Silenciamiento de genes mediante RNA de interferencia

Nicole Salgado | Silvia Lazzarino

17 | 06 | 2011

CONTENIDOS

.1. Introducción

.2. Mecanismo

.3. Función

.4.Aplicación

.5.Análisis

Trabajo de botánicos con petunias. Se descubre un fenómeno de silenciamiento que fue llamado “co-supresión”.1990

Trabajos el hongo Neurospora crassa. Se descubre un fenómeno equivalente al de co-supresion que fue llamado “quelling”.

1992

Andrew Fire y Craig Mello trabajaron el silenciamiento de genes en C.elegans, definiendo el rol del RNA de interferencia (iRNA).

1998

Tomas Tuschl descubre el uso directo de los siRNA, lo que permite su aplicación en mamíferos.2000

Andrew Fire y Craig Mello ganan el premio Nobel de medicina por descubrir el silenciamiento de genes por iRNA.2006

Un poco de historia sobre los RNA de interferencia..IN

TRO

DU

CCIÓ

N

INTR

OD

UCC

IÓNEste mecanismo fue

observado por primera vez en 1990, en plantas (Petunias).

Más tarde se observó en: - Caenorhabditis elegans- Neurospora crassa

- - Drosophila Melanogaster

Luego se observó en mamíferos

Caenorhabditis elegans

Drosophila Melanogaster

Neurospora crassa

MEC

ANIS

MO

MEC

ANIS

MO

Video Nature Reviews: http://www.nature.com/focus/rnai/animations/index.html

¿Qué es el RNA de interferencia y cuál es su mecanismo de acción?

MEC

ANIS

MO

siRNA se introduce en la célula

siRNA se acopla RISC (RNA induced silencing complex) y se le remueve la hebra

sentido

iRNA se une al RNAm Slicer Ago 2 corta el

RNAm

Se evita traducción y se silencia el gen

A B C D

A B C D

RNA de interferencia

Este mecanismo actúa como un sistema inmune a nivel celular.PROTECCIÓN

Este sistema regula la expresión de genes, especialmente en el desarrollo.REGULACIÓNFU

NCI

ÓN

¿Cuál es el rol natural del iRNA en la célula?

APLI

CACI

ÓN

Usos del iRNA como metodología experimental…

APLI

CACI

ÓN

Usos del iRNA como metodología experimental…

FIGURA 1Análisis de la expresión de b-arrestina en células HEK293

transfectadas con siRNA.

FIGURA 2Efecto de la supresión de niveles de B-arrestina mediada por siRNA en la

internalización del receptor 7MS.

Aspectos a considerar sobre la metodología experimental…

Técnica de fácil uso. Gran variedad de mecanismos efectores.

Existen programas gratuitos para el diseño de iRNA.Producción de siRNA ampliamente extendida.

VEN

TAJA

S

El silenciamiento no es 100% completo. Puede haber silenciamiento inespecífico. Es necesario utilizar un mecanismo para que el iRNA ingrese a la célula blanco.

DES

VEN

TAJA

SANÁL

ISIS

Otras proyecciones al uso de los iRNA…AP

LICA

CIÓ

N

Eliminar de la célula los elementos

esenciales para un patógeno.

Anular la función de proteínas que

estén involucradas en enfermedades.

Interferir en la expresión de

genes patógenos.

FIN

BIBL

IOG

RAFÍ

A • Maria Fernanda Correa, Haroution Adjounian, Sarkis Horacio, “Silenciamiento de genes mediante RNA de interferencia, consideraciones del mecanismo y diseño de los sistemas efectores”, Archivos de farmacología y terapéutica, 2007.

• www.nature.com - RNA interference

• “Biotecnología, RNA de interferencia: el silencio de los genes”, Tomás López, Daniela Silva, Susana López y Carlos Arias.

• Seungkirl Ahn, Christopher D. Nelson, Tiffany Runyan Garrison, William E. Miller, and Robert J., “Desensitization, internalization, and signaling functions of !-arrestins demonstrated by RNA interference” PNAS, 2002.

ANEX

OSistemas efectores

shRNA