Potassium Chanel KIR4.1 as an Immune Target in Multiple Sclerosis

Rajneesh Srivastava, Muhammad Aslam, Sudhakar Reddy Kalluri, Lucas Schirmer, Dorothea Buck, Bernhard Hemmer, et al

Yerlin Andrés Colina VargasDavid Cano Quintero

Medical students UPBThird semester

Molecular BiologyTeacher: Lina Maria Martinez

Introduction

MULTIPLE SCLEROSIS•Chronic inflammatory demyelinating disease of CNS•Disease of unknown cause / Autoimmune pathogenesis•Complex interplay between genetic and environmental factors•Autoreactive T cells key

Treatment Plasma exchange Depletion of B cells

Introduction

POTASSIUM CHANNEL•Transmembrane protein, tetramer•Allow passage of potassium into and out of the cell•Membrane potential repolarization•Resting potential•Are found in all body cells

Introduction

KIR4.1Type of potassium channel located in glial cells

Introduction

Relation•Patients with multiple sclerosis have antibodies anti KIR4.1 channels

Antibodies Anti

KIR4.1 potassium channel in glial cells Patients with MS

Main Objective

Identify the target of the autoantibody Identify the target of the autoantibody response in Multiple Sclerosisresponse in Multiple Sclerosis

Metodología

Cohorte EM Mc Donald 2005

1 recaída EM 2 o mas lesiones (MRI) Bandas oligoclonales

Grupos control – Sanos – Otras enfermedades neurológicas

Ratones– Corroborar / comparar pruebas– Efecto del anticuerpo “in vivo”

Metodología

INMUNOPRECIPITACIÓNAntígeno proteico precipitado de una solución usando un anticuerpo que se une específicamente a esa proteína.

Metodología

ELECTROFORESIS Separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico.

Metodología

WESTERN BLOTTécnica analítica usada para detectar proteínas específicas en una muestra determinada.

Metodología

ELISA(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay)

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas. Técnica de inmunoensayo en la cual un Ag inmovilizado se detecta mediante un Ac enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable como cambio de color.

Resultados

• A. Lisado de cerebro humano SDS-PAGE precipitado IgG de 12 EM–12 OND• MALDI-TOF para detección Cadena PesadaKIR4.1

•B. Western blot + 2 InmunoprecipitacionesKIR4.1

•C. Western blot IP in VitroKIR4.1 como blanco de la IgG en EM

Resultados

•B. Inmunofluorescencia (Izq.)Salvaje -Sup( 100μm)(Der) Purificado-Inf(50μm)

× SNC si KIR4.1 + AntiC -

• Kir4.1 se expresa en grandes cantidades en el cerebro del ratón 10 días después del nacimiento

•Anti-Kir4.1 +/+ tiñen cell gliares de salvajes pero no de los knock-out•A. 2ble Inmunofluorescencia. Anti-KIR4.1+ IgG EM y OND control

(200μm) No se observo en OND

Resultados

Inmunohistoquímica análisis

•Proteína gliar fibrilar ácida(GFAP) • Buffer de fosfato salino (PBS)

•AntiKIR4.1 – Proteína y no compite con KIR4.1_IgG

•AntiKIR4.1 = No C9neo

•KIR4.1 se expresa en Astrocitos y Oligodendrocitos

Discussion

Discussion

Discussion

Discussion

Conclusions

Maps

David Cano Quintero

Maps

Yerlin Andrés Colina Vargas