Variantes de la Prueba de Coombs

• La prueba de Coombs directa detecta anticuerpos ya unidos a la superficie de los glóbulos rojos

• y la prueba de Coombs indirecta detecta anticuerpos libres que pueden reaccionar in vitro con glóbulos rojos que tienen antígenos específicos.

COOMBS DIRECTO

Prueba de Coombs directo

• Se utiliza para detectar auto anticuerpos en la superficie de los glóbulos rojos del paciente

Nota: Los auto anticuerpos en ocasiones pueden destruir los glóbulos rojos

• Muchas enfermedades o medicamentos pueden llevar a la producción de estos anticuerpos

Medicamentos que pueden producir auto anticuerpos.

• Quinidina.• Quinina • Metildopa.• Procainamida .• Acido mefenamico• Penicilina• Cefalosporinas

Situaciones clínicas en las que se pueden formar auto anticuerpos

• Pacientes poli transfundidos.• Enfermedad hemolítica del recién nacido• Anemia hemolítica• Embarazo• Pacientes inmunosuprimidos

Fundamento de la técnica

• La prueba consiste en la administración de un antisuero que contiene anticuerpos dirigidos contra una serie de moléculas presentes en la membrana del eritrocito (auto anticuerpos); la unión de los anticuerpos presentes en el antisuero con los auto anticuerpos unidos al eritrocito ocasiona una reacción inmediata de aglutinación.

Uso de la prueba

• Diagnostico de enfermedades como:– Enfermedad hemolítica del recién nacido

(eritroblastosis fetal). – Anemia hemolítica inducida por fármacos.– Reacciones transfusionales (compatibilidad)– Anemias hemolíticas inmunitarias– Reacciones a transfusión– Trastornos linfoproliferativos, como leucemia

linfocítica crónica– Mononucleosis infecciosa

Objetivo

• Determinar la existencia de glóbulos rojos recubiertos con inmunoglobulinas y/o complemento in vivo, en particular IgG y C3d (Coombs directo)

muestra

• Sangre del paciente compuesta de un tubo anticoagulado (con EDTA o heparina) o un tubo seco debidamente identificado y que no exceda las 72 horas de extraída.

Tecnica de Coombs directo

• Lave tres veces los hematíes del paciente con solución salina fisiológica.

• Haga una suspensión de hematíes lavados al 2-5 %. • Añada en un tubo debidamente rotulado dos gotas

de la suspensión de eritrocitos. • Añada dos gotas de Suero de Coombs poliespecífico. • Centrifugue un minuto a 1500 rpm.• Lea desprendiendo suavemente el botón sobre la

lámpara aglutinoscopio.

Interpretación del resultado

• • Si en la prueba de Coombs directo observa aglutinación esto indica:– presencia de anticuerpos y /o complemento

unidos a los hematíes in vivo, repita nuevamente el procedimiento pero

utilizando los reactivos monoespecíficos anti-IgG y anti-C3d.

• El Coombs directo se realiza a pacientes en los primeros momentos de una reacción hemolítica y en el diagnóstico de anemias hemolíticas auto inmunes, hemólisis inducidas por drogas, y enfermedad hemolítica del recién nacido.

COOMBS INDIRECTO

Coombs Indirecto

• En esta prueba se busca la presencia de anticuerpos (específicos de ciertos antígenos) presentes en el suero del paciente contra antígenos que no necesariamente están presentes en los glóbulos rojos del paciente, pero pueden estar en glóbulos rojos de otras personas

• Si se mezcla suero tomado de un paciente que contiene estos anticuerpos con glóbulos rojos que tienen unidos estos antígenos específicos (generalmente de otra persona), los glóbulos rojos se van a cubrir con anticuerpo. Una vez cubiertas, las células se van a aglutinar después de una exposición al reactivo de Coombs.

En el diagnóstico de eritroblastosis fetal

• El suero tomado de la madre Rh- no reacciona con su propia sangre, sino con la de su feto Rh+.

• El suero de la madre, que contiene anticuerpos específicos del factor Rh, se mezcla con glóbulos rojos Rh+. Los anticuerpos del suero se unen a las células. Luego, se agregan anticuerpos antihumanos para aglutinar los glóbulos rojos.

uso

• En pruebas cruzadas (compatibilidad)/ estudio de reacciones transfusionales

• Método de rastreo de anticuerpos irregulares libres en el suero del receptor

• Profilaxis de la eritroblastosis fetal• Investigación de la variante Du

Prueba de Coombs indirecto

• Se basa en la incubación del paciente con una muestra de sangre tipo O y posteriormente se procede a administrar el antisuero.

Objetivo de la prueba

• Determinar la presencia de anticuerpos irregulares en el suero del paciente (Coombs indirecto)

Muestra.

• sangre del paciente anticoagulada (con EDTA o heparina) o un tubo seco debidamente identificado y que no exceda las 72 horas de extraída.

• Centrifugue la muestra de sangre tipo O 5 min a 3 500 rpm para obtener el suero y separe en un tubo debidamente identificado.

• Prepare una suspensión al 2-5 % con la mezcla de hematíes.• En un tubo debidamente rotulado añada dos gotas del suero

del paciente y dos gotas de la suspensión de eritrocitos tipo O y mezcle bien.

• Incube ambos tubos en un Baño de María a 37ºC por 30 minutos

• Lave tres veces con solución salina decantando totalmente el sobrenadante del último lavado.

• Añada dos gotas de suero de Coombs poliespecífico a cada tubo.

• Centrifugue 1minuto a 1500 rpm. • Lea desprendiendo suavemente el botón de eritrocitos

Interpretación de los resultados

• • Si en la prueba de Coombs indirecto observa aglutinación esto indica:– presencia de anticuerpos y /o complemento

presente en el plasma del paciente unidos a los hematíes y que posteriormente reaccionan con el reactivo de Coombs.

• Repita nuevamente el procedimiento pero utilizando los reactivos monoespecíficos anti-IgG y anti-C3d.

COOMBS CRUZADO

Objetivo de la prueba

• Determinar la compatibilidad entre la sangre del donante y el receptor a transfundir (Coombs cruzado).

Técnica para coombs cruzado

• En el caso del Coombs cruzado utilice una muestra de la sangre a transfundir para preparar la suspensión de eritrocitos

• Proceda de la misma manera que para el Coombs indirecto.

• El Coombs cruzado es una variante del Coombs indirecto y se realiza a pacientes poli transfundidos, pacientes con antecedentes de reacción post transfusional hemolítica y a multíparas para escoger sangre compatible.