Endokrini sistem

Hipotalamus/hipofiza/Pinealka

Tiroidea/Paratiroidea

TimusAdrenalkaPankreas

Bubreg

Testisi

Ovarije

Adrenal Cortex: Steroid Hormone Production

Figure 23-2: Synthesis pathways of steroid hormones

SPOLNI HORMONI

Testosteron=najvažniji androgen(testisi)

Estradiol(ovariji)=najvažniji estrogen., koncentracija varirakroz menstrualni ciklus, malo ga ima i u plazmi muškaraca

Progesteron=produkt ovarija i luči se nakon stvaranja corpusLuteum

U normalnoj plazmi niska i koncentracija testosterona( 50% potječe iz ovarija i 50% iz periferne konverzije Androstendiona i DHAS(dehidoapiandrosteron sulfata)-adrenalni korteks

*Estradiol i Testosteron (95%)cirkuliraju vezani za proteine plazme(globulin koji vezuju polne hormone)-SHBG.

*Koncentracija SHBG 2 puta veća kod žena od muškaraca. Primarno vezivanje za SHBG: DHEA,testosteron, estradiol Kada raste SHBG------rastu i estradiol sični efekti Pad SHBG------rast androgen efekata

*Drugi oblici: transkortin, albumin. Ovi proteini imaju nizak kapacitet vezivanja, a visok afinitet, za razliku od alfa 1 kiselog glikoproteina.

Testosteron: 65% SHBG, 30% albumin, 2% slobodni

*Za alfa 1 glikoprotein se veže progesteron

*Za albumine-svi steroidi

ANDROGENI HORMONI

Testosteron:

Procjena testikularne aktivnosti muškarcaKontrola nastupanja puberteta u dječakaDijagnoza i praćenje liječenja hiperandragonemije hirsutizma(žena),policistični ovariji

Raste testosteron kada je LH/FSH veće od 2

Androstendion-prekurzor u sintezi testosteronaDijagnoza: hiperandragonemija(hirsutizam), sindrom PCO

DHEAS

sinteza u kori nadbubrega, žene tokom trudnoćeDiferencijalna dijagnostika hirsutizma/virilizmaDijagnoza i praćenje PCO,KAH

DHEA-dehidroepiandrosteronDHEA-dehidroepiandrosteron

Androgen iz adrenalke

RIA za određivanje DHEA te konjugacioni produkt DHEA-S u plazmi

Esej često zamijenjen analizom 17 ketosteroida

Direktni RIA za DHEA i DHEA-S bez ekstrakcije

EDTA ili heparinizirana plazma, stabilnost 7 dana na sobnoj temp.

Vrijednost testa: Utvrđivanje funkcije adrenalke

SpermatogeneSpermatogenezaza

GnRHGnRH

hipofizahipofiza

TestiTestisisi

TestosteronTestosteron

HHiipotalamuspotalamus

LH/FSHLH/FSH

SpermatogeneSpermatogenezaza

InhibinInhibin

Serum FSH Serum FSH iliili Inhibin B Inhibin B

Serum FSHSerum FSH refle reflektiraktira spermatogene spermatogenezuzu

Serum Inhibin BSerum Inhibin B je marker za funkciju je marker za funkciju Sertoli Sertolijvih ćelija kod jvih ćelija kod muškaracamuškaraca, , i korelira obrnuto proporcionalno sai korelira obrnuto proporcionalno sa FSH) FSH)

Serum inhibin BSerum inhibin B je dobar indikator aktivne spermatogeneze i je dobar indikator aktivne spermatogeneze i korelira sa volumenom testisa i gustinom sperme.korelira sa volumenom testisa i gustinom sperme.(Klingmuller (Klingmuller 1997)1997)

Kombinirano mjerenjeKombinirano mjerenje FSH FSH ii Inhibin Inhibina je bolji indikator a je bolji indikator spermatogeneze nego bilo koji marker sam po sebi.spermatogeneze nego bilo koji marker sam po sebi. (Pierik 1998)(Pierik 1998)

Ovi testovi ne mogu napraviti razliku između individua sa Ovi testovi ne mogu napraviti razliku između individua sa normalnom spermom i onih u spermatogenom arrestu.normalnom spermom i onih u spermatogenom arrestu.

(Bohring 1999, Foresta 1999)(Bohring 1999, Foresta 1999)

SpermatogeneSpermatogenezaza

Leydig Leydig ćelijećelije

Sertoli Sertoli ćelijećelije

TTTT TT

TT

PrimarPrimarnini spermatoc spermatociitt

SeSekundarni spermatocitkundarni spermatocit

Okrugli Okrugli spermatidspermatidspermatozoaspermatozoa

Detekcija Detekcija SpermatogenSpermatogenezeeze

Konvencionalna analiza sjemene tekućineKonvencionalna analiza sjemene tekućine

Serum FSH Serum FSH ili ili inhibin Binhibin B

Veliki broj funkcionalnih testova-in vitro Veliki broj funkcionalnih testova-in vitro penetracija mukusapenetracija mukusa,, test penetracije sa test penetracije sa hamster hamster jajima i test post coitusjajima i test post coitus

Analiza sjemene tekućine

volumen > 2 ml pH 7.2 – 8 Koncentracija Spermatozoida > 20

miliona / ml Ukupni broj spermat > 40 milion/ ml pokretljivost > 25 % brza progresija i > 50 % sa progresijom prema

naprijed

Analiza sjemene tekućineAnaliza sjemene tekućine

Potrebno je ispitati barem dva uzorka u istoj Potrebno je ispitati barem dva uzorka u istoj laboratorijilaboratoriji

Putem masturbacije na Putem masturbacije na temp (15C to 38C) temp (15C to 38C) i brzo i brzo isporučiti u laboratorijuisporučiti u laboratoriju

WHO WHO kriterijikriteriji (1999): (1999): >20 million/ml >20 million/ml >40% progre>40% progresivna sivna

pokretljivostpokretljivost >30% normal>30% normalni oblicini oblici

Semen Analiza

Vitalnost > 75 % živi i < 25 % mrtvi Morfologija > 14 % normalni oblici

(Kruger’s) WBC < 1 million / ml Immunobead test < 20 % Mješani antiglobulin reakcija < 10 %

Endokrina evaluacija

Ako je abnormalna niska koncenracija spermatooida < 5milion / ml

Poremećaj seksualne funkcije Drugi klinički pokazatelji koji ukazuju na

specifičnu endokrinopatiju.

Post ejakulatna analiza urina

Indikacije:-Nizak volumen ejakulata-Nema ejakulata-Izbjeći ako postoje pokazatelji hipogonadizma

Uzroci niskog volumena / bez ejakulata:-Retrogradna ejakulacija-Nedostatna emisija-Obstrukcija ejakulacijskih vodova

Imaging muških genitalija

Transrektalno skaniranje isključuje obstrukcije na razini ejakulatornih duktusa

Izvodi se kod azo / oligospermičnih osoba sa niskim volumenom ejakulata i palpabilnom vasom.

Ako je teško ispitivanje, tada se radi skrotalna ultrasonografija

Specializirani klinički testovi na sjemenoj tekućini i spermi Leukociti u sjemenoj tek > 1 milion / ml

potreban tretman Penetracija Cervikalnog mukusa i post

coitus test Antisperm antitijela Test viabilnosti sperme (HOS test)

Endokrinologija seruma

Testosteron FSH, LH Funkcionalni testovi-tiroidna žlijezda prolaktin

Poremećaji na razini muških spolnih hormona

1.Deficit u produkciji sperme-mehanički nedostatak u transportu sperme, poremećaji na nivou funkcije spermija, blokiranje duktusa, droge –duhan, marihuana,alkohol azospermija, oligospermija

normalne razine hormona LH, FSH, Test

2.Smanjena sekrecija testosterona

Uzroci:• Deficit testisa-primarni poremećaji Hipergonadotropni hipogonadizam

• Defekt hipotalamus ili hipofiza(sekundarni. Poremećaji ili Hipogonadotropni hipogonadizam (nema oba gonadotropina ili samo LH)., generalizirani poremećaj na razini hipofize

3.Poremećaji vezani za seksualnu diferencijaciju muškaraca

Rijetki poremećaji

Produkcija testosterona poremećena, defekt produkcije Test 17 beta ketosteroid reduktaza nedostaje

Poremećaj- sindrom testikularne feminizacije-neaktivniandrogen receptori, nema odgovora ciljanih tkiva

•Uzroci primarnog hipogonadizma:

1. Kongenitalni defekti-Klinefelter sindrom ili ageneza testisa

2. Stečeni defekti uslijed infekcija testisa(zauške), trauma, iradijacija, citotoksični lijekovi Nalazi: pad Test, pad FSH, pad LH

• Uzroci sekundarnog hipogonadizma :a) Tumori hipofizeb) Poremećaji na razini hipotalamusa(Kallman sindrom) Opada testosteron, raste FSH, raste LH ?

Testovi:Dinamički testovi kao stimulacija sa GNRH utvrdjujeuzrok hipogonadizma kod nekih pacijenata

Kliničko stanje FSH LH Testosteron Prolaktin

Normalna N N N NSpermatogeneza

Hipogonadotropni Nizak Nizak Nizak Ngonadizam

Abnormalna Visok N N NSpermatogeneza

Complete Test Visok visok N/nizak NFailure

Prolaktin lučeći N/nizak N/nizak nizak visoktumor

N=normalan

DHEA-dehidroepiandrosteronDHEA-dehidroepiandrosteron

Androgen iz adrenalke

RIA za određivanje DHEA te konjugacioni produkt DHEA-S u plazmi

Esej često zamijenjen analizom 17 ketosteroida

Direktni RIA za DHEA i DHEA-S bez ekstrakcije

EDTA ili heparinizirana plazma, stabilnost 7 dana na sobnoj temp.

Vrijednost testa: Utvrđivanje funkcije adrenalke

Testosteron (RIA, EIA)Testosteron (RIA, EIA)

1. Imunoesej, prethodno dodati 8 anilino 1 naftalen sulfonat

Serum/heparinizirana plazma su uzorci(stabilnost 1 nedjelja na +4, 6 mjeseci na –20C. Najveće koncentracije su ujutro, opada 25% po noći.2. SHBG esej vezivanja specifični imunoesej3. Biodostupni test (slobodni + albumin vezani Selektivna precipitacija sa amonijum sulfatom za SHBG.4. Mjerenje prekurzora i metabolita (DHT, androstendion, DHEA)

Osa Osa HHiipotalampotalamusus--hipofiza-ovarije osahipofiza-ovarije osa• Potrebna za zdravo sazrijevanjePotrebna za zdravo sazrijevanje, c, cikličnostikličnost, , i reproduktivni reproduktivnuu

sposobnostsposobnost

• HHiipotalamuspotalamus: :

GnRH GnRH se oslabađa putemse oslabađa putem GnRH puls GnRH pulsnognog generator generatora svakih a svakih 60-60-90 min90 minuta.uta.

• HipofizaHipofiza: :

GnRH simulGnRH simuliraira gonadotrop gonadotropine da oslobodeine da oslobode FSH FSH ii LH LH

• OvariOvarijeve folikulejeve folikule::

PulsatilPulsatilno osobađanjeno osobađanje LH LH ii FSH FSH potrebno je za razvoj ovarijevih potrebno je za razvoj ovarijevih folikula koji luče spolne hormone potrebne za cikličnost u folikula koji luče spolne hormone potrebne za cikličnost u sklopu samog ciklusasklopu samog ciklusa

Ciklične promjene na nivou ženskih hormona reprodukcije

1 4 8 12 16 20 24 28

Days since onset of menses

FSH LH Estradiol Progesterone

Ovu

laci

ja

Početak ciklusa FSH-injiciranje rasta folikula zrela folikula-diferencijacija corpus luteumSredina ciklusa- lučenje LH-izazivanje ovulacije sekrecija PG i estradiolapriprema endometrija

NivoNivo E2, LH E2, LH ii P Progesterona u toku rogesterona u toku normalnog normalnog menstrualmenstrualnognog c ciklusaiklusa

11 12 1412 14 2121 28 28DaDani ciklusani ciklusa

E2E2 PP

LH/FSHLH/FSH

LHLH ProgesteronProgesteron

OvulacijaOvulacija

PrimarnePrimarnefolikulefolikule

OocitOocit

GraafijevaGraafijevafolikulafolikula

Rupturirana folikulaRupturirana folikula

Corpus Corpus luteumluteum

CorpusCorpusalbicansalbicans

SekundarnaSekundarnafolikulafolikula

GonadotropiniGonadotropini

FSH odgovoran za rani razvoj folikula u ovarijima ženaLH-ovulacija

Muškarac-FSH- odgovoran za spermatogenezuRIAIspitivanje infertilnosti, hipogonadizma

LH-ispitivanje ovulacijeRazvoj EIA (urin)Kućno testiranje(za detekciju ovulacije)

Određivanje i značaj FSH i LH

1.RIA metode

FSH može biti veoma nizak ispod 0,5 U/L na litar-loše lučenjeGnRH, hipogonadotropni hipogonadizam

FSH iznad 20 U , insuficijencija jajnika, menopauza

LH-ovulacijski rast iznad 20 IU/I

Policistični janici-raspon 13-25 IU/L, normalan FSH

Najvažniji gestagen Progesteron

U ciklusu maks lučenje u 21 om danuU lutealnoj fazi-potvrda ovulacije

U trudnoći sinteza mu raste nakon 8 nedjelja

Značaj:

1. Dokazivanje ovulacije2. Funkcija žutog tijela3. Defekt 20-22 liaze(ne sintetiše se PG) ili 17 alfa hidroksilaze(raste PG)

Progesteron-oslobađa ga corpus luteum nakon ovulacije

Uloga:priprema endometrija na trudnoću priprema dojki za laktaciju inaktivira se u jetri

Hiperprogesteronemija-nema mensturacije, vrlo rijetko

Hipoprogesteronemija- proizvodi variranja u samom ciklusui količini izlučene krviInfertilnost

Nedovoljna produkcija PG od strane corpus luteum –čest abortus u prvom trimestru.

Estradiol

Najpotentniji estrogenEsej kompetitivnog vezivanja., RIASkupljanje u određeno doba danaZa funkciju ovarija (tumori ovarija,adrenalki , testikularnog porijekla uzrokuju rast)

Raste u trudnoći, kod aplikacije gonadotropinaPad nivoa-primarna i sekundarna disfunkcija ovarija i adrenalki

ProgesteronUrinarni metabolit-pregnandiolRIAEvaluacija fertilnosti kod žena i detekcija ovulacije

Estradiol- najvažniji estrogen

a) Sekundarne karakteristike ženab) Stimulacija ili rast folikulac) Razvoj endometrijad) Razvoj falopijevih tubae) Razvoj vaginef) Stimulacija razvoja dojkig) Sazrijevanje spoljnjih genitalijah) Završetak linearnog rasta

Uloga: priprema uterusa za trudnoću i dojke za laktaciju

Dijagnostička važnost:

Ovulacija, funkcija jajnika, pad kon.-smanjena funkcija jajnikaNeplodnost, nastupanje puberteta kod djevojčica(ispod 36 umol/L prije)Funkcija jajnika prije menopauze

Poremećaji na razini ženskih spolnih hormona

*Subfertilnost, amenoreja i oligomenoreja (odsustvo krvarenja) primarni poremećaj(nema nikako krvarenja) sekundarni poremećaj-nema menzesa 6 mjeseci *Hirsutizam—rast dlaka sa muškom distribucijom uzroci inzulinska rezistencija povezana sa policističnim obolenjem ovarija

* Virilizam-abnormalan razvoj sekundarnih muških karakteristika(rast testosterona), uvećanje klitorisa, dubok glas atrofija dojke Čest uzrok-tumori ovarija,adrenalkiČest uzrok-tumori ovarija,adrenalki

Kada se kod žena dobije visok testosteron, veći od 2000ng po ml Kada se kod žena dobije visok testosteron, veći od 2000ng po ml ispitati SHBG, mispitati SHBG, mjeriti androstendion, DHA sulfat.jeriti androstendion, DHA sulfat.Razlog:sinteza ovog proteina u jetri depresirana visokom koncentracijom Razlog:sinteza ovog proteina u jetri depresirana visokom koncentracijom testosterona.testosterona.

Ako raste DHAS-adrenalka ima produkciju androgenaAko raste DHAS-adrenalka ima produkciju androgenaAko je uzrok ovarije-onda raste androstendionAko je uzrok ovarije-onda raste androstendion.

1.Abnormalnosti vezane za sekreciju estrogena se javljaju zbog primarnih poremećaja na nivou ovarija, sekundarno vezano za iregularnosti u produkciji FSH ili pak oboje.

•manifestacija: poremećaji ciklusa, odgođen pubertet ili oboje, infertilnost

2.Hiperstrinizam-Kliničke manifestacije ovise od starosti pacijenta., iregularanMenzes, infertilnost, uterina krvarenja

3. Prerani pubertet

4. Iregularnosti na nivou menzesa i infertilnost

Klasični poremećaji kod žena

INFERTILNOSTINFERTILNOST

InfertilInfertilnost je nesposobnost para nost je nesposobnost para da ima potomstvo nda ima potomstvo naakon jednu kon jednu godinu seksualnog života bez godinu seksualnog života bez kontracepcijekontracepcije

U 6U 6-o-om mjesecu intrauterinog m mjesecu intrauterinog života:života: 6 milion 6 miliona a ovariovarijevih jevih folfolikulaikula

Pri rođenju:oko dva miliona preživiPri rođenju:oko dva miliona preživi

U menopauziU menopauzi:: 400,000 viab 400,000 viabilnih folikulailnih folikula

Kod zdrave žene koja nikad ne postane trudna i koja Kod zdrave žene koja nikad ne postane trudna i koja ima ovulacije 13 puta godišnje u starosnoj dobi od ima ovulacije 13 puta godišnje u starosnoj dobi od 15-50 godina starosti15-50 godina starosti:: manje odmanje od 500 o 500 odd originalnih 6 originalnih 6 miliona folikula dođe do ovulacije.miliona folikula dođe do ovulacije.

Uzroci subfertilnosti kod žena

1.Povećana sekrecija ANDROGENA(OVARIJE) KAO ODGOVOR NA INZULINSKU REZISTENCIJU

2.Primarno oštećenje ovarija(rastu gonadotropini, opada estradiol)

3.Hiperprolaktinemija

4.Bolest policističnih ovarija(raste LH, normalan FSH), estradiolEvidentan hirsutizam(raste testosteron i konc sHBG)

5.Hipogonadotropni hipogonadizam (rijedak uzrok tumor hipofize)

Subfertilnost -MUŠKARCI:

1. Primarni testikularni nedostatak(oštećene tubule i intersticij, raste FSH, raste LH, opada testosteron)

2 Obolenja hipotalamus-hipofiza(opada testosteron., niski ili normalni gonadotropini)

3. Hiperprolaktinemija

Faktori kod muškarcaFaktori kod muškarca

Analiza sjemene tekućineAnaliza sjemene tekućine

Serum Testosteron, LH, Serum Testosteron, LH, FSHFSH ii (? Prola (? Prolakktin)tin)

Na primjerNa primjer: Histor: Historija zauški ija zauški // kriptohidizam kriptohidizam

TestosteronTestosteron 18 nmol/L18 nmol/L

LHLH 3.5 IU/L3.5 IU/L

FSHFSH 2323 IU/L IU/L

Ispitivanje ovulacije

Zadebljanje mukisa cerviksa Regularan menstrualni ciklus mid lutealni serum progesteron > 30

nmol/L Ultrazvučni monitoring folikulogeneze i

ovulacije Bazalna tjelesna temperatura Detekcija LH u urinu

Endokrini profil

Bazno linijski profil prva tri dana menstrualnog ciklusa

Gonadotropini (FSH, LH) Androgeni Funkcija tiroideje Prolaktin Estrogen Test tolerancije na glukozu

FFaktori kod ženeaktori kod žene

Disfunkcija ovarija Disfunkcija ovarija /PCOS:/PCOS:

Serum LH, FSH, E2, androgenSerum LH, FSH, E2, androgenii, SHBG, SHBG

HHiiperprolaperprolaktinemiaktinemia::

Serum prolaSerum prolakktintin

Poremećaji Poremećaji TTiroidne žlijezdeiroidne žlijezde::

serum TSHserum TSH

Oligomenorea/amenoreaOligomenorea/amenorea

IIspitivanje infertilnostispitivanje infertilnosti

Serum LH/FSH/E2/ Serum LH/FSH/E2/ testosteron/17-OHPtestosteron/17-OHP

Serum prolaSerum prolakktintin

Serum TSHSerum TSH

RegularRegularni ciklusni ciklus Amenorea/oligoAmenorea/oligo

Serum progesteron Serum progesteron za za detekcijudetekciju ovula ovulacijecije

HHisterografija za isterografija za potenciju tubusapotenciju tubusa

Analiza sjemene Analiza sjemene

tekućinetekućine

HistorHistorija i ispitivanjeija i ispitivanje

RegularRegularanan c ciklusiklus Oligo/amenoreaOligo/amenorea

DaDann 21 progesteron 21 progesteron

>30 nmol/L>30 nmol/L <30 nmol/L<30 nmol/L

NormalNormalnana lutealna lutealna fazafaza

? Luteal? Lutealnana fazafazaInsufInsuficijencijaicijencija

S. ProlaS. ProlakktintinU/SU/SEndometrialEndometrialnanabiopsbiopsijaija

sasaHirsutismHirsutismomom

bezbezHirsutismHirsutismaa

S. TestosteronS. TestosteronS. DHEA-SS. DHEA-SS. 17-OHPS. 17-OHPU. U. Slobodni kSlobodni kortiortizzolol

S. FSH/LHS. FSH/LHS. E2S. E2S. TSHS. TSHS. prolaS. prolakktintin

PROMJENE NAKON UZIMANJA ORALNIH KONTRACEPTIVA

1.75 % zena razvija netoleranciju na ugljene hidrate, dijabetesInduciran steroidima

2.za 20% rast TG I VLDL, mali porast LDL holesterola I pad HDLHolesterola, najveci utjecaj estrogena, indukcija hepatocelularnihEnzima/promjene u sastavu zuci

3.Promjene koncentracije proteina, pad albumina,rast nosaca,povecana agregacija trombocita

4.Promjene koncentracije kortikosteroida i hormona tiroidejeRast za 50%

FUNKCIJA JETRE

1.Holestatski efekti/40% promjene BSP test, raste ALP, GGT

2.Idiosinkratska zutica/efekat progestagena

3, Rast transaminaza

4.Rast zeljeza, TIBC, rast transferina/progesteronska komponenta

Trudnoća= stanje razvoja embria ili fetusa u organizmu žene

Biohemijske promjene u trudnoći :

1.Zadržavanje tekućine/ redukcija plazma natrija,i ureje

Ekspanzija ECF/opadaju koncentracije albumina i ukupnih proteina, uticaj na klirens proteina, brzinu glomerularne filtracije, opadaju kreatinin i ureja., prisustvo intermitentne glikozurije zbog redukcije bubrežnog praga za glukozu)(javljaju se humani placentalni laktogen, specifični beta glikoprotein trudnoće

1a. Povećana produkcija proteina koji egzistiraju na nivou obje cirkulacije(Estrogen, progesteron, rana trudnoća-nivo održavanja PG, u napredovaloj trudnoći placenta izvor progesterona)

2.Raste tiroksin, ali urinarna ekskrecija T4 je normalna, rast TBG, opada FT4 , rast ukupnih kortikosteroida, rast kortizola

3. Rast placentalne ALP 2 do 3 puta, raste aktivnost oksicotinaze(enzim sličan cistin aminopeptidazi)

4. Željezo.,stupanj promjena ovistan o profilaksi

5.Metabolizam masti-rastu TG, holesterol, fosfolipidi, masne kiseline

Patologija koja se asocira sa trudnoćom:Patologija koja se asocira sa trudnoćom:

a) Dijabetična trudnoća- asocira se sa povećanim rizikom mortaliteta fetusa•Hiperglikemija kod majke-Promocija hiperinsulinizma na nivou fetusa(in utero manifestacija povećan rast, postnatalno dolazi do neonatalne hipoglikemije)b) Hipertenzija-povećan rizik insuficijencije placente, retardacijafetalnog intrauterinog rasta.Eklampsija-(druga polovina trudnoće)konvulzije, hipertenzija, poremećena funkcija bubregakoja uključuje proteinuriju

c) Obstetrička holestaza-rast žučnih kiselina seruma beba intrauterina smrt nakon 36 nedjeljad) Korištenje lijekova-posebno anti konvulzivi.

Placenta

Luči proteinske hormone, estrogen i PG

Biohemijski testovi imaju ograničenu vrijednost u monitoringu razvoja fetusa

1.HCG(humani korioni gonadotropin)

Testiranje na beta podjedinicu, danas na intaktan oblikBeta podjedinica-analitika(pacijenti sa HCG neoplazmama)

Intaktan HCG-detekcija trudnoće(1-2 dana nakon fertilizacije)

Raste do 70-90 og dana trudnoće, opada za 10-15% kasnije

Određivanje HCG korisno kod:

Sekrecija HCG održava produkciju PG od strane C.luteum u ranoj fazi trudnoće

HCG stimulira:

a) Razvoj gonada fetusab) Sintezu androgena u testisima fetusa

• Dijagnoza ektopične trudnoće • Predviđanje spontanog abortusa • Detekcija više trudnoća odjednom • Detekcija u monitoringu HCG produkujućih tumora, • Praćenje rasta, tretmana

Imunohemija

1. Ukupni HCG

1. Intaktni HCG(1 At specifično za alfa lanac) (At specifično za beta lanac)

3. Slobodna beta podjedinica (At specifično za epitop na beta lancu)

Određivanje beta HCG

1. Test aglutinacije-inhibicije(na staklu ili epruveti)

Princip:Eritrociti ovce presvučeni sa HCG pomiješaju se sa uzorkomReakcija sa HCG At____ posljedica aglutinacija inhibicija

Tehnika neosjetljiva-lažno neg.rezProblemi: lažno poz reakcija: proteini, eritrociti, leukociti, bakterije

2. Imunoenzimatski koncentracijski esej-sendvič tipHCG u uzorku uhvaćen od prvog At se vezuje za čvrstu fazuDodaje se detektor antitijelo., sendvič čvrsta tehnika

3.RIA HCG------vezivanje za anti HCG, vrlo osjetljiv

4. Imunoenzimometrijska tehnika(Elisa), HCG uzorak + HCG At vezano za čvrstu fazu, anti HCG detektor At(E*)-----sendvič

HUMANI PLACENTALNI LAKTOGEN(HPL)(humani korioni somatotropin)

Strukturalno i imunološki sličan hormonu rasta i prolaktinuRaste do 37 nedjelje trudnoće

Djeluje sa HCG u stimulaciji sinteze estrogena i PG putemcorpus lutum

Stimulira razvoj mliječne žlijezde, ima somatotropno dejstvo

Raste sa gestacijom, korelira sa masom placente

Određivanje: RIA serum

SteroidiSteroidi

PRODUKCIJA ESTRIOLA

Fetus Placenta Majka

Holesterol Holesterol <<--------—— Holesterol Holesterol

Pregnenolon Pregnenolon <<--------—— Pregnenolon --------- Pregnenolon --------->>

<<--------—— Progesteron --------- Progesteron --------->>

DHEA-S ---------DHEA-S --------->> DHEAS DHEAS <<--------—— Estradiol/estron--------- Estradiol/estron--------->>

16 hidroksi DHEAS ---------16 hidroksi DHEAS --------->> 16 hidroksi DHEAS 16 hidroksi DHEAS <<--------—— Estriol ---------Estriol --------->>

• Slab estrogen, 100-i dio potencije estradiola, deseti dio potencije estrona po jedinici težine,osnovni estrogen u urinu trudnica

• Uloga:Obezbjeđivanje optimalnog protoka u gravidnom uterusu

• Evaluacija fetoplacentalne jedinice kod majki dijabetičara- pad estriola od 40 %- predikcija fetalnog distresa

• Identifikacija postdatumske gestacije.dijete rizik od razvoja sindroma postzrelosti, pad nakon 40 nedjelje gestacije

• Dijagnoza intrauterine retardacije rasta- nivo estriola nizak

• Refleksija fetoplacentalne jedinice

• Dobrobit fetusa

ESTRIOLESTRIOL

Estriol metaboliti* PLAZMA URIN

Nekonjugirani estriol 0% 9%

Estriol 3 sulfat 4% 15%

Estriol 3 glukuronid 13% 15%

Estriol 16 glukuronid 73 % 21%

Estriol 3 sulfat-16 glukuronid 10 % 40%

Analitika estriola(urin)

1.Reakcija po Koberu (spektrofotometrija)

Određuju se ukupni estrogeni., uzorak zagrijati u prisustvu H2SO4 i hidrohinona, stvaranje ljubičasto obojenog hromogenana 514 nm

Hidroliziran urin dobar uzorak, estrogeni ekstrakcija u fenil etil acetatu, Alen korekcija na 472 i 556 nm., ekstrakcijahromofora u hloroformu

2.Ittrich metoda*fluorimetrija-ukupni estrogeni

Ekstrakcija hromofora, eksitacija na 530 nm, emisija 550 nmŽuto zelena fluorescencija

3.gasno tečna hromatografija-koristi se plameni jonizacionidetektor., hromatografija isparljivih derivata sa N2 mobilnomFazom.,ovom prethodi hidroliza slobodnog estriola

4.HPLC-uv ili fluorescentna detekcijaEstriol-hromatografija na obrnutoj fazi C18., detekcija 280 nmFluorescencija 220 nm, emisija 608 nm-dansil derivati

5.RIA-esej kompetitivnog vezivanja 3H ili 125I estriol,Oslobađanje od vezanog biljega, separacija drugim At

6.EIA –esej kompetitivnog vezivanja., estriol enzim konjugatSepariran od slobodnog enzima, enzimatska reakcija 463 nm

Estriol-urin

Plazma ESTRIOL-mjera fetoplacentalne jedinice

•Raste sa trudnoćom• Nalazi se pod djelovanjem hepatalne i renalne funkcije majke• Prati se kod trudnoća sa visokim stepenom rizičnosti• Pad od 40-50 % , rani znak fetoplacentalnog distresa

ANALITIKA:

1.RIA-slobodni i ukupni estriol (česta) Antibiotici interferiraju sa procedurom

2.EIA-rijetka

3.HPLC –elektrohemijska detekcija

Ekstrahirani nekonjugirani estriol se hromatografira hromatografijom na obrnutoj fazi, detekcija elektrohemijskom detekcijom

Alfa fetoprotein (AFP)

Produkcija hepatociti, fetusRaste do 32 nedjelje trudnoće, strukturalno sličan albuminuPojavljuje se u urinu fetusa, prisutan u amnionskoj tekućini i krvi majke

Dijagnostički značaj: a)Otvoreni defekti neuralne cijevi i defekti ventralnog zida (anencefalija, spina bifida)

b)Down sindrom , mrtvorođenčad, bebe malih težina

Uporedo raditi AFP majke-voditi računa o godinama starosti Majke, rasi te prisustvu dijabetesa tipa I(MSAFP 10% veći kod crnkinja, dijabetičari 20-40% niži)

Mogućnost nastanka hromozomskih aberacijaNizak MSAFP korelira sa rizikom za Down sindrom

Najčešći poremećaji- abnormalnosti na razini fetusa:

1. Fetalni distresPad estriola i HPL-a u urinu i serumu majke, danas zamjena Ultrazvuk

2. Erithroblastosis fetalisObolenje izazvano inkompatibilnošću krvi djeteta i majkeProdukcija At majke orijentiranih prema površinskim Ag eritrocita fetusaPosljedice: destrukcija, anemija, opterećeno fetalno srceStimulacija hematopoeze u koštanoj srži fetusa, gušterače i jetreRazaranje ćelija jetreSmanjena sinteza albumina, smanjen onhotski pritisakStupanj destrukcije se određuje preko razine bilirubina u amnionskoj

tekućini

3.Gestacioni dijabetesMakrozomija(veliki fetus u fazi gestacije)Uzrok: hipersekrecija inzulina u fetusuDetekcija: mjerenje inzulina u amnionskoj tekućini

•Defekti neuralne cijeviVelike koncentracije AFP-a u amnionskoj tekućini u 95 % slučajeva (16 nedjeljA GESTACIJE)

DALJA IDENTIFIKACIJA: Ultrazvuk, amniocentezaAko se dijagnoza postavi prije 20 nedjelje trudnoće, zaustaviti trudnoću!

Mjerenje aktivnosti AChE kada fetus ima ovaj defekt

•Skrining na Down sindrom-amniocenteza

Opada Majčin AFP i protein asociran sa trudnoćomRaste HCGRaste nekonjugirani estriol

Ostale analize u amnionskoj tekućini

1. Bilirubin-ispitivanje rizika po fetus Rh inkompatibilnost

Posljedica-hemoliza, anemija,prevelika sinteza bilirubina

Nekonjugirani bilirubin-max 450 nm u amnionskoj tekućiniRast ovog max-erithroblastosis fatalis

Amnionska tekućina-amniocenteza-ubacivanje igle kroz abdominalni i uterini zid majke u amnionsku šupljinu

22 nedjelja gestacije(historijat hemolitičke bolesti ili pak Serološka evidencijainkompatibilnostiSkanirati uzorke 350-750 nmAko poraste A 450, a stariji je fetus, ozbiljnije je obolenjePrisustvo mekonija-ekstremni fetalni distres (350-400 nm)

Masti u surfaktantu

Plućni surfaktant: Lecitin(fosfatidil holin) i fosfatidil glicerol (PG)Skladište se u kasnoj fazi fetalnog razvoja

Dijagn. značaj:evaluacija zrelosti fetalnih pluća, prevencija respiratornogrespiratornogDistress sindroma)Distress sindroma)

Surfaktant sa PG ima veće stabilizacijske osobine-prisustvo značizrela pluća

Mjerenje stabilnosti pjene, površinskog napona, mikroviskoznosti

Kvalitativni esej:test stabilnosti pjene

(Fosfolipidi surfaktanta grade stabilne mjehuriće u prisustvu etanola)

Priprema amnionske tekučine za mjerenje L/S

Centrifugiranje pri nižim brzinama, supernatant držati na +4 ili zaleditiDio fosfolipida izgubljen u taloguIzbjegavati rad sa uzorcima kontaminiranim sa krvlju(rastu fosfolipidi)Nalaz validan ako je prisutan PG

Određivanje:

Stabilnost pjene(test miješanja)-stvaranje mjehurića u prisustvu etanola

Površinska tenzija

Mikroviskozitet tekućine

Interference: krv,mekonij , vaginalni sekreti

Različit spektar obolenja:

Neonatalni problemiEndokrinološkiGastroenterološkiUrođene manePoremećaji na nivou DNK

Neonatalni:

Bebe male težineŽuticaHipoglikemijaHipokalcemijaNeonatalni skrining

Endokrinološki poremećaji

Nemogućnost rastaNemogućnost rastaOdgođeni pubertetOdgođeni pubertetPoremećaji na nivou adrenalkePoremećaji na nivou adrenalkePoremećaji na nivou tiroidne žlijezdePoremećaji na nivou tiroidne žlijezdePoremećaji na nivou paratiroidne žlijezdePoremećaji na nivou paratiroidne žlijezdeDijabetes tipa II kod tinejđeraDijabetes tipa II kod tinejđera

Gastroenterološki poremećajiGastroenterološki poremećaji

Cistična fibrozaCistična fibrozaNetolerancija proteinaNetolerancija proteinaNetolerancija na ugljene hidrateNetolerancija na ugljene hidrateNasljedni poremećaji transportaNasljedni poremećaji transporta

Problemi sa neonatusima

1.Problem rađanja djece manje tjelesne mase2. Žutica3.Hipoglikemija4.Hipokalcemija(Mg)5.Neonatalni skrining6.Dehidratacija

•Nezrelost neonatalne jetre-niska aktivnost enzima detoksikacije

Rizici za razvoj kernikterusa: spol, način poroda, ABO inkompatibilnost, težina , gestaciona starost

•Hipoglikemija

Ozbiljna hipoglikemija-permanentno oštećenje mozga kod djeceNajčešće se javlja kod beba malih za svoju starosnu dob, majki dijabetičarki

Kod prijevremeno rođene djece hipoglikemija na razini ispod 1,4 mmol/Lprvih nedjelja života

Vrijednost konc glukoze ispod 1,9 mmol/L -indikator ozbiljne hipoglikemije za normalno rođenu djecu u prva tri dana života

Nakon ovog perioda hipoglikemija se definira kao ( 2,2-2,5 mmol/L), počinjetretman kod novorođenčadiTest na ketone, ali isti nije pozitivan kod hiperinsulinizma

Dehidratacija

Ukupna tjelesna voda kod bebe- 75% tj .masePrvih nedjelja nakon rođenja kontrakcija ECF-a-bebe gube na težini, poslije dobivaju

Funkcija bubrežnih tubula nije adekvatnaSposobnost koncentriranja urina lošaMaksimum osmolalitet urina = 600 mmol/LReapsorpcija bikarbonata i glukoze reducirana

Posljedica: Niske koncentracije bikarbonata, glikozurija

Hidratacija se ispituje preko mjerenja tj. mase

•Nivo kalcijuma

Prilikom rođenja, nivo kalcijuma je 1,75-2,00 mmol/L u prvoj nedjeljiKasna neonatalna hipokalcemija između 4-10 dana starosti Uzrok: Vit D kod majke nizak, nizak Mg-nekad uzrok hiperfosfatemija, problem bubreg

Rast vrijednosti kod odraslih nakon 1,5 do 2 godine starosti

Pad kalcijuma manje izražen kod djece dijabetičnih majkiPrijevremeno rođena djeca-depresija u razini kalcijuma serumaPotencijalno: neonatalna tetanija-iritabilnost, konvulzije

Neonatalni rahitis

Hipokalcemija,defektna mineralizacija kostiju, rast aktivnosti alkalne fosfatazeIzražena kod prematurusa uslijed povećanih potreba za kalcijumom, fosfatom, vit DRijetko uzrok konvulzijaHipomagnezemija-uzrok neonatalnih konvulzija, uvijek vezana za kalcijDefekt u crijevnoj apsorbciji magnezijumaNetretirana djeca- opadne do 0,1 mmol

•CK(kreatin kinaza)Carski rez- bebe niži CK MM, CK MB od transvaginalnihRaste aktivnost enzima i rast može trajati do 10 dana

•Potencijalna nutriciona ispitivanjaAlbumini-mjera hepatalne zrelosti,marker nutricionog statusaŽeljezo-brzo se mijenja u prvoj godini životaHemoglobinLipoproteini-mjera nutricionog statusa i genetskog rizika za razvojem koronarnog obolenja arterija

Praktični problemi prilikom rukovanja sa uzorcima ove populacije:

Uzorkovanje Volumen Tip uzorka Interferencije Instrumenti

Problemi kod uzorkovanja

Kapilarna krv Volumen Evaporacija Hemoliza Lipemija Bilirubin Tip antikoagulansa

Hematokrit neonatus i mala beba

Efekti evaporacije uzorak 0.1 mL

Referentni opseg/Interpretacija

Starost/spolUticaj majkeNačin porodaNezrelostNačin prehraneRastZrelost organa

Starosne grupe:

•Neonatusi- manje od mjesec•Beba- 1 mjesec do 2 godine•Dijete- 2-12 godina•Odraslo dijete 12-18 godina

Plazma fosfat

Problemi sa interpretacijom rezultata-fosfat

oFosfat kod malih beba pada u okvire referentnih vrijednosti za odrasle

oRezultati normalni, ali de facto niski za tu dob

oKod djeteta registrovan rahitis nakon par mjeseci

Promjene u koncentraciji hormona tiroideje kod normalnih

neonatusa

Beba rođena majci sa dijagnozomhipotiroidizma14.06 2005

15.06 TSH 34,8 mU/L FT4 27,3 pmol/L

Majci rečeno da su rezultati nenormalni

21.06 2005-neonatalni skrining na suhoj mrlji

3 mU/L-rezultat normalan

IgM

Uticaj majke

AFP (kU/L)

-10 ned 38910-2034000-8 ned 15960-988900-6 ned 6548-4808004 ned 2686-2338002 ned 1102-1137000 452-552702 185-268704 76-130705 31-63538 13-308910 5-150212 Ispod 4 do 73014 Ispod 4 do 35516 Ispod 4 do 17318 Ispod 4 do 8420 Ispod 4 do 41 više od 8 mjeseci ispod 10

Problem zrelosti

Način prehrane

Rast

Zrelost organa 8 nedjelja- 200 nefronaEmbriogeneza bubrega

20 nedjelja-350,000 nefrona 28 nedjelja-766000 nefrona Rođenje 822,ooo nefronaBrzina glom. Filtracije proporcionalna ukupnoj tjelesnoj površiniod treće godine do srednjih godinaRačuna se na bazi konc plazma kreatinina ili za tačnije mjerenje koristiti Cr(51) EDTA ili klirens inulina

GFR=kx Ht/Pcr ht=visinaK=30 kod prijevremeno rođenih bebaK=40 kod beba rođenih na vrijeme

Problem: vremenski skupljanje

Mjerenja zasnovana na ranim jutarnjim uzorcima i slučajnim UzorcimaVezati ekskreciju za klirens kreatininaOmjer protein/kreatinin konstantan od 3-16 godina starosti,bezSpolnih razlikaNe može se precizirati vremenski slijed uzimanja uzoraka

Analitičari imaju problem malog volumena uzorakaTeško automatizirati procesTeže raditiManje opterećenje, ali treba brz odgovorČesto potrebno prisustvo roditelja

Organizacija laboratorije

Odjel za uzimanje uzorakaOpća pedijatrijska bolnicaNeonatalni skrinigUrođene metaboličke maneDNK laboratorija

Servis neonatalnog skrininga:

•Fenil ketonurija•Kongenitalni hipotiroidizam•Srpasta anemija•+- cistična fibroza•+-MCAD

Specijalizirna tehnologija: tandem Masena spektrometrija