Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών...
TRANSCRIPT
![Page 1: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/1.jpg)
ΓΕΩΠΟΝΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΑΘΗΝΩΝΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΜΕΤΑΠΤΥΧΙΑΚΩΝ ΣΠΟΥΔΩΝ ΓΕΝΙΚΟΥ ΤΜΗΜΑΤΟΣ
ΘΕΤΙΚΕΣ ΕΠΙΣΤΗΜΕΣ ΣΤΗ ΓΕΩΠΟΝΙΑΚΛΑΔΟΣ ΙΙΙ ΜΕΛΕΤΗ ΚΑΙ ΑΞΙΟΠΟΙΗΣΗ ΦΥΣΙΚΩΝ ΠΡΟΪΟΝΤΩΝ
«Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά
προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές μεθόδους και την τεχνική HRMS»
Μαργαρίτα ΔήμαΓεωπόνος
Αθήνα 2014
![Page 2: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/2.jpg)
Εισαγωγή• Τρόφιμα και σύγχρονοι μέθοδοι παραγωγής τους.
• Υπολείμματα των φ.π. στα τρόφιμα.
• Παγκοσμίως χρησιμοποιούνται πάνω από 800 δραστικές και πολλαπλάσια εμπορικά σκευάσματα.
• Διάφορες Χημικές ομάδες → Φυσικοχημικές ιδιότητες
• Μέθοδοι αναλύσεις → Πολύ-υπολειμματικές
![Page 3: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/3.jpg)
Υπολείμματα Φυτοπροστατευτικών Προϊόντων
• Μέγιστο Όριο Υπολειμμάτων (Maximum Residue Level-MRL) – η μέγιστη επιτρεπόμενη συγκέντρωση υπολειμμάτων φ.π. και των τοξικών μεταβολιτών τους, η οποία επιτρέπεται να παραμείνει σε ένα προϊόν φυτικής προέλευσης (Το MRL εκφράζεται σε mg ουσίας ανά kg βάρους φυτικού προϊόντος ή ppm ).
• Ανάλυση υπολειμμάτων – η ανίχνευση και ο προσδιορισμός των φ.π. σε φυτικά δείγματα, έτσι ώστε να μπορεί να πραγματοποιηθεί η αξιολόγησή τους, όσον αφορά την ασφάλεια του καταναλωτή και την τήρηση της νομοθεσίας.
![Page 4: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/4.jpg)
Μέθοδοι ανάλυσης υπολειμμάτων Πολύ-υπολειμματικές μέθοδοι (Multi-Residues Methods,
MRMs) – επιτρέπεται ο προσδιορισμός πολλαπλών υπολειμμάτων φ.π., διαφορετικών χημικών ομάδων με κοινό στάδιο επεξεργασίας δείγματος και προσδιορισμού.
Οι MRMs, περιλαμβάνουν αρχικά ένα στάδιο εκχύλισης των αναλυτών στόχων με οργανικό δ/τη ή μίγμα δ/των και στη συνέχεια ένα στάδιο καθαρισμού του εκχυλίσματος από τις ουσίες του υποστρώματος.
Οι πιο διαδομένες αναλυτικές τεχνικές για τον προσδιορισμό των αναλυτών-στόχων, είναι η αέρια χρωματογραφία (GC), και η υγρή χρωματογραφία (LC) με εκλεκτικούς ανιχνευτές (π.χ. αζώτου φωσφόρου, σύλληψης ηλεκτρονίων, ανιχνευτής συστοιχίας φωτοδιόδων) ή φασματομετρία μάζας .
![Page 5: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/5.jpg)
Στόχοι της παρούσας διατριβής
Ανάπτυξη και επικύρωση μιας νέας μεθόδου προσδιορισμού φ.π. η οποία βασίζεται:
1. Πολύ-υπολειμματική μέθοδος επεξεργασίας δείγματος.
2. Σύστημα φασματομετρίας μάζας υψηλής ευκρίνειας (LC-TOF).
![Page 6: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/6.jpg)
QuEChERS
![Page 7: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/7.jpg)
LC-TOF/MSΣύστημα LC: Agilent Series 1200Σύστημα MS: Agilent 6220
ΔιαχωρισμόςΒαθμιδωτό Πρόγραμμαέκλουσης 2 δ/των (A&B)Α: H2O , 5mM HCΟONH4, 0,1%HCOOHB: MeOH, 5mM HCΟONH4, 0,1%HCOOH
Στήλες:Polaris C-18, (50 x 2.1 mm, 5mm μέγεθος σωματιδίων)
Τρόπος ιονισμούHλεκτροδιάχυσης (ΕSΙ+)
Φασματομετρίας Μάζας Χρόνου Πτήσης Ιόντων Μοριακό ιόν + 1 θραύσμα
![Page 8: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/8.jpg)
Βαθμονόμηση Μαζών
Διάλυμα Αναφοράς
Διάλυμα Ελέγχου Καταλληλότητας
m(amu)
Χρόνοι πτήσης
(μs)
118.0863 20.79841
322.0481 33.53829
622.029 46.12659
922.0098 55.88826
1521.971 71.45158
2121.933 84.14302
2721.895 95.13425Ιόν m/z Ακριβής
μάζα
ψευδομοριακό ιόν [ΜΗ+]
C8H15ClN5+ 216,110
Θραύσμα C5H9ClN5+ 174,0541
Positive Ion (m/z) Empirical Formula
121.050873 C5H5N4
922.009798 C18H19O6N3P3F24
Έλεγχος καταλληλότητας συστήματος
2o )( ttAm m
![Page 9: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/9.jpg)
Διαδικασία επικύρωσης της μεθόδου
Εκτίμηση της ορθότητας
Εκτίμηση της πιστότητας
Μελέτη της γραμμικότητας
Εκτίμηση επίδρασης του Υποστρώματος
Ορισμός ορίου ποσοτικοποίησης (LOQ)
![Page 10: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/10.jpg)
Εκτίμηση ορθότητας και πιστότητας (1/2)
Εμβολιασμός σε 2 επίπεδα
1ο επίπεδο: 0,01 mg/kg (ώστε να καλύπτει τα ισχύοντα MRL)
2ο επίπεδο: το δεκαπλάσιο του MRL
![Page 11: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/11.jpg)
Εκτίμηση ορθότητας και πιστότητας (2/2)
Αριθμός επαναλήψεων: 5 σε κάθε επίπεδο
Ως αποδεκτές μέσες εκατοστιαίες ανακτήσεις θεωρούνται αυτές στην περιοχή 70-120% για όλες τις προσδιοριζόμενες ενώσεις, με σχετική τυπική απόκλιση (SDR) ≤ 20%
![Page 12: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/12.jpg)
Μελέτη Ορθότητας Μεθόδου (Κουνουπίδι)
![Page 13: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/13.jpg)
Μελέτη Πιστότητας Μεθόδου (Κουνουπίδι)
![Page 14: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/14.jpg)
Μελέτη Ορθότητας Μεθόδου (Μανταρίνι)
![Page 15: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/15.jpg)
Μελέτη Πιστότητας Μεθόδου (Μανταρίνι)
![Page 16: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/16.jpg)
Μελέτη Ορθότητας Μεθόδου (Ροδάκινο)
![Page 17: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/17.jpg)
Μελέτη Πιστότητας Μεθόδου (Ροδάκινο)
![Page 18: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/18.jpg)
Εκτίμηση της γραμμικότητας
Εκτιμήθηκε με την εξέταση του διαγράμματος της απόκρισης του ανιχνευτή ως συνάρτηση της συγκέντρωσης του αναλύτη
Εκτιμήθηκαν οι παράμετροι:b : κλίσης της γραμμής παλινδρόμησης Sb : εκτιμούμενο τυπικό σφάλμα της κλίσης b της γραμμής
παλινδρόμησης a : τεταγμένη επί την αρχή της γραμμής παλινδρόμησηςSa : εκτιμούμενο τυπικό σφάλμα της τεταγμένης επί την αρχή a της
γραμμής παλινδρόμησης r : συντελεστής συσχέτισηςr2 : τετράγωνο συντελεστή συσχέτισης Su: αβεβαιότητα που προκύπτει από την γραμμή παλινδρόμησης
![Page 19: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/19.jpg)
Εκτίμηση της γραμμικότητας
![Page 20: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/20.jpg)
Εκτίμηση της επίδρασης του υποστρώματος
Σύγκριση κλίσεων καμπύλων αναφοράς σε ΥπόστρωμαΔ/τη
22
21
21
bb
calSS
bbt
Αποδεκτή η μηδενική υπόθεση → Η επίδραση του υποστρώματος δεν είναι σημαντική
![Page 21: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/21.jpg)
Εκτίμηση του Υποστρώματος (κουνουπίδι)
![Page 22: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/22.jpg)
Εκτίμηση του Υποστρώματος (Μανταρίνι)
![Page 23: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/23.jpg)
Εκτίμηση του Υποστρώματος (Ροδάκινο)
![Page 24: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/24.jpg)
Υπολογισμός του ορίου ποσοτικοποίησης (LOQ)
Προσδιορίζεται ως το ελάχιστο επίπεδο συγκέντρωσης, στο οποίο ο αναλύτης μπορεί να προσδιοριστεί αξιόπιστα.
Στο LOQ πρέπει να ισχύει S/N ≥10
LOQ=0,01 mg/kg
![Page 25: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/25.jpg)
Χρωματογράφημα πλήρους φάσματος εμβολιασμένου δείγματος κουνουπιδιού σε συγκέντρωση 0,01 mg/kg σε
σύστημα LC-ESI(+)-TOF
![Page 26: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/26.jpg)
Ανακατασκευή χρωματογραφήματος για την ουσία chlorpyriphos methyl σε δείγμα κουνουπίδι, σε συγκέντρωση
0,01 mg/kg σε σύστημα LC-ESI(+)-TOF
![Page 27: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/27.jpg)
Φάσμα μαζών της χρωματογραφικής κορυφής της ουσίας chlorpyriphos methyl σε δείγμα κουνουπίδι
![Page 28: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/28.jpg)
Χρωματογράφημα πλήρους φάσματος εμβολιασμένου δείγματος μανταρινιού σε συγκέντρωση 0,01 mg/kg σε
σύστημα LC-ESI(+)-TOF
![Page 29: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/29.jpg)
Ανακατασκευή χρωματογραφήματος για την ουσία chlorpyriphos methyl σε δείγμα μανταρίνι, σε συγκέντρωση 0,01
mg/kg σε σύστημα LC-ESI(+)-TOF
![Page 30: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/30.jpg)
Φάσμα μαζών της χρωματογραφικής κορυφής της ουσίας chlorpyriphos ethyl σε δείγμα μανταρίνι
![Page 31: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/31.jpg)
Χρωματογράφημα πλήρους φάσματος εμβολιασμένου δείγματος ροδάκινου σε συγκέντρωση 0,01 mg/kg σε
σύστημα LC-ESI(+)-TOF
![Page 32: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/32.jpg)
Ανακατασκευή χρωματογραφήματος για την ουσία chlorpyriphos methyl σε δείγμα ροδάκινο, σε συγκέντρωση
0,01 mg/kg σε σύστημα LC-ESI(+)-TOF
![Page 33: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/33.jpg)
Φάσμα μαζών της χρωματογραφικής κορυφής της ουσίας chlorpyriphos methyl σε δείγμα ροδακινο
![Page 34: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/34.jpg)
Συμπεράσματα (1/2)Στην παρούσα διατριβή αναπτύχθηκε και
επικυρώθηκε μια μέθοδος προσδιορισμού φ.π. η οποία βασίζεται στην μέθοδο εκχύλισης QuEChERS.
Η ταυτοποίηση και η ποσοτικοποίηση των αναλυτών πραγματοποιήθηκε με την τεχνική LC-TOF, μία σχετικά νέα τεχνική στον τομέα προσδιορισμού υπολειμμάτων φ.π. που μέχρι πρότινος χρησιμοποιούνταν ως τεχνική σάρωσης.
![Page 35: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/35.jpg)
Συμπεράσματα (2/2)
Η μέθοδος επικυρώθηκε επιτυχώς για την αξιοπιστία της σε κουνουπίδι, μανταρίνι και ροδάκινο.
Από τα στοιχεία επικύρωσης προκύπτει ότι η μέθοδος για την πλειονότητα των αναλυτών παρουσιάζει:
αποδεκτή γραμμικότητα με r ≥ 0,99, αποδεκτή ορθότητα με ποσοστά ανάκτησης 70-120% ,
αποδεκτή πιστότητα με SDR ≤ 20%.
LOQ=0,01 mg/kg
![Page 36: Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊόντα με πολύ-υπολειμματικές](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062308/55ccdfc6bb61eb93278b4630/html5/thumbnails/36.jpg)
Σας Ευχαριστώ πολύ για τη προσοχή σας.