~. O. (letE.-·WUdl. í4 oetu1ire 1981 24003

1. Disposiciones generales

PRESIDENCIA DEL GOBIERNO

En la pigina 21135, punto mnco, en relación a los preciosde' v~nta de acE>ite de oliva virgen ·en noviembre de 1981, do!,dedice:

14. Flúor.15 (al. Boro [curcumlna).16. Mercurio.

Aneio 1Il. Carne y Productos cdrnicos

18. T1uracilos.

Aneio XII. TOmB de muestras

Toma de muestras de suelos.

Anelo A. TOmB de muestras de fertilf.dlld

AM/o.. Toma de rnIH.tniB paro prospecciones edafológlc"sAM~ c. roma de rnlHstros de suelo. ¡¡(ectado. por sollnf.dlld

2. Bases nitrogenadas.3. Grado alcohólico (método areométricol.

Vinagre

17. Acido acético de sintesls.

Alcoholes

3 (al. Color.51. Presi6n del anhldrido carbónico.52. Antisépticos y antlfermentos [método microbiológieol.

•

Aneio X. Sw¡IoB

11. Capacidad de cambio catlónico.11. Amdez valarable de los suelOS.14. Sodio por fotometrla de Hama.

Aneio XII. Vinos

INDlCE DE ANEJOS.

Anejo ,. Aceit~s ~ grasas

35. Prueba de Vizern.43. Reconocimi~nto de ésteres no glicéridos en grasas co­

mestibles por cromatografia en capa fina.49. Acidos docosenoicos.

Aneio II. Aguas

Aneio IV. Fertilizantes

S (al. Nitrógeno total (método de Kjeldahl, modificadopara muestras que no contengan nitratosl.

6 (e). Nitr6geno total.7 (al. Nitrógeno amoniacal (método del 6xldo de magnosio).7 (bl. Nitrógeno amoniacal (método del formaldehldol.

. '8. Nitrógeno amoniacal y nltrleo oonjuntamente (método deDevardal. .

Aneio V. htosanitarios

4 (al. Dlmetoato (por ultravioleta).• (bl. Dimetoato [por infrarrojol.14. .Cobre total (por lodometria).

. Aneio VI. Leche

19. SustanGias proteicas reductoras.

Aneio VII. Piensos

13. Nitr6geno amoniacal.14. Carbonatos.15. Aflatoxina B,.

Aneio VIIi. Productos orgdnicos -fertilizantes

1. Preparación de la muestra.2. Humedad (pérdida de peso a lOO' Cl.3 Ibl. Materia orgánica total (por oxidación).5. Cenizas.13. Fósforo total.18. Potasio soluble en 'agua (pOr fotometrla de Ilamal,

Anejo IX. Plantas

1. Preparación de la muestra.2. Nitrógeno.

142.­140.-

142.­140,-

Precio. ptaalQ.

ORDEN de 17 de septiembre de 1981 por la queBe estab!~een métodos oficiales de "nc1!isiB de "eet­tes )' grasas, aguas. carnes y productos cárnicos,fertilizantes, productos fitosanitarios. leche y pro­ductos Ideteos. piensos y sus primeras mBterlas.productos orgánicos fertilizantes, plant"s. suelos.productos derivados de la .uva y similares y tomade muestras.

23561

23562

CORRECCION de erratas del Real Decreto 2031/1981.de 4 de septiembre. por el que le "prueba lB regu­lación de lB e"mpalla oliv"rera 1981-82.

Padecido error en la Ins.erci6n.del mtado Real Decreto, ¡>u­blie@rlo en el -Boletin Oficial del Estado. número 219. de fecha12 de septi~mbre de 1981, se transcribe a continuación la opor­tuna rectificación.

Corriente de más de 2.· y hasta 3.· de acidez .Corriente de hasta 2.· de acidez ... ... ... ... .

debe decir,

Corriente de hasta 2.0 de acidez ... ... ... '" ...Corriente de más de 2.• y hasta 3.· de. aeidez

Excelentisirnos setiares:

De conformidad con lo establecido en ialI Ordenes IIÍiniste­riales de 30 de noviembre .de 19'/6 (.Bol.tin Oficial del Estado.de 4 de enero de 19771. 31 de enero de 1977 (.Boletin Oficiald~l Estado. de 14 a Z1 de ¡dlio) j 31 de· julio de 1979 (.Soletin

.Ofic'.al del Estado. de 20 y 30 de ego.to), por las que se declara­ban oorr.o cficiales diversos métodos de análisis, se ha continuadoensayando y poniendo a punto nuevOS métodos, no sólo de lasmaterias comprendidas en las citadas Ordones. sino de otrasnue'as donde existe necesidad urgente de disponer de métodosde a:'iálisls para el control de ó"terminados parámetros anal!­ticos.

En 5\1 virtud. y a propuesta de los Ministros de Agriculturay Pesca, de Hacienda, de Admin:stración Territtrrial, de Defen­sa. de Trabajo. Sanidad y Seguridad Social. de Indust";a yEnergla, de Economla y Comercio, de Educación y Ciencia.de Obras PúbEcas y Urbanismo, esta Presidencia del GobiernodiSpOne, .

Primero.-Se aprueban cOmo oficiales los métodos de aná­lisis de aceites y grasas. aguas, carne y productos cárnicos.fertilizantes, productos fitose.nltarios, leche y productos lácteos,piensos y sus primeras materias, productos orgánicos fertili­zantes. plantas, sl1elos. productos derivados de la uva y simi­lares y toma de muestras que se citan respectivamente en losanejos I al XII.

.Segundo.-Cuando no existan métodos oficiales para deter­minados análisis,. y hasta que sean estudiados por el grupode trabajo correspondiente. podrán ser utll1zados los adoptadospor Organismos nacionales o internacionales de reconocidaSolvencia. •

Tercero.-Quedan derogadas las disposlclonss de Igual o in·ferior rango que se opOngan a la presente Orden.

Cuarto.-La présente disposicl6n entrarA en vigor a lostreinta djas de su publicación en el .Boletin Oficial del Estado•.

Lo que se comunica a VV. EE. para 'su oonommiento y efectos.Dios guarde a VV. EE. .Madrid, 17 de septiembre de 1981.

RODRIGUEZ INCIARTE

Excmas. Sres. M1nIstr08 de AgrlculP1r'a ., Pesca, Hacienda.Administración Territorial, Industrla ., Energla, Obras Pú­blicas ., Urbanismo. Defensa, Trabajo, Sanidad ., SeguridadSocial, Eoonom1a '7 Comercio ., de Educacl6n ., Ciencia.

24004 14 octubre 198{ B. O. ael E.-Niim. 248

ANEXO l.-ACEITES Y GRASAS

••-PRUEBA DE VIZERN

35.1,-Principio

Insolubil~.olón d••Icohol.. grosÓs suporlortt. partlt dallnaaponlflcable da teeitoa praoced.nt.. de .0.ltuna que por su ou.nda y en~ condlclon.. pueden precipittr.

•.2.-MarOlialy sp...ro.3&.2.1.-Mal"z d. fondo pl.no, ds 250 mi adepjtb!e a relrigorsnte da rsltuJo.

35,2.2. Rafrlgersnt. d. rsflu)o.3&.t.3. Embudos da separación d. 50Il mI,

35.2,4. B.~o d••rena.35.2.5. Malm .rlonmover d. 100 mI, con bo.. ssmerileda, proy!ote de refrigerenl. de

reflujo de .sir., COhstituido por un tubo de 80 a 100 centfmetrol~ Jonl)itud Iproximadl­ment••

35,2.8. Tubo da snsayo con gnJ_ de pared de 1,5 mm V &menslo.... spro>cImsdso de160 mm de altura V3:J mm de diAmetro lnterior, pl'OYilto de tapón de ClUC!"O delilk:onl,Uevando en el centro .un term6me1ro graduado .... grados comprend..lendo la ltcaIa .. gamI .de 2O"C .. 86"C, manteni6ndose homogtnea la temperatura en ~odo el rtcfnto interIor1ñli­¡able.

35.2.7. Eslula d. culdvos, da cspacldad sdéouade, regu1sble • una tempel'l"" da23'C :t O,S'C.

36.2.8. Evaporador rotatorio con vacfo4

35.2.9. B.~o de agua regulable de 26'C :1: O,S'C,

3&.2.10.-Plpllt ds 10 mi.3&.2.1l.':"V.... d. lSO mi d. forma slte.

~U.-R..otivD.

3&.3.1.-S01\l0Ión de hidróxido potúioo 21'1, en fjtnol de 98' G.L. lXenlo da ,ld.hidoI.

•.3.2.-Etanolde SO' G.1. .•.3.3.-Agus _ledo.

3&.3.4. SuW.to sódioo .nhidro.

3&.3.5.-DlooluoI6n Indicadora da fsnolflalslna. DJ$oIwr 1 gromo d' fsnolftaltlnllll100 mi de Ilenol de 96' G.L,

35.3.6.- Etanol de 9611 G.L., el<Elnto de aldehidos.

35.3.7.-HexanQ.

35.3.B.-Etanol de 850 G.l. Diluir 885 mi de etanol de 96' G.l. hasta 1.000 mI con aguadestilada. Ajustar exactamente. Oll e 0,8520.

36.4.~ProcedlmlentQ

Pesar con precisIón de 0,01 g, !j g de acette en un matraz de 2SO mI y ariadir 50 mI dela disolución alcohólica de hidróxido potisico 2 N, coloear el refrigerante V hel\lir duranteUna hora. Transcurrido dicho tiempo, retirar el matraz del bario y esperar unos minutos hall­ta que baJe su temperatura, retirar el refrigerante y verter el contenido del matraz en el em·budo de separación de 500 mi, enjuagar el matraz con 60 mi de 19ua destilada en-pequel'asporciones y 8 continulClón proceder análogamente con 60 mi de hexaoo, recogiéndose to­do en el embudo de seParación. Agitar enérgicamente durante un mrñuto. Dejar repasar Vuna vez que las fases estén completamente &eparadal, transvasar la solución hldroalcohófl·ca al matráz de saponificaci6n y la dlsoluci6n de hexano a un segundo embudo de separa·tión. Extraer de nuevo' la disolución hidroalcoh6lica con otros 60 mi de' hexano, m¡niendoel extracto hexánico con el anterior. Realizar una tercera extracci6n con otros -60 in( de he.J(ano y reunir con los· extractos anteriores.

~n el uso de que se formen emulsiones. a"adir unes gotas de etanol absoluto para ell·minarlas.

lavar IOS8Xlractos tres veees seguidas con porciones de 50 mJ de etanol de 500 Igitan~

do durante treinta se9l;1ndos, hasta que en el último lavado no se ·aprecie coloraci6n rosa aladicionarle dos o tres gotas de disolución Indicadora de fenoUtale!na. En caso contrario,Continuar con los lavados.

Pasar la disoluci6n en hexlno del IJ1SI¡:lonlftcablf • un matraz de 2SO mf con tap6n •merilado, enjuagándose dos veces el embudo de extracción con 5 mI de hexano cada vez.Agregar al matraz unos gramos de sulfato s6d1co MeO, IIQitando y dejando en repOIO UN~dos horas con el tap6n ajustado. .

A continuaci6n, Ven porciones suceeivas, filtrar la tolucl6n heldlnlca a trav61 3e papelde filtro seco. recogiendo la soluci6n f1ttrada en un matraz de 100 mI, evaporar el olSoIventeIn un evaporador rotatorio con vacío, pudléndotl cal9ntar. una temperetura que no IXC&­-da de 4O-oC.

Terminada la evaporaci6n de la totalidad del disolvente. H agregan Ir matraz 10 mi deetanol de 85° medidos con pipeta, colocar el refrigerante I introducir en un b81\o de aguaregulado 8 una temperatura de aJ'e ± 6°C, en el que .. mantiene. agitando de vez encuando, hasta conseguir la fusión del producto o tu dJloluclón total, para lo que IOn IUfl­cientes, nonnalmente, unos 2 ó 3 minutos de permanencia en el bano, no d.biéndose pro­Jongar i~necesarjamente la calefaccl6n. '

Delar enfriar el matraz sin quItar el refrigerant., huta alcanzar una temperatura de unOl30°C y transvasar la dIsolucIón elcoh611ca dellnsaponiflcable al tubo de ensayo, enJuagln­dose el matraz con otros 10 mi dt alcohol d.86° medidOl. tlmbi6n4 con pipeta, ¡ncorpO.r6ndolos al contenido del tubo,

Colocar el tapón con el term6metro en el tubo;flomogeneizaf la mezcla 8 IntroducIr ti..lIIIxI en un VilO forma sita d. 150 'l'1, Yal \'l1li oon sl tubo ..-11sva • un'bollo da Illu'

regulado a 2S°C ± O,6OC mantenl6ndou ..r el t*npo necesario para que 81 termómetroregisttela·misma temperatura del bario. Una vez alcanzada dicha temperatura, sacar el. tl.l·00, colocarlo en un soport. e introducirlo en upa ..tufa que previemente está regulada.23'C ± O,5°C mantenitndolo en repolO en la estufa d08 h9f'll aontadas a p'rti! del mo­mento en que alcance los 23'C•

La formación de un precipitado en forma de eopos, SI -considere como positiva. Un pre-­cipitado mas dividido o pulverulento, no res.uelto en copos, no puede interpretarse cor¡lO ,positivo.

35.5.-R~fer/l'ncial .

1.-Una Norma Espai'lolll, 55004.2.-Una Norma Espai'l"ola;55049,l.' Re'Visi6n 1917.

43.-RECONOCIMIENTO DE ESTERES NO aUcElllooS EN GRASASCOMESTIBLES POR CROM/>,TOGR/>,FI/>, EN CAP/>, FIN/>,

43.1~- Prindpio

Disoluci6n de la muestra en hexano y posterior "paraci6n de los triglicéridos por crQooINllografia en cepa fina.

Es -aplicabl'e 1 ~odot l~s aCf!ites vírgenes O retinado,. utilizables p¡rectamente tin la 811·mentacion human.. .

El rMtodo ha sido ('studiado c~n §Steres de· Ac¡d?~ grasos V los alcoholes siguientes:metano!, 1,2 y 1,3 propi1e:1qlt<:ol y et'¡[:mglicol.

los límites dfttectados, segUn ens.lyo colaborativo p.n e' qu~ har' interve'1ido cinco labo·ratorios, osCila entre 0,7 por 100 (plp) \' 1 por_100 ~p-'p'.

43.2.-MateriB! y8paratol

49.2.1. -Equipo ·de cromatografía el'" tapa fina, comp~esto de ¡Aac'as de gel de ,sllice l]y un espesor de capa de-O,25 mm o de 0,40 mm en caso de ser necesaria una fl'layer reso­lución.

43.2.2.-Piaca calefactora -adecuada para qU&mar placas que permita alcanzar ler.-:pe...turn de 360°C. .

43.2.3.-MicroJeringa de 10 ¡.d•

43.3. -Reactivol

43,3.1.-Hexano para cromatografia fd 213•c = 0,694'.

43.3.2.-:-Eter etílico (dZO"c = 0,7151.

43.3.3. líquido de desarrollo.Mezclar 92 volumenes de h~xano y 8 volúmenes de éter etili~o.

43,3.4.-Acido sulfúrico a1.5C,ipor 100.

43.4. -Procedim/,nm

Depositar con una jeringa 2 a ~,l de la disoTuci611 de la muestra en heJdlnO'all0 por-1M,aproximadamente sabre la placa de cromatografía a una distancia aproximada do 1 cm deborde inferior de la capa de sfllee.

Introducir en ta cubel8 contenida el liquido de desarrollo lley.ano.,éter fltíliC"o, esplOlrendohasta que el frente del disolvente se sitúa, unos: 3 ~m. aproxima1amMte del borde superiorde la plau. Sacar 18 placa de lit cubtta y dej,t( serar el aire, lb cual se consigue en unosminutos. Con iI fin de facilitar ef reconodmhmto de fo! ésteras más dificiimenle separables,.. recomendable V necesario en algunos casos efectuar dos u tres desarrollos. Para ello,terminado el primer desarrollo V una vez seca-la place, volver a Introducir en la cubeta,manteniéndola hasta que el frente de diSolvente se hsya situado a la misma altura anterior.Repetir el proceso una veJ;,inAs si es necesario. En los casos de duda sobre el resultado po·lltivo de la prueba, deberá repetirse la cromatografls, sometiendQ la placa a dos o tres de¡.~oIlOl.

Pulverizar 11 placa seca con una disol~6n de 6cido sulfúrico al 50 por 100 y quemartobre 1& placa calefactora Bunos 300°C.

0.15. -lnterpretlCi6n de resu1tl1ÚoI

A un tercio aproximadámente. d~l borde Inferior de la placa aparece una mancha íntens!correspondIente a los triglicéridos. En aceite$ puros no aparece por .ncima ninguna olrlmancha pr6xTma a la de los triglicérldos, a excepción de algunOl componentes del insaponl.flcebfe que marchan con el fr:ente del disofvente. Una mancha, mAs o menos intensa, situa·da por eneima, J)róxima a la de los triglic6ridos, acusa I1 pl'9I8ncle de hteres extraf'los alallcerol. La distancia relativa enfte estas do8 manchas deP,ende. lógicamente. del elcohol deque H trate, 101 éster. de monollcoholes, tales como el metílico o edUco, te sitúan mAsdistanciados de como lo haceh 101 éSteres de dlaleoholel,talet oomo" etilenglicol o pro-­pilenglicol.

Una manche de muy débil tntensTdad. en la posicl6n correspondiente a los 6eteres meU-Icot, no debe ser tomada en· consider8ci6n. .

43.8.-Referencid ....

1.-lnltiMo ds RacionalWición del Ttsbajo. Ufli Norma Eipañoll ~~,oes.

.ü

B. O. del E:-Num. 246'

48. -ACIDDS DOCOSENOICOS

14 oetulire 19B1

49.5.-CMculos

240n~

49.1.-Principio«

Determinación cuantitativa. por ctomaiografl'~ gaseo", de los fcidOl docosenoicos eonatenidos en aceites y grasas utilizadas en la Ilimerllacibn humeN. Cuando le trata de aceitede cofza estOs leidos est60 constituidos exclulivamente..,por el 6cído erúcido Icil13,14 do-·cosenoico). .

. El m6todo, N furtda en obtener tes 6ste.... metflicos' de los leidos grasos contenidos enl. muestrll problema por metan61isis con metóxido sódico, compl~tad8 eón. una lhet8nólisil6cid. si fuera necesario, adicionando previamente 8 la muestra una cantidad determinadade teft'cOSlto de metilo (lIgnocerato de metilo) O ti acido libre, que se utiliza como patr6nlnterno.· .. .

49.2. -Materi-' y tlplNatos

49.2.1.-Como e~ el método oficial n.·41. apartados 2. f. Y3.1.

49.3. RHcfivo~

49.3.1.-Como én el método oficial n.· 41, apartados 2,2.1.; 2.2.2.: 2.2.3. V2.2.5.

49.3.2.-Heptano normal, de pureze edeeuada-pera cromatogrllfíe gaseo~.

49,3.3.- Disoluci6n acuosa llturt<fe de cloruro sódico.

. 49.3.4.-Erucato de m&tUo (docosenoato de metilo), patró,n para cromatograf'l'a gaseosa,con UnI riqueza minima del 99,5%.

49,3.5.-Lignocerato d_e .metilo {tetr.cosenoato de metilol, pltr6n plrl Cl'QOl8tograff8,c;on !Jn' ,riqueza mini,rna del 99% IV&r 49.6.1.}. '.

49.3.6.-Soluci6n pe;tór:'l de erucato de metilo, en heptano, conteniendo 2 mg/ml.

49:3.7. -Solud6n patrón de lignocerlto d. metilo, en heptahO, conteniendo 2 mQ!ml.

49.4'. -PToetdimiento

..~·.t1.-Preparaci6nd4l la muestra.

le multStr!! Ulit¡zeda !1eberi estar "ca V fibre d'.seá«nentOl constituidos por materia..xtra~a$. 5! no 111;-51 esl. 18 filtrer. previamente por un pepel filtro, .greg¡ndo, si fuesenecesario, une pquena ctntidad de lulfato abdico anhidro, para retener la humedad. Sí lossedirnt:ntos e::tuvte5fH1 constituidOl por materia grasa .ólida, se fundir6.. calentan<j. suave'manta j¡; MueJlr,. ""itandv lo necesario par. conleguir SU homogeneización.

49.4,2~-Detet'minaci6n del factor d. retpU~aper. el trucato de metffo en relIcl6n.a1Jignocerato tIe metilo. " - -

Tomar, exaciamente m&dido. 1mI de solución pttr6n de erucalo de ~fo 149.3.4'), ct..positAr en U" matraz c6nko de 26 mf, agregando 3 mi de le aokIción patrón de lignoceratode metilo ·(49.:':I.5.}. Agregar 4 mi de heptlno y .gl18r aaavemente plfI homogenelzar larnncla. "

Prt'!parar otras dos aoluciones tomando, respectivamenté 2 y 3 mi de .. IOluc16n de eN..cato, Y·lf'ladiendo en cada caso 3 mI de la soludón de lignócerato, completando con hep·tino haste Un volumen total de 8 mI.

El f~tor de respuesta se obtiene aplicando la siguiente fórmula:

P,~ _Agx~A. x p.

Ilendo:

RJI = Factor de respuesta. ,.A, ai: Respuesta del ácido lígnoc6rieo.A. o:: Respuesta del éddo erúcico, expresada en las mismas unidades del Acldo liQnocérico.P, • Peso. en mg. del erucatO. .p. o:: p.o, en O'tg, dellignocerato.

49.4.3. -Pre;>8r~ci6n tie 101 65t.1I metlli<;ot:.

En un mat~ez .:.lo metilaci6n~, pesé.r, con precisi6n de 0,1 rng, 50 mg -de "ra muestraeonvenitmtemente preparada.. ~regando 3 mi de la solución pIItrbn de lignocerato de meti·lo IVer 49,6.1.' y 10 mi de'le soIuci6n de metilato sódico. Agregar 2 6 3 trocltot de platopor060, COtClear ef refrigerente, ealentar: hestaebulllción suaYe, que .. mantiene duranteuna ~ora. Al cabo de este tierhpo_V sin interrumpir 11 ebullición, .gregar, por, la boca supe.rior del refrigerante, 10 mI de 11 solución mettnólica de c1orhidrico, .continuando 11 ebunt·ci6n ~...nte 15 minutos (Ver 49.8.2.).

Al cabo de .te tiempo, dejar enfriar 11 matriz V. una vez. frlo quitar'eI refrigetlnte, .c;R.cloliando 5 mi de hepwno; 'tIponer " matrIZ, agitando fuertemente dUnlInte un minuto.Adlcioner soIuci6n acuosa IIturoda de cloruro abdico basta situlr la cape de heptano en ..cuello del matraz. '

49.4.4.-Cromatografta gateo.. de Jos nter...

InVoc", 2,. de 11 solución de hep..no Nor 4&.6.3.1.les condiciones OperatiVII m6I adecuadel-deben ter eateblecidat por el ope~ador o 11

\'tita de loa resultadol obtenidol c:oo In muela pltron8lJ de iIIterw l1ltIIIieo&, Como orien~

.ción, V si .. utiliza eiI relleno rICOI'TIefl4Ild eneil m6todo ofldII n.· 41, apartado 3., ..puiden indicar les siguientes: TemperltUnI del Inyector.260'C; temperItUnI de la columNl190'C; ternpElratura dttI dtteetor~C. El flujo de-ni~ debert .... regulado para obt&­tener un tfelTi;1O jje retención pllra IIllgncKerlto'de uOOI'7 minu101~ obteni6ndoee normlll~ . ,mente esta r6tend6n cdh ~-40'ml/mln.

Determil\8r la respUesta ch:!1 de1e.:tor pi'" el pico de loI6steres d.los 6cJdOl docoseno¡"COI V Ugnoctrico r IIlillnoctl.~ por wll<¡uitrl dt Ioti "'_1" out .. ulillun con·""'1110 .

% de icidos docooer.oicos en el aceite = _-,A"",--"x-,P"",-"xc.R:.:...•.:x,-,,'OO=-_A, X PIlI

siendo:

A. _ Respuesta de los écido,)S doc.osenoicos.

Ap

, _ Respuesta del patrt!n tlignooenttol expresado en lis mismas unidades t'lue los ácidoSdOC:osenoicos. :

f'" =Peso, en mg, del' patrón.P1ft • Peso, ~ tng, de la muestre de acelte.R, "'" Factor de respuesta del &fuelto de metilo en relaci6n illignocerato de melifo, de~

terminado como·se indica en 49.4.2.

49.6. -NQtas

49.6.1.-En .Iugar del erucato y lignocerató de met~o se puéden utilizar como patroneslos 6cidos libres, siempre que tengan un mlnimo de purlZa del 99%.

En este caso, para determinar el factor de respuesta erucatollignocerato. se deberán to­mar los volúmenes de soluciones patrones que le indican' en el apartado 49.4.2. 1eeogién...

_ dolos en un metraz de metilación .. elimino el disolvente con una corriente de nitr6genQpuro y seco y se rnetila ornrtiendo la adlci6n de metilato sódico adicionendo 10 mI de solu­ción clorhfdrica de metanol • hirviendo. reflujo durante una hora. Se sigue como 11 indi­ca en el ¡partado 49.4.3.

49.6.2.-Si It maestra anali;r.ada esti constituida por una grasa neutra como es et casonormal al tratarse de aceites de semillas refinados, y el patr6n utilizado, es el Iignocerato de'metilo, bast.... efectuar soI8mente la metil.cibn .Icelina, sin que sea necesari,ó le utilizaci6nde tllofucióo clorhldrica en metanol.

, Según esto, trenscurftdo el peñodo de ebullici6n de una hora, después de agregar la so­lución de met~ato, se deja enfriar, le agregan 10 mi de sqlución acuosa de clorhidrico IN V5 mi de hepteno,· continuan"do como se indica en el último pár~afo del apartado 49.4.3.

Si fuese .necesaria la ~acKm de 'cidos libres provenientes bien d. la muestra o delp8tr6n por utilizar 6cido'I,ign0c6rico, se proceder6 como en 49.4.3.

49.6.3. A;usUndoM estrictámente a la. condiciones operativas indicadas en todo el cur~

10 de" la metódica, la cantidad inyectada de" erucalo y Ugnocerato no debe sobrepasar, encada ca~, de 10 ~. En ~ualqu¡er caso, par. obtener UI'lI resPuesta cuantitativa correcta,este lÍQuido no debe sobrepasarse, tirvtando los res:uhldos obtenidos en la determinacióndel factor de respuesta. t81 como se describe en el apartado 49.4.2., para apreciar los Ilrrú-tea de linealidad en la respues~a del detector; .

ANEXO II.-AGUAS

14.-fLUOR

14.1. -Principio

Determinación directa del fluor pOr potericiometríl, utilizando un electro~o iónico $eTec~

tNo.

14.2. -Maftlri.' y.paratos

14.2.1.-Potenci6metro con escala ex"pandida que permita apreciar 0,1 mV.

14.2.2.-Electrodo selectivo de fluoruro.

14.2.3.-E1ectrodo de referencia (preferentemente uno de doble unión cuyo departa a

mento Interno contiene solución saturada de CtK y el externo una soluci6n IN respecto •NO,K y CINal.

14.2.4.-Recipientes d.e plástico de 50,100 Y1.000 cm' de capacidad.

14.2,5.-Pipetas de precisi6n.

14.2.6. -Agitador rnag nético.

14.3.-Re.ctivO$

14.3.t.-Solución patrón de f1uoNro conteniendo 1 9 deF- por ~ro. Pesar 2,210 ~ d~FNa ldesectdo o 110'C durante cuatro horesl disolver y enrasar a 1lftro con.. agua deslonl~

zodl.14.3.2.-Solucl6n amortigu.dor. I11SAB). Disolver en un litro d. ag~. d~i.on¡zada

&8.6 'g de CINe; 15 cm' de 6cido acético ,lIelel; 102,06 g de acetat? ~ICO trihidratadotG1,&3 9si .. anhidro); y 0,3 liI de cltrldo s6dIco d1hidretado (0,4 9 '1 se .tter1e 11. moles de-stua', cotnproblndo que SU pH queda compt'endtdo entre 5,00 y 5,60. Ajustar SI es necea

lirio.Esta solución pue\::le sustituIrse por otra é:onltituida por fi1 cm1 de ~cido·acético glacial;

, 68 5 9 de CINa; 4g de·CDTA (6cic1o haden 1,2·dtnitrilo--tetracetato sódICO) y NaOH en c~n.~ suficiente (unos 125 cm'J perII obtenlS' un.pH 5.0G-6,60,. completando con 19u• desl0 4

nizada hntl1 litro.14.3.3.-SoIuci6n exterior para et_trodo de referencia. Disolver 10,1 9 de N03K y

1.86 ade CIN••n agua 'hasta'100 cm'.

14.4.-Procedimiento

14.4,1.-0btenci6n de li curva patrón: Puesto. e! potenc¡ómetr~ en régimen de trab,aio,IntrodUc:ir IoIl1ectrodol MIoc.tivo y do roferoncil en UflI mtzcla comp~"ta por 2Q cm de

24006 14 octu6re 1981 B. O. ilel E~Niún. 248

solución patrón de 1 mg de F- por litro y 20 cm' de una de las soluciones TlSAB. Agiter&Hpet'ar a que se estabilice IIlectul'l y a~arll.

Extraer los electrodos, Iavarto.· con Igua desionizada, secarlos con papel de Hltro y vol­Ver a introducirlos en .UNI rnRClI de 20 cm' de sohJci6n patrOn de 10 mg de F- por litrcfy20 cm' de solución TISAB. Agitar, aperar la eetabilbaci6n de la lectura y.notaria.

Si &l electrodo funciona en condiciones óPtimas, la diferencia entre'amba8 lecturas debeoscilar entre 56 y 59 mV dependiendo de la temperatura a que .. et'ectu....on las medida..

14.4.2. - Determinaci6n. Operar con la muest,. como se ha indicedo anteriormente.

24.5. - Cálculos

Calcular el contenido en fluor .prepdo en mgllitra rTMk:!iente conpar&Ción con la curvapatrón. teniendo en cuenta que ésta puede ser extrapolada hasta 0.2 mg de F- por litro,utilizando papel semiiogarltmico.

14.6. - Observaciones

14.6.1. - Difltl'encias de lectura entre da. pttrem. (1 y tO mg de F- por litro. inferior•• 4G-46 mV indican normalmente que el electrodo seIeetivo ha perdido sensibilidad V debecambia.... El periodo de vigencia del etectrodo de ftuor viene a .... de 12 • 18 lTI8MI con unuso diario normal. •

14.6.2.... Hablda cuenta que l. temperatura de la soluci6n afecte • la. lecturas. tanto lasmedida. de les sofucionel patr6n como 1ft de las muest,.. deben real~ I la mismatemperatura.

14.8.3.-·las interferencias producidas por los iones Si4-; A1h. Feh y H+ (este últimopor debajo de pH5). al formar complejos con el i6n F- y 1M i6n OH- a pH superiores a 8.quedan eliminad•• con el empleo de soluci6n TI5AB.

14.6.4.-las muestras V soluciones a utilizar deben conservalU en recip.ientes de pln­tico.

14.6.5.-Para concentraciones inferiores a 0,2 mg/l F- debe utilizarse el método deedición conocida.

15(1'>. - BORO ICurcumiRa)

15{al.1.-Principio

Acidificaci6n y evaporaci6n de la muestra an presencia de curcumina. formad6n de uncompuesto de color rojo y posterior medida espectrofotométrica del color desarrollado pra."ia disoluciÓn en etanol.

El método es aplicable en presencia 'del 16n N03 - en concentraciones inferIores al00mg/l.

15(aJ.2. -Mllterial y sparatos

15(al.2.1.-Espectrofotómetro capaz de efectuar lecturas B546 nm, equipado con cubtt­las de 1 cm de paso de luz.

15(a).2~2. -Equipo normal de vidrlp (eltento de boro) cuarzo o platinQ.

15{a}.2.3.-Bai'\o de agua regulable,a 55· ± 3·C..

151aJ.3. -ReactiVO$

15101.3,1, - Etanolal96!6 NM.15(aJ.3.2.-Acido clorhídrico concentrado.

15(al.3.3.-Solución de Boro: Disolver 511,8 mg de Aeido b6;ico en agua desmineranzl-da y completar hasta un..litro. (1 miO 108 "'¡crogramos de boro). .

151a).:3.4.-Solución patrón de Soro: Diluir 10 mi de solución de boro (15.3.3.l hasta unlitro con agua desmineralizada (1 mi <> 1 microgramo de boro).

15faJ.3.5. -Reactivo de etJJCUmina: Disolver 40 mg de curcumtna 12 -CH30 C, H, _ 1

- OH - 4 CH ... CHCO)2 CH,2 y 5 9 de ácido oxálico en 8) mi de etan~ al 95% (1~al.3.1.J.Ai'tadir 4 mi de lIcido clorhídrico concentrado y llevar a 100 mi de etanol de 95%. utilizandomatraz aforado. (Esta solución _ estid>1e alrededor de 15 dIas si se guarde en hasco colorlopa~V se mantiene en refrigerador.)

15(al.4. - Proced/mlenrtJ

15{al.4.1.-Obt~ci6n de le CUrva di caltbrtdo. Introducir en c6psutu de evapora.ción del mismo tífitO y tamark! O;' 0.25; 0,50. O.7t: V 1,0 mi de soIuci6n patrón ere borofl51aI.3.4.1. Al'ladir agua desmtneralizada a ceda cAps"ula par. obtener un vokJmen total d.a1 mI. Agregar 4,0 mI de reactivo de cureumina (15(aI.3.5.• a todas ell.. V mezclar cuidad~lamente. Evaporar en bario de agu•.a56· .;t 3·C, manteniendo 101 residuos I esta ttr\"lPlt"

ratura durante 30 minutos en 1ItufI. o..- enfriIr '-ti tlmper8tUra ambiente. ,Al'1edIr .,.noI al 96!6 (15(al,3,I,) y _ irI1urando, _ a _afonldo co.......ndo a 211 mi.Fllt~r lis IDIuciones (si ea prticilo) pof flItro de~~. (Whatman 30 o~.UeYlr une perle- de kM fijtradol • la cubeta del JnnvmInta dI·mtdkIlI, Yleer • lS48 nm dIn­tro de .. primer. horll subliguktnte al teeedo.

Con loa datoa obtanidoa conatrulr la CUMI patr6ot.

151aJ,4,2,'-Datonnlnaci6n: Tomar 1 mi, de la ..-Y _ axac_ 'Igual quoen·15(.1.4.1. Si al efectl,ter el an6l~ aparedeM una concentrlci6n excesiva'de Boro, clIberepetirle "......;o diluyendo 1&~ra con 19UI _;...!U 1 I hIIta un votumen cono­_, y tomando 1 mi del m*"'> pa'" la vaIor_.

151al,5,~Cókuloa

Calcular el contMIido en' boro exprewtl,. &n ITJU./litro medilnte comparlci6n con la curvede calibrado, teniendo en CIJenta, si es neceMrio4".dDud6n de .. 1T'IUlllItrII.

15(8).8. - ObS6fWCÍ.)rra

15(al.6.1.-EI m6todo sigue la ley de lambert.Beer hUta· 2 mg de boro por titrc?, 1IIcantidad mínima detectable de Boro es de 0,2 mq/lltro.

15(1¡.7.-Bibliogran.

t-Bunoten N.6 y TGit B.H.-l969-J. Amer. Water Worb AsII. 61:367.

2.-Standard MethodaJAPHA -AWWA-WPCF)-1975;287.

le.-MERCURIO

16.1. -Principio

Conversión de lós compuestos organomercurialés en sales inorgánicas de mercurio, ,...ducci6n de los iones mercúricos a mercurio metálico por la .acci6n del Sn ••• \/olatilizaciOndel meféurio metálico y arrastre del mismo has.ta la célula de absorci6n mediante una coorri«lte de gas y determinación de la absorbancia a 253.7 nm.

16,2. -Material y aparatM

18.2.1.-Espeetrofot6metro de absorción atÓmica.

16.2.2.-Umpara de mercurio de cátodo hueco.

16.2.3.-Cámara de absorción con ventanas de cuarzo. acoplable alespectrofot6metro.

16.2.4. -Equipo d. reducción del 16n mercúrico a mercurio metilico y de arrastre de ...te con corriente de gas hasta la cAmara de absorción. incluyendo un sistema de desecación.

16.2.5.-Equipo de suministro de gas con flujo regulable.

16.2.6. -Tubo flexible de tigon de 1/2 cm de diametro interior para las conexiones ".cesarias.

16.2.7. - Registrador de las intensidad.. de absorción, de voltaje VvelockMd variablel.

16.3. -Reactivos

16.3.T.-Acido sulfúrico concentrado.

16.3.2.-Acido nÍlr-iCo concentrado;...16.~.3.-'Permanga!'8lo potásico al 5% PIV en ligua desioniztda••

16.3.4.-Persulfato potético al 5% PIV en agua desionizada.

163.5.-Hidroxilamina- Cloruro sódico al 12% P/V en agua desiorÑzac!•. Disolver 12,01de cloruro de hidroxilélmina V 12 9 de cloruro de sodie en .gua desionizads y completar ..volumen a 100 mi.

16.3.15. -Cloruro estinnoso al 20% PN en ácido clorl1idrico af 20(~ V/V.' Disolver 20 Gde cloruro estannoso en 40 mI de ácido clorhídrico al 50%· y completar el volumen a 100 micon agua desionizada. .

16.3.7.-SoIuci6" patr6n d~ mercurio de 1.000 rngll. DisoIvet' 0,1354 9 de cloruro mer.cúrito en 75 mi de agua desionizada. at\adtr 10 mI de leido nítrico concentrado V ajustar elvolumen a 100 m!. Esta soluci6n mantenida en re1rigerador puede conservarse un ano.

16.3.B.-Soluci6n patro" demercur¡o de 0,1 mg/l. Se obtiene de la anterior por ""c:nI---

.u

B. O. iiel E.-Num. Mí 14 oetullre 1981 24007

val diluciones COf'-- agua desionludl, llevando la concentraclbn final de 6e1do nhrico al0.16" V/V. Debe prepen:lrte, el igual ql.M!aI toIucionu interrnediu, dllriBmente.

18.4.-ProcMim~to

18.4.l. -Obtención deio curve do ceIIbredo. Treneferi, oneuotn de O: 0.5: 1.0: 2,0: 5.0'Y 1~. MI de ti soluci6n patrón de 0,1 ppm W5.3.8.t que contienen de O• 1 J.IG de mercurio• matraces edenmever de 250 mi. Aftadlt 19(J1 destilada. cada matraz hasta un volumentotal de 100 mi. Mezclar entrgrClmente y aftadJr B mi de iCkIó autfúrico concentrado(16.3.1.) V2.6 mi de 6oido nltrieo conCffitrado (18.3.2.). etda matriz,' Al\adlt 15 mi de lalbIucl6n de permanganato potisTco UB.3.3.) I Cid. matraz y dejar en reposo, a1 menos 15minutos. Al\lKtir 8 mi de persultfto potisico U8.3.4.) I cada matraz V calentar en un blriode egUI durante dosh~manteniendo la temperatura a 96 I C. Enfriar y .t\adir 6 m. Cl. ~o­nJro s6dico-doruro de hIdroxiaminl n6.3.5.) para reducir el exceso de permanganato. Cua"..do la sotuci6n se ha decolorado transferir al matraz del equipo de reducci6n 116.2.4.1 unaelfcuota o la totalidad de la misma, de lcuetdo con el equipo de que se dispong., agregar0.5 mi de cloruro estIinnoao (16.3.8.) por cada 10 mt de lasoluci6n decolorada transferida15 mi si se trariSfie~ la totalidad) yaeguidamente, sin agitacl6n conectar el matraz al siste­ma de a1reaci6n previamente ,ajustado al flujo deseado '(1 litro/minuto en los equipos co-­"ient&5). Al iniciarse la aireación se producir' una absorbancla creciente que aleanzara unm.~lrrio dentro de los Xl segundos para iniciar Ufl descenso progreslvo hasta alcanzar nue­vamente el valor cero, momento en el cual puede iniciarse la reducci6n y aireaci6n' ,del si·guiente patr6n..

Representando en abcisas Jal concentraciones de los distlnt~ patronas y en ordenadaslas alturas de los correspondientes mAximos de absorción; se obtiene la curva de calib·radQ.

16.4.2.-0eterminaci6n. Transferir 100 mi del agua probÍema o una allcuota diluida a100 mi que no cont€nga més de 1,0 119 de me.rcurio a un matraz" erlenmeyer de 250 mi ycontinuar como en 16.4.1.

16.5. -C"culos

. Calcu:81 el contenido de mercurio expresado en mg/litro mediante comparach~m con lacurva de calibrado, teniendo in cuenta, si es neces;ario, la dih.ici6n de la ":!uestra.

16.6. - ObsefV8ciones

16.6.1. -Para muestras de aguas residuales puede. ser necesario més pennanganato.Agitar y al'ladir porcio",s adicionales de permanganato, si fuese necesario, hasta que peroaista al menos durante 15 minutos el color púrpura: .

16.7.-Bibliografí8

1. - Stan~ard Methoc1s for the examinadon of Water and wastewater, 14 edition, 1975,:lig•. 156-159.

2.-Method for Chemical AnalVSis -of Water and wastes. U.S. Environmental Protection&.gency (E.P.A.~-€25- 6/74-003) 1974 pAga. 118-126. Nacional Environmental' Aesearch::.nter Cincin'1:iti. Ohio 46268- U.S.A.

3.-Globol EnvirOOOletal MonitoriJig System ETS 78.8 pli-g. 119.

ANEXO ¡H.-CARNE Y PRODUCTOS GARNICOS

16.-TIURACILOS

16.1.-Principio

Extracci6n del.enlitiroideo con'metanof, evaporación del disolventt, dlluci6n con agua ypurificación con éter. Evaporeción del extracto acuoso a see::..oP!Jad, Po:lstt¡'(¡r recogida ¿ecloro1onno·m<rt~nol•.cromatografia en cotumna de ólc:ido de alu~;nio y posterior desarroHodeI.c0lor Con dicloroquinona-cforimida en tampón adecuádo.

Aplicable a rnuestras de tiroides.

len,., en befto rnaJIa a 7O"C é1urento 10.rnInulco agitando antrglcemante. Deje, enl,;armlnt.,,~do iI agttaci6n. Ag..-ger. Iproxfrnadtrntr*, 10 mi de 11 mezcla clóroformo-mata­not 1I matrIZ Y pasar a 11 coturriNl cromltOQrtflel CcMm.tro ;nterior 1e mm y 30 cm de lar.11"1. cuYII _ inferior _ tepedo """ aIgc>d6n. La IC1IvIded del óxido de eluminlodebe .... controlldl por un enuyo de rtlCUpereci6n con lllONci6n patr6n de tiuracilo. To­mar 10 mi de esta toIuci6n, liOlT.etogrtfica y deNrroIlIr el color. Medir la dens~d óptica.10.0.' eegOn el método que a continuación·N deserlbI. A la vez desarrollar eolor con 10 mide.1a IOluci~ patr6,M de tturacito no crolTll10gr81}ldI. LM dtNidad8$ Optic~s en 10$ dos ca..101~ .... idénticas.

lM,-PrDcedJmiento

1M.l.-Determinación.

Pesar en el vaso de la trlturedore 20 g de .. muettrI, prep&rlde 'según .1 m6todó n.' 1,o 6 9 si .. trata de tiroides. Agregar 100 mi de~nol y homogeneizar durante unos minu­tos.· A continuación pasar el contenido del \lISO a unos tubos de centrifuga y centrifugardurante 6.minutell 2.000 r.p.m. Pasar e1,sobrenadante I un matriz de boca esmerfiada,UevflndoIo 11 rot.avepor I ea-e para reducir IU volumen I un cuarto d-' inicial, con ayiJdI diVICio. .

Treelado, al eobrenadorrte O una ampolle de dac:antacl6n de 2SO mi de ""p,..>Clacl. levan­do el inatr{lZ-con 25 mi de egua· destilade e incorpcrindola tambi6n·. la empolla de decan..tád6n. agregar Hg\lidamente ea mi de tter ItIlico, agitar durante unos minutoa. dejar de­tantar y recogt!f1í parte IICUOBll en un matraz de bow esmerild. ~egUjdamen1ese iava denuevo el éter con 12 mi de egua destila~, rec::ogién<folo tao'Tlbién en el matraz. Llevar el me..trIZ que contieni la fracci6n r.cu0ll11 rotlVepor y evapcrQt a'sequedad ton ayude de VIcioyI une temperatura de ea-c. .

El residuo lit obtenido le fecog8 con 30 mi de la mc!zeta cloroformo-metano! V se tras-­vasa 8 JI columna crometogr6fice•.dejando delcander el liquido hastI 0,6 cm por encima elela capa de 4xido de aiuminto.Levar la columne· pñmero con 30 mi de la meza. cloroformo·metanol y dellpu61 con ~ mi de ~noI. Dejer baJer el Hquido, vigilando que la columnaquede sMmpre lumergida. Lavar el metraz,de I'VlporaciOn con 36 mi de metanol al 75%para disolver eventualmente !al Ottimal trazII del residuo y tr8SYlsar el liquido 11 la coh.1m4

na. olSClrtar los BprimérOl ml de la rnezdl y recoger 11 resto en un matraz de boca .."...rUeda. Lawr por. Clltima vez el nlI'tr8l GQn 20 mi de metanoI Ypesarios lla columna.

Evapo,.,. a eequedad el contenido del matraz en rotavapor I eo·C, con ayude de vacto,recoger el residuo de la ev8pofacibn en· 20 mi de la soluci6n tampón, pH 7,6, al'\adir 2 midi la Pu'ci6n de cIIdoroquinona-cIorirnidl, agitar 20 lIQundOl y dejar reposar 20 minu~.

Trasvasar IIlOfuel6n a una ampolla de decantld6n de 250 mi, laver el matraz con 4 mi,se cloroformo pIlIéndolOl 1 la ampolla ·de decantación y agitar. IJeiar reposar y recoger elextracto ctorofórmico en una probeta de 10 mi. Realizar un nuevo .lavado con 5 mi de doro­formo, recogerlo *" la probetl y ,nrasar 110 mi•.

Homogeneizlr'éI extracto do'rof6rmJco y puerto I un tubo del colorfmetro. el CUll Hile.va • la centrifuga. 4.000 ,.p.m. hasta: que el liquido queda comp$etlmente dero, leyendo"·densIdad 6ptk:I1 435 nm, con cloroformo como referencia.

18.4.2.-0btenci6n de la curva de calibrado.

Poner volOm."'" de 1,2 Y4 mi de 11 solución patr6n de tiurecilo en un ertenmeyer de100 mi, evaporar e lequedad en rotavapor a 6O~c y dl;8r enfriar. Recoger el resíduo en20 mI de la soIuci6n tamPón pH 7,S; aftadir 2 mi dt la solución de didoroquinona-clorimiday dejar reposar 20 minutos. Trasvasar el contenido a una Impo"a de decantación y agitar.Dejar repo_ y recoger el extracto clorofórmico en probeta de 10 mi, hacer un segundolavado con 5 ml de ctorotonno, Igitar, recoger en la probeta y enrasar a 10 m!. Homogenei"Zir, paslr al tubo del coforImetro. centrifugar y 1eer en el cololfmetro a 435 nm.

Con Iot dltos obtenidos construir la curva de calibrado.

18.5.-CMcul,,'

Calcular el contenido en tiuracl10 expresado en ppm medfente comparaci6n con la cu~di (;IIlibrado, teniendo en cuenta, " el necesario, 11 dikJci6n de la muestra.

•

16.2. -M.teda! y apa:rat~

1e.2.1.-~otavepor con vacTo.16.2.2.-Centrlfuga capaz deafcanzar 4.000 r.~.m.

16.2.3. - E~pectrofot6mtttro OcoIorfmotro c:apu. de efectuar lectl.lr.'s a 435 nm.

18.2.4. -Trituradora. -

1e.3.1.-Cloro~ormo.

16,3,2,-Metano!.

- 18.3.3.-M.zc!o elo,oforrno-m.."nolll.IIi

16.3.4.-Mezcla de 75 p-:¡r 100 de m~"'.ánó¡·lI'6IJl' ¿astila.1a (3·1).

16.3.5.-Solución tem!>ón pH '.a: DiK.:Vf;r '24'3-g" de troS lhidroximetil) Iminometano(tris) en 8JO mI de agua destilado y ~iustar it pH 7.6 eOfl 6ddo 'cforhidrico eN•

. 16.3.6·.-Soludóli de dicloro\tl.iirm-04·clonmida. Dísclver 20 mg de 2.6 dicfoÍ'Óquinocfo..rimida en 50 mI de isopropanol.

16.3.6.-Tiuta,ilo puro.

16.3.8.-Soluci6n patr60 de tiuracllo. Dlsof\i8l' 26 mg dr tl'tJraclfo fin 250 ml de rntdanOJ.De esta .olución se llevan 5 mi Bun matraz aforado de 25 mi. enrasando con metanol.

16.3.9.-0Xido de aluminio neutro de grado de actividad' lsecar durante 2 horII •1OO"C al vacio, en pr~ncÍB de ~2.0.. ct;ar enfdlq' qUlrdar" fruco de Pip6n esmerila,doen desecador). .

16.3.10. -Pl-eparación dolaleDlum.. Cl'Ometoo,6Rce. ll)trodúe~ 8 g dtl6x1do de ",uml­nlo en un orlonm.,.., de 100 mi, de boca esmerllada. AQregar o.e mi de lIllUl doeliIIda y Ga'

,Ie.e.-Ro'_1.-0- du Mothylth;ourecllo (MTUI dona'" vIonde. Vo~ WO" H. Rov, Ag,ie.' 26; .

_!l973l.2.-ThIourac:i11lnd poRutIon IRmenllllres. Rech8rcM It doUge du MTU Clans le Vl8nde.

.. Orglnel lnimaux .. 51. excr6mentl, faroerce. L•• Van Waes H., MedecinelBloIogla/Envlronnomont. Jenuary..Juno 15, 20 119"15).

24008 14 oetuJire 1981 B. O. (le] E.-NUm. 248

ANEXO IV.-FERTlLlZANTES"

61.,.-NITROGENO TOTALIM6todo de KJeldah1 modificado para muestra•.que no conten,gan. nitratos)

61a) .1. -Principlo

Transfor,rnar el nitr6geno orgánico en sulfato am6nTco, por ebullicl6n con 6eido sulfúrico.concentrado y separar por destilación el conjunto de nitrógeno amoniacal as! forrr.ado y elque eventualmente pudiera existir en la muestra, recogiéndolo en un exceso de Acido ~alo~

ndo. El exceso de écido se determina por retomo con un é!call valorado en presencia deItljo de metilo.

Es aplicable a todos los abonos que no contengan nitrato.

111~.2. -Material y apalBtO$

8(1I1.2.1.-Mauaces Kjeldahl de 500 a 800 mi.

8<111.2.2. -Aparatos de destilación.

1<1I1.2.3.-Vasos de 300 mi.

6(a).2.4.-Buretas de 215 mi.

6(8).2.6. -Probat" de 25 Y200 mi.

l(al.3.-Reactjvo$

eraJ.3.1.-0xido de mercurio o mercl:lrip metálico, exento de N.

8Ia).3.2.-Sulfato potásico o a6d1co anhidro, exento de N.

8la).3.3.-Acido sutf(¡rfco de 93 8 98 por 100, exento de N.

8hd.3.4.-0isolucI6n de tfosulfato s6d1'co o de sulfuro s6dico: 8J g de Sa0aNea' 6H20In tlltro de ague o 40 9 de sulfuro .6dico en ¡ Otro de agua.

8{aJ.3.5.-HldrÓxido sódico o en disolución: 450 9 de NaOH en agua, enfriar y enrasar a1 Itro. Debe tener de densic}ad 1..36 o mAl.

8(al.3.8.-Aegulador de ebufticlón Inerte.

et'a).3.7.-Aojo de metilo: Oisc.'ver 1gen 2009 mi de álcohol.

eral.3,B.-Disolucl6n de ácido sulfúrico o clorhldrico N/2 o'Nll0 si la cantidad de N espequena.

6la).3.9.-0isolución de $Osa N/2 o N/10.

6(aJ.4.-Procedimlento

. elal.4.1.-Pesar d. 0,7.2.2, g deI.bono y ponerlos ... un _1<leldehl. AIledlr 0,7;de óxido mercúri<:o o 0.65 9 de mercurfc metánco, 15 g I¡fe sulfato J)01:ásica Osódico anhidroy 25 mi de sulfúrico concentrado. SI fuera necesario pesar mIls de 2,2 g. anadl'r 10 mi deIUlfúrico por cada gramo de. muestra.

.coloéar el matraz en poslci6n-lncRnada V calentar suavemente' hasta que cese lafo."..\l6n de espuma (pare reduclr Ista puede af'Iadirse una peque~ cantidad de parafina). Her·~r vlv,amente hasta que la IOluclón le aclare y luego, por lo menos. otros treinta minutosmAs (dos horas para 18a muest". que contengan materia orgAnica).

6Ia).4.2.-Enfriar, aPfadlr con precaución unos 200 mi de agua, votver a enfriar por de~balo de 25"C, a!'ladir 25 mi de disolución de tiosulfato V mezclar para precipitar ei Hg. A~·dir el regulador de ebullición inerte para evitar vaporación súbita. Indinar el matraz y aí'iadiretri agitar la sosa (25 9 sólidos O suficiente disolución para poner la reaccfón muy alcalina).La disoluciÓn de tiO$Ulfato Oaulfuro .. puede mezclar con la disolución de 10M antes deal'ladirla al matraz.

6(al.4.3.-lnmediatamenta conectar el matraz al bulbo teniendo StJ'mergldo el extremode la· alargadera en un vaso que contiene el Acido N/2 o NIlO exactamente mecftdOI V cinco• siete gotas del Indicador. Agftar el matraz para mezclar el contenido y calentar hasta quedestile todo el amoniaco (al menOI 150 mi de destilado).

6(al.4.4.-Velorar el ,exceso' de leido con sosa de la misma normalidad.

Hacer un ensayo en blanco.

Sí.I.S.5. - Cálculo

'l6N= 18 - Al. 0.7P

"endo:

p • Peso, en g. de la muestrl.A - volumen, en mf. de sosa N/2 consumido en e1lnAJisis:B ~ Volumen, en mI, de sosa N/2 consumido en él ensayo In blanco.

6(a).6.-0bseNJcionsa

6(al.e.1.-El dispositivo da calentamlento 11 ajusta de tal forma que sea capaz di hvlr250 mi de agua a 25~C a ebullicl6n fuerte en unos clnca minutos o al tlempo'que especlfl·que el método. Para probar 101 calentadorel se precalitontln drez·mlnutos si IOn de gas otreinta minutos si son eléctrlCOl. Agregar regulador d. ebulllcl6n !nene para evttar 1ObrecI..Jentamiento. .

6f.sJ.e-.2.-Cnulr ellfquTdo que queda en lo. matraces KJetdahl con agua 1+1,aeparandopor filtración las sar~ de Hg InsolubJoa: quo 11 reHMI .... un I'Idplonte ~rop1ado, piI'Ifmpedir la contaminUl;iOn deJ medio.

efal.S.3.-En auaenci. de mattlriI orgAnIce puede Illadtuil"lela mez.-&eklo de mercu.­rio-sulfato Potásico por la de settnio, ...trato de cobre, IUlfato potésica 0:1:20) en ti pro.porción de 1 9 por cada 0,5 g de muestra, no tiendo necesario en este caso utilizar la disg..lución de tíosujfato sódico o sulfuro l6dlea junto I la disolución de hidróxido sódico, en laetapa de destilación. .

6(al.7. - Refer,mcJe

1.-Assoclation,of Offlciai AnalytJeal Chemia.ta.. OFFICIAL METHOOS Of ANALYSIS,Ed. 1975. pAgo 1512046. . .

6(bl.-NITROGENO TOTAL(M6todo KJ.rdahl modlfic.do par. mua'lra que c.ontlena" nltraa)

8(b) .1. - Principio

El nitrato nitra el leido saDclflco en presencfa di Icldo sulfúrico concentrado. POltarior­~te el nitrato del derivado 'nitrado se reduce por el Zn o el tlosulfato V se prosigue como.. el Kjeldehl pata muestras que no contengan nitratos. .

No .. aplJoebl. a abonos que teilg.n ella~~I-/NO. - ni. 10& aI>onosllquldOlen general. .. .

6!b).2.-M.t&ti&' y opIIBto.

Como en 61.).2.

CNbl.3.-RtlBctivos

6(b}.3.1.-Acido saUcDico.

6(b).3.2·.-Polvo de zinc-impalpable.

6Ib).3,3,-EI ,..lo como en 6(.1.3.

6<b).4. -Procedimiento

6Ibl.'4.1.-Colocar de '0,7 a 2,2, g de muestra en el matraz de' digestión y eftadtr 40 mide- ácido sulfúrico que contenga 2 9 de 6cido aalicDicC!. Agitar hasta mezclarto compfeta..mente y dejar en reposo agitándoTo~ cuanto en cuando durante treinta minutos °rN••

6{bl.4.2.-A!'Iadtr 5 9 de S;¡03Na2' 5 ~20'6 2 g de in en polvo.'Agitary dejar en repo..10 cinco minutos. Calentar en llama pequena hasta que cese la formación de eSpuma. A..tirar del fuego, ai\adir 0,7 g de HgO ó 0.65 g de Hg metálico y 15 9 de sulfato potásico oaódico anhidro. Hervir vivamente hasta que se aclare la disolución y luego treinta minutosmés por lo menos (dos horas si la muestra contiene materia orgAnica). . •

6lbl.4.3.-Continuar hasta el final como en 6{a).4.2. VsJeuientes.

Ó(bJ.5.-Referenc;'

t.-Associat'ton of Officlal Analytical Chemist. OFFICrAl METHOOS OF ANALYSIS._:ElI, 1975, pAgo 16/2.050. . _

6Iel.-NITROGE"O TOTAL

B(cJ.1.-Principio

.la·reducción del nitrógeno nitrico a amoniacal se hace por .1 cromo en pebfo, prosl­guréndose eomo en el Kjeldahl para muestras sin nitrat08.

~c).2. - Materia' y aparatos

Como en 6(a).2.

6(d3. -Reactivo$

6fc) .3. 1. - Cromo metal en polvo que pase por un tamiz de 100 mallas 10.149 millmetrolJ,exento de N.

6Ic).3.2.-Acido clorhldrico concentrado [d -1.181.

8fcl.3.3.-Acido sulfúrico dtlufdo. Se agregan lentamente 625 mi de ácido auffúrlco a300 mi de agua. Diluir a eui un litro con agua y agiter. Enrasar cuando se enfrla. Evitarpresencia de amoniaco en la atmósfenr. -

6(cl.3.4.-0isoluci6n de tiosulfato sódico O de sulfato.patésico: leo g de S:z.O~Naa

&HaO disolver en agua y enrasar a un litro. o JOg ~ SK2 en un litro de agua.

8Ic).3.5.-Ef resto como en Sfal,3.)

8(ct.4.-ProcedimlMto

8<cl.4.1.-Pesar de 0,212" de la muestre 'que contenga una cantidad Tgual O manarde eo mg de N nltricol. poner1os en un Kjeldahl de 5ClO a EkXl mi V agregar 1,2. g' de potvode Cromo. Agr&g.l!lr 36 mf de agua. o Ir el prolMma SI liquido, completar hasta formar unvolumen total de 35 m!. Dejar en repoa.o durante diez minutos agitando en circulo de cuan- .do en cuando suavemente para disolver todos los nitnldOl. Agregar 5 mi de ácido c1orhJdrl·ca concentrado 'f dejar an reposo un tiempo que no debe ser inferior a treinta segundos niIUperlar a diez minutos:

81cl.4.2.-Poner el matraz en un disposItivo de calentamiento que cumpla 6(a).8.1. inllete o sJete min.-tos y medio.Despu61 de calentar trea minutos V medig., I8parar el calor ydejar enfriar. AgHtgar Z2 g de sulfato potáico, 1 9 de óxido de mercurio y el regulador deebullición inerte. Af'\adir 40 mi de ácido sulfúrico diluido 625 mI de ácido sulfúrico concen­trado. Si la materia orginica que consume gran cantidad de écldo, excede de 1 g, agregaradicionalmente 1 mi de Icido sulfúrico l;Oncentrado por cadl 0,1 9 de materia org6nica enexceso. .

.L

B. O. (lpl E.-Num. 246 n oetu6re t9ar 2;S009

elcL4.3.-Coloe8r el matraz en el d~positiv~ de calentamiento que"cumpla 6fal.6.1. encinco minutos. Disminuir el calor ella espume ocupa una zona igualo mayor de 2/3 del bul..be del matraz. Calentar durante cinco minutOs hasta que desaparezcan los humos blancos.Para muestras que contengan materia org4niCl, agitar suavemente, por rotación V prose­guir la digesti6n durante sesenta minutos más.

6Ic},4.4,-Continuat hasta el fjnal como en 6{aJ.4.2. y,Iguientet.

6Ic).5. -RMerencias

1.-Association of Officia¡ Analytal Chemists. OFFICIAL METHOOS oF ANALYSIS.Ed. 1975. p'g. 16/2.051.

7rol.-NITROGENO AMONIACAL(MAtodo del 6xido. de m'e"ulo)

7{aJ.1.-Princlpio

Transformación del nltr6geno .moniaeal en Imonlaco pOr lIacel6n de óxido de mígn..lio (no carbonatado). Destilar el amonillco sobfe un volumen conocido de &cido ~ulfúriCCi Vvalorar el exceso de écido por retorno con hIdróxido aódico en presencia de rojo de metilo.

Aplicable a todos los abonos, incluSo 101 compuestos. en 108 cuaJes el nitrOgeno se en-­cuentre $Ólo como ser am&nice o mezclada con nitratos.

No es aplic,a.RI~ a los abonos que conten,,~ urea. Cianamida y o1ros compuestos or9é~1..COI nitrogenados.

71Al.2. ~M.te";81 y'.paratos

Como en 6(a).2.. excepto matraz Kjeldahl.

7Iai.3.-RHctivos

7(a1.3.1. "'-Oxidó de magnesio (ljbre de carbonato magnésico).

7(al.3.2.-Hidr6xido s6dico N/2;

7(al.3.3.-Acido sulfúrico N/2.

7IaL3.4.-lnl:fic&dor de rojo de metilo: Pisol~.rJ.g en 100 mi de e~nol.

7tal.4.-Proc~imiento

Pesar. con precj.i~n de un mg, de 0,11.3,5 g de la tnuestra. tegún ~ contenido' dlt n1­trOgeno amoniacal. Introducir en'un matraz de destilación, 'l'Iadiendo unos 200 mi de aguly 2 g o mis de óxido de magnesío. Conectar el matraz a un refrigerante, mediante un bulbode seguridad. .

Destilar unos. 100 mi (te! liquido V recoger en un vaso conteniendo unos 30 mI de 6cldosulfúrico N/2 V unu g01as de rojo de' metilo. Valorar el exceso de bcido sulfúrico N/2 mtoodiante hidró):ido 56<:11co N12. Hacer un ensayo en blanco.

7{a).5.-Cálculo_

. Como en 6/a).5.

7{al .6. - Referenc~

1. -Association of Official Analytical Chemist$. OFFlC1AL METHOOOS Of ANALYSIS.·Ed. 19BO. p'g. 17/2.065.

7Ibl .. - NITROGENO AMONIACAL(M6todo d. formaldehido)

7(bJ.1.-Principio

El catión amonio reaccIona con el formol originando urotropina y dejando In libertad 101.cidos de l. sal,. que se valor.n.

Es necesario que la disolución d. fa muestra aH neutra respecto al rojo de metilo y qUlno exi$tan materias sólidas que puedan reaccionar con los 6cldos liberados.

Es eplicable al nitrato em6nlco y e' sulfato amónico. Puede utilizarle' en presencla deurea. .

7Ibl.2.-MoterialYoparo'••

7Ibl.2. 1. - Motrie.. olorodos d. 2liO o 500 mi.

7IbL2.2.-Vo"" do 3lIO mi.

7Ibl.2.3.-Burota. do 25 mI.

7Ibl.2.4.-Probotll. ~o;lOO mI.

7Ibl.3.-Ructív2.

7Ibl.3.1.-!'ormoldohido al:n por lOO.7(bJ.3.2. -Hidróxido &6dico N/2.

7lbJ.3.3. -Indicador de fcnolftaleína: Oisolyer 1 9 de fenolftalelna en 100 mI de efanol.

7Ibl.3.4.-lndi<ador do rojo do motilo: DI.oIVlll S dor<>jo do motilo on100 mi do O1anol.

7IbJ.4.-p(o~dimiento

7(bl.4.1.-Pesar con precisión de un mg, 7 614 g de la muestra y diluir a 250 mi o 8500 m!. Tomar con pipeta 25 ó 50 mI introduciéndolos en un ma1raz Erlenmeyer y al'iadir1 mi de formaldehido por cada 0•..1 9 de muest,& en la porci6n. Diluir 8 unos 200 mI y dejarf!ln reposo cinco minu1os. '

7Ibl.4.2.-Valorar con una soluci6n de hidr6xldo s6dico N/2 en presencia de cinco go­tas de fenolftaleina.

7IbI.4.3.-Hacer un ensayo en blanco ~titizartdo formaldehido y fenolftaleína.

7Ib1.4.4.-Neu1talitar una pordón del ~roblema con hidrQxido &6di¡;O N/2 en presenolldel rojo de metilo.

7(bl.5. - Cálculo

';lfN- M~ lA + 8l.0,7~ - . p

M = volumen, en ml, de hidróxido sódico N/2 gastados en 7(b~.4.2.

A "" volumen, en mi, de hidróxido sódico N/2 gasta~os en 7Ibl.4.3.

B ... I/olume.n, en mI, de h'idr6xido s6dico N/2 gastados en 7lbJ.4.4.

p ;::: P8$O, en g, de la muestra c.on1enida en la alfcuota.

1Ibl.6. ";"Observaciones.

Es necesario neutralizar el form~'dehido y el problema en alíc,;uotas distintas-.las d. tideterminación, aunque iguales en I/olumen, para evi1ar 111 mezcla dt indicadores.

7Ib).7. -Referencies

1.-Association of Officlal Analvtieal Chemist:l. OFFICIAl METHOCS OF. ~ALYSIS.Ed. 1980. P'g. 17/2.066.

8.-ÑITIÍOGENO AMONIACAL V NlTRICO CONJUNTAMENTIIMétodo d. O.varda)

8.1.~Princ¡p¡o

. El nl1rógeno nítrico se rediJce 8 amoniacal por el hidrOgeno desprendido al reaccionar litaleación de Devarda en medio fuertemen1e alcalino. Des1ilar el amoníaco formado V el VIexis1ente en la disolución. recogiéndolo enun e{(c8S0 de 6cfdo y v¡lorando por retorno.

Es aplicable a los abonos 81'1 que se ex~a " nTtr6geno ní1rico' y amoniacal, pero no _aplicable en presencIa de ma1eria or9énica. cianamida de cdIcio y urea.

8.2. - Material y aparatos

Como en 6lal.2., excepto el matraz !<jeldahl.

8.3. - Reactivos

e.3.1.~Aleación de Devarda (AI-Cu·Zn, 46/50/8).

8.3.2.-Disoluci6n concentrada de hidróxido sódico (42 por 100 en pesoJ.

8.3.~.-Qisorución·de ácido sulfúrico N/2.

8.3.4.-Disolución'de hidr6xido sódico N/2.

B.3.5.-Indicador de rojo de metilo: Disol~er 1 gen 100 ~¡ de etanol.

·8.4.-Procedimiento

8.4.1 ..... Pesar. con precisiÓn de 1 o1g, de 0,35 a 0.5 de muestra y ponerlos en un matraz:de 600 a 700 mi. Al'\adir 300 mi de agua, 3 9 de aleación.de Devuda y 6 ml deJa disoluct611concen1rada de sosa, despacio y por las paredes para que no se mezcle con el resto.

8.4.2. -Conectar con el aparato de ·destilación. teniendo Introducido el extremo de ..alargadera en un vaso que contiene 30 mI de 6cidollulfúrico N/2. Agitar el matraz y calen·1ar suavemente al principio y luego en una proporción que produzca 250 mi $le destiladoen una hora.

8.4.3.- Una v;z destilado todo el amoniaco valorar el e,xceso de Acido sulfúrico N/2 consosa Nf2 en presencia de rojo de metílo. Hacer un ensayo en blInco. .

8.5.-C.9lcufo

Como en 6{aJ.5.

8.6. - Observacionfl

Si se desea conocer separadcmente el nitrógeno nftrico una vez determtnados tos doljuntos. determinar el nitrógeno amoniacal por.eI método del óxido de magnesio y la diferen..

•ela aerá.el.nítr~eno nitrico.

8.7.-Referencia

1.-~iotion 01 Officioi AnalyliClI Chomiotl. OFFICIAI. M~THOOS OF ANAl.YSIIi.Ed. leso, p6¡¡. 1712,0lI7.

L.,....• . .1....._.

24010 14 octulire 1981 B. O. (lel E.-Num. 248

ANEXO V.-FITOSANITARIOS Ilendo:

41.l,DIME10ATO (por ultrav(or.t8)

... volumen, en mi, detiosutfato 0,1 N gutadOlen et an61__•b - volumen, en mi, de tJosutfato 0,1 N gastadol en blanco.p - peso, In g. de la niuestra.f • lictor de la saludOn di tiosulfato sódico.

4(b1.4. ....,.Procedimiento

4{b).3.-fleactivo$

4(bl.1.-Principio

x Riqueza patr4nAh. muestrax Peso patrón

Ab. patrón Peso muestra% de dimetoato =

4Ibl.5.-C6!CuIOJ

4lb).o4.' .-Preparación de la soluci6P'l patrón:

Pesar con precisiqn de 0,1 mg. aproximadamente 200 mg de dimetoa~o patr6n é intro.­ducirlos en el matraz aforado de 25 mI, disolviéndolos y enrasando posterK\rmente con clo~

ruro de metileno.

4(b).4.2.- Preparaci6n de la sol~..ci6n de la muestra a analizar.

Pesar con ,precisión de 0,1 mg. la cantidad de muestra necesaria ~I tener aproximada.merite 200 mg de dimetOato, introducirla en un cartueho de extracCi6n y seguidamertUi ex..traer en un soxhlet con cloruro de metileno durante el tiempo necesario para lograr el 8g0-0

tamiente de la muestra (aproximadamente una hora). Terml(l8da la extraeción concentrar lasotuci6n en rotavapor {a un temperlttura de 3O-40G CI hasta que queden aproxjmadameme 5mi, recoger el contenid~ del matraz de evaporación trasva~hdolo a un matraz aforado d.25 mi, ayud6ndose para una recuperci6n cuantitatiVa con pequei'las porciones de cloruro demetileno lrealitar un minir(lo de 3 levados) y finalmente enrasar con ei mismo disolvente.

41b) .4.3. - Determinaci6n espectrofotométrica.

En un espectrofotómetro de infrarrojos y utilizando cubetas de BrK de 0.05 mm de espe.­sor realizar un bQrrido entre 1.600 V 1,800 cm -1 de las sol.uciones del Dimetoato patrón Vde la muestra preparadas como se deseribe en los apartados A(bl.4. J. Y4Ibl.4.2.

4Ibl.3.1.-Cloruro de metileno.

4lbJ.3.2. -Oimetoato patrón de riqueza conocida.

4Ib).-~IMETOATO(por lnl.."ojol

4fbJ.2.1.- Espectrofot6metro da infr¡:orrojos.

4(b).2.2.-Cubetas de SrK detl,05 mm de espesor.

4Ibl.2.3:':'Extract~Soxhlflt de 250 mi de capacidóJd.

4fbJ.2.4. -RotaviiP"or.

o4Ibl.2,5.-Sal'lo df: agua.

4(bI.2.6.,-Matraces afo~dos de 25 mi.

41bJ.2.-MlltBrial Y aparatos

Mediante espectrofotometria infrarroja se determina el contenido en Dimetoato euantlfl'..cado la banda de absorción que presenta es'" compuf'!l:,t:;. entre 1.600 y 1.800 cm-1 -

Aplicable a formulaciones en forrTl4 de polvos e9polvoreab1el.

41sl.1.-Principio

Mediante cromatografla en capa fina y visualizaciÓn a la luz UV. se separa el dimetoato'de sus impurezas y productos de degradación. Mectlnl~mentese recoge la zona del 'dime­toato y se determina su contenido por bromometria.

Apncable tanto al D¡metoato técnico como a sus formuladones en forma de IfquidosemulsiC?nables y polvos mojables.

4(al.3. - Reactivos

4{al,3.1. - Placas de sit¡caga1 60F 254. de 0,25 mm de espesor. las placas deben Iavlr·se, antes de su uso, pOt desarrollo, en la misma direcci6n .en que despues se utilizaran,con. la mezcla cloroformo metanol. '

4Ial.3.2.-Cloroformo.!m.etanol30/1 NIVI.4(a),3.3. -Solución Bromuro/Bromato potllsico O,lN.

4Ial.3.4.-Acido sulfúrico 2,5N.

4(a).3.5. -I~duro potásico.

4(a).3.6. - Solución de molibdato am6nfco al 5 por 100.

4(al.3.7...... Solu~6n de tiosulfato sódico O,lN.

4(al.3.B.-Cloroformo.

4(al.3.9.-1ndicador de engrudo de almid6n.

4(al.4. -Procedimiento

Pesar, con aproximaci6rr de la décima de mg, 4 g' de producto técnico. disolver en clo­roformo en matraz afarazo de '0 mI y llevar a volumen con el mismo dis!'lvente.

41a1.4. f.- Preparaci6n de la muestra.

4(8).4.1. '.Producto técnico.

4(aI.4.1.2.- Líquidos emulsionables.

No necesitan preparación espedal, aplicándose directamente sobre la placa la cantidadde muestra necesaria.

4(a) .2. -Materi'afy aparatos

4(a).2.1. -E,quipQ para cromatografia en capa fina.

4{al.2.2. -Lámpara de luz ultra....ioleta capaz de efectuar lecturas a 254 nm.

4(al.2,3.- ~olavapor.

41al,2.4. - Extractor Soxhfet 'de 260 mi de capacíded.

4(al.2.5.-Baño de agua.

4{aJ.o4. '.3.-Polvos mojables.

Pesar, co'n aproximación de fa décima de mg. la cantidad d'; muestra necesaria para ob·tener 4 9 de principio activo, introducirla en un cartucho, de extracción y seguidamenteextraer en $Oxhlet con cforoform'o durante el tiempo necesario para l!iI8rar ef agotamientode la muestra {aproximadamente dos O tres horas). Terminada la extracción concentrar lasolución an rotavapor fa una temperatura de 5O-6OGCl hasta Que queden solamente' 62 mi,recoger el contenido del matraz de evaporación trasvasándolo a un matraz áforado de 10 mi,ayudándose para una recuperación cuantitativa con pequef'ias porciones de cloroformo(realizaLun mínimo de 3 lavadosl y finalmente enra~r con el mismo disolvente:

4fal.4,2.-Separaci6n cromatogr¡fica.

Aplicar sobré la placa .crometográfrca, 110 largct de una nnea de 14 cm situada a2 cmde! borde, inlerior y a 3 cm de cada borde lateral, un volumen de soluci6n que contengaunos 20 mg, de sustancia activa. . - •

Evaporar el disolvente y desarrollar la pfaca, una vez, con la.mezcla cloroformo/metanol30/1 VIV. Evaporar ei disolvente Vexaminar la placa o la Tuz U.V., marcando la zona cg..rrespondiente al dimetoato (normalmente la mancha principall.

Separar mee'nicamente, con ayuda de una espitula, la ZOna da la capa de aJ[fce,gelque contiene el dimetoato, asf como la fl"8nja de 5 mm que la rodea, con ef fin de asegurar­le de que la separación es CUlf\tltatfva, pas6ndose a un frasco de lodo de 500 ml o en sudefe<:to a un erlenmeyer del mismo volumen Con tapón esmerilado.

41a) .4:3.-Valoraci6n bromom6trfCl.

Introducir en el frasco de iodo Omatraz erlenmeyer un tubo conteniendo ~5 g de toduropotésico, anadir 25 mI de solueión O,'N <fe,bl'tlrnllro bromato y 2S mi de 4cido sulfúrico 2,SN,TAPAR EL MATRAZ, MOJANDO PREVIAMENTE et. TAPON EN AGUA DESTILADA YDEJAR 30 minutos a 20GC &gitando de wz en C'wlncfo. Al cabo de este t1empo invertir elmatraz para que el ¡adulo potlsíeo entre In contacto con .. solución V • condnuaci6nef'iadir , mI de solución de molibdato Imónlco 1I 6 por 100 Yvalorar la mezcla con 1110·luci~n .O,'N de tiosulfato sódico, UIIndo engrudo de Eftldón como indicador.

Hacer un ensayo en blanco, con lis miamu cantidades de reactivos V tomando uneeantidad de silicaget parecid~ a la~ .nélisi. y de la mllma ZOM. .

41a1.5. - Cálculos

"dfmetolto. (b - al x O,, x f x 1.638

P

B. O. def E.-Num. ~46 14 odu6re 1981 24011

14.-C08RE TOTAL IPor Jodom.'~oJ ANtxO VI.-LECHE

Los iones cOpricos, resultantel de la mlnet'llizacl6n de 1, muestrl con mezcla Bulfo-nítrf-'ca, reaccionen con yodW'O ,potasico, produciendo Yoduro cuproso y yodo. Esto último 51valora ,con tiosulfato s6dico.

Aplicable a productos técniCOl, formulados Vmnclas con dhiocarbamato.

14.2. -M8t~ri(J1 Y tlp6rato&

14.2.1.-.Material de vidrio de uso corriente en ellat:9ratorio.

14.2.2.- Place calefactora.

19.-SUSTANCIAS PROTEICAS PRODUCTORAS

19.t.-Principio

Determinaci6n de las sustandas protéicas redUctoras d~ la leche, mediante reacci6n éonferricianuro potásico y posterior valoraci6n coSorimétrica. Este método es aplicable a la de.tecci6n de leche en polvo reconstituIda e~ leche cruda o pasterizada. .'

-19.2. -Material y aparatos

14.3.-ResctiV(j$,

siendo:

V = volumen, en mi, de la solución de...&iosulfato.N = Normalidad exacta de la sotuclOn"de tiOlulfato.P • 1*0, en ", de 11 r;nUeitra.

p = pes~, en g. de la muestra de cobre electrolítico VV = voh.. men gastado, en mI, de tl0sulfato s6d;co~

14.3.10.-Urea.

14.3:11. - Yoduro potáSICO, libre de yodato, disolklci6n 4?0 gIl.

14.3.1.-Acido acético glacial.

14,~.2.-Acido nl1rico, densidad 1,42.

14.3.3.-~cidci sutt'úrjco, densidad '~84.

14,3.4:-Engrudo de almidón. Triturar 2 g de armld6n con unos 10 mI de agua fria, has·ti formar una pasta homogénea, que se a"adiré con agitación constante, a suficiente agua

. hirviendo para alcanzar 200 mi, continuar la ebullición dl;lrante unos minutos más, enfriar yfiltrar si fuese necesario.

14.3.5.-Fluoruro s6dico1 disotución saturada, aproximadamente 48 gil en frasco. dipolietileno:

14.3.6.-Pepel indicador de pH,

14.3.7.-Piedra p6mez (gránulosl.

14.3.8.-Tiocianato potisico, disoluci6n 400 gil.

14.3.9.-Tiosulfsto s6dico 0,1N, disolución exactamente valoreda. Pesar alrededor de25 g de tíosulfato s6lido cristalizado (S10,Ns1. 5H10l. disolver en una pequeRa eantidad-de8gua frla recién hervida. Diluir. a un litro y almacenar en frasco. de vidrio. Dejar envejecerdurante unos 15 dia. y sifonar o pasar a través de placa filtrante. GuardEK' en frascos de vI­drio de color topacio. La normalidad exacta de la disoluci6n debetá determinarse pasandocon exactitud a la décima de mg, aproximadamente O, 15 g de cobre electrolítico de méximapweza y siguiendo el procedimiento que se indica en 14.4. L.os cálculos se harán teniendopresente la siguiente fórmula:

19.2.1.-Espectrofot6metro que permite. lecturas de 610 nm con cubetas de 1 cm.

19.2.2.-Centrifuga 1000·1500 r.p.m.

19.2.3.-Tubos de centrffugll gradúados 8 50 mi.

19.2.4.-Baf'io de agua de temperett.lra regulable hasta 8Q°C.

19.3.-Reactivo$

19.4.2. - Determinaci6n.

Mantener las muestras apro.ximadamente a 3·C. lea muestras congeladas o conserva..das son inadecuadas para la determinación. Pipetear 15 mi de tamues.tra previamente ho­mogeneizada en un tubo de centrífuga graduado de 50 mI, que contenga 15 mI de agua.Añadir 3 mi de la solución de ácido acético al 5%, agitar bien con una varilla de vidrio Vcentrifugar durante 5 minutos. Decantar el tíquido sobrenadante. lUna pequeP'ia parte delprecipitado puet!e quedar flotando en la parte superior del tubo después de centrífuga; s.i lamayor parte del precipitado queda en el fondo del tubo, se puede despreciar. Sin embargolsi la muestra contiene excesiva nata, el precipitado flotará y no podrá separarse el scbrenS4

dante. Desechar la determinaci6n y volver a mezclar la muestra completamente. Lavar elprecipi(sdo dos veces con porciones de 15 mi de agua, mezclando cada vez el precipitadocon una varilla de vidrio, centrifugar 15 minutos y decantar.

Al precipitado y a un tubo de centrífuga limpio Que se llevaré paralelamente como blan­co, añadir 3 mI de soluci6n de urea V entonces diluir 816 mi con agua. Agitar, aP'iadir 5 mide la soluci6n tampón y 5 mI de la soluci6n de ferrlcianuro potMico al 1%, y agitar de nUe~

va. Colocar en I;ln bai'lo de agua a 7O·C, exactamente~ minutos y enfriar en hielo.

Una vez fria: al"\adlr 5 mI de la soluciOn de"cido trlcloroadtico al 10%, agitar y filtrara través de un pap81 Whatman n.· 40 de 11 cm o sImilar. Usar los primeros 5 mi del fil~

trado para lavar las plltedes y el fondo de! recipiente, desechandolos. Verter el resto de lasoluci6n ·sobre el filtro y dejar que filtre completamente; filtrar de nuevo si el filtrlldo esturbio.

Introducir 5 mJ de agua In un -tubo de ensayo, al'ladlr 5 ml dél filtredo claro. Adicionar1 mi de-la soluci6n de FeCI) al 0;1 % pIIra que se desarrolle el color, agitar y dejar en reposoexactamente 10 minutos. Ajustar el 100% de transmitancia a 610 nm con el blanco yefec.tUllr la lactura. Con lJlS ~ries de muestras, al'\adir 'la soluci6n de FeCl, a intervalos conv"nientnpara permitir las Iectural' d"puél del periodo de 10 minutos.

19.4.1.-Preparaci6n de la curva de referencia.

Pipetear O; 0,5; 1,0; 1.5; 2.0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0 mI de la soluci6n de ferrocianuro l'ot6sico10,05 mg/mi) en tubos c!e ensayo. Af'ladir agua hasta un volumen total de 5 m!. A todos 101tubos se les añade 5 mI de la «s0luci6n blanco. prepantda como se-describe acontinuaci6n:

Diluir 3 mi de la solución de urea a 15 mI con -agua en un tubo de centrífuga, aRadir 5 mide la soluci6n tampón, 5 mi de la solución de ferriclanuro y 5 mi de la soluci6n de tricloroa~.

cl!\ico. Mezclar'bien con una varilla de vidrio (La «solución blanco» no necesita ser calenta..da, ni filtrada pata la CUI'\/a de referencia. Sin embargo, cuando analizan las muestra~, elblanco se calienta y se filtra igual que en las condiciones del ensayol.

A intervalos- convenientes añadir 1 mI de la solución de FeCI) al 0,1%, para desarrollar el.color, ag!tar y dejar en reposo exactamente durante 10 minutos. Ajustar el 100% dtl t~ans ..mltancia con la solución control (0.0 mI de disoluci6n K.Fe {CNI,) s 610 nm. leer a conti..nuación en transmitancia las distintas preparacionll8 de las soluciones patrones y represen~

tar los valores obtenidos frente a concentraciones en mg de ferrocianuro potásico en papelsemiiogaritmico.

Preparar la curva de referencia con cada serie de anár,sis.

19.4. -Proc~dimiento

19.3.1.-S01uci6n de Acido acético &15% diluir 50 mI de ácido acético glacial con agu.destilada a 1 litro.

19.3.2.-Soluci6n saturada de urea en agua destilada.

19.3.3.-Solución tampón. Disolver 2 9 de NaOH en agua y diluIr I 2SO mT. Disolver10,2 g de ftalato Icido de potasio en agua y diluir a 250 mI. Mezclar 159 rrn de la soluciónde NaOK con 200 mt de la soluci6n ftalato, diluirlo hasta 800" mi Yajustar la soluci6n final.un pH 5,6 por adici6n de las soluciones de NaOH o ftalato.

19.3.4.-Soluci6n de ferricianuro pottsico el 1%. Disolver 101lg de fenic1anuro poUsicoen agua destilada lJ diluir 8 1 litfO. Desechar la sotuci6n si presenta color verde o contieneprecipitado 82\.11. Esta soluci6n debe utilizarse recten preparada.

19.3.5.-Soluci6n de 'cido tricloroacitico 1110". DIsolVer 100 g de 6cido tricloroac6tJ..ce en egua destilada y d1luir 8 1 litro.

19.3.6.-SoIucI6n de Fe CI, • 6 H,O 01 0,1%. DisoIYIlr 0,1 g de Fe CI,.6H,O en eguadestilada y diluir a 100 mI. Esta solución-debe utHizarse red6n preparada.

1UX-Soluc!6n de ' .....cI.nulO potAslco 0,06 rng/ml. Peeer 0,1147 g de K.FOCN,.3HzO y diluir a 1 litro de egue. Diluir 50 ml de esta IOlucl6n' I 100 mi en matraces aforadoLCada mi contiene 0.05 mg de ferrocianuro anhidro. Debido I que este reactivo .. oxidaflcilmente con el aire ss debe utilizar inmediltllmente después de 'u preparaci6n.

6.356. V. N

P

15.7306. P

V

% de cobre (P/P) •

siendo:

N=

14.5.-Cálculos

14.4. - Procedimiento

Pasar con precisi6n de.la décima de miligramo una muestra que contenga aproximada..mente C,15 9 de cobre metal e introducirla en un metraz erlenmey~.r de 250 mI.

Adicionar, cen probeta, 10 ml de ácido nitrico y 10 mi de ácido sulfÚ1icó y una peqúeñacantidad de gránulos de piedr!! p6mez. 'Calentar a eb~lIici6n el erlenmeyer sobre placa cale­factora, hasta la desape-rici6n de los gases dccolor pardo y el desprendimiento de vaporesblancos detlsos. La SOIL'ci6n resultante deberá ser de color verde-azulado con sedimentoblanco.

$i fu~se necesario repetir la adición de ácido-nitrico, ar'ladir5 mI y cont1nuar la calefac~ción.

Retirar el erlenmeyer deJa placa ealefactora y dejarlo enfriar a temperatura ambiente.

Adicionar cuidadosamente.poco a pOCO 50 mi de agua destilada y calentar a ebulliciónCobre la placa calefactora durante diez minutos, agregar 0,5 g de urea, prolongando la ebu~Ilici6n cinco minutos. •

Retirar el erlenmeyer de 1", placa calefactora y dejarlo enfriar a temperatura ambiente.

Af\adi:, con pipeta, amoniaco agitando la disoluci6n constantemente hasta que se foimaprecitipitado, prosiguiendo.la adicí6h de amoniaco gota 8 gota hasta que el precipitado sedisuelva y la disoluci6n adquiera un éolor azul oscuro. Dejar enfriar 11 temperatura ambiente.Adicionar con pipeta ácido aclltico hasta· Que la soluci6n tome color azulo' azuf verdoso ytenga carácter ácido el papel indicador. Entonces afíadir con pipeta 2 mi de ácido acético.Dejar enfriar a temperatura an1bienfe• ./

Adicionar con pipeta 5 mi de fluoruro s6dico y 10 mI de yoduro potásido. Tapar el ma~traz er1enmeyer con su tap6n previamente humedecido con agua y agitar 'suavel'flente parafavorecer la mezcla.

. Valorar con tiosulfato sódico hasta Que la soluci6n adquiera un color 'amarmo pálido,ef'ladir' con pipeta 2 mi de engrudo de almidón y 5 mi de tiocianato potésico. Agitar suave4mente y continuar la valoración hasta la desaparici6n del color azul.

2401~ 1981 8.0. del E.-Niim, 246

19.5.-Clllculo

A partir de fa curva de referencia, determinar la cantidad de sustancias reductoras cc.momg K4fe (eN'. por 100 mi de leche, multiplicando el velor.obtenldo de la CUNa por 4«;).

19.e.-Obs"",.clonu

Los anAlisis deben terminarse el mÚlmO dta QUe se comiencen. Es importante que lasmuestras no permanezcan demasiado. tiemPO después de enfriamiento o después de ta til·melÓn. Durante la determinación el laboratorio d.ebe estar libre de vapores oxidantes o re­ductores (H¡S, Cf~. NH03, etc.l.

19.7.-Refe~nciu

t.-,Offici.1 M.thodt 01 ArnlIV'is 011he AOAC•• Ed. 1975. N.' 16.047-16.050.

ANeXO VII.-PIENSOS

13.-NITIIOGENO AMONIACAL

13.t.-l'ñnclpb

13,4.-Procedi",*"tO

Pesar con precl~n dtjt mg arrededor de 4 g de la muestra 8 analizar, previamente ho"mo­geneizada y molida, en partículas no superior. a t ,mm de dittmetro. Introducir mediante el·embudo 13.2.3. la muestra en el matraz 13.2.1.1. Af'ladir 150 mi de agu8 destila~. arr...trando con ella las partíClJlas de muestra que se hubieren adherido 8 lBS paredes del embu..do. Ai\adir 4 gotal\ de la solución 13..3.7. V 3 goras dele solución 13.3.2. Aflad;r a cada unode los kitasatoa 13.2.1.7. y al ertenmeyer 13.2.1.9., 10 mi de la lolucl6n de ácido bórica13.3.6. con 3-4.gotas~ lndicador 13.3.9. Coloclt en el otro de los tres kitautol 13.2.1.7.

.~ sulfúrico diluido para. absorber el amoniaco del aire, hasta asegurar un de;rre h~liIco.

Monter el aparato de destilación, coneCténdolo a Y!lcío abriendo la Ila'" unida-al kitasatodonde se adicione el écido sulfúrico diluido. procurando una succión suave, Pero suficientepera obtener un barboteo del tfquido obtenido en el matraz 13.2.1.1. y calentar en barlo deagua. Seguidamente arladir sobre la mUE:cstra contenida el) el matraz 13.2.1. t. 10 g de13.3.1. en 100 mi de agua hasta que el indiéador 13.3.9. vire de color, en caso de no viraraliadir mb cantidad hasta su viraje. •

Es imprescindible evitar que durante las adiciones de .6xido de magnesio el embudo13.2.1.2. -quede exento de lIquid.o para evitar la pérdida de amoniaco. .

El proceso de calentamiento en baPlo de agua y al vacío deben efectuarse de tal forma.Que la temperatura de destilaci6n esté' comprendida entre 6O-·70-C, 'sin que la. temperatu­ra de! bat'lo alcance los go-C.

Destilar durante 30 minutos a parti{ de Que comience la destilaci6n. Transcurrido estetiempo, suprimir el vacic;J 'f el calor, desmontar 'os kit(lsatos 13.2.1.7., lavar ef refrigerantecon agua destilada sobre el matraz 13.2.1.9., tran~a.:i8r lo, liQuidos de los kitasatos al ma·traz anteriOJ y los lavados de los mismos valorando a contir;u!lci6n con la sóluciOn de ácidoclorhldrico 13.3,3. Realizar· un &nSllYO en bta~co operando ~e la misma forma.

p

13.5.-C~/culos

13.6.-Referencias

t

e

f.-Una Norrt:'a Española ~5/n lproy~tol.

% n\trÓQ. amoniaoal 7

liendo:

1,4 = Factor de ca!~!Jlo.A B volumen. en ml, de éddo clorh~ldrico O. \ N em'l!~os en la valoración d~ la n"llestrs.B = volumen, en mI. de !cido clorhidrico 0, lN e~c1F.~.jcSen (';lJ-ensayo en blanco.

F "" Factor de la sollolci6n qe ácido c10rhidriCQ O.1N.N ::: Normalidad ~e la soluci6n de ácido clorhidric.(l O, iN.P ::E peso, en g, de la muestra.

13.2.-M.tariafr'paI''''U.2.t.-Ap.rIlO de d_i6n 10rmado por:

13.2.1.1.-MIlrU de 1m bocal, de un litro de capacKlod y boca _'lad•.

t3.2.1.2.-Embudo con KM de PISO Yiunt. esmeril.d••

13.2.1.3.-AI.fg8dll'l con tres esmenladM,

13.2.1.4.-Tonn6metro do mercurio graduado do O• 2OO'C, con _erilado.13.2.1.5.-Rolrigerente.

13;2.1.8.-Gul. pare capu.... con ......rilado.

13';1.7.-T... m....c..~h_do 500 mi de capacidad.

13.2.1.8.-Pleza con dos esml!'ilados,provishl de oliva lattrtl para entrada de S.....

S3.2.1.9.-&lenmeyerdo 500 mI do ~pocidecl.

13.U.l0.-Pi con oliva .codado YesmerUado.

'32.2.~Bu' d. 5O.ml, greduadl en décimae.

n.U.-Embudo de v6st1go largo.

S3.2.4.-V.... do precipiladol dolEO mi do copacidad•

.1a·2.5.-Bello de agu. termostltJzado.

13.z.e.-Bombado v.elo O almiJar.

Desplazamiento del nitr6geno amontacal en medio alcalino, mtdi{lntl dtltifación al vacioV1ICOglco en dlooluei6n 6clda. .

APllcablo o herinas de pescado Ycarne.

13.3.-II..etivo.

S3.!.t.-Oxido.do magneeio.

~U.2.-ArItieepumante dpo aiI¡cpna.S3.U.-Acldo cforhldrico.O.lN.

U.3.4,-Solucl6n de ezul de _0.10.24% on ollnol.~3.3.5.SQlucI6n de rojo de metilo al 0,02% In etanol.

tU.e.-Soluclón do 6cldo bórico 014%.

tU.7.-Soluclón de fenolftalelna 11 O,Sl6 en ".nol.

1U.8.-Soluclón do 6cldo IUffú,;co 1150% vlv.

13.~.i.3•••-rndicador: MlZclar • p.n.. laUlles. v/v la ..luciÓ/] 13.3.4. eón la oolu~n .

.L

B. O. del K-Ni~m. 246 14 oetuore l!1BI 24013

PIEZA -A-

-t~_~I3.00""'--_--.t-

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PIEZA-O-

2.80

PIEZA-G-

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.1.

24014 R ocfu1jre 19l1T R. O. Bel E.-NuDi. 248

14.-CARBONATO

14.3.I.-AcIdo clorhldrlco, d • 1,10.

14.3.2.-Cerbonato de CIIoIo.

14.3.3.-Solucl6n de leido ",1f1lrlco O, lN oopl1»dmado, CÓIoreede cen roJo de nletIIo.

•14.2.-1,10_y_106

14.2.1.-Apareto de S__Olotrlch, oeg,ln flGun 14.1.

14.1.-I'lfn"""Oeeeolilpoolcl6n do lo corbOñlloo medIonte la _ dellc1do cIorhfdrice y ce.",.....

clón riel volumen do enhfdrido earbónlco.des(lrendIdo _ • una eantidld _ decarbonato c6k:lce modIdo en ialmiImaI_.

14.4.-__

S~On la__ en earbonllce do Ia__ O.S ctcuondo l. rIqu.....comprendida entro e15Ollo y 1lmf> exprIIIdo en Clrboneto_.

I 9 cuendo le r1qUIZl 111' comprendIde entrI ~ 10% yeA""" exprIIIdo en __-.1 9 cuendo le rIqUIZI .... compr"- entrI"1~ y""" "'llreeedó en __

c6lcioo.

2 9 o 3 9 cuondo 11 rlqulZl 111 inferior " 10% -..edc en CIIboneto c6k:lce.Une \/IZ pesode 11 centJdeC(ld6nell de _ • _Introducirlo en el frasco 141 del

IlparllO do S~DIotrIch, el cuol _r6 proyIeto do.un peque/lo tubo do rnáteriol frrom.piblo conteniendo 10 mi de 11 oclud6n.I4.3.1. Conecter. contInUIC~n'e1lreecocon "IpIrIlO. Girar le lIeW (5) ......... ~ lormI que " tubo III comunlquo oon el exterior.

Por medio del tubo m6YII12l. quo .... 1Ieno de'6cIdo _ce 001_114.3.3.1 y unf.do el lObo graduedo Ill, ...., el nivel del liquido • le 8ioduocl6n de cero. Girar le IIIvIlSIdo modo que hege.comunlcor loe tubol111 y'l2l y comprobe{ el nivel. cero. •

--del frasco (41, de/er __"'"-_ el 6cIdo clorhfdrIco !l4.U.'oobrllll mu...... IgÜeIar le preelón balendo el tubo l2l. AgItor " frasco (41 hall que toN·.,... C!O"'I'Ieto el deeprendJmlento del gil CIrb6n/co.

R_le preoI6n.reduclllndo el liquido "mismo _ en loe tubol fll Y (21. H_11 llIcturI. paoedoe. UIlOI minutos, hall que " volumen _ ptImI":"Zea _nte.

.-en !lo rnIo,mee pondIclonee \In lIlIIl'<I~ con o.s gredoo do CIrbonetodo CIIcIo 114.3.2.1.

tmi~-----;:;-~------

'.12

-kJ-PIEZAS-Ly M-

P1EZA-H-14.B.- C4'coIo

!ti COlCo • _-:V::,",,-,:IOO,:,-_T~ 2P

"'do:

v • volumen, en mi. doCO, deel>tllldldo por Iel11Ulllre.T • volUmen, en mi, de ca, deoprend/do por o.s ...._ do éO,Co1l4.3.2.I.P •. pelO. In grBlTIOI, di la mueItt••

lU.-~

14.e.I.-Cuendo le-'1_.. ouperIor • 2 gre_lnlrodue~ """llImente 15 mido egue _ en el frasco 141 Ymezclllr en'" do oomenur "on6lieit. Emplee, el _volumen do egue pare ela_ oo.",.reI!vo.

14.8.2.-81 H utiHUfun aparato de un voiumen dJferente al de Scheibtw Dletrk:h, ti".CIArio adaptar JI Clntided de mulltrl tomada de la ebullición Yla tultancia • comparIt,... como, el.c61cu1o de IIIU_.14.7.-_cIe

1.-JournaI 0IlIcleI deo cemm..-.. Europ6ennee. NOm. 116/18 do lecha de 12-7·1971.

B. O. elel E.-Num. 248 14 ocfu'lire 198f 24015

15.3.1.~Acetonitri1o.

15.2.16.-llJyIoar di CfOlllIlOIMca con 20 ......

15.2.17.-~dI-.p.....

15.2.18.-_dI_ reguiabllantre 2O-2IlO"C ± I·C.

tl.2.1•• -DIIICU'C.. di \Iktrio Y M'IWiDI cIIIecedor.. con liNea gel como agente_.15.2.20._Mln~ da I Y8 mI-.bIertoo con hoJa da llumlnlo, Up6n rooca y obtura­

oI6a do lofl6n.

15.2.21.-Tubol do _ color ...... da 7 mlcopoddod 6tI1, tapón rooca y obtura<:lóndI_.

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15.2.28.-p.-.z_dI_..., c6mInI di~ Impufao< ~er",inbi.bl.

15.2.27.-C6merI do pul\lllrizleó6n.

15.2.28.-Urnpera u_ con luz W de 1ong1tud de onda IIrga 366 nm y luz Wde longitud de ondt dM18 254 M1. Le L6mparII debe ten.. un fItro azul-violeta tipo UG-6 deSCHOTT GermIny o oquiY._ •_ del cU'l _ 11 luz W do 366 y 254 nm..... m­tro ozuI·_ tlono un pIlO do _ de 2OQ-4OO MI Yun m6x1rno de 330 MI. La 16_debe tener una intensided de luz • 366 rm di forme que puede verse claramente una meo·che de A_ B, do 0.00Q4 flII po< poq>II_cIa azul a la luz W de 366 ~m obien de '0.0002 flII por ftu-.;, amiriII. 11 luz W do 3llll nm despu6e de h.ber pulv..rizado CO(' aoIuci6n ecuoIÍ de kido .utfúrico al 25".. todo eHo sobre une crom.toplael__ doI __con el eIuyante adeculdo Y_11 pIIclIl UfIlI distancia do lO cmde 11 1imperI;

15.2.29.-FiItro__pora p'Olocd6n de 101 ojoa .. 11 oboervIcl6n de 11. ero­matopIacu •.11 luz U\I. tipo CG-4 di Schott Gerlllll1Yo aqulwlanto que deje PO'" 1610 11'luz de 460 nm.

15.2.30.-EopectroIot6mot de doble.haz con rango do 180-IlOO MI.

15.2.31. - Agitallor pora tubol.

15.2.32.-MIaopIpetao de 2 Y2!iO JA.15.2.33. -Ruorodtnsft6metro.

I503.2.-SoIuclón llCUOIlI de Cloruro po~co al.'" IpM.15.3.3.--....0.

l503.4.-Acldo _co IN.

1503.5. ~C1oroformo.

lU.6.-Clorofonno-AoetonIl178 + 241.f5.3.7-.-Ctorofom1o-EtOfétllco·__tl70 + 30 + 101.

1U.8.-T.........ClorofllfTnO-AcetONlI3O + 150 + ;lO1.

15.3.8._Toluono·C1oroformo·_·"':_90'" 130 + 150 + 20 +'0.51.

IU..l0..-CIoroformo·AcetonÚroponol·211116 + 30 + 5l.

15.3.11.-Banceno-Clorofonno·AtIlOnI (90 + 80 + 30).

15.3.12.-T"uono·Acetalo do Etilo·Ac. f6rmico 90% (100 + 90 '" 101.

1S.3.13.-Tolueno-Acetato de Etao'Clorof~'Ac.fórmico 90% (70" 50 + 50 + 20);

f5.3.1•. '-Bancono-MelInoI-AcIdo ae6tico (180 + lO + 101. lMezcler Metanol-Acido_ico (10 +. 101 con Bencéno ..II~I;80 + 10 + lO).

15.3.15.-Clorol0rm0·_ (180 + 2l11;

15.3.16.-CIorofonnq·...ceton. (186 + 141.

. 15.3.17.-S_ de Ac. eulfúrico 9Il%-Aguf _11 + 3). Enfriar ontes de su uso.

15.3.18.-SoIucó6n dejcido trjfIuorollc6tico 99%·Bencono o Cloroformo (1 + fl.

16.3.19. -Eter edIioo anhidro.

1&.3.20.-Patr6n de AfletolCina SI' que debe estar guardldo en frasco de vidrio. colorImbIr bien cerrado y 14°C. Cuando V8"¡II e empIeerse debe estar • t.-nperetura embiente.

'5 3.21.-Solucl6n de reserva patrón de aftatoxina Bien cloroformo. Preparar una solu·ci6n.que contenga 10 loG de Aflatoxina BJlml de Cloroformo. Medir el espectro deabsor"'ción entre 300-370 nm V medir la extinción tAla 364 nm. Calcular le concentraci6n de Afia·toXina 8 , en 1o'91m1 según le f6nnul8 siguiente:.

. 312XAx1000ug de Aflatoxima EI,/m! de solución •.

. 2llBOO

Si .. coIocen 1ft une CrornatopteOl 5 ,.. de la 80Iución anterior ,de patrón de Aflatoxina8" se desarrolla 1. crornat~con unO de 101 solventa lInteriof. 15.3.6•• 15.3.16. Vle

, 8XIrTlÑ'\a una vez teCI., .1I1uz lJV de._ nm: da YefallOIamente. una manche y no seriperceptible ningune f1uor.scencil en el lugar donde inicialmente io ha coIocIdo el volumende 5 Ji correepondiente ale lo'uciOn 'patrón de Afletoxina 8 1,

16:3.22. -5o'uci6n de. trD~ pBt,6n de lfl8toxine'B, ., Cloroformo. Preparar I plrtirde .. tOIuci6n 15.3.21., una 80Iución di trabeio quI contenga 5 JoIIjI de Af!atoxina Bl/m deCloroformo'. Conservat como en 16.3.20., con un mlnimo de superficie de evaporaci6n.

15.3.23.-Solucl6n patróri d. Aflatoxina 8 1 en CIorofonno. para ensayo del limite dedetección. Preparer a partir de la solución 15.3.20., una soluc:ión que c;ontenga 0,1 ,..g deAflatoxina SI/mi de dorofo·rmo. Conaervar como en 15.3.22.

·---13 .~

0J.30___J

oN

15.2. ;...Matetiaty ';/titatos

!Este método permite detectar un mlnlmo de5 JlQ/kg de .flatoKina 81"

'IS.-AFLATOXINA B,

15.2.l-Balarlza y m;crobalellZa' -:Dn precisi¿r. de 1 V O,0Q01 Olg respectivlmen~e.

16.2.2. - Molino.

'5.2.3.-Matracos erIenmeyer color ambar, de 500 mi, cuello esmerilado 29/32 y tep6nde v~dr¡o color .rribar.

15.2,.4.-Agitedor de vai\#6n o de muftecl.

16.2.5. - Papel de filtro 'sin cenizas de 9 cm de diimetro, filtración répidl.

15.2.6. -Embudco do r""ad6n de apro_" 50 nwn de dl'melTO interior y éüellocono;

15.2.7. -:- Pipeta de 50 mI.

1!5.2.8.-Perl de,goma pn tuedón adaptable 111 pipetaanterier 15.2.7.

16.2.9.-Embudo de ~tación fOtllll de pera color ambar, de 150 mi, cuefto esmeri·licio 14l23, con tapón de pl6stko If\ItICIbIe por liquidas org6niCOl y lIeYe de t8ft6n.

15.2.10.-Jering8 hlpod6rmlcl do 50 mi con Iguje formode po< un tubo do lell6n do8-9 cm de largo y 2 mm di&netro interior o bien tlJ~ de vidrio estrecho de 13-14 cm de ler·go Y 5-4 mm de CliArnetro Interior. estl tubo tendrt un ertrechIIm.iento en uno de MIl ex·tremos de 2-3 cm de largo y 2 mm ditmetro Inteti,or • iri conectado a una trompa de eguI.pare vecío pOr medio de tubo de' teflón.

16.2.11.-Tubo de vidrio forme p8re co$or ambar, resistente al Vicio (tig. 1).

15.2.12.-""-.

15.2.13.-Ba/lodo ogue __ ontnl20-1OO"C ± I·C.

15.214. - Bomba de vado de membrana. con v6lvuJes y membrana de tefl6n. La bomballevar. un lneaidor incorporado que permitir' regullr una~ Intrt 0-0,95 kQ!cm.2..

15.2.15.-CImpono_"dee-

15.I .-Frlnc/pklElCtr&Cción de la mlcotoxlnl con ls mezcla lleetonitn1o sotucl6n leuCJS8 CIK 4 " l' + 11,

flltración' y ¡)urifiCélo;ió'l de un. parte Illtcuota con distir.to!l 'Solventes V cambios de pH. EVI­poracitr: ~~! exnact" I~mpio y redisolución en c1orofofl'D0' Sep,¡;~ación de la tex;na por ero­matO{j's:;cen ca::;8 fi!la y confirmación deJa misma mediante reacción con f,cido sulfúricoy .citlo·trifllJor:)oc~';:1) y posterior cuantificeei6n de I1 micotoxiJl8 por densitometria Q por11 métoóu dulllmlte c!~ detección. .

24016 n oetl,ll)re CMI 11: o. aeI E.-Niim. 248

1S,3.24.-Cromatoplacas tipo Mac::her..,..·Nagel Sil G-26HA con b.. de vidrio 'fII prepa-oradas de 20 )( 20 'Cm y 0,25 mm de eIpeIOr de elpI folmada por Iiica gef.con YIIO ISO..c.)y una peque~a cantidad de material orgénico ponmero o cromatopfaca equMtlente.

Con un divisor de cromatoplacas16.2.1S., dividir Jai placa, en 20 fra~ de i cm de ...cha cada una. Eliminar &1 sillea gel sobrlote Vactivarles (coloeedas en pOIk:l6n wrtiCII' ..lentándofas a110·C por espacio de 30 minutos. Guardarfas en desecador 16.2.19., haI1:...momento de su' uso en que deben ..tar I ttmperaturI .mbient••

15.3.25.-Gas Nitrógeno puro.

15.4.-Procedim;'nto

15.4.1.-Pesar ea 9 d. muestra molida de for:m- que pase I travM de, un tamiz á0.8 mm de luz de matlt y homogentiz.r y U8\ler .. erftnmrvtr 16,2.3. AnIdir 180 mi de lee­tonitrilo y 20 mI de solución acuosa de cfoNro pot6lko el 4.", tapir Yo agitar vIgorOllmlntl30 minutos en ¡gitador 1&.2.4. Filtrar el extracto ItraWI de PIPII de filtro 115.2.6. y rteogII'60 mi de !Huado (cubrir OJ pope! de filro con \/Idrlo de rtIo/ durante lo ff!trKlónl. TOfI1II' conp;pet. 16.2.7., 60 mi de lIltr.do .ntorior y U...rIoa al embudo de decantación 16;l.9•. AIIacIIr60 mi de I....t.no, 1.por y agitar 16-:¡O _n<loo, dajar_r capas y oIIm1nar lo _superior de Isooetano con jerIngI Otubo estrecho 16.2.10 fc~ndo no upirar 11 CIPI in,..rior de Acetonltrilo. aunque qu~ una pequefta cantklacl'de IaooctIno). Repetir la opwa.ción .nterior 3 veces con 60 mI.de I8ooctIno cad8 vez ~ eIimlnIr e111ooctano., cadllIvadocomo anterionnente. A"adir I 11 capa de Acetonltrllo 12,.5 mi de 'gua deltilada y agitar.Anadir 25 mJ de Cloroformo, tapar y agitar 15--20 segundos. Dejar aeparar C8P11, FDtrar 11c.pi inft,lor do Cloroformo-Acetonltrilo.• _ de pope! de fil1ro 16.2.6.. U.,. haat. alborde de Sulfato I6dlco anhidro. Recoger el filtrado en ef tubo de fonna di pel'1l 16.2.11.Aftadlr a la capa acuosa que queda en el embudo de decentacl6n 15.2.'., 1 mi de écldo.c:lorhkfrlco 1N Vagitar. Al'iadir 20 mI de Cloroformo, tepar y agitar 16-20 segUndos, dejar ...parar cápas y flltm le capa inferior cJorof6nnica pasAndola I tr'" del 8U~ato l6dico an~'"dro anterior y reuniendo .este filtrado con el qut ya tenemos In el tubo 16.2.11. Repetir ..elCtraccJón de la capa ICUO!ll 3 veces con 10 mi de Cforoformo CIdI vez y~ cada ex­traccl6n como anteriormente reuniendo todollol flftrados en el tubo 16.2.1',

16.4.2.-Uovar a1lllbo 16.2.11... lOtov.pOr 16.2.12., y avapO.... huía unoo 2 "., conVIcio (depresl6n .0,6-0,7 kg/cm2) y I 5O-66·C. Enfriar, IaYlr 111 paredes del tubo con 3:porciones de 1 mi de Cloroformo llevando el d'quid9 a le parte e¡strecha graduada '.y contfonuar fa evaporación en el rotavapor hasta 0,1-0,2 mi con vado [depresión. 0.7-0,8 kg/crriZya Sl).-65'CJ. Ceda vez que se interrumpa ti VIcio hIy que Introduclrnitr6geno.

Enfriar y afiladlr Clorof6rmo hasta rl dMIlón 1 mi de JI parti"estrecha graduada def-tubo15.2.11. T.por y Uov.r iJ agit.do, de lobeo 16.2.31•• radllOlvfondo Yhomogone/zando la ...lución.

El voIuman final dalllltr.cto PIlO 1, cromatogrofla on cap. fin. _, de 1 mí y _moa a este extracto: Soluc16n A.

u.v.r al ootr.cto IOIucl6o A, .·mlnlvlal" 16.2.20 6 lobeo 18.2.21.

ANALlSIS CUALITATIVO

16.6.-D'88"O#o$

15.6.1.-En una IIn.a imaginaria 'itu.eIa I 4cm de l. base de l. -cromltopIacl15.3.24.,colocar con 15.2.22. y 16.2.23. (oIn dot.io.... lo Mlparfk:lo del oItIca goIl loa oigul.nteo YO­lúmenM i Intervalos de 1 cm; cea uno in URI franja y ••proxImadamente 0.5 cm de loslodoa de l. mlama: do. de 3 ji Y doI de 5 ji d4 muaotro oxtr.ctO ..lución A (no ampl....la franja de los extre",os dé la cromatopllCl).

En uno de fOI voh'Jmen.. correspondientes i 3 J.i y • S ¡l iuperponer adecuadamentecen 16.2.22., y 15.2.23., 3 ¡I do lo aoIuol6n de lrabajo petr60 do Aflatc»cin. 8, 16.3.22­(patrón intemo). En otro punto apert. colocar 3,A de lasoluci6n d. Aflato)(Ína 8115.3.~(patrón e.ldernol. Hay que cuidar de que el di6metro de las manchü un. vez~ ..deposición t01al, no sera auperiCfl' 12~2,6 mm de di6metro· por lo que con JI mlcrojeringI15.2.22., adaptada al dispensador repetitIVo 16.2.23 JI calocarAn loe volúmentl tofIIeI enfracciones o porciones de volumen y secando.cada fraccl6n o porción con afre caliente [nomás de 35-40"C) 15.2.24., antes di colOQIr Ji algulentl. Na trabajar Con luz natural ni conluz artificfal directa. -

15.5.2.-Trazer en la cromatoplaca Ccon I'pizde grafito) una Unea tranl\lersal que '*cara la altura hasta donde debe llegar ~ frente de solvente di desarrollo; dicha altura estarflcontada 8 partir de la linea Imaginarla donde se han colocado los volúmenea de mueatrlextracto solución A y los patrones. Le Ihura ter6 en genetaJ de 11 cm.

16.5.3.-E'n tas cAm'ara' de separacl6n cromatogrjffca 16.2;25. colocar~ rnI.ptO)Iima­dos de iolvente de desarrollo 16.3.8., que alcanl8lin en la cllmar. unos 1•• cm de altura,tapar y dejar en reposo 6-10 mInUto... Introducir despuls r. cromltoplaca (6stI 1tt116 •temperatura ambiente) In el Interior de la c.6mara 15.2.25., en perfecta poIici6n wrtfcll yde forma que la cara con amca gel est6 enfrente I unos 3-4 cm de la parad de la c6mara dedesarrol.lo 15.2.25. Tapar y deserrol. en climarllnsatureda hasta qua el frente de IOIvenwalcance la attura Indicada en 15.6.2. 1.1 temperatu... de trebejo en el desarrollo ... di23·24·C. No trabajar con luz nltural ni con luz artifh:lal dlrecw.

15.5.41-Sacar la cromatopJaca y tIeYar. -w:ttrlna~ gases oscura 16.2.15. De;ar ..... elaire. Fonar el secado final con unalUave con'entl dllire moderadamente C1Uente lnomAIde 35-40Q CJ 16.2.24. o con corri.nte de Nitrógeno.

16.e.-Detección

15.e.1.-CoIOf"'.Ir la cromatopfaca sobr. fond9' negro, en habitación oteura V .10 cm dedistancia de la láfnpara UV 16.2.28. .

exom!nar (cen oI1J1tro amar1llo 15.2.29.). la cri>matoptal'l.1a luz W CÍo 3ell nm. A 3511.nm 18 Aflatoxina 8 1 IpIrICl con una mlru:M8U1 briBIntI tIuotelCOntl Ylftnite di dIteooci6n de 0,0004 i'lI/manchl. -

Pulverizar lo crom.toplooa con aolucl6n d4 Acldo auIf1lrloo·Agu.o n + 3) 15.3.17•• ,t)xamtnarla de nuevo ala luz W de 368 nm. A388 nm y en 11tH conclicloNlla A1IetmcIna8 , aparece con una mancha .mll'RIo brflJentt ftworescentt y lmittI de dttec:c:tón. O..cmzpg/mandla.

CO:T\p3!ar la mancha de extracto solucl6n A prob1ema con el standard Interno de Anato­xIna BI torrespóndiente y por " mIsmo Rt, ~uortlcenclllZul propia V fluortl<:encle arnarJ-

lIa oblanlda con la ..lución de AcIdo MlifIlrloo 15.3.17. 3ell nm~1•• prococfarI 11 inicill idintlflCldl6n.

Slla crcrnatoplaca .. -... ala fu< W de 2M MI, la ...........10 azul y am.rlllo brí­IIntl .. conviérte In lzut y arneritlo muy~ V Iin ftuorelClnda con un tlmite de de­tteeión mucho mayor y no int....nte P" ell~.

16.7. -Confom>ooi6tl

15.7.1. -Confirmlf la prtMnclt de "''''toxina 8, In la mueltrl probtema. por .plicld6n• lat~ di I1 Aftatoxinl ., in Aftlto'" 8 11 por mecHo del tckto triftu0rqac6­

- tico.Tomar doo _opta... 15.3.24. i¡ __ on _ un. do _ aogún .. Indica •

~tinuad6n:

_ <loo zonaa de la cromatoplaca (zona A y zona 11. In lo zona A coro- looYOiúrnenet de mulltrl extrilCto IOIución igull como ..~ M JI ~icI IPfoblema'"probIama + patr6n ln1arno de Aflato_I, patr6n -.... deA_ 8,1. En lo zona 8-___de Igual manara Con Iaa _ mu_" qIlO Iaa • lo zona A. T_ protegiendo.zona A con placa de vidrio Yan cada una de Iaa .....- de la zona Itou_ conm1croplpeta 16.2.32., 2 ¡I de IOIucl6n de Ac:ido _ 15.3.18., _ pr •Dojar __ &' _ Iprot_ lo cromatoplaca do la Iuzl. S_ la cromat?lli_(protegertl de IItlud con corriente de aire callentt: (no mAl de 35-4Q-C) du...me 10 mlnutQIIo bien con corrienttl de Nitrógeno: dUflf'lti 20 mInutoI. Proceder al desarrOIto de las doaCrofnatoplacas tal como se l"diC• ., 15.5.3., '1 con los soIvtnt.. de deserroho 15.3.8.• V15.3.7.• _ivamante.

Proceder dtspu6a como en 15.5.4.'

_ Examinar (con" filtro amwiHo 15.2.29.11. cromatoplaca a IlJ luz U.V de 366 nm previo"haber cofocado la cromatoplaca sobre fondo negro, en habitaci6rl oscura y • 10 cm de d'"tinelo do lo Itmparo UV 16.2.28.

Comparw la zona A con la ZOIll B Y IoI'problemu YltIndIrdI ¡memo vexterno corrll­pendientes. En la tonII A la AfIItoxina 8 1 estart en 11 forma Y el Rf hebftual (mertcha.confluorescencilazul brillante). En la zonl B la AftltolClns B, que ahorleatarl trasnformada enSal aparee_' con mancha. de fluoracencia azul brillante pero muy cerca de l. "nea ima:s'­naria óonde le han coIocedo inkiaTmentlloe votú~. el Rf qua teindrt .hora 11 AfIt'~n8

8a. Mr6de apt'oximadlment8 t/4de1 RfI eoml? aparece 11 AfIatoxfM 8 1 en 11 zona A.

Proceder despu61 al putveriz.to d'- 1.. crornatoPIacM con 51 lOIución aeDO" de AcldoIUlfUñco 15.3.17., V volver. comp8r1r obIeMIncIo dtp nuevo a la luz U\I' ~ 388 nm. La.rtatoximlt 81 en la zona A y MI derivado AfIatoxina Bz In " 10M B sparecer6n con unlmenc:hI de ftuorescencla ImlriI10 briHanW.

Si 11 rnlncha toepeehota In la muestt'l proI:lfernI que hI cump"do 1M condicÑon... rnen­cionadll en 16.6 cumple ~bi6n Iat condicÍOl'*: efe 15.1. que .. Afllto.ll;ina 8,..

ANALISIS CUANTITATIVO

16.8.-Mdrodo Hlllmir....ro<_15.8.l.-Tomar con mlcropipom 15.2.32.,:l6O ¡I del oxtrlC1O aokJol6o A y.alladfr :l6O ji

de Cloroformo. Llamararnoo. _ nuava aolucl6n: _ lOIuol6n /J.

15.8.2.-P...,..ar"_ lo aolucl6n~ de AfIatOllina 8,15.3.23.15.8.3..,.En una _1nÍOginaria oí1uada a 4 cm de la _ de una c:romatop/aCIl6.3.24.•

depositIr teniendo In cuenta lo que " ind6ca In 16.5..... de , • 10 ". de .trlCtO 1OIuci6n8. A conNnoáel6n _;w de lo miama forma de 1 • 8 ji de aoIuci6n patr6n d4 Afia­toxinl 8115.2.23., reci6n prepltllda..

16.9.4.-PrococIar al _111 como" indica on 16.6.3., y con al aolvant. de __lo qua .. haya amploado par. al an6l101a _ivo. Atondar 16.6.'.

16.8.5. -Pulverizar la cromatopiaca con la aoIuol6n __ de AcJdo auIf1lrloo 16.3.17,prococroendo como en 15.8.1., ..aminar (con al filtro amarillo 18.2.211.1 la crornatoplaca •la luz W de 388 MI. Sit...... en la zona de lo Afla10llina 1, ..... .,..... con __da ImariIII Y~ cu61 es 11 úttlml -mancha de JI AfIIIoxinI 8 t que ...... tanto In lamuootnl problema con1arninada como on al petr6n de' Afla10llina 8,~(par~ al pe.trbn 1. lJltima manchl de micotoxlna quII le Wdebe correspondw. 0,0002 ug aproximada­manlat. Efectuir intarpO/aci6l¡ en!nl doa IIOI~"*,,, al " _. la Ultima mancha de '-­Anatoldna S, que SI .... IR ,. mU_rI 'contaminedl~der' a toI milmol ':'8 de Afta..toxina 81de la última msnchI que se .... en e11t1nd1rd depositado.

L~V~loa~4Nrmultl 11'11 dO AtIa10llina I,/ka de muaatrll - -=a~~=-=I5O::"'x-:P:'-"'-

L • limita de daltcd6n on 1'11 ~ncIont•• la 6ItImo ....,.,., ....... VI on al pe.tr6n dapoaitjdo.

V- vol..... onmldela__oaoluol6nAl1m1t.• - .-an lA OOIl_I4Itt~ • lo 6ItJma _ ........ d4A1IotoJllna 8, ..Iom •• .

P-_".Ia_onl.15.8.1.-81 on la ....-__laA_1,,",,on_ loo mandtaa PÍO­

_ • _ con miclopipoto 16.2.32., :l6O ¡I del__1 Y_ %llIO ¡Ade cloroformo;~._nuova aoIud6n__c.

16.8.7.-Procadir corno .. 15.8.3•• 15.1.1S..·~con al _o aolucl6n C.

CIte"'"

PI do Afla10ldna ',/kg de mútatro -Ifliicar la f6nnulÍi 1YnUIfpIIclr al .......... porlo.15.9.9. -SI on lo m..... conlMnrnada lo Aflatoldna 8, .. VI en _Iao manchas_

ceder • tomar con mlcroplpota 15.2.32., 2!10 ¡I del _o _ C y alladlr %llIO ji •Cloroformo. IJamartmol a..'riueva solución extFaCtO IOIud6n D. . '

16.8.9.-'_, corno onl6.8.~•• 15......~ _ al__ aolucl6n D.

L

B. O. ael E.-.NUm. 246 14 odu1Jre 191ft ~4C17

1.-PR~PARACIONDE LA MU~5TRA

no.'CAPACIOJ,D TOTAL 200 cc.

2.2.-~toMI y I[1IfIto.

~.2. t .-PIIIIUiWlcilS Clpaz: plrI 50 cm'.2.2.2. -&tufl con rogulíclón do t_rlturl 1106'Co

2.2.3.-!ltsacodor.

El ... que contionlll_1I dote""i"" por do....c\6n on lItufl.

El _ no .. lpilcoble • mueetrll que p<Oducon lustln,l.. vol~" dif..enlll dllllluI IllllmptrllUlI do _lcl6n.

t.2.-PtocirdimiontO·

Abrir 01 rec1J>lentl y verier 01 contenido IObrl un plptlsati.ldo.

Tomor modilnll CUlIllO, 1lIIOI10 Ii dI._......,.,. IOble un _ustonello deunoo 50 mi Y_inerldo on 01 mioma .. hllmedld oeg(ln 01~ oficlol n.' :z.- A contInUlC1ón. prt'III deHad6n 01 .. -ro, tritu... 01 _o mlnuolmonte o por

modio di un moronilio eI6ctr1co; _ CIiéntImlertIO ....-Ivo Yu"ndo 11 cantidld ....e.-ria Plr. que .. rellk:e una 6ptirnl molienda•.

De IItI mullt,. finll~,!,"r1M dIotInlll portio... ¡lIl'IoI.n61111..Z.-HUM~DADIP6rdldl de pelO .,00'CI

Eott rn6todo lIIobloeolu condiclon.. generol.. di p,eparlci6n di II muestro: 1M dec:arteter partfcuJlr estAn indicldls en 101 mitodos corr"pondientea.

ESCAU. tIANEXO VIII.-PRODUCTOS ORGANICOS FERTILIZANTES

15.9. -Mitodo fluorode/1sitomitrictl

J.lClde Aflatoxina 9,/kg de muestrw • apIi~ la fórmull1 y multiplicar el 'Multado por 100.

15.8.10.-y así sucesivamente con 'em~ secuenda de dIIucl6n y le misma secuenciade flctor de clI1culo Que le deduce de 101 palOl8l1terfortl.

15.8.11. - Si hay dude en ti CJltlma r:nancha de ~flatoxin. Bf que .. ve correspondiente~_ vo.lumen de 1 6 2 ~; efectuar la ailuci6n correspondiente y repetir un nulYO desafrol~

pire fijar bi'ln la última mancha de Aflltoxina B1 que so ve aaegur6ndoH de que la .nUlrior\'1 no se ve. .

ANAll515 CUANTITATIVO

15.9.1.-Teniendo preMnt. que l. Afleto)(ina 8 1tteM unu elracfefÍaticas espectrofoto.""triees propias sobre placa de longitud de onda de emistón de 430 nm y longitud de ondade eKc/tación de 366 om V teniendo en cuenta que la Aflatoldna 81tiene unu característi·CII-espeétrofotom'tricae del completo ptondente de la reacción qutmica IObre placa delongltüd de onde de emisl6n de 426 nm y longitud de onda de excitación de 366 nm; laIntensidad de f1uorescenda de 1.. mancha. de aftl~!,a 81 .. medht con un fluoroclensi~

16metro y comparando la Irytensidtd de fk.¡oreecentla de 1.. manch.. del 'ldraeto con ladel patrón se buscarA la cantidad de ~fletoxin. 81 que le encuentra tri 1M manchal.corres.pondientel al extracto. Detpu6s con el correspondiente factor de dilución se calcular' 11cantided de Afl'.toxina BI presente en la mUlltrl, expresando el resulado en ¡Jg de Aflato.Xónl Sl/kg de muestre problema, .

16.10. - Ob-.ck",..

15.10.1._~1 o.,.,i';' C\lonth~;w por 01 rn6todo del \fmllI do _cl.ón 1Imb16n puodofttvarse a cabo tomando" fimtte de detecci6n de 1a Aftatoxinl 8,. por obIervael6n de 1,fluorescencia Izul de ti luz U.V. de 3EI6 J:I, tIntO peJ'l muestra contlminada et;lmo parapetr6n, ,in embargo me limite ti mis alto que selitúa In 0,0004 ug/manehA y'POI' tintoCfisminuye ~ sensibilidad.

. 15.10.2.-510n 01 pat,ón do Moto.l"" 8,15.3.23., depo._ on 011_ CUI"';totloYO por el m6todo dellimi1e de detección, ti, ven toda! 111 mancho, proceder a diruirlo enuna concentrBti6n de 0,07 ug/ml por ejemplo y repetir de nuevo con ..tI SQIuc1Ón.

~5.10.3. -No demorar tiempo en los distintos pasos anaIltiCOl Yen especil! parl 18 cuan·tlfic~d1" por el mé1.odo del limite de dete.cd6n en donde la~ cantIdad" de Aflatoxina B.~n t-~as y pu~de haber pérdidas importantes.

15.10.4,--Con ·el método descrito, Ial identificaciones y confirmaciones d. Aflatoxina 81aon buenas; sin eml::llrgo, puea. darse et CfSO de Que segón le naturaleza del producto yal .,>td~O de 9Cr,stlrvaclóll, tiP9 de cultivo y tratamientos previos como primlfa materia obien Url'n l'lelerogeneidJd c"mo ~urrt en un pienso compuesto; el analista puede encon~

trIIrM alguna VIZ con prúbl'!lml' de identificación por aparición de interferencias molestee

en la zon& thI la Aflatoxin. 8 1:, continuación .. des.:riben algUnas formas de subsanar es-te inconveniente &5por6dico: .

11 Emplear otros solventes-de desarrollo 15.3.8, .15.3.16.

2) Efectuar un doble dessrrollo en t:rmisma dirección y con el .Tli5mO sol\1ente de des­arrollo (previo secar Ie.eromatoplaca despu~s dal primef'desarrollol.

31 Efectuar un do~ dttS8rrollo en·~ fTli3m8 direC4.i6n pero con dos_solventes de_ desarr()oolo distintol (previo secar la cromalcplaca después del primer desarrollo).

4) Efectuar un primer desanono con iter etnico anhidro hásta UnI a1tur. de 12 cm...~

CII' la Ctomatoplacá y desarrollar despuó'S en te misma dirección con. uno d~ los IOI\lenteaque desplaza' adecuadamente la Aflattlxina 8 1, Esta forma 4) sólo I.

lebe hacerse en caso'muy necesarlo pUesto que cuap-las contaminaciones con Aflatoxin8·B I .on baJas p~ede

haber l.iis.-ninuclón de sensibilidad por falta de compacidad en la mancha de Aflatoxina 8 1deserrollada. Sin embargo esta forma 4) es muy út;1 cuando le analiza Manioc O'MandiocaO productos sirñilares que contienen una sustancia llamad. S~letina, esta -$ustancia ti..ne una fluorescerlci9 I%ul brillante muy Inten'" • la luz UV de 366 nm y en un desarrollonol'l'M\ la Scopo:a1lna se litú. en le zona de 1. Aflatoxina B, enmascarando la presencl.de 6ste y pudterodo prestarse a confusión. Aunque la Scopoletina no aparece como manchecon fluorescencia amlllrillo brillante ala luz tN de 366 nm después de pulverfzar la cromato·placa con ·18 so~ueión acu.osa de Acldo lulfúrico 15.3.17., y por tanto se descarta la posibl·lidad de cñu"'tdiri. con Aflatoxlna 8 1 11 apareeer la Scopoletina lJrl la lona de la Aflatoxl­na B. Irnns'l91bilita la identifieacl6n de &Sta caso de contaminación de l. muestra. 'Por tintoel pri;ner·deSilrOIIO con iter etlllco anhidro desplaza a~. SCopcMetina íignificativamente y enc.lmbio desplaza muy pocó. la Aflatoxina Bl• una vez efec:tu&do este primer desarrolw ydetpués de secar la cromatopfaca, $O ef,ectúa el dasarrollo definitivo con unO de los solven.·'les de desarrollo indicados anteriormente 15.3.6. 8 15.3.16.: la Aflatoxina 8 1 es desplazadaadecuad3t'1ente y '- Scopoletina también petO éste queda VI fuera de 11 zona correspon­dientes a la Aftatoxina' B1 después del· 6esarrollo definitivo.

Esta forma 4) es útil también cuando havproblemas de-aníli8ia en productos contenien~

do clorofila6, por ejemplo en piensos compuestos que contienen mb de un 10% de harinade alfalfa, sin embargo, el aoalista debe efectuar primero un anMisis normal tal como te in­dica en la técnica descrita y tuzgar después si es necesario emplear esta forma 41.

6) Efectuar una maver dilución de la muestra extracto solución A, llevando el volumen e2·3 mi sin embargo. ello 91 traduce en una menor sensibilidad e'l cuanto a la mínima con­centración detectable de Aflatoxina B, aumentando Jos valores de 4-6 pg /kgi-.dicados co-rno mlnimo detecta~é de esta micotoxjna. •

15.11-,-Referencias

1. Alberto Gimeno 119791. J. Asso<:. Off. Anal. Chem. 62, 579·585.

2.-Roberts . .e.A., Patterson, O,S.P.119751. J. Assoc. Off. Anal. Chem. 58,1178·1181.

3,-Alberto Gimeno (19801. J. Assoc. Off. Ar:al. Chem, .63.182·186.

4.-S:oloff, L..-Nesheim, S., Vln, l., P.odricks. J.V., Stack¡ M" Clmpb811, A. O. (19711.J. Assoc. Off. Ar.~. Chem. 54, '1'97.

2.3. -!'rocidímion ID

Inmedlallmlnlo despu6s do ebrir 01 p,oclnto. pesar cón preclsl6n d. mo ITrodedor d.»a de mUllir. en un pes8sustancias previamente tarado.

Colocar en estufa a 105°C ± 1°C huta pelO constante, ~ocurando no Tnllodudr Mue·YU muestras en la estuf~ durante la última f~se de secado.

DetMminll'.I1 pérdida de peso para expr....r .1 rllUltldo en ".

24018 14 oduore 1981 ll. O. del E.-Num. 24j1

2.4. -Exp'resi6n rh!os nsultaclot

Expresar los resultados sob.. materia seca o sobre producto total.

2.5.-Re'erenc/B~

1.-Ministerio de Agricunura. Métodos 0fici!IIeI ~ Anélisis de Fertilizantes. Madrid,1974.

2. -AFNOR, 1976. Produits organiquBl Supports et Milieux de Culture. Norma U44-171.

Calcinación direCta a S40GC.

3Ibl.-MATERIA ORGANICA TOTAllpor oxldael6n)

3{b~.1.-Princlpio

Oxidar la m&teria orgánica en condiciones bien definidas por medio de· una soluci6n C004

centrada sulfo-cr6mica, valorando e4 exceso por retorno.

Aplicable a todos los abonos que no contengan más sustancias reductoras que la propiamateria orgánica.

5.2.1. - Cépsula o crfsol.5.2.2. - Ba¡'o de arena.

5.2.3.-Varilla de vidrio de bordes redondeado'.

5.2.4. -Mufla u horno eféctri<:o.

5.2.5. -Balanza de prectsión.

5.2.6~ -Desecador.

5.3. -RiMlctivos

3fbJ.2. -Material y IIparstosAgua destilada y desionizad8'.

5.4.-Procedlmitmt'o

Pesar,con precr.i6n de 0,1 rng, 3-4 gramos de la muestra preparada según el m6todooficial n.0.1, desectW'ldo a 1(X).105°C. Enfriar en desecador y pesar sobre criaof.

Introducir en le mufla u horno manteni6ndolo durante 3-4 horas a 54Q-C. Enfriatohl$111emperatura ambiente.

A continuación lavar m reeidoo con 2 mi de agua destHada y desionizada, disgre9ardocon l. varilla de cristal. Evaporar al agua en el. bll'Io de aren; e introducir nuevamenteen la mufla. \

Esta operación te repetiré hasta conseguir cMizas blancas tras lo cual se tnfria ende':>~.::&dor y se pesa.

b -:uo necesario 'utilizar un mI de icido nltrico para facilitar la calcinación totar.

3(bl.2.1.-Estufa relgulable a 105°C.

3(b) .2.2. -8a"'0 de agua.

3(bJ.2.3.-Agit'!dor magnéticO".

3Ibl.3:-Reactivos

3Ibl.3.1.-Sorución oxidante. Pesar exactamente 15 g.de anhídrido croo,1co cristalizadoV disolverlos en un matraz con 34 cm3 <:kt"agua destilada. Al'iadir lentamente y agitando165 crrfl de SO..H2 {d .1,841. homogeneizar y guardar al abrigo de la humedad.

3(bl.3.2, -Soluci6n valorada de sulfato ferroso amónico N/5. Pesar 19,610 9 de sulfatoferroso-amónico cristalizado, colocarlos en un matraz IIforado de 250 cnr y disofwrlos con150 crrfl de SO..H2 puro. Agitar V .nr~sar a 250 c:mJ con agua dest~ada hervida V fria. Ettasolución debe estar recientemente preparada y valorada para cada serie de muestras.

3{bl.3".3.....Soludón sulfúrica de difenilamine. Disolver 0,5 g de dtf8nilamina en polvoren200 cm 3 de 8gua destilada. Af'iadir lentamente 10ó cm3 de SO..Hi (d • 1,841, homogenei~lar y guardar en frasco topacio. .

3Ibl.3.4. -Auoruro de sodio pulverizado.•

5.5.. Cálculo!

'" conizas •p-c

mx '00

3(bl.4.-Proce,¡;mientotlando:

p • peso, en gramos, de las cenizas mú el criSol.e • p8$0, en gram'os, del crisol.m • peso;!n gramos, de la muestra desecada.

13.-FOSfORO TOTAL804020 3lI10

Pesar exactamente de 100 a 500 mg de muestra perl'ectamente triturada V homogenelza.da según el contenido previsto en materia org6nica que te IOspecM tiene el producto, de .• cuerdo con la tabla siguiente:

Contenido aproxim&do en materia org'nica f"J

Introducir la muestra exactamente ptMda en un tubo de ensayo de 26 cm' ayudfndoseCOn una pipeta qUe contenga 10 cm' de IOluc16n oxidantee~ poco • poco PIUII&\Iiter una ebullición violenta. Agttar sulVemente el tubo atf preparado, colocándolo en unbli'lo ~e agua .. ebullición.

Después de minuto y medio de tn-mersr6n~ tJempo necesario para que JOI tubolllt6n •JI temperetura del baro, egiW', Ydejar en~ cinco minutos y repetir~ operacióntres veces mil.

Sacar loo lUboa do! bollo Ydafat anIria, IlIlampOflllUra ambianta duranta 3lI mtnUlOa.

Trasvasar cuantitativamente el contenido del tubo • un matraz aforado de da 260 cm1con I)'Udi de ligua. dastnade, enfriar a temperatura ambiente, enruar y homogenelzar.

Tomar con una pIpeta 50 crrí' de fa IOluclón anterior y coIocarloslfl un mitrar trten­meya, de 2!iO cm',a~_ 1&0 cm' de agua destlada, 2 ; de fIuoruro t6díco y 8 _.-~~~~~ r .'

VeJorar con fa solución de auffato fertOlO lm6nfco aghando con agitador magn6t1co. Bcolor 'Jira lentamente del m0rr6n al azul violeta, • punto de equivalencia queda marCldo por11 paso brusco del azul violeta 11 verde.

Realizar simultaneamen1e un 'ensayo en blanco.

m=; pMO, en mg, de la muestra a ensav-.N • volumen. en' mI. de sulfato ferroso 0,2 Ngastadot en el ensayo en bla~.

n • volumen, en mI, de sulfato ferroso 0,2 N gastados en la muestra ensayada.

Cantidad de muettrl a pesar In miligramoa

3{bl.5.-C6Ic"'.

" de materia orgánica. 1,034 (N-n) •

.Iendo:

liOQ

250 x 10060xm

3lIO 200 1&0 100

!

10013.1.-Princ;pio

Tratar el producto orD'nico #enilizante con un 6cido fuerte para soIubiUzao ef fosMrico '1precipitlr con 6cido citromofftfco Y quinoteinl, recogiendp Ypeundo el precip.'ted? ama.tillo de fOlfomolibdlto'de quinolefnl, del que se deduce el contenido en P~ s.

Se puede precipitar COn un l'IeC'tivo Onlco denominado quÍQ:)Qciaco, que vmtiene 1016cidól mollbdico. cltrlco y la quinolefN.

.Ea aplicabM a todos JoI producto. org6nkos fertilizantes In que se precisa detennm.. 1oque le denomine foIfórico total.

13.2. -Matwial yapa"'",

13.2.1.-flftro G-4 COI! poroo de 5 a 15 mi<_ da d_.13.2.2."-"110""", do vaelo. . .

13.2.3. -Papal de flbra do vidrio.

13.2.4.-Reactor.

13.3.-RHethw

13.3.1.-Acido nftrlco concantrado.

13.3.2. -Acldo auIIllrlco Cone_.

13.3;3{'"Nlt_ a6dico O pot6aloo.13.3.4.-R_q_. 0;101_70 g dé__dih_edo en 1~ cm"

de agua. D.isof\ler ea 9 de jcido cltrk:o en una mezc&l de 85 an' de NO,H y 150 cm' deagua r enfriar. Madlr grado"ment. la dltoCucián m6libdica.a li citJico..rtitliCl agilando.

DisolV$l' 5 g de qulnoleína sint6tica en una mezcla de 3S cm' de ácido nitripJ V 100~de agua. A".dir gradualmente eI1a d1sqlución a la moUbdico citriconftrica mezclando y.lando en reposo \f8inticuatro hora. Filtritr, al\adlr 280 cl'Í''' de acetona, diluir a un litro conegua y mezdarlo. Guardar en frac:ot. de pottetiIeno. .

3fb}.6. -Referenc;aa

1.-AFNOR, 1976. Produit< o_iqutt. &_11_ de Culturo. Norma U 44-181. 13.4.-Pro_lo

P..r 1 g de muestra en un matraz de 200 trn' y Iftadlrle pñm,ro unos 6 cm' de 'cfdonrtrico y despu6s: 20 a 30 cm' de 6cido aulfúñco. Otiar en digestión y celenw gritdullmen-

B. d. efe] E.-Num. 248 n ocfu1)re 19B! 24019

.. _Io__._2ICgdl__ opolAolco ..__porcianIo. _. y _11__....-.. CIlllkIId di

nitrito. . . .Cuondo lo -.cI6n__, oidrior y_,110 ""odI_.htMondo.­

pocoI minutos.

lloior.",. lo dIIoIuc:I6tI Y_ 1 un _liando dl2IiO ""o. _ro.-.y fltrarll 'trIY6I de un fItro IICO..

En un. orIoruneyer dllIOO ""o;~.UN .....011 cloI _ quI no __ mildi 25 mg de P20" cIIulr. lIMI100 cm' con -out, IftIdIr 60 cmi l:IBI reactivo quimocilcocubrir con vidrio de reloj, coIocar.1n Pleca caIiwItI con vttrina bien ~tiladl Yt.vk duran:'" un minuto, enfriar • ternpIr8tUra Imblente, egitIr CUkledOlllillnle formIndo remolInoatreI o CUltro veces cful'lnte 11 enfriamiento.

Rtm por un Vooc:h con pIpII di fittro de lIbrI dl1Iidrlo p__ dooocodo o 250°Cy w,do. _ cinco _ con pordoneI di 25 cm'. de IgUl. -

Delecar el crisol con 8U~ I B'C durante treintl minutol. lI'1frIIr ... deHca·dor y pooIr 1I foolomollbdlto de qu_ IC,H,N). 110 (PO.. 12 foll>O,l. EfI9tUIr piro........... un onooyo en b4ane0. _

13.5. "'-CMcuIoI

" de p~.. 1M - BI. 3'207P

oIondo:

'P • pooo. en g. de lo ......,. _do In 11 oIIcuOll.M • pelO. en g. del predpltIdo de foIfrimol1bd&to de quinoft(n••JI ~ PelO, en g, del precipitedo del enuyo en blinco.

13.&. -OInMWcionn

13.6.1. -En !ugll, de gooch Ypapel de fibrI de Yidrlo puIdt UliIizI... un _ ftIttIn..de 5-15 micrn de di6met:rode porot, tal como un G-t.

13.6.2. -En """ dO _ 01 po'oc:lpltado 1 250°C du,.... moclII ho,. 1"'''_'''• 150°C durante UNI-~.

13.6.2.-EI tiempo de digest~ puede lIdu,","" IJtII/m>do un .....or.

13.7.-Roforone;'.

1.-MélodolOfieIlloo de lo A.O.A.C. EcllcI6n 1970. nÍlltlll. 2.01.6 y2.023 o 2.025.

2. -l.ottI. G. YGol""","l. C: Gukll."'- Chlmlco ogrorII, pig. 366.IDOtormlnulooM deM Inidride fOlforlea lote1e lm6todo OfflCiale)•• BoIogna, 1987.

1I."'-POTASI0 SOLUBLE EN AGUA_por fotometM de lI.me)

16. l.-Principio

Se funda In 11 _,.cI6n de lo mecIIda dilo_dos de _ de 'tomeo .._en una llama. de una dilolucl6n problema desconocidl y de una disolución patrón di con­centración conocida.

Pira evft.- interferencias, e1imínir 101 metales pesadoI por precipitación C9n oxelltQamónico y klIlnione.s Interf8l'ent81 por retención mecnanteJetinas cambladQr•••

.Se aplica. todoa 101 próductos orgtnleos fertiliz.ntes.

16.2. -MotrillYapara..o

16.2.1.-M_ oforodol de 250 YlOO cm.ode capackfad.

lS.2.2.-CoIumM de cambio ~Ico, Puede utHlZlrH coIumno di YIdrio de crornalog,.·tia de 30.5 ,,".-y 1.9 cm. de _intimo, can _ o vttvulo In 01 fondo paro controllral Cl\Jdel dalllqukfo. .

lS.2.3.-fot6mltro do lllmo.

16.3.-R_.

16.3.1.-DIIoIu~do oxalato orn6nlco. DiIoIvIr 40 g. de CaO,lNH,la In un litro deH,O.

'16.3.2. -1ndIc;ocIor '* do rnolIo: DIaoMr 0,2 l. de '* de metilo In 10 mi. do alcohoL

16.3.3. -Addo nlttlco dIuldo 11 + 101.16.3,4. -Utilízor una ...... do _ ooti6nIco do bIildctod __ o _. tal COlIlO

_hlIR.... _ A-7 o du_ A-41 de ac:IdhIo pennu""o oqulvolenta, prlPlrodIcomo .;gua: CoIoCIr 410 g. de ....... In _ do__y.-doa lItroa de NoOMal 5 por 100. AgI!Ir""'" mInutoa COIlIII_~. Oojar oadtmentar lo ....... Y_tlr1I_.do NItlH. Repatfr 01 __ con NaOH a15 por 100 doa_mio y dacantlr 11 dIIoIu~ de NIOH cIoapu60 del tr_ final. Atlacllr doa _ diHzO ... reaina, egitlr unotI minutel. de;ar la I1IIinIIICimInt8r V deClntlr 11 H20 ,de iIvado.Repetir treI-cu.tro veca. LlI'IIinaqu~ lIhotII en la 10rmI de blllllibre. Regenerw I 11

. forma NO, tratando ""' _ con NO.H 01 5 por lOO In la mIIma forma qua c:omó con lodaoIucl6n de NItlH........ 11 ..... con 1100 _ quool aguo de _ oIt:anoo pH 2 o~_oI_por_anlocolumnlo~Y_Inun_

'II'Inde. Guardar la ..... cubIattI de H,O In !ruco lIpIdo.

16.3.5.-lIIi1r1to o _ pot6oIco. RIClIo1IIW dqo _ • par1Ir di MoO 11 ... digrocto .-tillo Y_ cinco ho.... IOS°C. .

1O.3.6.-NOaU•.

16,4. -Proc«Jim~nto

-,6....1.-Preper.c1ón de la columna: Cofocar un teco de lena de vidrio en el fondo de laoofumNl, wrar la villwll Val\edir H;,¡O esu 10 cm. de Ilturl. Transferir una porción de re.lJ!:'Ie un YIIO de,200 cm.' y ausponder en H;t0' Transferir la suspensión. l. columnaV eJustar 1I.ltura de la ,..¡na comPKta a 20 cm. Orenlr el exceso de H O hsta que queda• 2,5 cm. di " perte IUP'Dor. Regen6r1r la resina despu61 de que si hayan pasado 10etk:uotaItueeaivu. exCeptb con ambet1it1IR-4B con la QUe pueden utilizarH 20 elícuotas. .Para el Na, regenera, después de ~Cer pasar cinco atfcuOt8S. -

18.4.2. - Preparación de 11 diaoIuclón~: Pesar un. cantidad de muestra qu6contenga unos 15 mg. de K20, .l\adir 125 cm. J de H20 Y 50 cm.s ele disolución e oCNH,lz y heM'r trtinta minutos" Enfriar, diluir h~ volumen, mezclar Vpaser por filtro ~~

16.4.3. -Prepal1l~i6n de la 3eurva patrón: 0is0Iver 1,2931 g. de NO,K (o 0,9335 g. de CIKIen H~ V diluir hasta 500 cm. 11.000 p.p.m. de K). Preperar las disoluciones patr6n por di­lución cubriendo los rímites O50 p.p.m._ de K a intervalos no superiores a 10 p.p.m. y 8~.diendo la cantidad adecuada de NO,U si va 8 utiliz'rH un inrtrumento con patrón interno,Preparar la curva patrón de litrT'lisión frente a concentr.ci6n !justando el Instrumento deforma que 50 p.p.m. de K d6 lecturas pr6J1Ctmas .1 centro de la escala. Atomizar porcionesde dllOluciones patrón huta que IaIlectu.... para !el MriN eeert' reproducib••

16.4.4.-Determinaclón. Transferir una aUcuotl de 10 cm.' de disolución de la muestra• un wm de 2!iO cm.',.Al\adlr~na. gota de- rojo d.. metno V neutralizer con NO,H11 + 101. AJustar t1.nive1 de H;tO In l. columna huta 11 pwte 1Upet';or de la teSina Vtr1lnl­ferir cuentftativamente la IIfcuotl t la columna, abrir 11 llave' para obtener una proporciónde flujo di dos gotII/eeg•• recog. e1lf1uente en metra eforMSo de 250 ~, l.8var la en..cuotl dentro de .11 reaIna con __ poqueII. pordonaa de 1100. R_ 50-18 doafluente, Iuogo aI>rlr lo .... Y _ lOO "".'__1100 In la coI_procuiando que al nivol de 1100 n° quada por dIbajo dilo PO'" -'"' de 11 col...... do_o. DiluIr hasta wluman y _r 101 .. utI1lz1 Inotru_ con patr6,f _ .._ ofIadir lo contMlld proc:iaa de NO.U .... de cIIIu~ a VOlumen).

v.tornlllr porciones de m.-a \liria _ paro _ Ioclum _ oagu... pIl'I

_ dIooIucl6n. DotermlMr las p.p.m. di K 1 por1Ir de la curvo pallÓn. n.. tomparatu,. dolas dtsolu'- pltr6n ydo lo mu"" no cIeban cr_ In mil de 2'Ct.

Poro comprobor. _ 1.!i05II g. do _ lIcIdo de potIoIo lpalr6n prImarIol y_.• un mett1IZ aforado de 250 mi. Aftadfr 0,5 D. de PO.H CNH,. tNH,.! y proceder corno ..18.4.2. empezando en laftedlr 125 de H.10... S K20 ~I'do debe ser fguaf a 23.0.

lU.-C4/culoa

CIIcuIar el contenido-en KaO utm18ndo la éotfttPOrKlilnte curva pauón,

16.8.-0b.wvlclotlft

.\.as ..1e> de 16.3.5. no as _cío roc:riJ1,o- si. dispone di UM pu'lZI de gtadolespect1ogr6fícOl.

16.7.-RtfetOllCÍOl

1.-Mélodoo de an6l1ols. A.O.A.C. Eclicl6n de 1970, núm. 2.054.2.-MétodO$ Ofici.. de Anillsia de Ferilz:antes;M,- Agri<:ulturl~

ANEXO IX.-PLANTAS

1.-PREPARACION DE LA MUESTRA

1.1.-Principio

1II Dperaclon.. descrit... contlnUld6n, tienen ppr finalidad conseguIr una mUlltllpa,. al enilisls lo 1M'~ posible. Por olio. todo Ilmplfficaci6n o _ Inouoficiente '" .. OJ*Ici6n,'puede conducfr I unos I'IIU~OI que no ...... representltivoe.

1.2.-_y__ti>a

l.2.1.-tatufo con olro Iomefo.

1.2.2.-Bandelá do fondo pómo.

1.2.3.-M....1Io de Igata o_ ~icII,

1.2A.~CopI1lo dloorde notullloul\/I.

U.-R"-

U.l.-SoIucl6n 01 tpor 100 de un delargonta no I6nlco,

U.-~

I.a\/Ir ......... con 1OIu~ 1.3.1. -.» ombIo _ con 1.2.4. lIVar a contIn'"c:I6n doI_ con'lgUI corriente Ypor__doI con aguo__•Todo -_de_no clobI-aupartorl-__

_ _ no dIba af__ In al .... de qUilo halo .... 4eotlnada a" ,.11zIodOn de deterrninacionn analhices que pwmilIn comprobar un tnrtamiento .de contlminacl6n.

A contInu",cl6n deseCar l8a hojM, depoait6ndolas en Unl bande;a de fondo pomo a «l°Ccon estufa con aire forzado durante el tiempo necesario pal1l alcanzar peso constante toor­melmen~ entre 16-24 horasl.

-la muietrt deIecIde, Y• .., poIibII8!1 caliente, • muele ., moliniOo ~ 6gatl o enmollnliio de.-pa met6licas. comprot.ldo-previamentliI posible conteminación. El t.amaono di le mueetrII debe .. '" auflcientemente grande pera que 181 representativa.

Una vez reducida conveniwrtlmente .. hoja • polvo, tritroducirla en un .recipiente d.cIarra_.__u..~ aIn lIP6n v. an _111 paro," almo-

c:enamiento. -

.L

24020 14 ociu6re 1981 lJ. O. (le) E.-Num. 248

2.-NITROGENO

2.1.-Principio

Atacando el material vegetal con 6cido IUttúrieo concentrado, • ebuJlición, en preMnCII.de uh catalizador. el nitrógeno .. tr8O$forma 811 sulfato amónico. Se deetiLa en prellnclede un exceso de hidr6xido sódico yle vWot'8 el amoniaco destilado con Acido autfúrico N/14-

~.2. - Material y .paratas

2.2.1.-Equipo normal de laboratorio necesario para efectuar una digestión tipo KjeldhalYsubsiguiente destilación y valoración..

U.-f/Nctivoo

9.'3.1.-SoIucl6n de 'leetlto s6dico. 1N. Dllolver 136 D. de acetato sódico trlhldrltO In-ou- y diluir I un Iftro. El pH ~'" lOIuci6n debe __, IptOximIdaIrneme, 8,2.

9.32.-EtaOOl al 96 por lOO rlM.

9.3.3.-Solud6n de _ IN. ai_ • pH 7.0. A/ledlr, por cedB lIIro de -ei6t>que 18 prepare, 57 mi. de 6cido glacial a unos 600 mI. de agua v entonces aftadlt • mi.de hidróxido em6nico corqntrado, de peso _pacifico' 0,90. B hidr6xido debe aftIdirse enuna vitrina de gáMla t ..... de un embudo de cuello lergo de tal tnanera que llegue al fondode la lOIupoo: del écido. Oe;ar enfriar Yajustar a pH 7,0 con 6cidO acético o NH.OH. USlndoun pH-metro Oindicador azul de bromotimol ~ Uevar la sotución al-volumen convenido.

9.4. -Procedimiento

2.3.-RNCtiYoS

2.3.1-Aeido sulfúrico concentrado Id • 1,341

2.3.2-Acido autfúrico N/t••

2.3.3.-Leiia de SOla ciustica 36 B6 f266gll. de NaOH, aproximadamente).

2.3.4.-Sulfato potásico.

2.3.6.-Sulfato cCtpríco anhidro.

2.3.8.-Selenio puro.

2.3.7.-Rojo de mello.

2.3.8. - Verde de bromocresol.

2.3.9.-Soluci6n de 6ddo bórico al2 por tao en agua.

2.3.10.-C.tallzador: M_8Og. de 2.3.4.; 20 g. de 2.3.5. V2 g. de 2.3.5.

2.3.11.... lndleador: Mezclar volúmenellgualel de rojo de metifo (0,66 "por tOÓI y verdede bromoc~ <0,33 por 1001 ., alcohol etIIica di 96-•

pesar. cpn precisión d. 0,01 g.. una muestra de 4-6 gramO$ segúr, telo.tura. Coloear enun tubo de céntrffuga y at'ladir 33 mI. de acetato sódico (9.3.11. Agitar eltubn tapado du~

rante cinco minutos en e/agitador·mecAnice. Oesteper V centrifugar hasta que el "quicio lH>o

brenadante eat6 claro. Decantar el nquido Sobrenadante V desechatlo. R~r el tratamtentootras tres veces mini resuspandiendctel suelo antes de cada agitación. A continuaci6n .1tJSoo

pender \a muestra en 33 mi. de etan~ (9.3.2.1 V agitar el tubo tapado durante cinco tni~

tos; destapar, centrifugar Ydecantar el rtquldo claro que sobrenade. Repetir eJ. tratarrientohasta que la' conductMdacl eléctrica del (¡ltimo liquido IObrenadante sea inferior a 40 mi­crQmh08/cm. (trellevlldos suelen Ser suficientee).

Despiezar el JO<fio absorbido por la muestnl traténdola del mismo modo, con tr.. pOr­clolles de 33 mI. de acetato amónico (9.3.3.1 decantando cada porción del Uquida lObl'er'w-

dante en un matraz aforado de 100 mi., completando el volumen con aC1!ltato amónico(9,3.3.) y homogeneizando.

Determinar la concentraci6n de sodio en el extracto contenido en el matral de acuerdocon el método 14(8) para extractos de acetato amónico.

9.5.•-C~lculo

9.6. -"'~i,'rencla3

11.-ACIOEZ VALORARLE DE LOS SUELOS

l.-Bo:~er. c. A.; R<l.itemeier. R. F. Y Fireman, M.: \(Exchangeable cation analysi, o,laline and'Blkali soilsn. Soil Ss. 73~ 251·261, 1952. .

C • concentración, en meq/T.. de Na en el extracto.·

p • peso, en g" de la muestra seca.

10' C

PCapacidad de cambio Imeq./1OO g.1

siendo:2.4.-,.Procedimiento

Introducir en un matraz de 150 mI. de capacidad, da 150 a 200 mg. de A'luestra vegetal,preparada según al método oficial n.- 1, evitando qua se deposite en el cuello dlJl matraLA continuación-agregar 5ml. deteido sulfúrico concentrado; dejar en contacto mecfta hora.

Transcurrido este tiempo agregar un0l2OO mg. de catalizador"y despu6:1 di haber pulltOdos Otles bolitas de yjdrio, calentar algunos "¡nstantes, suavementa al principió y después

levar a ebullici6n. la decoloración completa se obtiene generalmente en treinta minutos,li8f1do'la duración total del calentamiento una hora. .

Enfri.ryatlad1r. de una sola vez. 30 mf. de agua. En el momento de destilar, .t1adir deuna sola v8z25 m!. de la l8jla de sosa y fijar el matraz al aparato de arrastre de vapor.

Recibir el destilado en un vaso de 250 mI. conteniendo 0,5 mI. de indicador V 10 mi. deI:cido bórico, tocando la extremidad inferior del refñgerant8 el fondo del vaso. Mantener ladestilación durante dos minutos y medio a tres minutos, siendo el volumen recibido d. 100• 125 mi. Valorar con écido sulfúrico MIl. (viraje de verde a rojot.

2.5.":' CBlcuIO$

Celcular ti % de nitr6geno mediante la el(presiónn

%N10' P

t 1.1-Principio

Percolacl6n dellue!o con una solución 0'.5N de c1oiU1o b6rico V 0.055 N de trietanollJmf..ni llevada e pH 8 con tcldo clorhídrico y posterior valoración con écido c!orhidrico hastapH 6,1, comparando la cantidad consumida con la vtilizada' en un ensayo en blanco.

tiendo:n-volumen, en mi., de soIuci6n gastadOl en la valoraci6n

p ;. peso, en g., da la muestra

t mJ. de soluci6n N/14 com~sponde I t rng. d. N.

Z.6.-Re'.r~nci~s

1. - Méthodes de référencI pour la d6termil1ltion"1es 'Iémlnts mlMnlux dlnslta ..,.g.lIul(, Comité Inter·lns1'ltuts.

Comunication pr'Hnt6e 4.' colloque Intemldonalsur le Contr61e del'AUmentation del.Plant8$ Cultivé". .

A!'IEXO X.-SUELOS

'.-CAPACIDAD DE CAMBIO CAnONICO

l. '--PrincIpio

El suelo 18 satura de lOdfo medfantl cumo lr.IadOlJ sue8eiyos con «etato l6cIoo INI pH 8,2. El excesp de NI te elImina deI..-o y allOdio .b.orbido .. deIptaza can 1CIlfto.am6nico 1N, en cuya IOlucl6n .. dettrmlna ellOdio.

9.2.-M./OriMy'f1OlOto.

92.1.-FolÓmetro de 110.... o _rofotómotro con..-oriol _ fot_ de_.

9,2.2. -Agitador medll"llco de tubos de centrifuga,

8.2.3.-C.ntrlfugB ylUboe de 50 mi.

11.2.1.-Matraces erle,nmeyer de, 125 v 500 mI.

11.2.2.-Matraz aforado de 250 mI.

11.2.3.-Filtro Bilchner núm. 40.

11.2.4.... ReCipiente reSistimta al calor de 10 litro••

11.3. -Rescitvo.

11.3.1. -Soluci6n de ,cldo-clorhídrico 0,2N.

11.3.2.-Solución indicadora: Disolver 0,22 lt. de verde de bromocresol y 0,075 g. deroJo de metilo en 3,5 mi. de NaOH O,1Ni .completando a 100 I'nl. con etanol del 95 porciento (v/vi. . .

11.3~3.-Sofuci6n 2N de tñetanolamina (TEA). Difuir TEA comercial [N ICH2CH

10HJ,­

peso especffico 1,128, sproximadamente eNJ y normalizar con la solución Icida 01.3.1.1 yindicador (11.3.2.).

.11.3.4.-SoIud6n 8l<t¡Ictdte _nade: Disolver 550 g:<Io C~Be. 2H,O "" aguo _di Yhervida en, u" recipiente de 10 litros. Medir 25Q ml. de trietanolamina,2N y 36 rnt. deicldo dorhldrico 6H y diluir la soluciOn .. un totM dct 9 litros con agua destilada y hervid.a.Mezclar bien 11 ,ellIción Y.justar -. pH 8,00 :!: 0.02 con Acldo ~rhktrico oETA. Impedir JIdiIoluci6n de COa W\ l. solución instalandQ'un .Ión y un tubo con cal sodada cqneetadOl• la toma de llre. .

11.4.-Procedlmlorfiio

Colocar 10 g. de suelo en un· matraz erIermeyer de 125 m!. yaf'ladir 100 mI. de la soluciónextractora (11.3.4,), remover el contenido para meze/ar bien. tapar el matral y dejar en re- ­poso u~ mlnimo de 8 h. Tra"'sterir el car,t6nido a un filtro BiJchner núm. 40, con papel demtro whatman núm. 32 o similar {4,25 cm.}, enjua~er el er:"'nJT'\(lyer con la sotuci6n extrac·tonI y continuer percatando esta solución I través del' suelo que se tenga un total de por·

'8. O. (fel E.-Niím. 246 14 óduore 1981 24021

ANEXO Xl.-VINOS

1.-DIagnóstico y Rehabilitación de Suelos Salinos y Sódicos, Pe¡sonal del Jaboriltoriode Salinas de los EE.VU. 1973. Ed. l.imusa. México.

olondo:

e • concentración. en meq/1, de SOd'1O hallada en la cUrva de calibración.

V• volumen, en mI, de la alícuota de la solución a analizar.

xsoSO<!"oo lmeq/ll. e

v

14.S.-Cl/cufo

- Celcula( el con1enido en sodio In. agua o ex1racto del suelo expresado en nieq/l a~l¡'cendo la siguient.e f6rmula:

Acid.ez valorable (meq/100 9) • (V·V110N

'iendo:

V =volumen, en mI.• de lcido clorhídrico utmzado para valorar 250 mI., de la soluci6nextractora.

V' 11: volumen. en mt., de 'ciclo clorhídrico utilizado para valorar 250 mi. de.la soluci6nextractora 'que ha estado en contacto con el suelo.

N ... Normalidad del ácido clorhidrico...

colado -de '225 mI. Dejar drenar cad. fracci6n d. la IQluci6n extractante 8ntes de a~d1tla fra:cción siguiente; pero evitar que el suelo se agriete debido a aec&do excesivo. Trans­ferir completamente la solución percalente a un matraz aforado d. 250 mI. '1 enrasar conel reactivo 11.3.4. A continuación verter el contenido del matrIZ en un erlenmeyer de600 mI. el'ladlr 5 gotas de soluci6n indicadora 111.3.2.) y -valorar con kido dorhldrico(11,3.1.) hasta el viraje de color a rosa IpH = 5,11. Enjuagar el mltraz con 111 solución quele esté Valorando y completar la valoración. Velorar 250 mI. de la solución extractora origl­nal hasta el mismo punto de- viraje utilizando la mitma cantid.d de IOlución in~icadora.

11.5. - ClJlctlfo$

1'.S.-Referencias

1.-Peech, M.: llMeth~ds of Soil Analysis». Pan 2; 910·912. American Society of Agro­nomy, 1965.

2. -Coleman, N. T. YThomaa, G. W.: «5011 Acidity and Li~ng~: '036. Agronomy ­Mon. núm. 12. American Society of Agronomy, 1967, .

3¡o!.-COLOR

3¡.).1.-Pdnclpio

E:t color de k>s vil'lO' se deterlY1ina por transparencia como. se percibe por la vista, peropor.un procedimiento independiente de la apreciación personal, valiéndose de métOdos es·pectrofotométricos triestimul8res de ordenadas seleccionadas de Hardy, fundado en el sis·tema de la Commisión Internationala de l'Echairage 'C.tE.l, con relación a la luz producid.por un cielo nublado lfuentt: C),

3Iat2.-Materi.'y ~aratos

'4. -SOOIO POR FOTOMETRIA DE LLAMA

14.1.-Princ/pio

Excitación del sodio de soluciones. pulverizadas sobre una 1Iama y medida de la radiaci6nemitida, utilizando"litio como patrón interno. •

14.2. -Material y 1!parsros

14.2.1. -Matraces-aforados dé 50 ml.

14.2.2, - Fotómetro de llama

3ta12.1.-Espectrofotómetro para medida en el espectro visible.lós valores de transml­tencía correspondientes 8 una misma muestra, no deben acusar diferencias superioresa 0,005 y cuando la escala del aparato esté graduada en valores de transmitancia mUltiplica­dos por 100, no debe haber diferencia superiores a 0,5.

Las cubetas seran de cuarzo o de vidrie de índice de refracci6n mállimo_ 1,5, de paredesparalelas y espesor interno b que se expresa en centimetros y con una aproximaciónde ~ 0,002. b.

Cpnviene disponer de cuatro pares oe cubetas en las que los espesores b, seande 0,1 cm.; 0,2 cm.; 0,5 cm. y 1 cm;

Según la intensidad delcofor se escogerán un par de cubetas de tal forma q'Je la absof~

bancia A quede comprendida entre 11,3·0,7 (transmitancia 0,5·0,2J.

3(a).3. -Procedimiento

14,3, -Reactivos

14.:l1.-:Solución de acetato amónico 1N, ajustada a pH 7,0: Por c&da litro de so1....:;i6nque se prepare añadir 57 mi. de acido acético glacjal a unos 6(;(1 m!. cie agua y entcnc~s

al'iadir 68 mI. de hidróxido amónico;) c.o~r:entrado de peso e~~<;.:ifi;::o 0,90. El hidf~¡,~ido del",;l.I'i",dirs'! en vr:rina de g'ascs a tra ....és de un er:'lbudo da cuello ;::srQ" de tal m.mera que llegueal fondo de la solución del acido. Dejar enfriar yajuster 8 pH 1,(' COn !lcido 3cé1i::o o hidr6·xido am6nico. usando un pH-metro o indicador azul de bromotirl"'ol. Diluir la s..'llución. al vo­lum9-!'"' cOJ'....enido.

14.3.2. - SoluciÓn de cloruro sódico O,04N. Disol...er en agua 2,338 g. de cloruro sódicoy completar a 1 litrO.

. 14.3.3. - Solución de cloruro sódico O.04N en acetato amÓnico 1N. Disoh;er en el retlcti­vcf14.3.1. 2,338 g. de cloruro sódic9 completar a un litro.

14.3.4. - Soluci6n de cloruro de litio O,05N. Disolver en agua 2,12 g, de cloruro .de litioy completar a 1 litro. . -

14.4.-Procedim,imfo _

Preparar una aerie de patrones de cloruro s6dico usando 10$ reactivos 14.3.2 y 14.3.4.a/'ladiendo a cada uno la misma allc...ota de la solución 14.3.4. Preparar una serie similar depatrones de cloruro sódico con los reactivós 101.3.3. y 14.3.4 usando el reactivo 14.3.1. envez de agua para diluir. Las concentraciones de cloruro sódico que se recomiendan son O;'0.2; 0.6; 0,8;.1; 2; 3 Y4 meqll. La concentración óptima de cloruro de litio varia con el tipode fotómetro de llama pero generalmente es de 5 a 10 meq/1. Los patrones de, cloruro sódi­co en ugua se usan para ¡mlllisis del sodio en aguas y en extractos aeuosol de suelos. Lospatrones de cloruro sódico en acetato amónico se usan pera analisis del sodio en el extr,]C~

to de !lcatato amónico del suelo. Cali~rar QI fotómetro para un intervalo de concentraciones

entre Oy 1 meq/1 de sodio, usando las cinco primeras soluciones patrones. usar la primeray las cuatro ultimas soluciones patrones cuando se vaya'8 trabajar en el intervalo de Oa 4,meq/1 de sodio.

'-Medir con pipeta una alicuota de la solución que se va a analizar en un.matraz aforadode 50 mI.; la81icuota debe de contener menos de 0.2 meq.'l de Sodio. A~adir el v~lumenapropiado del reactivo H.3.4.·demodo que cua~do se diluya a Un volumen de 50 mi. laconcentración de litio sea exactamente ig'Jal a la di! las solu:iones patr9n de clOruro sódico.

Enra,sar a"adiendo agua o reacti ...o 14.3.1. Sl ...an a analizarse extractos ~e acetato am6.nico. Mezclar y determinar la concentración 'de sodio con el fotómetro de Hama llsando lacurva de cal,ibración apropiada. '

Si el vino no está limpio centrifugar pre....iamente. Eliminar el gas carbonico, si es neea·sario, por a9¡t~ci6n con vacio parcial.

Medir diractamente con el expectrofotómetro las transmitancias de! vino a las Cuatroloní:litudes de onda:::: 625, 550, 495 Y445 nm., empleando la cubeta de espesor convenien­te, según intensidad del color elel vino.

3ía).4., - Cálculos

Ulilizar agua desti.'?,da como liquido de referencia.

31a).4.1. - Calcular las coordenadas (x.y) del punto representativo del color del vino enel diagrama tricromático de la C.LE.

x)l = X + y + Z

y X+y + Z

X. 0.42T", + 0,35 T560 + 0,21 T".

Y O,20T;" + 0,63 T&SO0.17 T...+

Z = 0,24T... + O,94T...

los valores trieslimu!ares X, V, Z expresan las proporciOfles de colores rojos. verdes yazul Clue dan por mezcla el color del vino.

cuando el espesor b de lacubeta sea inferior a 1 cm. ,eferir la transmitancia a 1Cm en ·141siguiente forma T ¡;:¡ 1'1.'11 Ysi la transmitancia viene expresada en porcentaje.

T,tlb

T=~

T • tr~nsmitanda referida a 1 cm. de espesor de cube!a.

T' ,=_. transmitancia ob:enida 'para b ~m. de espesor de cubeta

b 111 espesor en cm. de la cubeta utilizada.

Como ~s esp"E-Ctrofatómetros esttn generalmente graduados tanto en transmitan da Tcomo en absorbencias A. se puede también calcular la transmitancia en 1 cm. de espesordel vino a partir de la absorbancia observada en el espesor b, si la medida se ha hecho en

. cubeta de eSpC!sor in~er¡or a 1 cm., teniendo en 'cuenta que:,A = logT

.C

24022 14o.dubre 1.981 B. O. del É.-cNi'ím. 246

3(aI.6.1.-EI color de un vino queda comple1arnente definido por la luminosidad relativaVen porcentaje y las coordenadas tricromáticas x e y.

Se pueden prever las caraC1eristicas cromáticas 'de una· mezcla de varios vinos cuandole conocen las caracterlsticas cromáticas de las mismas. Los valores triestimuteres X, Y, Zde la mezcla se obtienen por la suma de esos valoreS multiplicados por su proporci6n paracada constituyente:

Con este 11n, se calculan las absor~ancias A en un cm. de espesor multiplícando respec.t!vamente por 2, 5 V 10 las absorvancias leIdas en un es~or b de 0,5, 0,2 Y 0.1 cm. Seobtienen después los valores correspondientes de tránsmitancia bien por aplicación de la re.laci6n anterior, bien refiriéndose a la tabla calculada a partir de esa misma relación.

3{e).4.2.-Luminosidad ralativa.-Es el valor" de Y, expresado en porcentaje (siendo el~egro. Y .,. OY~I incoloro y = lOO).

3{a).4.3.-Cromaticid8d~_Para expresar al cromaticidad (longitud de onda dominant~ ypureza) se recurre al diagrama de cromatiddad, que representa el Í<locus¡) de todos los coto.res del espectro, considerando que a 400 nm. corresponde el azul, a 520 11m. CU~Q$pondeel verde y a 700 nm. el rojo. 8 punto O corresponde a la fuente Il{minosa U~~EZ3dil, que, eneste caso, es el i1uminante standard a, que representa la luz de un día medianamente claroy cuyas coordenadas son: -

Xo == 0,3101 • Yo == 0,3163

3{aJ.4.4. -longitud de onda dominante. - Conocidas las coordenadas K e y dal color, seune el punto de esas coordenadas e aI.punto O. En el punto en el que esta recta corta al,Spectrum Locus» se encuentra la longitud de onda dominante qtle corresponde. al matizde este color. Asi en el caso de vinos de tono teja, la longitud de onda 'dominante se sitúaentre 585 y 59B o.m. aproximadamente. 'Para 10 vinos de un colQ( tinto franco, se sitúa entre

699 y 660 nm., mientras que para los vinos de tono rojo púrpura está caracterizada por lalongitud de onda dominante del color complementario. Se obtiene el valor de esta longitudde onda prolongando la recta en l. dirección de e hacia Opara que ella corte el «SpectrumLoeuslI como hemos visto antes.

Este color complementario en el caso de vinos de tono rojo púrpura se sitúa en el verde.Se anota el valor de esta longitud de onda seguida de c (compíementario}, por ejemplo 495 c.

3(al.4.5.-Pureza.-La pUreza se calcula determinando I~ distancia relativa del punto e· que reptesenta el color de( vino eKaminado V del punto S que corresponde al {{Spectrum

LocUSII al punto Oque representa al iluminan te.

Se expresa la puteza en porcentaje por la relaci6n:

100 X

3Ial.5.-0b',,,,•.

Distancia det punto e al· punto O

Oistancia del punto O al punto S'

" A .. .7 . , . .. J .. •7 .. I ••T~a

" O.'" 0.29 0.29 029 0.29- O.'" 0.19 O.:N 0.29 ll.211" O.U 0.28 0.28 ~ 0.2' 0.28 0.28 o.2~ tUI! 0.211 0.2'B 0.28 0.211 0.27 0,27 0.21 0.21 O.~1 O.~' O.~1 0.2754 0.27 0.27 0,27 0.27 0.26 0.2b tU" 0"" 0.2l'1 0.26" 0.26 0.26 0.26 0.16 0.26 0.25 0.15 el ~5 0.25 0.2S,.0.15 {I.25 0.25 0.25 0.25 0.2' 0.25 1l.2~ O.H O.Z"" ;j.2" 0.24 0.24 0.24 0,2" 0.:?4 024 (1.24 0.24 0.2"" 0.24 0.24 0.24 0.2.1 0.1) 0.2.1 0.2.1 021 O." . D.n" D.n 0,2) 0.2.1 O.:?1 0,23 0,2.1 lk2! (1.22 0.22 0.2260 0,22 0.22 0.21 0.22 0.22 0.22 0.22 0.22 0,22 0.22., O~' 0.21 0.11 0;21 0.21 0.21·

~:~ ,

0.21 0,21 0,21" 0.21 0.21 0.21 0.21 0.20 _ 0".10 070 0.20 0.206l 0.20 0.20 0,20 0.10 0.20 0.20 0.20 0.20 0.19 0.1964 0,19 0.19 0.19 0,19 0.19 0.19 0,1.' 0.19 0.!9 0.19os 0.19 0.19 0.19 0.19 0.11 0.18 0.18 Q.18 0.18 0.1166 0.18 0.18 O.U 0;18 0.111 0,18 0.18 0.18 0.11 0.1767 0.17 0.17 0.17 0.17~::¿ , 0.17 0.17 0.17 0.17 0,17" 0,11 0.17 0.17 0.17 0.16 0.16 0.16 0.16 0,1669 0.16 0.16 0.16 0.16 0,16 0.16 OY\ 0.16 0.16 0.1670 0.15 O.IS 0.15 0.15 0.1' 0.15 0.15 0.15 0.1' 0.1571 O.IS O~t5 0.15 0'.15 O.l' 0.15 0.14 0.14 0.14 0.1"7Z 0.1" 0.14 0.14 0.14 0:14 0.14 0.1. 0.14 0.14 0.14n 0.14 0.14 0.14 0.1,' 0.13 0.13 0.13 0,13 0.13 0.13,. O.U 0.13 0.13 O, IJ 0.13 0,13 O.U CO.IJ 0:13 O.IJ" 0.12 0.12 0.12 0.12 0.12 0,12 0.11 0.12 0.12 0.1276 0.12 0.12 0.12 0.l2 0.12 0.12 0.12 0.11 0,11 0.1177 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11 0.1178 _0.11 0.11 ~O./I 0.11 0.11 0.10 0.10 0.10 0.10 0,1070 0.10 0,10 0.10 0.10 0.10 0,10 (1.10 IlI.O 0.10 0.10,. 0.10 0.10 O.lO 0.10 O.DO O.DO O.DO O.DO 0.09 O.DO" O.DO O.DO O.DO O.DO O.DO O.DO O.DO O.DO O.DO O.DO" O.DO r.DO 0.08 O.DI 0.01 0.08 O.DI O.DI O.DI 0.0183 O.DO O.DO 0.01 D." O.DI 0.08 0.08 O.OS D." 0,011.. D." 0.07 0.07 0.07 0.07 0.07 0.07 0.07 0./01 0.07" 0.07 0.07 0.07 0.07 0.07 0.07 0.07 0.07 0.01 0.07.. .0.0' 0.06 0.06 006 0.06 0.06 0.06 0.06 0,(16 - fi.%87 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06 0.06.. 0.06 0.05 0,05 0.05 0.05 0.05 O.OS O.OS O.o.s 0.0'.0 0,05 ..OS 0.05 0.05 O.OS 0.05 0.05 0.05 0.0' U.O'.. 0.05 O... D." D." D." 0.04 1).lJ4 n.(;~ L1.04 004" D." 0.04 D." D." O... O... 0.04 0.04 0.1» 004

" 0.04 0.04 0.04 0.03 0,0) 0.03 0,03 0.03 ú,(\J 0.039J 0.03 0.03 0.0) O.Ol 0.03 0,03 0.03 0.03 U.úl 0.03.. 0.03 0.03 0.03 0.03 0.02 1l.í'l2 0,02 0,02 ().~;2 0.02O, 0.tl2 0.02 0,02 0,02 0.02 0.02 0,02 0.u2 0.e2 0.0296 0.02 0.02 0.02 0,02 0;02 0,02 0.01 0.01 ú.rH 0.0107 0.01 0.01 0.01 0.0/ 0.01 0.01 0.01 0.':11 0:11 0.01.. 0,01 0,01 0.01 0.01 0.01 0.01 D" 0.01 O.lJI 0.00.. 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 O.DO O.DO G.OO O.DO'00 0.00 0.00 • 0.00 O.DO O.DO O.DO 0.00 O.DO O.DO 0.00-

TABLA DE TRA~SfOR:o.U.nO:'\1)E ABSORBE:"i(lAS ES TR"~S\IITA:'\CIAS,'1 ... .. .. ~ .7 A ~...... • .. A

2." 2.40 2,30 .,22 2.U 2.10 2."• '.00 2.701," 1.77 1.74- 1.72I 2.00 '.96 1.92 1.19 U5 '''' I~O U7 1.$5 ,...

'.70 ,... l." l." '.1>2 '.60 1.43 1.41 1.41J '.52 IJI IJO 1.41 1.47 1," 1M'.0''," '.o, 1.0'• '.<o ,JO 1,31 1.07 ,JO IJ' ...' 1~4 "'4 l3JI 'JO '.29 I~' 1,28 1.27 ',26

1.11 J.11 l.lT 1.16',22 W '~I '''' 1.19 J,I91.11 1.11 1.107 1.15 1.15 J,I4 1,1" I.l.a I.IJ 1.111.04 'J16 ,.o,• 1,10 ,... ,... 1.01 1,08 1.07 ',07

'.00• l." 1.04 '.04 ,.o, 1,03 '1.02 I.O~ 1.01 ,.o,"07 0.97 0.96'0 ,... 1.00 O... O... 0.911 0.98 0.97

D.93 0,920.94 0.93 0.93BI O." 0.95 0.95 0.95 0.94O." O." 0,0912 0.9:1 0.92 D.91 D.91 0.91 .... UO

BJ 0.19 O." UI O." 0.87 OA7 0.151 0,86 0.86 0.86.. 0.85 O.SS 0.8S O." 0.84 O." O." OJ' . 0.83 0.13IS 0.82 0.82 OJ' 0.82 0.81 '0.11 0.11 D... D... O.".. ..,. 0.79 0.79 0.79 0.78 0.78 0.7' 0.71 0.11 0.1717 0,77 0.17 0.76 0.76 0.76 0.70 0.75 0.75 0.75 O.l!

0.73 0.73 0.73 D.n 0.12SI ..,. 0.74 0.7. 0.74 0.730.71 Q.10 0,11»g 0.12 D.n 0.72 0.71 0.71 0.71 0.71

0.70 0.70 0.69 0.69 0.69 0.69 0.69 D." 0.68 O."21 O." 0.68 0Jl7 0.67 0.67 D." 0.67 0.66. 0.66 0.66:ti 0.66 D." 0.65 0.65 0.6S 0.6' O." 0.64 0.64 0.642J 0.64' 0.64 0.63 0.63 0.63 0.6.1 0.63 0.63 0.62 0.6224 0.62 0.62 0.62 0.61 0,61 \ 0,61 0.61 O~, 0.60 . 0.602S 0.60 0.60 0.60 0.60 059 0.59 8:l1 O'" O~O a.s':l6 0,58 ' OJ' OJ. OJ. o~. OJ' 0.S7 OJ7 OJ727 0J7 OJ7 OJ7 0~7 O'" O'" .... O'" .... ....21 OJ' 0.5s O~, OJ' OJ' o... O... O... O.... ....29 O...• O... o~, O~, OJ' o~, OJ' .,u OJ' OJ'3D O~. 0.52 o~. o~. 0.l2 O~. O.SI :* O~' OJIJI OJI OJI OJ' OJO .... OJO O... OJO OJO32 0•.49 0•.49 0.49. .... 0..0 0,49 0.49 0.49 O... O...IJ O... 0.48 0.41 0.48 .... "'7 0-47 0-47 0.47 0.4734 0.47 0.47 0.47 0.46 0.46 0.46 0.46 O... 0.46 0.46

'" O... O.... G.4S .... O.., O."S O.... ..., O.., OM3' 0.44 0.44 0.44 .... 0.44 0.44 0.44 0,44 ',43 0,43J7 0.43 O... 0.43 OA' D.4' OA' O... ....2 0.4% 0,4%31 0.4% 0.42 0.42 Q.42 0.4% O... 0.., OAI .... '0,41;lO 0,41 0.41 O.. , O.. , O... O... 0.<0 OJO ..... .....0 D." O... 0.<0 O... 0.30 OJO OJO 0,39 OJO 0.30ti 0,39 0.30 OJO O.JI 0.31 O"" 0.31 'JI 'JI OJI.. O.JI 0.01 0.01 0.37 .." 0.07 0.07 • .07 • .>1 0.37., 0.37 0.37 0J1 OJO .... OJO OJO 'JO O.JI t.J6.. OJO OJO 0.0' O.» 0.3' 0.3, .... ..» O.» 0.3'., 0.3' 0.0' 0.34 • .34 0.J4 0.34 .... '.34 0.34 0.34.. 0.34 0.34 0.0' 0.0' 0.3' 0.0' O.JJ O:JJ O.JJ O.».,

0.33 O.» O.» 0.0. 0.3' 0.3, 0.3. .... D.n 0.3.•• 0.0. 0.3• 0.32 '.32 0.32 0.0' 0.31 0.3, 0.01 .....0 0.0' 0.0' 0.01 DJ' 0.3, 0.0. "JO OJO OJO ....3D .... .... OJO O.JI .... .... D.Z9 D.Z9 ..,. ..,.

B. O. iiel E.-Niím. 248

&l.-PREStON DELANHtDRtDO CARBDNICO

14 oetutire 1981 24023

61.1.-Principio

Medida de la presión gl560sa d. un reciplentt cerrado: herm6ticamente mteiant. un.perllta .decuado que disponga de un m.nómetr~.

61.2. t. - Equipo manom6trico que conste de las siguientes partes:

51.2.1.1 .-Agu)á perforadora del tapón o .del recipiente. hueca. con v61w1a que obtureel orificio de ent!.8da de gas a la misma y sistema estanco de adaptación al tapón o recipiente.

151.2.1.2.~- Conducto que ponga en comunicación la aguja cOn el menOmeuo.

51,2.1.3.-Man6me'uo que permita lecturas de hasta 10 Kg./cm.z

61.3. - ProcedimIento

Mantener ~ muestra en reposo durante dos horas .. ménos. llevar l. temperaturaaproximadamente a 2O°C y perforar el tapón O el recipiente según e{ caso. Abrir Ia- válvulacon lo que el g85 pasa al manómetro. leer la preai6n que lndic. e1lTianómetIo.

61.4.-Expresi6n de/os resultsdos

Le presión se eKpresara en atm6sferas a 20°C.

., atm, • 760 mm. de Hg. "'''1.034 Kg./cm,z.

52.-ANTISEPTICOS y ANTIFERMENTOSIM{!todo microbiológico)

52.1. - Principio

Comparación del desanollo, en vino·problem<' y testigo, dl! las levadurM COntenidas' I:'nI láminas de agar-extratto de levadura gluCosado, tras permanecer sumergidas 4S horas

en ellos.

52.2. -Material y aparatos

52.2.1, - Hematímelro.

52.2.2.- Cajas Petri.

52.2.3. - Portaobietos rayados en zig-zag.

62.2.4.-Varma en forma de U de uncs 0,5 cm. de diámetro.

52.2.5. -Tubos de ensayo -aforados a 10 mI.

52,2.6. -Tubos capaces de-contener portaobjetoa normales de microscOf:iia.

62.2.1.-Autoclave.

52.2.8.-Micro~cop;o.

52.2,9.-Estufa de cultivo

62.3. -R~Úvo$ y medios de Cullivo

52.3.1.-Soluci6n acuosa de etanal de 6,9 9./1. (un m!. de esta fiolución combina 10 mg.~W~ .' .

52,3.2.-Mosto de 10°-86 pep1onado all por 1.000, Esterilizar en autoclave a 112°C du·rante 20 minutos.

52,3.3.-~gar-ex~rapto de levaduraitlucosado:

Extraco de levadur ,............................. 5 g.Glucosa ' ~ ••• ,.... ••••••••••.••••••••• •••• 20 g.

·Agar..••..•..•..••.•••••••• ,................................. 17,SgAgua destilada lO : 1.()(X) g.

Una, vez fundido en bario de agua, distribuir a ra:tón de 10 mI. por tubo V esterilizar• pooe durante 20 minutos. '

62.3.4.-Cepi de lev.dura: Saccharomyces bayanu••

152.4.1.-P~6ndel vino problema: SI le ck*I de SO:z1lbnJ al superior a 15mg./I. tproceder a combinKi6n de( exceso mediante .. eofuci6n lCUOI8 de etanal, dejando transcl.l-·rrir 24" holas. deldeau adición. Comprobar den~ que el contenido de so. libre ea Infe-rior Ii 15 m.JI. . '

'&2.4.2.-.Preparacl6n del vino testigo: Utlliz.r un "'no de caraet8l"T~icas lo más parecida.posibles al VIlO problema, especialmente In-grado Itcoh61fco. Respecto al SOl libre se pro­-_como en 52.4.1.

&2.4.3. -Siembra del .gar y formación de la pelicula: Una vez fundidos en baflio de agua101 tubos con 10 mi. de agar-extracto de levadur. glucosado Vcuando la temperatura bajaI 45-50"'C, sembrar, tras conteo "con hemetfmetro, 5 millonee de levaduras/mi. 150 millonOlpor tubo} de un cultivo de 72 horas en mosto peptonado de lO' Bé.

Tras homogeneizar rAipidamente 101 tubos sembrados, verter su contenido sobre los por­taobjetos rayados, situados en posici6n inclinada, apoyados &obre un brazo de la varm.en U. colocada dentro de la caja Petri; el agar fundido deslizará uniformemente sobre la -su­perficie de cada portaobjeto, formando una lAmina de &gIr. Acto seguido colocar horizon.talmente los portaobjetos apoyamfo sobre lo:ldos brazo. de la varilla en U y dejar en reposodurante un par de horas.

. 52.4.4.-Formacíón de COlonias: Asegurada t. solidificación del medio sembrado, Sil.mergir completamente los portaobjetos en los tubos que contienen el vino problema y et vfnqtll!lS1:igo. Tapar no herm6ticamente los tubos y.mantener en la estufa de cultivo a 25'Cdurante 4B horas.

Finalizado este perIodo e6minar el vino de los tubos, dejando los portaobjetos en el int..rior de ellos e~ contact.o con el aire y a 2S°C. .

62.4.5. -Observación micrpsc'6pica: Observar las I4minas Inmediatamente despu6s dillcedas dtI vino. Si.no se aprecia desarrollo de cofonias Incubar en estufa a 25'C y repe'l1rla observación mk:rosc6pica 8 las 24, 48 Y72 hotn al • necesario.

En los vinos de alto grado alcohólico puede retrasarse aún mAs el desarrono de las cola.nias, como.se comprueba en el vino testigo.

52.5. -lnt8rpflJtad6n de 10$ resultados

La presencia franca de ~olonias indir.a la ausencia de antisépticos yantifermentos,

52.6.-R~erencilJs

1.-Método biológico español-argentino para la investigación de la pf'e$encia do anti:s6p.tlcos en los vinos. E. Feduchy An. IN1A. Servo Tecnol. agro N2. 1975.

VINAGRE

17.-ACIDO ACETICO DE SI1\lTES1S

1!', t-Prindpto

Separación del éddo acético mediante elltraccibn cen éter isopropilico y medida de IUcontenido en C'4 mediante espectrofotometría de centelleo liquido.

lt2. -Msreriel y aparstos

17.2.1. - Pi?Bta automática de 100 Ilt

17.2.2.-Pipeta aforada de: 10 mI'.

17.2.3. -Viales para conteo, de vidrio con bajo contenido en 'potasto, dotados de un s1Iotema de cierre de material-plástico_ para evitar el ataque delllcido acético.

17.2.4.-Extractor líquido-liquido en conti~o, 'con capacldad para.2 litros de muestraV 3,5 litros de.disolvente·orgánico.

17.2.5.-Columna rectifieedora de 1 cm. de longitud y 3 cm. de diámetro interno, reU.na de anillos rasching 10,7 x 0.4 cm.) con camisa aislante cerrada al vpcio.

17.2.6.-Columna.de destilaci6n fraccionada de 40 cm, de longitud y 3 cm. de diAmetroInterno, rellena de anillos tasching 10,7 x 0,4 cm.l con c:pm!$8 aislante cerrada al vacio yllave de salida a k>s 20 cm.

17.2.7.-Espectrofotómetro de centelleo líquido.

17,3.-Reactfvos

17.3.1. -Eter isopropilico.

17.3.2.-Acido acético de/síntesis con riqueza supertor al96 por 100.,17.3.3.·-Tolueno marcado con C14•

17.3.4.-Solución de 8 g./I. de butil PBC en tolueno para centelleo,

17.4. -Procedimiento

17,4,1. _ Extracción y purificación del ácido -acético.

Extraer 2 litros de vinagre de 5 grados acéticos lo la cantidad correspondiente s¡,se tratade vinagres de otra graduación) en continuo con 3,5 litroS de éter isopropílico. durante 24horas al menos con lo Cjue se obtiene un extracto que debe contener aprOXimadamenteel 70 por 100 d~ ácido acético presente en e! vinagre.

24024

.L

14 oetu6re 1981

"B. o. ({el E.-Num. ·246

Eliminar e( disolvente por destilación éñ fa columna 17:2,5. y rectificar el residuo en litcol;JfTlna 172.5. Recoger, por la sJiída situada en el centro de la columna, la fracdón qúe-deslila d 114" despreciando fas primeras gotas del desiilado. El destilado debe tener uha ri­qL:eza de ácido <lcético mayor del 95 por 100 en peso. .

17.4.2. M,:cJida espectrofotom¿trica.

174.2.1 --Fondo: Erl un vlal se introducen 10,59 de ácido aC~lico de síntesis y 10 mi.de liqtjlao de_centll¡:~() 117.3.4.1-

1742 ..2-.·- Mu(!~tra preblemó', Introducir, en los v"ales de conteo, 10,5 g. de cada desti·lado y 10 r:--f. de IiQu~(j::> de ce.,leHeo ¡17,JA.)' Preparar al menos 2 viales por cada mue5traprol:,:",~'a y '.j~O para el fondo de acético de 'síntesis. Cada vial se lee 300 min'Jtos comon;in·,,cl'o.

Una "'Ó'z o:-fe~t1Jado el conteo aPladir.a cada vial un volumen de patrón interno 117.3.3.1q'Je dP. ;¡pro,\ifYladJmente 40.000 dpm. y contar durante 4 minutos.

17.5. - Cálculos

Actividad especifica (dpm. C14'g. de Cl :: Al - Al.

siendo:

3. -GRADO ALCOHOLlCO fm6todo .reom6ftieoJ

3.1.-Pri'lcipio

Medida directa del orado mediante la ut~ización' de 'un alcohómetro.

3.2. -Material y aparatos

3.2.1. -- Prooota cilíndrica cuya& di~~ns;",nes mínimas serán de 30 mm de diámetro inte..rlor y 320 mm de allura,

3.2.2. - Termónietro contrastado, gra':uado por lo menos en 0, 1 grados.

3.2.3. -Dispositivo que permita mantener v.:!'1i(la; la probeta.

3,2.4, -Alcohómetro graduado en d~,,¡.·"8S, CM ulie distancia míaima entre dos gradosconsecutivos de S mm (masa df,l areómetrO mavor c1~ 6ú a~. El coefidentp. de dilatación cú·bica del vidrfo empleado debe estar CbmprE'ridido entrl:l OO20סס,0 y .OO25סס,0

3.3. -Procediiniento

Al = --,- cpm IM_J _

0,4 x El x 9 x e

E ,lEficacia de la muestra)epm (M + 'PI - epro IMI

dpm.lPI

•

Colocar en la- probeta la cantidad nect!~¡:lfia de alcohol. A¡::tar par... uniformar fa tempe­ratura (que deberá ser lo más próxima posible a la dal calibrdJeo c!,g! ::llcoh6metrol. Un minu· .to después de hacer la lectura del term6metro. Actirar el te,móme~ro. introducir el alcoh6­metro lque debera estar bien limpio y desengrasado) y desplé¡ de l.m minutO' de reposo ha·cer la lectura del grado aparente sobre el vastago del alcohómelro. Hacer al menos tres lec·turas del grado alcohólico ·aparente. sirviéndose :si es preciso de. una !u~a•

3.4. - Cálculo

El. (€ficacia del fondol ." _"cp"m=r,-F_+.-p,-J=--=cp~m",-,r,-F,-J_dpm (PI

g :: gramos de la mtlestra o fondo en el vial.

e "" gramos de (icido acético por gramo de muestra o de fondo.

cpm lM + P) == cuentas pór minjJtos de la muestra mas el patr6n.epm IF + PI + cuenta.. por minuto del fondo más el patrón.

3,4.1. - En el caso de utilizar a!cohómetros de 15°C.

Calcular el grado alcohólico a '5°C, utilizando la tabla 1.

. Calcular el grado a!c:;.hólico a 20°C, utilizando la tabla 11, afladiendo al graao alcohólicoap¡¡rente a 15"'C la corrección correspnndiente. ~

epm (M)

epm (F)

dpm IP)

cuerltas por minuto da la muestra.

cuentas por minuta del fondo.

desir,tegraciones por minuto del patrón.

ALCOHOLES TABlA PRnlEllA DE Fl:EIIZA REAL

2. - BASES NITROGENADAS

2.1.-Pdncipio

Fijar:ión del amoniaco '( las bases nitrogenadas mediante ácido fosf6rico, seguida de unaprimera destilación. Liberación del amoniaco y las bases nitrogenadas con hidr6ICido sódico,segunda destilación y posterior valoración con écida clorhídrico del segundo d:stilaclO.

2.2. - Material y Bparatos

2.2.1.-Malraz de 200 mI de capacidad.

2.3.-Reactivos

2.3.1.-A~idofos16rlco d ... 1.34.2.3:2.-Soluciól'l de hidr6xido sódico al 10 por 100.

2.3.3. -Soluci6n de ácido clorhldrico O,OlN.­

2.3.4.-So1ución de rojo de metilo.

2.4. -procedimiento

En un matraz de 200 mI, introducir 50 mI de elcohol, ldlcionar 40 mI de agua Vdos go_tas de ácido fosfórico; destilar y desechar los primeros SO' mI. Enfriar el matraz y al residuofrío.adicionar 2 mI de solución de hidróxido sódico. 10 por 100 '620 mi de solución d~ h¡~c1r6xido sódico all por 100 si hay proyecciones). Destilar de nuevo recogiendo alrededor de7 mi de desti:ado en un tubo de ensayo, en el que previamente se han introducido 2 mI deagua y una gota de soludón de rojo de metilo, procurando que el destilado caiga en el fon~

do del tubo con la ayuda de una alargadera. Valorar I cominuación 'con solución de ácidoclorhídrico O,OlN hasta que el indicador vire a rojo. .

2.5. - Cálculos

Nitrógeno (mg de nitr6geno/litro de etanól) .290 nlA

liendo:

A • grado a1cch6lico de alcohol.n ca volumen, en mi, de soluci6n de ácido clorhídrico O,OlN gastados en 'la vaforacl'6n.

2.6. -Referencias

l.-CODE>< OENOL.OGIQUE INTERNAnONAL. O.I.V•• 1978, p6g.17.

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14 octubre 1981

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~4032 n ocfu6re lOO! B. O~ (leI E·.-Num. ~48

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".0 D.... ",0 ~... ,... 0,9) ".. 0,011',1 '.011 ".' .... ".' ..... 17.' 0,01.... 0.04 ".. .... ".' O,OS' ".' .,0'.." .... 0'1" ••04 ,." ..... ,.,,, ..".... ..04 0'1.' ••04 ,... ..... ".- 8,01 \

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"'.' ••04 lo.' 0,'04 11,' O.... ".' O."".' 0.04 lo.' O'" ".. ..'" ".' 0,01.,.. ••04 lo" .... "" ..... "" ',01

".' .... lo" .... ".. ..... " .. 0,01.... ..... OO•• .... ::: ..... ::1 .0,01• ;6 .... OO.' ••04 .... 0.01OO., 0.04 •.7 0.04· ".' .;00 ".7 ....".' ..... oo.' .... ".' O." ".' ',jI'1M .... lo.' ••04 ".' 0,01 ".' .."06.0 ..... ".0 o... ".. 0.01 ".. '.01

".' .... ".' 0.041- :::

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".' D.... :;:1 .... ".. .... ;::1 •".' D." .... T4.' :~ •-'7 D.... ".7 D,D6 ".' 'M O.... D." .... .... .... .,DI "" •".' .... .", .... "., .¡;¡ '''' •"". l.

ANEXO XIr.-TOMA DE MUESTRAS

1.-TOMA DE MUESTRAS DE SUELOS

u.~Objo'"

B objeto de JI tom'l de mullft'llM obte".- di un JUeIo una mutitrl ¡ep,....tlthii delmIImo pira poder determinar a j)lrtir de IUI tul ell'Ieterfldces ffIicII '1 qulrricee.

1.2.-'lmblto do .pI1coc/6n

fa1e m6todo de toma d.m_.iI>lIca" 1 _loo dpao cllmuoolrOO cII-l'Il"'n poro fe_, pr_ci_ odofoI6GIcM. lIInido4 IIC.

f.s.-D.nnic~

MUESTRA SIMPLE: ContIcIId cII~ _ cII .... P'ItI """""" clllIl _.

MUESTRA COMPUESTA: CIntIdecl cII JllOdudo di un ;....,_.por..- y hO­mogenoIzación ele VlIriaa ....... ""ploo Y__..... oon .04'_'IUficlente, '•.CW MIelo.

MUESTRA PARA EL LABORATORIO: CocII uno cII r. porl.. obIenldoo por rocIuccI6nde" muestra compueetl.

•

U.-Pro__

Tomo do muaolt.. poro foitlIded lAneo 11.

Tomo de muaolt.. paro proo¡>oecl_ adeIoI6g/eoa IAnexo·21•

Tomo da muootrao poro ooIInIded lA_ 31.

U.-PropNaci6n dolo mu._ _ all_

Para formar una 'muestre compuesta, las muestras Itmp_ SI I'feogen In un ptAstico V18 mezclan de la siguiente rNnera: se cogen fuertemente dos Vértices opuestos del plllsticoy le estira de uno de ellos de forma: que el aueIo ru~e hacia' el otro. Después se estira deést8 pera que kI muestra gire en sentido contrario. Se repite el proceso con 108 OVOI doaVértices. Volver 1lI realizar el proceso hasta conseguir una mezcla homogénea.

Una vez homogeneizada le muestra compuesta .. extiende tobre ellllkt1co formandotina cap! de 1 cm de espesor que 68 dividirá en cuatro cuadrantes. Se descartan cuantJta.tlvamente 00s de los cuartos situados en los extremos opuettos de' una diagonal. LOI otrosdos se mezclan por el Procedimiento descrito y 18 wefven • cuart8ar. El procedlmlentctle repjJe huta obtener la cantided de muestra compultta que se ctes..

El tameno de la muestr1: compuesta estarl en funcJ6n del número de muestras parl ellaboratorio neoesariu, .. como de las prueba y an6l1als qUe .. pretenden realizar.. Preparada" 1nlJeItrIl compuesta M.dMdIrfI 6Itta en el nOmero de partes necesarfaleonttñuyenda cada una de tilas u1\8 mu..... para ellaboratorJo.

'Si las mll88tral~ estuvlesen demas'-do Mmedu perl mpeelr la preparaci6ñ de 18muestra compueata por el procedimiento Indicado•• delec8rln previalT\eflte.

1.7.-CMrtlM y.tiquetJKlo de fw ~Vls. tú mutJ$tru

Una Ve! obtenidas las muestral pel'l el t8b0ratorio le fntroduclrlm en las bolsas 14.2.1.etiquetando ceda muestra (••4.1 para su perfect8 identificación reflenénclolas con tinta inde-­l&ble al ag'ua (puede ser la tinta'ordinaria del boligrafo a'base de glicerina). Se confecciona..Iftn dos etiquetas iguales~n el modelo de la fig. 1, Introduciendo una de ellas en el in­terior de la bolsa, doblada en dos 'p1iegu.., de modo que la cara escrita quede protegida enel interior. Si la muestra 811' relativamente seca no es predao tomar otta. precaucioo8l•pero si est4 muv húmeda puede colocarse dentro de un trozo de p1éstico para que no, semoje: De todos modos debe situarse una segunda etiqueta en. el nudo o cierre de la bolsa•

El cierre se puede conseguir anudando l. parte superior de la bolsa con alambre plastif.l.­cado uno de cuyos 8ktremos se utiliza para ligar fuera la 2.. etiqueta o bien grapando 1&bolsa o atando con gomas o InelulO bramante. ' " -

U. -Bjbliogmlo

1.-Gufa para la descripción de perfiles de suelo. 2.· edición 1977. FAO. Roma•

2.-Quantitatlve and numeriClI methodl ro soil classifiC8t~n and sUrrey. 19n R. Web..ter &d. Clarendon Press. Oxford.

3"-$0j( Tall"onomv 1975. U. S. Depar1lTletlt Qf °Agricufture SoU Cooservation ServleeAgricultura Handboak no· 438.

ANEXO A

AN~XO JI-TOMA DE MUESTRAS PARA FERTILIDAD

1.1. - Gen~ralidMiu

Oos cIases de muestras pueden diferenciarse en el muestreo, las afteradás,- pattr llIn~lisis

qulmico y mecánico del luelo y las inafteradds para la medición de propiedades f1sicas. En elptln1er caso 81 po8ible la formación de la ~ubmuestra o muestra compuesta.

II operación de toma de mueatraa comprende las siguientes operacionee: fijación deln"'mero de l'QUestrulimple., selecci6n de( tipo de muestreo, profundidtd,de muestreo Vpósible submuestreo.

1.2.-NútnllO. fl'HMStr..N slmpIH

El oomoro cII """"'- oImplal • tomar deponcII d. la _iabUIdod de la propiadad •medir y del grado' de exactitud deHado. Para eonocer .. VlrJabiHdad seria necesario rea:Izar un muestreo previo pira estimar la varianza d. la población de acuerdo coíno .. Tndl­ce • continuaei6n. De no disponer de lite dlto r'Io ," pueden dar valores e'oncret08 parI eln(¡rnero de muestras 11'" 11 blen ra lltimaci6n ..... tanto m6I exacta cuanto mator tiel n(nnero de las miIrnaI. .

En un muestreo al a:za( en .. que te hayan extraIdo n unidadel, .. obtienen estimaciO­nes de la media y Yvariania v (y) di la med" por

In donde Vlller Vllor observado plrllI unidad J. la estImación de la varianza de ta medIapermhe el c61culo delln1ervIIo de confianza de la media por la siguiente relación:

lSIL-y±ICI a" I 1/2n-I

In donde L• el rnteM!llo d. conflanzl, t ....vañabJe de Student con fñ-Il grados da tI'.bertad, ct • el nivel de probabUldad del Intervalo y i " la expresión correspondiente a t2J. ..,

SI se tIene una estimación de la varianza de muestreos previos de la poblaci6n, entoheee• puede estimar el número de porciones necesarias en futuros muestreos para obtener una·prooi.ión dod•• IIIn~ cII probtbiUded dotermlnedo•• portii da l•• ecuacion.. l2l y 131:

,1.4.1.-PaIo • 11m.... poro _ un --""~ on 11 ouoIo.

1.42.-CuchnID dll odef6Iego o ""'~.1.4.3.-8_ cII pl6st1<o oIn ......,.:. _ ..~ ...... _ portIckne de

loo ejempl ele mu_ poro 11~.

,...4.-Edqu llIg. ll.

M.B.-Cuerda o grapadofo.

M.8.-CInla'-'1.4.7.-Sonda.ocanll_ ""'" -...,otlIeWoo (1Ig. 21.

, ·1.4.8.:"'Sond.. modelo aUllrallono (1Ig. 31.

1.4.9:-801... portapordonoa. Hañ cII .... cII utI1zoel6n OnFol. prorerét..,_cII_""ial p16stico flOJObIe.y cII dimontlon..1dtouodea ollomallo cilio p0rQ6l1oo

111 V-

12lvIYl- I~I

n1: V,1-1

n

.L

8. O. 'del E.-Num. 246 14 octulire 198! 24033

1.3. - Ticnica rJe muestrN

2.1.-Gtn,ntlidsMs

ANExol-TQMA DE MUESTRAS PARA PROSPECCIONES EDAFOLOG.ICAS

.

.

1

I I I I~ • '-0",0-.TO-.r,~;~o""-oT'-er, "~,;""'8';r-:~,..,~,,,,?,.-;~....,~,...

Pnlol horrzontes m1xtOl o de transición ee mucho m6s preciso tomar dos muestr;s1ndependlentes de la 'rINs alslat1al consideradas como Uno 1610 de sus componente!, Vmediante ~I cAlculo ~erior atribuirle un valor promedio; qua obtener inicialmente u!"lamJestrI media mediente la mezcla en lit debidN proporciones de dos materiales de ordina..da con propiedades muy distinto.

EspectIl atencl6n \'Iay que prestar" muestreo por 'separado de: 1) Eflorescencias super­fIdaI... 2J las costras, ~) Los n6dulOl y concreciones, 41 Los Ilm~es abruptos entre hori.. ,lOIrtU Y6] Las «ten9~ y «d"'9it~cioneI entre hQrizonten.

.Cuando te trata di determinar dertoI contrIIt.. bruscos tri la composición, al pasar deuno I otro horizonte, como IOn, 101 caIOI del CClmblo textural .bruptol V del cartetercplltoc. (en los Palexevatfs. Pelendlldtl. ,.leargidf, etc,) en 1.. normas del sistema «50ilTaxonomYJ o cu.ndo • trata de definir algunos horizontes diagnósticos, cuyas propieda.det tienen que alC8nzar.ciertos v.lores en ciertos espesoras (por ejemplo el horizonte «Argí­lico. tiene q~ alcanzar auflclente 1neremento en la proporción de arcilla, el 20% mAs quelot,eluvTales, en sus 30 cm superiores)! en tales casos será preciso dt ordinario atenerseI la. especificaciones del tema implicado para poder realizar el muestreo de mooo conve­niente, En general una toma de muestras -cada 2,5 cm luna pu.lgada inglesa) es la normamAs exigltnte.

2.2,2. - T6cnica según interveJa' fijos.

Este tipo de muestreo es recomendable cuando SI Vate de conoceF la variación cont1.nuada de algun componente, como la ercilla. los carbonatos etc" a fin de estudiar su dis..tribución ene! perfil con detalle suficiente y siempre supondrá la toma de un numero mu­.cho mayor de muestras que en el caso anterior. ya que k)s intervalos de 105 espesores hanele ..menores pues si no estos datOl carecer1.n de signifiClciOn.

ninguno2O-«l30-50

O-ID0-200-30

Profundidad da mu..'''''Superficili/ •Profundo

cms. an.r.

n = 1~

Prader.sHerb'ceos Vfrutales en no cultivo·Frutales I.brados

Cuhlllo

La.cantidad de porción depende del material usado _para al muestreo, siendo importanteQue cada uritd8d contenga aproximadamente la misma eantidad de sue'o e igualmente re­partida entre todo el intervalo que constituye la profundidad del muestreo fig. ("1.

ANEXO B

La toml de. muestras debe ab¡orcar ti totalidad del perfM es decir tanto los hon"zontupríriclpll/rls COfl'lO los',vbhon"zonk{ y horizon~$ de tr~ns;ci6n.

Es de le !"layor importancia el'petfecto conocimi~to y descripci6n det perfil del Sl'elo~ra la loma de muestras por lo cual previamente ¡e rellenaré una ficha descriptiva del~(véase modelo adjunto),

Úna vez est'Jdiados y descritos en It fi~ha.198 horizontes y subhorizontM V det.rmina~da. Ilgun.u. de sus propiedades medlante .",lisia de ceracterimi6,n r6pida en el Clmpo seproceMré a ia toma de muestras, ' .

'. ·Le.MUestra dabe P~CiCeder Jlempre 1f. C8\leatal I ter .posible,. En caso de obtenerse poraondeo debe indicarle. .. . .

. En la tome de mllesttls hay que tener en cuenta ciertll precauciones como es el casoeJe suelos que contienen Mas proporcio~de. ""'&mentos gruesO./I. Es el caso de muestras·en terrenoslObra terrazas fluviales OdlWivadOs de colu'lis de pie de~monte. En estOl CUOI.. h'ce n~ri8 unasep8faclón de partes gruesas en el campo por tamizado de 11 tiirra~ que se recoge para su posterior enlJlo 11 1.l?or~orio~ ~ ~ es preciso anotar la pro:porci6n de elementos gruesos·rechaudot, at comO. su naturaleza, tamafto, caraeterfsticas

·lItol6gica. Vmi!'1eralógicas ya que en CIS9 contr~rio nO$ veremos privados de,esta Informa·tt6n sobre el materiel madre. .

EN seteceión no ha de ser muy precisa pucfit;ndo .reti.rery los elementos de cierto' ta­me!to, como los mayores da un cm" mediante una simple criba, quedendo para'ellabora·.torlo la labor de separación restante. . ... .' .

Junto cOn las muestras aebe enviarte 11 leboritorio una rlltl detallada de 111 mismasque ""',,ronda loo algu;""", ep!grafOl:.

Mu.~tta F«hII F'rofunrlk/,J HorIzQnr. C1asifi~i6n lC!.follJg¡~ ObIfrvIcionll.-!!.::-~ Cm.· ;.p~"",,_. . _

--'-'-- + 1. en donde O es: el limite eipeeific8doD'

En el caso. d. no poder aplIcarse 101 CISIcuIos Interiores SI definlr6n prevfamente. d.lC,,!erdo eon criterios edefol6glcos O de prietica agrlco18. ',eas homogén881 dentro de lazona en la 'que se cwltiwt una misma variedld, 'om6ndose dentro de cada in. definida. hg.

mog6nea por el suelo y el estado del cultivo. de '5 • 25 porcioMl.

De acuerdo con criterios edefol6gicos O de práctica agrícola se ~efinir'n previamentl'reas «homogéneaslt.

Dentro de cada 6rea hómogénee se debe establecer: tipo de muestreO y profundidad delmuestreo.

1.3.1. -Tipo de muestreo

El tipo de muestreo deb8 cumplir 11 propiedad de ser .!azar, es decir que todas las post·blet muestras simples que se puedan tomar tengan la misma probabilidad de ser elegidas.

En el muestreo simple al alar la elección de los puntos 8 muNtrear se realiza por refe.­rendí I unos ejes eo:ordenados fijados en 11 'r88. las coordenadas de los puntos se ohtte·neo poi' tablas de números al azar y como unidad pera cade eje resut1:a suficiente al consi·derar 1/1000 de su longitud. . I

En el muestreo estratificado al azar, la superficie so 1U~\ljde en ","s de igual forma VIxtención, generalmente cuadrados. Dentro de cadI uno de ellos le elige .1 azar un mismOnúmero de puntos,

En ti caso de ser "Arees hornog6neu de pequeftl extensión O cuando no H recu~ auno de los dos muestreos anleriorel el procedimiento consistiré e:"l efectuar un recorrido enIlg-zag .. tram de la Plrc*a y tomar Unl muestra limpie cada cierto número de !sIsos, fija·dos eltoi de acuerdo con la extensi6n de la parceia y ti númerc. de mueitr.. simples a to-­mar.

1.3.2.-Profundidad de muestreo

1.1 profundidld det muestreo·viene det&m'\lneda por la de enl'lIzamiento. SI la. rarcellegan hast. un. profundidad grande del lUelo le. tomar;tn m.teItras simpleI • diferentelprolundida_ m.",I." muestr.. simples parOIaIeo da d~erenl. proiuncfldad. Como cilrIoorientatlvn ofrecemos.... siguientei:

2.2.-7:lcnice d. mu.streo

• 2.2.1. - T.6cn;ca gen....

Dtntro de d.de. horizonte'rtPrttentatlvd del ped'lOn. marea eon" cuchiHo un reet6n­auto cuyOIllmhn superior e inferior coinckien con los del hoIizonte y-seguidamente .. pro­CIde 111 vaciado·hornog6neo de este reeténguto en toda ~ .Itura hlsta el pelO de mulltrl_oo. En el caao de qu.... IUlJ'I'ltar JI raprisenllllividld dvllI1\IOIl1eO " repe1ItA 11CIjltrlIet6n l1li dIaIinto' frent.. lit JI 01"01110

14 oetu6re 1981 B. b. 001 .E.-Num. 246

I

0.. 11&--'_._ -..,-

.......:INt.•....................--jj¡l-

V·v-eon- ,.........'lOMA DI MUEITM COH'AlA

...----- ....,," ..'_f.

IDNDA DE MOO!LO AUI1'IWJANC)~10cm.

SONOA DE DORlE vAAdijm""Q 'l>crn.

FIGURAS

I."-btudlo do con/tol

Conocido ~lant. el Estudio dttellado. el nivel o ros niveles de salinidad de Ji zonaIXIminada se efigen puntos de control, eatrat6gicament. situados y en número dependientede CIIdI CIIO particullr. En cedI punto de controt • 8ItabIece un cuadrado de e x 6 me­troI en 101 que periódicamente se efectuar." tomes de rnuntl'll. Con carkter orientativo..dt'" Ju alguientea:

1.3.1.-A la profundidad do 0-25 eme. 9t_ que lO mezclan PO" obtonor~na.

'.S.2.-A 11 profundidad de 20-50 CI'nII, 6 tOma que. mezclan pll1I obtener una.

1.3.3.-A ti profundidad 50-100 Cmt, 15 tOrT\ll que se mezcian par. obtener una.In .. ellO de que haYI eftorekenclH ..rVl... mu8JI"'" por eeparBdo y se rttfrIrtn

1ft.. do prooodor o lo'- do_. dooc:rito onteriormente.

SI .. tienen If"l euentl 11 distribución de lea c:omunidades veget" hmófil.. en .fa _~el6n de 101 puntos de muestreo .. aumenttrl eonsld.llblemente 111 reprlllOtalMdld de ...te, tal como al .. tienen en cuenta 101 criterios expresa~ en 1.t.

ANEXO e

.s. DptrI tomando mulltm de calieatu del aueIo con una Intensidad de tomas que ....Ita con el nIYeI de l81inidad encontrado en ti estudio de reconocimiento. Como norml ge.htf'Il puede _ablecerll que el número de calicalll • aMIiz.r oscill entre 5 y 20 por cada1Ob_r_. .

ANEXOC-TOMA DE MUESTliAs DI! SUELOS AFECTADOS POR SALINIDAD

al.-Estudio do fOCOM_

Po.. 4eIrm~or u'l" ..... -me... hocen tomaa de mu...... •.. porfiles del ouolo. delorden de 1 • 2 por 100 htc:di~. junto con'CUItfO tomas de mueatral del horizonte auper­fkialall d1stllncia de ~noI veinte metroI, In tomo a cada calicata.

Loo mu...... 00_ de loo horizonteo do codo perfil .. onollzon _.6domento. Loo• COnseguidas de los horizontll auperfleiM~ en torno ... perfil .. mezclan plr' ob-

ton.. unaoolI.. .