TIAMIN, VITAMIN B1

3 - (4 -amino - 2 - metil - 5 - pirimidinil) - metil - 5' - hidroksietil - 4' - metil - tiazolium hlorid

1.

2Cl-H

12

3

4

56

1'2'

3' 4'

5'N

S

CH3

CH2CH2OH

N

NH3C NH2

Osobine:beo kristalan prašak ili bezbojni kristali, gorkog ukusa, rastvoran u vodi i etanolu

kiseli vodeni rastvori (pH 3-4) su stabilni u prisustvu kiseonika, termo- i fotostabilni

termolabilan vodeni rastvor iznad pH 5 neutralan vodeni rastvor stajanjem žuti

1. H+

H2ON

N

H CH2OH

H3C NH2

+N

S

CH3

CH2CH2OH

degradacioni proizvodi

OH

Oksitiamin

1. cH+N

S

CH3

CH2CH2OH

N

NH3C

CH3

CH2CH2OHN

N

N NH2H3C C

O

HSH

Tiol degradacioni proizvod

1. OH -

pH 9 H

HO

N

S

CH3

CH2CH2OH

U H+ rast. dominira tiazol a u OH- i neutralnim tiol.

U vodi obe forme su u ravnoteži: prisutna 2 apsorpciona maksimuma na 232 nm i na 266 nm.

UV spektar tiamin hidrohloridaUV spektar tiamin hidrohlorida

Maksimumi apsorpcije:

Metanol: 262 nm, 238 nm

0.1M HCl: 246 nm

0.1M NaOH: 232 nm

IR spektar tiamin nitrataIR spektar tiamin nitrata

Identifikacija: Ph.Eur.1. IR spektri2. Tiohromna reakcija: svetlo plava fluorescencija u butanolu UV max. 365nm. Dodatkom mineralnih kiselina gasi se fluorescencija. Reakcija je specifična za vitamin B1 tek ako se izvodi u priustvu NaHSO3 ne sme doći do fluoroscencije!

K-heksacijanoferat(III)

(365nm)

1.pH 11OH -

N

N N

N

S

CH3

CH2CH2OH

H

H3C

zut

oksidacija

H3C

CH2CH2OH

CH3

N

SN

N

N

TIOHROMfluoresciraplavo u butanolu

H, t

1. + HSO3- + N

S

CH3

CH2CH2OH

N

N NH2

CH2SO3H

H3Cslabokiseor-raB1

Nu- jaciod H2O

- X-

Određivanje:

TNS kao slaba baza sa HClO4. u HCOOH / (CH3COO)2O. z.t.t. potenciometrijski

kao hidrohlorid titracija sa 0.1M NaOH; z.t.t. potenciometrijski.

RIBOFLAVIN VITAMIN B2

7, 8 - dimetil - 10 - (1 - D - ribitil) - 2, 4 - (3H, 10H) - benzopteridindion

N

N

N

N O

O

H3C

H3C H

CH2

CH2OH 3

CH2OH

1

2

34

567

8

9 10

Osobine:

Žut do oranž - žut kristalan prašak, R. u vodi samo pri dodatku elektrolita ili uree kao polarnih komponenti, sa bazama gradi soli.U H+ sredini termostabilan (može da se steriliše) i prema O2 Rastvori fotosenzitivni, posebno u prisustvu alkalija. Nestabilan u OH- sredini. Optički je aktivan (C*u ribitil ostatku)

RastvaranjeRastvaranje

N

R

HN

N O

O

N(Na)

H

N

N O

O

N

NH

R

DIKATIONu c.H2SO4 na N5

•Neutralan rastvor ima žućkasto-zelenu fluorescenciju koja je pH zavisna!- Gasi se dodatkom H+, OH- ili redukcionih sredstava (Identifikacija!)

UV apsorpcija sa λmax= 223, 267, 373 i 444 → žuta boja služi u identifikaciji i određivanju.

U H+ sredini u prisustvu redukcionih sredstava Zn (HCl) ili Na2S2O4 gubi se žuta boja – dihidroriboflavin.

UV spektar riboflavinaUV spektar riboflavina

Fotosenzitivan na povišenoj temperaturi - tip fd.p. zavisi od pH i prisustva kiseonika

H

H3C

H3C N

N

N

N O

O

H

1.O2 H+ ili

neutralanrastvor

O2

cvrstneutralanrastvor

H

H3C

H3CN

N O

O

N

N

CH3 Hleukoriboflavinleukolumihrom

hv

zutlumihrom

oranzlumiflavin

TT 330oC TT 300oC

FOTOLITOCKI PROIZVODI RIBOFLAVINA

Identifikacija i određivanje: Ph.Eur.

1. [α]D20 = -115 -135 (u baznim rastvorima).

ili u prisustvu boraksa kada o.a. jako raste ali je (+)!2. IR spektri 3. Gašenje žuto-zelene fluorescencije vodenog rastvora dodatkom min. kiseline ili baze.

Određivanje: spektrofotometrija, bazni rastvor λmax = 444 nm (Ph. Eur.) Izvodi se zaštićeno od svetlosti.

Test čistoćeTest čistoće

Ispitivanje na lumiflavin TLC metodom ili

testom rastvaranja u hloroformu oslobođenim od etanola

fotod. proizvod rastvorljiv, riboflavin ne.

PIRIDOKSIN VITAMIN B6

Osobine:

u formi baze - bezbojni kristali rastvorni u organskim rastvaračima. T. T. = 160°C.

Hidrohlorid – bezbojan, kiselog ukusa, T. T. = 205°C ili 212°C, hidrosolubilan.

Vitamin B6 – amfoteran (pirid. N – bazan)

(fenol – kiseo)

UV apsorpcija je pH zavisna

pH< 7

290 i 232 nm

N CH3

OH

CH2OH

HOH2C

H

+ H+ - H+

pH > 7

245 i 309 nm

N CH3

O-

CH2OH

HOH2C

pH neutralno

253 i 324 nm

+ H+ - H+

HN CH3

O-

CH2OH

HOH2C

OsobineOsobine

Stabilan je na vazduhu. Fotosenzibilan u alkalnim i neutralnim rastvorima.

Rastvori u mineralnim kiselinama su termostabilni i mogu biti autoklavirani na 120°C, 30 minuta, dok neutralni rastvori podležu polimerizaciji i oksidaciji

Za analitiku važne:

1. OH grupa (fenolna – azafenol)2. N – bazan – piridinski3. α – pikolin (CH3 grupa kisela)4. bifunkcionalna parcijalna struktura fenola i susednih hidroksimetil grupa.5. pozicija 6 koja je sub. elektrofilnog napada (ES)

Identifikacija po Ph.Eur.

1.UV spektar : 0.1M HCl. λmax 288-296 nm,

- u fosfatnom puferu dva λmax 248-256nm i 320-327nm

IR spektri (fenolna grupa) TLC metode-detekcija mrlja sa Gibbs-ovim

regensom

UV spektar piridoksinaUV spektar piridoksina

0.1M HCl. λmax 288-296 nm,

- u fosfatnom puferu dva λmax

248-256nm i 320-327nm

U 0.1M NaOH takođe dva aps.

Max. 309 i 244nm

IR spektar piridoksinaIR spektar piridoksina

Ostale metode identifikacijeOstale metode identifikacije

Fenolna funkcionalna grupa: -Gibbs-ov reagens za VIS i TLC detekciju-FeCl3 - ljubičasta boja kompleksa i

-kuplovanje sa diazonijum solima R-ja alkilovanja sa CH3J Fluorescentni metod

2,6-dihlorhinonhlorimid

Cl

Cl

ON

Cl

N CH3

O-

CH2OH

HOH2C

H-Cl-

- H+

O N N CH3

O-

CH2OHHOH2C

Cl

Cl

Indofenol plave bojemax 620 nm

gde je fenol blokiran i reakcija sa Gibbs-ovim reagensom izostaje.Dodatkom H3BO3 raste specifičnost reakcije.

+ H3BO3

N CH3

O-

CH2OH

HOH2C

H

O

O

BOH

OH

H

N CH3

HOH2C-

Helat Bilidimerni helat B

kuplovanje N CH3

CH2OH

HOH2C OH

R

N N

Cl-- HCl

N CH3

CH2OH

HOH2C OH

Ar N N

Azo bojazuto - narandzasta

1. N CH3

CH2OH

HOH2C

CH3

OCH3

+ 2CH3J

OH-

CH2-

CH3

OCH3

N

CH2OH

HOH2C

CNO

H

CH3

CH3

H2O

ALDOLNAKONDENZACIJA

Reakcija sa CH3J

CH2OH

HOH2C

N

CH3

OCH3

NCH3

CH3

CIANIN ( VIS APSORPCIJA )

Fluorescentni metod

KMnO4

oksidacija

N CH3

OH

COOH

HOOC

N CH3

OH

CH2OH

HOH2C

N CH3

OHC

C

N CH3

OHC

C

FLUORESCEINjaka fluorescencija

Određivanje: titracija u nevodenoj sredini sa HClO4 / HgAc2O z.t.t. potenciometrijski

FOLNA KISELINA

CO

N

N CH2N

N

OH

H

H2N

NH NH CH

COOH

CH2

COOH

2

2 - amino - 3, 4 - dihidro - 4 - oxo - 6 - pteridinil metil

4 - amino - benzoil L - glutaminska kiselina

N - 4 [ 2 - amino - 3, 4 - dihidro - 4 - oxo - 6 - pteridinil metil amino] benzoil

- L - glutaminska kiselina

1.

Osobine: žut prašak, nerastvoran u vodi i organskim rastvaračima, soli rastvorljive u vodi, rastv. u alkalnim hidroksidima, karbonatnim rastvorima i mineralnim kiselinama.

Spektralne osobine:

U baz. rast. tri aps. max. λmax = 256 nm, 283 nm (pteridin) i 365 nm (PAB).(Ph. Eur.)U kiselim rastvorima λmax = 298 nm

Identifikacija: Ph.Eur.

1.) specifična optička rotacija u 0.1M NaOH je +18 do +22° 2.) HPLC metod iz određivanja (tR)

3.) TLC metod. Detekcija mrlja na 365nm UV denzitometrijski.

Ostale identifikacije:Ostale identifikacije:

1. Cu(II)

alkalni rastvor

N

N

N

N

Cu

N

N

O

N

N

O

H2N

R

R

NH2

OXINAT - komplex

pahuljast zuckasto zeleni precipitat

N

N

O

H

H2N N

N CH2 NH R+Zn

HCl

mucka i filtrira

N

N

O

H

H2N N

N CH3

RH2N

diazotacija i kuplovanje

filtratmetil pteridin

kvantitativna reakcija

3.

R= CO NH CH COOH(CH2)2

COOH

4.

N

N

O

H

H2N N

N R

alkalni rastvor folne kiseline

KMnO4ili hO2

N

N

O

H

H2N N

N COOH

Violetboja - zelen (Mn (VI))fluorescencija

Određivanje:

HPLC po Ph.Eur. spektrofotometrijski Za sve vitamine hromatografske metode

(TLC, HPLC, GH)