD45 PerCP
R1
15.02.10-Soltanbaev.222
100 101 102 103 104
CD7 FITC
16.02.10-Soltanbaev.245
100 101 102 103 104
CD38 FITC
16.02.10-Soltanbaev.246
100 101 102 103 104
CD38 FITC
Спасибо за внимание!