红细胞稀有血型 2013-08-27 朱自严朱自严. 稀有血型的定义...
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红细胞稀有血型红细胞稀有血型2013-08-272013-08-27
红细胞稀有血型红细胞稀有血型2013-08-272013-08-27
朱自严朱自严朱自严朱自严
稀有血型的定义稀有血型的定义
• 当一个人的血型需要在一千个人中找到一个与他当一个人的血型需要在一千个人中找到一个与他
一样的血型时,我们把这个人的血型称为稀有血一样的血型时,我们把这个人的血型称为稀有血
型 型
• 稀有血型与其他血型一样不会对你产生任何的问稀有血型与其他血型一样不会对你产生任何的问
题除非你需要输血题除非你需要输血
各国对稀有血型的定义各国对稀有血型的定义
• 美国 美国 1/10001/1000
• 英国 英国 1/200 1/200
• 荷兰 荷兰 1/100 1/100
• 日本 日本 1/100~10001/100~1000
• 巴西 巴西 1/1000 1/1000
• 德国 德国 1/1000 1/1000 • 法国 法国 4/10004/1000• 以色列 以色列 1/2001/200• 中国香港 中国香港 1/600 1/600 • 中国 中国 1/10001/1000
最具临床价值的稀有血型最具临床价值的稀有血型
1.1. 高频率组抗原高频率组抗原2.2. 具特定表型组合的血型抗原具特定表型组合的血型抗原 血型系统的无标志细胞 血型系统的无标志细胞 Rh Rh nullnull ,O ,Ohh
同时缺失几个免疫原性很强的血型抗原 同时缺失几个免疫原性很强的血型抗原 E- M- JKE- M- JKaa-- 缺失某一血型系中一组或大部分血型抗原 缺失某一血型系中一组或大部分血型抗原 D--,D..D--,D..
您是与众不同的,也许您的血也是您是与众不同的,也许您的血也是You're one in a million. You're one in a million.
Maybe your blood is too.Maybe your blood is too.• 稀有血型筛选稀有血型筛选• 中国稀有血型库中国稀有血型库• 寻找稀有血型--难!寻找稀有血型--难!
Bristol4000
CLB2000
Osaka1000 New York
30000
稀有血型库
Oh CDE/CDE CdE/CdE CwD-/CwD-
-D-/-D- Rhnull Rh:-51 LW(a-b+)
LW(a-b-) S-s-U- S-s-U(+) pp
Pk Lu(a+b-) Lu(a-b-) Kp(a+b-)
Kp(a-b-) Js(a+b-) Ko K:-11
Fy(a-b-) Jk(a-b-) Di(b-) Jo(a-)
Yt(a-) Sc:-1 Co(a-) Co(a-b-)
Vel- Ge- Lan- Gy(a-)
Hy- At(a-) Jr(a-) In(b-)
Tc(a-) Cr(a-) Er(a-) Ok(a-)
ISBTISBT 最难获得的稀有血型列表最难获得的稀有血型列表
稀有血型筛选项目稀有血型筛选项目
• 2008 2008 年开始年开始• 目前共有十三个省市血液中心参加目前共有十三个省市血液中心参加• 共筛选献血员共筛选献血员 140140 万人次万人次• 筛选的民族包括筛选的民族包括 汉族、回族、壮族、蒙古族、维吾尔族、侗族、汉族、回族、壮族、蒙古族、维吾尔族、侗族、
塔吉克族、土族、僳僳族、怒族塔吉克族、土族、僳僳族、怒族• 共获得各类稀有血型献血员共获得各类稀有血型献血员 13001300 多名多名
13 regional blood center participated this program13 regional blood center participated this program
中国大规模筛选稀有血型项目中国大规模筛选稀有血型项目• Large-scale screening by serological methodsLarge-scale screening by serological methods
稀有血型筛选方法稀有血型筛选方法稀有血型筛选方法稀有血型筛选方法
微量板改良微量板改良 IATIAT 试验试验尿素筛选试验尿素筛选试验分子生物学筛选试验分子生物学筛选试验
用于筛选的稀有抗血清用于筛选的稀有抗血清
Mab for Rare Blood Mab for Rare Blood • Anti-Rh17Anti-Rh17• Anti-GPAAnti-GPA• Anti-GPCAnti-GPC• Anti-WrbAnti-Wrb• Anti-KellAnti-Kell• Anti-IAnti-I• Anti-LuAnti-Lu• Anti-TnAnti-Tn• Anti-KpbAnti-Kpb• Anti-HAnti-H
Mab and Poly-abMab and Poly-ab• Anti-MurAnti-Mur• Anti-DiaAnti-Dia• Anti-DibAnti-Dib• Anti-LanAnti-Lan• Anti-PP1Pk(Tja)Anti-PP1Pk(Tja)• Anti-CoaAnti-Coa
Multiplex PCR systemMultiplex PCR system
Ytb(636bp)Kpc(462bp)β -actin(320bp)
K(204bp)
600bp400bp300bp200bp
稀有血型等位基因对照品的制备稀有血型等位基因对照品的制备 • 定点诱变技术(定点诱变技术( SDMSDM )制备)制备
稀有血型等位基因对照品 稀有血型等位基因对照品
Molecular heterogeneity of the Molecular heterogeneity of the Jknull phenotype in ChinaJknull phenotype in China
Name Alias Nucleotide Change Amino Acid Change Phenotype
1 JKB IVS 8+5 G>A Intron 8: 3’ acceptor site G>A Exon 8 skipped Jk(a-b-)
2JKB IVS 6 +35~45 delA
Intron 6: +35~45 deletion A Exon7 to 9 skipped Jk(a-b-)
3 JKB 512A 512 G>A ( stop codon in exon 7) Protein not expressed Jk(a-b-)
4 JKB 902A 902 G>A G301E Jk(a-b-)
5 JKB 222A 222C>A N74K Jk(a-b-)
6 JKB 536G 536 C>G P179R Jk(a-b-)
7 JKB 499G 499 A>G M179V Jk(a-b-)
中国的中国的 KoKo
• 2 Ko out of 87,665 random donors from Shanghai.2 Ko out of 87,665 random donors from Shanghai.
T insertion
G 715TG 715TStop at 218Stop at 218
Stop Stop
No G715T mutation have No G715T mutation have been found in 100 been found in 100
donorsdonors
exon 3 nt185 T insertion (GenBank accession number,EF208900)
exon 7 nt715 GAA→TAA mutation (GenBank accession number EF208901)
在中国发现的在中国发现的 Rh nullRh null 在中国发现的在中国发现的 Rh nullRh null RhD CD47 GPA Wrb S
Neg - 71 % + 12 % + 16 % Neg Neg - 71 % + 12 % + 16 % Neg
Neg - 70 % + 4 % + 25 % Neg Neg - 70 % + 4 % + 25 % Neg
Liu Y.Liu Y.
Liu BLiu B
100 101 102 103 104
D-FITC100 101 102 103 104
CD47-FITC100 101 102 103 104
GPA-FITC 100 101 102 103 104
WRb-FITC100 101 102 103 104
S-FITC
100 101 102 103 104
D-FITC 100 101 102 103 104
CD47-FITC100 101 102 103 104
GPA-FITC100 101 102 103 104
WRb-FITC100 101 102 103 104
S-FITC
GPAGPA 突变导致突变导致 WrWrbb 不表达不表达• Band 3 exon16 Glu658 Wr(a-b+)Band 3 exon16 Glu658 Wr(a-b+)• GYP A-BGYP A-B ; GP.Hil (MiV) ; GP.Hil (MiV) exon (1-3)exon (1-3)GYPAGYPA exon(4-6) exon(4-6) GYPBGYPB• 新突变新突变 271 G>C (exon 4)271 G>C (exon 4)
在献血员中筛选在献血员中筛选 IgAIgA 缺乏的血浆缺乏的血浆
• 筛查筛查 2260922609 人人• IgAIgA 含量≤含量≤ 0.05mg/dl0.05mg/dl 的共的共 77 人(完全缺乏)人(完全缺乏)• 0.05mg/dl0.05mg/dl << IgAIgA 含量≤含量≤ 0.5mg/dl0.5mg/dl 的共的共 77 人(相人(相
对缺乏)对缺乏)• ELISAELISA 使用羊抗人使用羊抗人 IgAIgA• 卡式凝胶使用卡式凝胶使用 DiaMedDiaMed
中国稀有血型网中国稀有血型网http://www.chinarareblood.cnhttp://www.chinarareblood.cn
中国稀有血型论坛中国稀有血型论坛
血型抗原的基因诊断血型抗原的基因诊断
血型基因诊断血型基因诊断• 是趋势,是趋势,好处:可解决血清学疑难问题好处:可解决血清学疑难问题 亚型、变异型亚型、变异型 获得性血型获得性血型 移植移植 胎儿血型预判胎儿血型预判 法医学法医学 …………• 但目前常规应用很难但目前常规应用很难 主要问题:主要问题: 人种之间的不同基因多态性 人种之间的不同基因多态性 基因与蛋白表达上的差异基因与蛋白表达上的差异
基因与蛋白表达上的差异基因与蛋白表达上的差异• 红细胞血型中,有较多存在血型基因,但抗原不表达的现红细胞血型中,有较多存在血型基因,但抗原不表达的现
象。如象。如 DELDEL 、、 K0K0 、、 RhRh 杂交基因杂交基因• 相同的抗原表达可能具有不同的基因背景。如弱相同的抗原表达可能具有不同的基因背景。如弱 DD 、不完、不完
全全 DD• 有些血型抗原由多个基因座控制或修饰,如调节型有些血型抗原由多个基因座控制或修饰,如调节型
RhnullRhnull 、、 (in)Lu(in)Lu 。。
欧盟的血型检测基因蕊片项目欧盟的血型检测基因蕊片项目• BloodGen (http://www.bloodgen.com)BloodGen (http://www.bloodgen.com)• 2003/09-2006/082003/09-2006/08;;• BristolBristol 英国、英国、 UlmUlm 德国、德国、 SanquinSanquin 荷兰、荷兰、 LundLund瑞瑞典、典、 BarcelonaBarcelona 西班牙、西班牙、 UHKTUHKT捷克、捷克、 ProgenikaProgenika公司公司(( 西班牙西班牙 )) 、、 BiotestBiotest 公司公司 (( 德国德国 ))
• 检测检测 104104 个个 SNPSNP ,集中在三个,集中在三个 MPX PCRMPX PCR ,,
MPX-PCRMPX-PCR
ABO,RHDABO,RHD 15 15个产物片段个产物片段 GYPA,GYPGYPA,GYP
B,RHCE,DOB,RHCE,DO,JK,KEL,FY,,JK,KEL,FY,DIDI2020 个产物个产物片段片段
微矩阵分析微矩阵分析
• PCRPCR 产物与探计产物与探计 (Cy (Cy Dyes)Dyes) 杂交杂交
• 扫描扫描 (array scanner)(array scanner)蕊片蕊片
• 数据数据 (( 荧光强度荧光强度 )) 分析分析
设备 PCR 杂交站
扫描仪
BioArray SolutionsBioArray Solutions in immucorin immucor
免疫血液学的研究方法免疫血液学的研究方法• 只有标准的操作步骤,没有通用的、唯一的方法只有标准的操作步骤,没有通用的、唯一的方法• 各种抗原和抗体都有自己的特性,需选用合适的方法进行各种抗原和抗体都有自己的特性,需选用合适的方法进行测定测定
Thank you!Thank you!