Steeps needed to move forward in Spain

3rd European Symposium in rare anaemias

Dra. Ana VillegasPresidente grupo español estudio

Talasemias y hemoglobinopatiasEritropatología

19 Noviembre 2010

Steeps needed to move forward in Spain

• Estudios epidemiológicos• Diagnóstico de talasemias• Consejo genético• Diagnóstico prenatal• Manejo terapéutico de las talasemias

Talasemias • Disminución o ausencia de síntesis de

una o mas cadenas de globina

Hemoglobinopatias Estructurales• Síntesis de una cadena

estructuralmente anormal. Variantes de Hb normal

talasemia

80-90 x 106 portadores de β-talasemia60-70000 nuevos casos/año

250 x 106 α+ talasemia26 x 106 α0 talasemia

Datos epidemiológicos en EspañaTalasemias

• Incidencia β-Talasemia 0,2—2%• Incidencia α-Talasemia 4,79% *

α+ talasemia 4,49%α0 talasemia 0,29%ααα genes 0,72%

*determinado mediante biología molecular

Baiget M. Biol Clin Hematol 1981;251:8-10*Sanchez J Tesis Doctoral Madrid 1997

Martin Nuñez G Sangre 1995;40:459-64 Oliva E Med Clin 1998;110:361-4

*Villegas A Hematologica 1998;83:99-103

Datos epidemiológicos en EspañaHemoglobinopatias estructurales

• Incidencia 0,77% HPLC variant * 1,08% HPLC fase reversa (cadenas de globina)* 1,47% HPLC variant**

Población española no Hb S, C, D * Gonzalez AF Haematologica 2002;87:368-372 ** Mañu M Med Clin 2006;126(8)181-5

* Joyanes B Med Clin 2006;126(8)290-2

Talasemias

• α talasemia• β talasemia• δβ talasemia• γδβtalasemia• hemoglobinopatías estructurales con

fenotipo talasémico

• εγδβ talasemia• δ talasemia• γ talasemia

Talasemias

• Talasemia mayor • Talasemia minor • Talasemia intermedia• Talasemia silente

TIPOS DE α-TALASEMIAS Y BASE MOLECULAR

Tipo de lesión Genotipo Fenotipo

Deleción

Talasemia α+ heterocigota Talasemia α0 heterocigota Talasemia α+ homocigota Enfermedad de la HbH Hidropesia fetal por Hb Bart (α0-talasemia homocigota)

-α/αα --/αα -α/- α-α/----/--

Portador silenteRasgo talasémicoRasgo talasémicoEnfermedad de la HbHHidropesía fetal por Hb Bart

No deleción

Diagnóstico de la talasemia¿Cómo?

• 1º nivel de sospecha (clínica, hematimetria, frotis SP)

• 2º nivel presunción (EEF, Hb A2, Hb F, Hb H, Hb Bart, cuerpos de inclusión)

• 3º nivel de confirmación molecular

trasmisión de infecciones

expansión ósea

hipopituitarismo

hiperpigmentación

hipotiroidismohipoparatiroidismo

hipertensión pulmonary embolismo

miocardiopatía

trombosis venosa

hemosiderosisy cirrosis hepática

hemopoyesis extramedular

esplenomegalia

diabetes mellitus

artropatía

Retraso puberal

hipogonadismo

osteoporosis

baja estatura

Endocrinopatas tto hormonal sustitutivo

Transfusión leucoeplección tests virales

Osteoporosis bifosfonatos vitamina D

Sobrecarga férrica deferoxamina deferiprona deferasirox

Tratamiento de soporte Complicaciones

Tratamiento curativo

Tratamiento futuro

Traspalnte de progenitores médula ósea cordon umbilical no relacionado no mieloablativo

Tratamiento experimental eritropoyetina moduladores de Hb F (hidroxiurea, butiratos) antioxidantes

Terapia génica

ANEMIA Microcítica (VCM<80fl) (HCM<27pg)Historia familiar, raza,edad,sexo gestación, sangrado.

Ferritina,Sideremia, TBIC, IST.

Ferritina N o ↑,Sideremia N o ↑, TBIC N.

Ferritina ↓ ,Sideremia ↓, TBIC ↑.

Ferritina N o ↑,Sideremia N o ↓ , TBIC ↓ .

Ferritina ↑,Sideremia N o ↑, TBIC N.

Talasemia

Estudio de hemoglobinas

Consejo genético

Ferropenia

Estudio de causadigestivo, ginecológico

Tratamiento

Enf. crónica

Signos de E:C:VSG, rouleaux,

neutrofilia, linfopenia,↓ albumina

Diagnósticoenf. de base

A sideroblástica

MO: ↑ hemosiderinasideriblastos en

anillo

Investigar causa

RBC(1012/L)

Hb(g/dL)

Hto(%)

VCM(fL)

HCM(pg)

CHCM(g/dL)

RDW(%)

β+ β0 β+ β0 β+ β0 β+ β0 β+ β0 β+ β0 β+ β0

Media

D.E

V. Mínimo

V. Máximo

Rango

C.V

E.E.M

P

5,7 5,6

0,7 0,7

3,9 3,4

7,3 7,9

3,4 4,5

12,3 12,5

0,1 0,05

0,258

12,3 11,4

1,3 1,3

8,5 7,8

15,7 16,2

7,2 8,4

10,6 11,4

0,2 0,1

0,000

37,2 34,8

4,0 3,9

26,0 22,0

47,2 48,4

21,2 26,4

10,7 11,2

0,6 0,3

0,001

65,1 61,9

5,7 5,1

56,3 32,9

82,0 78,4

25,7 45,5

8,7 8,2

0,9 0,4

0,001

21,5 20,2

1,8 2,3

18,4 2,0

27,0 27,2

8,6 25,2

8,4 11,4

0,3 0,2

0,001

33,1 32,7

1,0 1,2

30,7 30,1

35,4 36,5

4,7 6,4

3,0 3,7

0,2 0,1

0,083

15,1 15,8

3,8 2,1

12,4 13,6

36,9 29,4

24,5 15,8

25,2 13,3

0,6 0,2

0,162

Hematimetría

β-talasemia heterocigota• Hb A2: >3,5%• Microcolumna; EEF y elución; HPLC; EEF capilar

alfa-talasemiaalfa-talasemiaVCM (fL)VCM (fL)

7675,9

74,2 70,2

69,2

67,7 68,2

65,963,9

61,361,1

61,7

01020304050607080

-a/aa -a/-a --/aa -a/--

hombres

mujeresniños

888 241 92 15 Nº casos:

alfa-talasemiaalfa-talasemiaHCM (pg)HCM (pg)

26,1

25,8

26,5

23,3

23,922,2

21,321,5

22,8

19,6

18,5

19,5

0

5

10

15

20

25

30

-a/aa -a/-a --/aa -a/--

hombres

mujeresniños

888 241 92 15 Nº casos:

Aplicaciones de la Biología Molecular al Diagnóstico de las Talasemias

PCR-ARMS CD39 (C→T)

Estudio molecular (β-talasemia)

1 2 3 4 5 6 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’

Estudio molecular (α-talasemia deleción)

2: ααα3.7/αα 1: -α3.7/αα

3: -α3.7/-α3.7

1 2 2 2 3 4 2 4

4: αα/αα

Southern blot, con las endonucleasa de restricción Bam HIy sonda α (1,5 Kb. Pst I).

1,76 kb

5,46 – 3,7 = 1,76 kb

3,7 kb

ReversoMutadoDirecto Reverso

normal

Ψα1 α 1α 2

1,76 kb

φ M N M N M N

1 2 3

Estudio molecular (α-talasemia delecion)

PCR-gap

φ 1 32 4 65 7 8 119 10

PCR-RFLP (Hph y Nco I)C8: 5’-GAGCCTGGCCAAACCATCAC-3’ / C3: 5’-CCATTGTTGGCACATTCCGG-3’

Codon iniciación(αNcoα): ATG → ACG

IVS-1 (-5 nt) donador(αHphα): GGTGAGGCT → GGCT

1094 bp -849 bp -

1943 bp -

- 1078 bp- 1395 bp

αNcoα/αααNcoα/αNcoα

αHphα/αααHphα/αHphα

* * *

**

* ** *

**

Estudio molecular (α-talasemia no delecion)

Utilidad de la biología molecular en el estudio de las talasemias

• Esencial en el diagnóstico de la α –talasemia

• Diagnóstico con expresión severa de β-talasemia– Asociación β-talasemia y

hemoglobinopatias estructurales• Asociaciones de α y β talasemia• Permitir un consejo genético adecuado• Indispensable para realizar el

diagnóstico prenatal y preimplantación

Enero 1996-Abril 2008 Mayo 2008-Octubre 2010

Total Dx. prenatales 36 21

Procedencia

Españoles βT/βT 23 (63,9%) 9 (42,8%)

Marroquíes βT/βT 4 (11,1%)

Sub-saharianos βS/βS 9 (25%) 12 (57,0%)

¿Cuándo pidieron asesoramiento genético?

Antes del embarazo 35 21

Durante el embarazo 1

Resultados

βT/βT 4 2

βS/βS 2 3

Diagnostico Prenatal

Agradecimientos

Fernando Ataúlfo GonzálezPaloma RoperoLara VinuesaFélix de la FuenteJorge MartínezPersonal del Laboratorio

Grupo Español de Eritropatología de la SEHH