SPORE NEWS

Volúmen 11 Número 4Septiembre 2014

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Incubación retardada, Parte II. El producto DriAmp.

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SPORE NEWSIncubación retardada, Parte II. El producto DriAmp.

Anteriormente hablamos sobre la incubación retardada en relación con el producto Self-Contained BI EZTest para esterilización con vapor (Spore News Vol. 10, Nº 4). Ahora nos ocuparemos de la incubación retardada con un IB muy distinto, el DriAmp, utilizado en un proceso también distinto, el de la esterilización por calor seco.

En la sección de ‘Pruebas de resistencia’ de USP se habla de cultivar los indicadores biológicos (IB) ‘dentro de un tiempo determinado, no más de cuatro horas’ después del proceso de esterilización. Surge un problema cuando el usuario final no puede cultivar el IB expuesto dentro de la ventana de 4 horas. Según se ha indicado anteriormente, en esos casos ¿es aceptable un retraso de un día, dos días o una semana entre el momento de la exposición y el cultivo del IB?

Mesa Labs, Bozeman Manufacturing Facility (BMF) realizó dos estudios con el producto DriAmp para la esterilización por calor seco. En estos estudios se establecieron valores D con IBs cultivados inmediatamente tras la exposición y se compararon con valores D de IBs que se habían retenido tras la exposición. Para establecer una ventana aceptable para la comparación, el valor D de las muestras de IB de incubación retardada tenían que mantenerse dentro del 20% del valor D del ensayo original. Este no es el propósito exacto de la norma ISO para confirmar el valor D según lo indicado en ISO 11138-1(2), pero comprobando la capacidad de las esporas dañadas de seguir siendo viables dentro de una ventana similar del 20% se establecería una medida aceptable. Los lotes utilizados para estos estudios se indican como Lote “A”, Lote “B” y Lote “C”. Las unidades de los Lotes “A” y “B” fueron expuestos, mantenidos, enviados y cultivados de forma separada a las unidades del Lote “C”.

Para el primer estudio, que examina los efectos de los IBs expuestos al envío, unidades de tres lotes de IBs fueron expuestas a nuestro resistómetro Biological Indicator Evaluator Resistometer (BIER) de calor seco a 160 ºC, de forma que se obtuvieran resultados fraccionados. Cada grupo de 30 unidades se dividió en tres conjuntos de 10 unidades. Un conjunto se cultivó e incubó a 37 ± 1 °C durante 72 horas y se registró el crecimiento. Otro conjunto se mantuvo a temperatura ambiente en Mesa Labs, BMF, y el último conjunto de unidades hizo el viaje de ida y vuelta de Francia con un distribuidor. Aproximadamente se necesitaron 8 días para el tránsito de ida y vuelta a Francia. Al volver, las unidades mantenidas y enviadas se cultivaron e incubaron según lo descrito anteriormente y se registró su crecimiento al cabo de 72 horas. A modo de referencia, se colocó un registrador de datos de temperatura con las unidades almacenadas expuestas, y con los IBs expuestos y enviados a Francia se incluyó un registrador de datos.

Para las unidades que se quedaron en BMF, la temperatura varió entre 19-25 °C y la humedad relativa varió entre 24-52 % durante el periodo del estudio. Para las unidades que hicieron el viaje de ida y vuelta de Francia, la temperatura varió entre 4-33 °C y la humedad relativa varió entre 21-65 %. En la Tabla 1 se muestran los valores D160 para los tres lotes de IBs antes y después del periodo de duración del estudio de envíos.

SPORE NEWSIncubación retardada, Parte II. El producto DriAmp.

Muestra Tratamiento D160 Porcentaje  diferencia

CulBvado  inmediatamente 3.7016

Lote  “A” Mantenido  en  BMF 3.5093 -­‐  5,2%

Envío  a  Francia,  devolución 3.7762 2,0%

CulBvado  inmediatamente 3.7954

Lote  “B” Mantenido  en  BMF 3.8600 1,7%

Enviado  a  Francia,  devolución 3.8201 0,6%

CulBvado  inmediatamente 4.1202

Lote  “C” Mantenido  en  BMF 4.0391 -­‐  2,0%

Enviado  a  Francia,  devolución 4.0776 -­‐  1,0%

Para el segundo estudio, que examina la incubación retardada sin envío, de nuevo se expusieron IBs de DriAmp en el BIER de calor seco a 160 °C de forma que se obtuvieron resultados fraccionados. Cada grupo de 40 unidades se dividió en cuatro conjuntos de 10 unidades. Un conjunto se cultivó y se incubó inmediatamente a37 ± 1 °C durante 72 horas y se registró su crecimiento. El resto de grupos de unidades se almacenaron a temperatura ambiente en Mesa Labs, BMF, durante 1-7 días después de la exposición. Tras este periodo de retraso, los IBs se cultivaron e incubaron según lo descrito anteriormente. Se supervisó la temperatura con un registrador de datos colocado inmediatamente junto a la zona en la que se almacenaron las unidades expuestas.

Las temperaturas durante el almacenamiento variaron entre 20-25 °C. La humedad relativa durante el estudio varió entre 21-52 %. La Tabla 2 muestra los valores D160 para los tres lotes de IBs y tiempo de espera antes de la incubación.

Tabla 1: Datos de resistencia, estudio del envío

Muestra Tiempo  de  tratamiento D160 Porcentaje  diferencia

Incubación  inmediata 3.7913

Lote  “A”1  día  de  espera 4.0662 7,3%

Lote  “A”4  días  de  espera 3.9509 4,2%

7  días  de  espera 3.8877 2,5%

Incubación  inmediata 3.7470

Lote  “B”1  día  de  espera 3.8927 3,9%

Lote  “B”4  días  de  espera 3.8009 1,4%

7  días  de  espera 4.0574 8,3%

Incubación  inmediata 4.1471

Lote  “C”3  días  de  espera 4.3421 4,7%

Lote  “C”5  días  de  espera 3.9066 -­‐  5,8%

7  días  de  espera 4.0146 -­‐3,2%

Tabla 2: Datos de resistencia, todas las muestras

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En global, estos estudios parecen indicar que mantener y enviar los IBs de DriAmp durante un periodo de hasta 7 días tras la exposición, o posiblemente más tiempo, tiene un bajo efecto perjudicial sobre la supervivencia de las esporas presentes en el IB.

Referencias:1USP 31, <55>, Biological Indicators- Resistance Performance Tests, Recovery2ISO 11138-1 Sterilization of Health Care Products, Biological Indicators Part 1

Eric Gillitzer, Ph.D., es Científico Investigador Senior de Mesa Labs. Inició su colaboración en 2008 en el área de producción y desde entonces has estado involucrado en todos los aspectos de la fabricación y análisis de IBs en el laboratorio de producción, en el laboratorio de esporas y en los laboratorios de I+D. Eric es miembro de la Association for the Advancement of Medical Instrumentation (AAMI) y ex-miembro de la American Society for Virology (ASV) y American Society for Microbiology (ASM). Eric se graduó en Montana State University, Bozeman, con una licenciatura (B.S.) en Microbiología y en Stony Brook University (SUNY) con un doctorado (Ph.D.) en Biología Molecular y Bioquímica

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