removal of cumulus from mammalian zygotes using microfluidic techniques
TRANSCRIPT
��������� ���������� ���� �������� ����� ���� ����� �������� ���� ��� � ��� ��!���� �� "�� #�!������ �
������� �� ��� ���� �������� ������� ���� ��������� ���������
��� ��������� ���� ��!���" ��� � � #������$
���%������� �� ��������� &����������� '��������� �� #��������(
������� ������� #)$��%������� �� *����� +�������� '��������� �� )������� �� '�!���(
���%����� '�!���� ),
*!������� $� �� �%���� ������!��� ��� !� !�� � �����&����� ������ �� ��������� ������ � ����� �� ��� ��������� ��-����� ��!��'�� �������� (������) ����� *���+!� ���,�-� � ������%������ �� ,�+*����!�+ ��-��� ��!� ������ ����� ��� �� !�� ��� ����� � !��! � !�� ����� *���+!� ���,�- (�������)��� �� !���.��% ��� &����� ����,��!��� � ��������� ����� *���+!� ���,�-� � "�� ��%��� �%�!+ ���� ������ !��� !�� �����������! !�� ����� ��!� � ���%���! ��,� ������ !�� ����� "��,��! (������ �%��/���!+ �������� !��� !�� ����) ��� � �� !������� !�� ����� ��� ��!���� "�� + !�� � � ,�� ���*������&�� !� ������� ,� �!�����% ��� �������! � !�� ����� *���+!����,�- �����% !� !�� ���,�!� �,���!��� ��� ������ � !������� �� ��� !�� ���+!��
.�� #����� ����+�� ������� %����� �� ����� � �����&�����
)����������
��� �� �������� ����� ��� ������ �� �� ����� � ���
�������� ������� ����� �������� �������� �����
���� ��������� �� ����� ��������� �������� !"#$%
�������� ��������� ����� ��� ������� �������
���� ������� �� ����� ���� �&������ �� ��� !!'$%
�������� �������� ����� ��� ����� �(�� �� ��� !! $
�� ������� ������ ������� !!)$ �������% �� �������
��������� ��� ��� �� ������ ������ �*����� !!!%
�������� �� ��� !!+$� ,����� �������� ���������
�-&.$ �������� ������� �������� �������� �-&/$� �������� �������0���� �-&1$� �������� ����� ������� �-&,$�
����� ��� �� �� ������ �������� -&1 �� ���
��������� �� ��� ��� �� ����� ������ �� ���� �
������ 2����� -&,� ��� ����� ������ � ���� 0����
������� ���� �����$ �� �������� ������ ���������� ��
�������� 33 �����$ ��� ��� ������� �� ���
���� ����� 4����� �� ������� ����� ���� ��� ���� ��
��� �� ��� �� ����� ����������
5����� �� �� ������ � ����� ������ �������
������� ������ ����$ �� ������ ������ ��� ��� 6���
)7' �� �� ������ ����� 2����� ���� ����� ��� ��
�1����� $ ��� ��� ������� �� 337 +3 ����� ������ �� � �����$ ��� ���� ��� �����6����
������ ������� ��� ������ �� ����� � �����
�������� � �� ������ ���� ��� ������ ��� ��������������0�� ����� �����$ �� ���������� � ��� ��
������� ������ ����� ��� ������� �� ������ ���
������� ����� �������� ��� ���� �� � �������� � ������
�� � ���� � ��� ������� �� #337)33 �� �1����� $�
��� ����� �� ����������� ������� ����� ��� � ���
������������� ��� ��� �,8,$% ��� ������������ ��
���� ��� ��� ���� ,8, ���� ���� ��������� �� �������
����� ����������� 0���� ������ ������� �������0��
������ ���� �����$�
��� ������� �� ������� �� ��� ����������0���� ��
�������0���� ��������� -� ���� ������� ��� ����
�������� �� �� ��� ��� �� ����� �������0��� ��� ��
����� �� �� ������� ��� ������ �� ��������� �����
��������� ������� �� ���������������� ������� ���
������� �� �� ����� �� �� �� ����� �������� �� ����
� ����� �1���� �� ����� !"3$� ,������ ������ ��
���� � ������ ��� ���� �� �� �� �������0���� � ���
� ��� ������������� �,��� �� ��� !!)$� 2�����
�������0����� � ��� ������ ���������� �� ��0��$
��� ����� ��� ������� ��� �9�������� !" $�
������� ��������� ������� ��� ������� ��� ������
���� ��� ����� ����� ������� �0�� �������$� ����
������� ������� � ����� ������� ��� ����������� ���
����� �� ������� ��� ��� ��������0���� � ����� ��
� ���$ �/����� �� ��� !!)$� .��� ��� ����� ����
����� ����� �:���� !" $� �� ����� ��� ������� ��
������ ������� ���� ����� ��� ����� ���������
�������0���� �2���0� !;)% (����� �� 1����� !'!$� -�
������� ����� �� ���� �� ��� ����� � ������� ���� ���
����������<������� ���������� ���� ���� ���� ���
0�� �������� ��������� ����� ������� �=�������
!" % 9�������� !" $� 1�� ����� ������� ���
������� ����� �� � ���� ������� ���� ��� ����
������ ������ -&1 �� ������ ��� 6��� >+ ����� ���������
-&1� �� ������ �� ��� � ������
? ,����� ������ ������
.����� ���� �� ������������ �������� � ��� =��/5/� ��
=�������� ��������� :���� >333 ���������� �� ,�������� 8����
�� ������ >#7>;� >333�
$�/
,�������� ������ �� ��������� ������� ��� �������
������ �� � ���� ���� �� �� ��������� ����� 8��
������ �������� ��� ��� �� � �� ����� ��0�� ����
� ����� ��� ��������� @����� ��� ,8, ���� �� ��� ��
��� � ���� �� �� ��������� ������ ��� ��������
1������ ��� ����� ���� �� ��� �� ����� � ����
����� ���� �������� �� ��� ����� �4�������� >333$�
A������ �������� ��� ������� ������ �� ������ ���
���������� -� ���� ������� ����� �� ,8,� �� ���� 37
33$ �� ���� �� ���������� ���� �� ��� ���� �� � ��
���������� �� ����� ������ �� @��� ������ ��� �����
B��������0���� ������ ��������� ��� ������� ������
�4�������� >333$� &�������� ����� ���� ����� ��������
�� ��� 0���� �� �� �������� �� ���� �������
������������� C��� ��������� �������� ������� ��
��������� 0������ ������ ������� �� ������
������D�� �� ���� �:��� !!'$� A ����� ������ �� ���
���������� �� ����� ��� ����� ������� �������
����� �,��� �� ��� !!)$� *��������� ���� ���� ���
������ ��� �������� �� �� � ���� ���� �� �� ��� ��
��� �������� ������D��� ��������� ���� �(����� ��
1����� !'!$� A������� ���� ������D�� ������� ���
�������� ������ ������� �� ������ ��� �������� ��
��� ������ ������ �� ��� � �� ��� ��������� �� ��� ,8,�
-� ����� �� ��������� �� ������ �������
������ �� ����� ��� ������0�� ����� ��������
�� ��� ����� ������0�� ,8, �������� �� �������
������� �������� ���� ������ ������� ������� @���
������������ ������� ���� ���� � ������� �� �����
�� ������� �� ��������� ���
������ ������ ��� 0�!��������
-��������� �� ��� ��������� ���� ������ ������D��� ��
�� ����� ��� ��� ���� � ��� ������ ��������� ���
�����@����� ������ �� ���� �������� �� ����� ����
������ ��� ������ �� ���������� ������D���� ���
������ �� ��� ��������� �� �������� � $ �����������%
�>$ ������ ���� ����% �#$ ���� ������ ������% �+$
�� ��� ��0�� �� �������� �������% �)$ ������� ���
������������ �� ��� ������� �����% �;$ ���� ���
�������� ���� ��� �� ��� �������% �� �'$ �����������
��� ���� ������ ������� �� ��� @����
��� ������ �� �������� ���� �����������������
�.2/�$� -� �� ���� ����� ��� �� � ��� ������
��������� �������� ��������� .2/�� �� ��� ����� ��
������ �,�� �� ��� !!!% ,��� �� ��� !!"$� ���
������ ����� ,8, ������� �� �� ���� ��� ������ �����
������� ������ � ������ �������� 1����� > ������$ ��
� ��������� ���� �� ��� ������ ����������� ��� �����
����� ��� ������������ ������� �� ��� ��� ������ �����
��� ����� �� ��� ������ ������� ��������� �� ����
������ ���� ��� .2/�� ���� ������ ��������� � ���
��� �� ��� ��� ������ �1����� > ������$$� ��� ���
������ �� ��0�� �� ���� ������ ,8, �� ����� �����
�)33 �� ���� � +33 �� ���$� ��� ��� ������
������� ��� ������� ������������ ������� �1����� >�$$
�������� ��� ��� ����� � ��� ���� �>)3 �� ��
)3 �� ���� � +33 �� ���� ��� �������$� 1����� ����
��� ��� ������ !3� ���� ����� ��� ��� �� �������� ������� �� ��� ���� ������ ���� �+3 �� ���� �
+33 �� ���$ �1����� >�$� ��� ��������� �� � ������
������� ��� ��� ������ ��� ������� �� ��� ���
������ ������� �� ���� ������ �������� ������ ��
������� ����<������� ������� �C����� �� ��� !!"$�
��� .2/� ������� ���� ��� ����� ����������
���������� ������ ������� �� ��������� �� ���
����� � ������� �������� ������ ���������� -�
�������� ��� .2/� ������ ������� ��� ���� � ����
0��� $� � � ������ �� �� � �� �� ��� �� � ��� � ���� ���� � ���� ���� ��� �� �������� ������� ���� �� �� �� ��� ����� ��������� ����� �� �� ���� ����
0��� �� �� �� � �� � �� �� � ���� ���� �������� �� ������������ �� �� � ����� ��� �� ��� � ��� ��������� � �� ��� ������� � �� ���� �� ��������� � ������� ���� ������������ ��������� ���� �����! �"#"��
$$1 $����� %� �� &���
����� ��� ����� ��� ����� �����$� � �� �����
� ���� �� �� ���������� ���� ������ ����� ��������
,������ �� �������� �� .2/� ����� ������������
������� �2��� �� ��� !!"% E� �� ��� !!!$� 1�����
������ ����� �� ����� ���� ������� ���� ����� ������
6�� ������6���� ����� ����"� 33� /�������� ,�� �
F������ /A$� 4���� �� �� ������ ���� ��� ���� ��
� �� � )33 �� �� ��� ) ������� ���� �� �� �
>)3 �� ���<������� �� >33 � � ��� ' ������� ���
���� �� ���� � !)�, ��� ) ������ �� ���� ���� �&
� ���� �� >33�E<��>� �� ���� ��� � !)�, ��� >
������ ��� ����� �� ������ �� �� 5 �� ������ ��
�/�������� ,�� $ ����� ��� ����� �� ���� � ) ��������
� ���� #37+3 �������� ��� ���� �� ���� ������� �
>)�, ��� >3 �������� .2/� ������ "+� 2��
,������� /������ /-$ �� ����� �� 3 � ���� ��
����� ���� ��� ������ A ��@�� �.�15$ ��������� ��
���� �� ���� ���� ��� .2/� �� ���� ��� ����� ����� ���
.2/� �� ����� � +3�, ��� + ������ ��� ������ ��
������� ���� ��� .2/� �� ��� .2/� �� ������� ����
��� ������ ��� .2/� �� ��������� ���� ������� ��
����$ �� ����� �� ����� ������� ��� .2/� �����
������ ������� ��� .2/� �� ������ �� ����
�������� � ����� ����� � ����� ��� �E� �� ��
!!!$� A �� �� ���� ���� �� ����� �4�& 3"� 2���
,������$ �� ��� ����� ������ ��� �� ������ @���
��������� � ��� ����� �1����� #$� A� ����� ����������
������ �1����� #$ �� ���� �� �������� ��� �� ��� �����
������ ����������� ���� ��� ��� ������������������ @���
������� ��� ������ �� ����� �� ��� ������ ������
����� ��� �� ��� ������ ����������� �1����� # ������$$�
5�� ���� �� ���������� �� ������� ����� �� ����
6������ ������� �� �� ��������� �������� �� �������
������$ �� ��� ������ �� ���������� ������ �� ����
������ �� ����� ������ @�� ����������$�
&2%��������� ������
��� ������� ��������� ���� ���� ���� �� ������
������� ����� ���� ������ ,8,�� ��� ,8,� ��
�� ��� �� � -&1 �����> ���� �� ��������� �� ���
������� ��� @��� ���������� ������ �1����� #$ ��
��������� �� ��� ������ �� ������� ��������� ���
������$ �� ��� ������� ��� ������ �� ���� @����� �����
������ ��� ���� ��� ����� ���� �� 6���� ���� ����� �������
������ �� ��� ������ �� �� ���� ������� ��� ������
� ������ �� ��� �������� ��� ������ �� ���� 6����
��� ���� ������� ������ �� ���� �����
�������������� �� A ,8, �� � ����� ���� ��� ������
�� ������ �� ���� �� ��� ������ �� ��� ����� ��� ,8, ��
���� ���� ���� ��� ��� ������ �� ������� ��� ���
������������ ������� ����� ���� ������ ������� �� ���
������ �� ��� ��� ������� :���� ����� ���� �������
��� ������ ������������ ������� @�� �� �������� ��
������ ��� �1����� >$� ������� ��� ,8, ����� ���
� A� ��� � �������� ��� �� ��� ������� �� ������
������� ��� ������ ��� ����� ��� ���� �� �������� �
��� ������� �� ��� ���� 4����� �� �������� �
��������� @��� @�� ���� ��� ������ ��������� ��
��� � 1��� �� ���� ������ �� ��� >� ��� ,8, ��
���� �� ��� >� ������� �� ��� ������� ����� ���
�������� �� ������� �� �������� 8��� ������� ��
�������� ��� ����� �� @����� ��� ���� ��� ���� ���
�������� � � �������
������
,������ ������ �� �������� �� >) ,8,� ���� ���
������ �� ����� ����� ����� ����� ��������� �������
��������� �� >) ���������� ������� �������� /���
������ � ������ �� ���� �� ������� @��� @�� �� ���
�������� ��� ,8, �� ����� ���� ��� ����� ���� ��
���� ���� ��� ��� ������� ��� ����� ���� �� ���
������� �� � ������ ��������� ����� ��� �����
-� ��� ��� ������� ��� ,8, ���������� ���
������������ ������� �1����� +$ ��� ��� ���� ���
������� ����� ���� ���6������� ��� ���������
��� ���� ������� ������� A� ��� ,8, ����� �������
��� ��� ������������ �������� ��� ������� �� ����������
����� ��� ����� ������� @������ ���� �� � ����
��� ������� ����� ��� ��� ��� �� ��� ���� � ���
������ �� ��� ����� � �� ������� ��� ������ ������������
������ ��� ���� �� ������ ������������ ���� ��� ������
0��� 3� � � ������ �� ���� ���� �� ���� ��� ������� �� �������������� ����� ������ ��� "����������� � ���� ��� ��� �� �� ����� ��������� ����� �� �� ��'( ����� �� ����� � �� ���� ��'( �� ���� ������ )����� ��������� ���� �� �� ����� �� ������
*��� � �� "������ ���� ' �� �� � $���� $$�
�� ��� ������� ��� ,8, ������� ��� �����������
���������� ����� ������� �� ������ ��� �1�����
+�$� ��� ����������� ���������� ����� ��� ������� ��
������ ��� ������ ��� ������ ��� ��� ������ ���
������� �� ���� ���� ���� ��� ��� ����� ��� 0���� ��
������� � ��� � ����� �� ��� ���� ������� @���
������� ���� ��� ��� �� ������� ��� ������� ���� ���
0����� ��� 0���� ���� ����� ������ �������
������� �� �� ������� ���� ����� ������ �� ���
0�����# 1��� �� ���� �������� �� ��� >� 2�� �� ���
�� �������� ���������� �� ��� ��� ������ ����� ���
,8, ���� ����� � �� ����� ���� ��� �� ��� >�
������� ��� �������� ������� �� ����� ��� ������ ���
��� �� ��� 0���� �1����� +�$� ��� �������� �������
�� ���� ������� � ������� ������ ������� 0���� ��
��� ������ �1����� +�$� 4������ �� @�� �� ��� ���
������ ������ ��� ������ 0���� ������� ��� ���
������ ��� ���� ��� ������ ����� ��� ������� 0���� ��
���� ��������� ���� ��� ������ �����
���������
(����� ,8,� ���� ��� ������ �� ��������� ������� ���
��� �� ��� ��������� �� ����� ���� .������� �������
�C����� �� ��� !!"$ �� @���������� ���� ���� ���
������ ������� � ��� ������ �� ��� ����� -� ����
������� ��� ����� ���� �� ���� ������� � ���
������ ������� �� ��������� ����� ���� ���
������� ��������� ��� ����� �� ���� �� ��� �����
C������ ��� �� �� ��� � ���� �� ��� ������� �� ���
������ ������ ����� ������ �� ����� �������� ��� ��
��� � ���� ���������� �� ��� @���<�� �������� ����� �
��������� ��� � ���� ���� ��� ����� :��� ��� ������ �����
��� �� �� ��� ������ �� ������ ���� ��� ��� �� ��� ���
������� ���� ���6������� ����� ,8, �� �� ����
������� ������ ������ ��� ���� ������ � ������ �����
��� ��� �� ���� �� ��� ������ ����� ��� ,8, � �� �����
���� ��� ������ ���� ��� ������� 5���� ������ ����
��� ������ ���� ��� ��6�� ��� ������� ���������
������ �� ���� ��� ��D���� ������ ����� ����������
�� ��� � �����
1��� ��� ������ ����� ��� ,8, �� ������ ���� ���
������ ����� �� ���������� ��� ����������� �������� -�
��� ����������� �������� ��� ,8, �� �������� ���� ��� ����
�� � ����� ��� ���� �1����� )$� �� ������ ����
���6�������� ��� ����������� ������� �������� ���
��������� �� ��� ,8,G� ������� �� ��� ����� �� ���
����� ����� ��� ���� ����� �� �� ���� ��� ���� ��� ���
�������� ��� ������� ��� ������� � ���� ��� ���
���������� ������ ���� ������ @������ HH>�������
�����GG ��I��� ��� ��������� ������� ������� A� �
��� �� �� ��� ������ �� ���� ���6�������� 1����� )
������ ��� ���� � � ���� ����� ������� �� ����� �
������� �$ �� ���� ����� ��� ���� �� ��$ �������� ���
0��� 4� ������� � �� ���� � �� �� �� �� �� ������� ���� �������� ����� ���� ���� ��� �� �� ������� � � ������ �� ��������� ���� ������� � �� � ��� ������� �� ����� ���������������� ���� ����� ����� ������ �� �� ������� ������ ���� ����� �� "#" ���� ������ "#"� ������ ������ "#"� �� ������� "#"� � ����� ������� �� ��������� ������ ��� �� "#" �� ����� � ���� +� ���� ����� ��� ����� �� ��� ������� ���� �� ��������� ���� ���,� ���� �� ���� � ����� ��� �� ������� ��� �� � �� ���� ���� ���� + �� ���� -� ��� *� ����� ������� �� ����� � ���� - � ���� �� � �����
0��� 5� ������� ���� �� �� ������� ������ ���� ����� �� ����� � ��� ���� ����� ���� ������� � � � ����� � �� � ����� ����� ���������� �� �� ����� ��� &��� � ����� � ������������ ���� ������ ���� � �� ����� ��� ������� ���� ���� �� ����� � � ����������� ������ ���� ��� ���� ������������ !��
$$$ $����� %� �� &���
������ ������ �� ��� ����� ��� ������ �� ��� HH����GG
���6������� �� ��� ,8, ���� ��� ����� ����� ������
��� ��� ��� ���� ���������� ��� ��� ���� �������
������� ����� ������� ��� ������� ����� ���
�������������� -� ��� ������� �� �� � ������
���������� ����� ��� ���� �1����� )�$� ��� ,8, ����
�� ������ ����� ����� �� ��� �� ������ ��� ����
������� ����������� ��� ������� ���� �����
���������� ����� ��� ����� � $ ��� ��6�� ������
������� �>$ ��� ��6�� ������ � ������� �#$ �����
�� ����� �� ������ ��������� �� ��� ,8, �� �+$
��������� ���������
A���� ������������ �� ��� �������� ������ �� ���
������� �� �������� � ������ ����� ,������ ������
�� ������� � @��� �� ���� ������� ��� ������ ��� ��
����� ��� ,8, �� ������� ��� ���� ����� �� 3 �������� � ��� ������� ���� ����� ��� ������ ���
��)3 ���� ������ ��� ���� �� 33 ��� �� �� �� �
��� ������� �� ��� ���� 1���� ���� ������� ��� ���
�� ��� ������� ����� ������� ��� ���� �������� ��� �����
���� ��� ����� 1�� ������� �� �� ������� �� ����������
��� ������� ���� ����� ��� ������ ��� ��� �� ���
����� -� ��� ���������� ��� ������� �� ��� ������ ����
�� ����� �� ���6���� �� ������ ��� �������� ��������� �� ��
�������� ��� ��� ������� �� ���� ��� ������ ���
��� �� ��� ����� ��� ������� ������������ ��� ����
��� ,8, �� ���� � ����������� (���� @�� �� �����0�� ��
������ ���� ���������� � ��� ,8, @��� ���� ���
����������� ������� �� ��� 6��� ������ ���� ��� ������
���� ���� � !3 ������ ���� ���� ��� ������
�������� ������ ���� ��� � ����� ����� �� ��� �����
8�� �� ������ �������� ��� ������ � ��� �
��������� ���� ��� ��� �� ������ ������ �� ����� ��
������ ��� ���� �������
��������
-� ���� ��� �� �������� �����@����� ������ ���
������� ������ ���� ������ ������� .��������
������ @�� �� ������������ ����� ��� ��� ������ ��
������� ���� ������ 0������ .������ ������� �� �����
������� �� @�� ���� ���� ��� ���������� ��������
������� ��������� ������� ������� ���� ����
���������� ��� ������� �� �� ��������� ������������
���� ��� �� ��� ������� �� ��������� �������� ���
����� �� ������� ������� ����� ������� ��
��������� ��� ���� ��� ���� ����������� ������
���� ������ ����� ��������� �������� 1����� ���� ����
������� �����D���� �������0����� �� ������� ����� ��
������ ��� ����� ����� �� ��� ������� ������� �
����� ����������
,������ -&. �������� �� ������ �� ��������� ��� �
�������� �� � ����� �� ���� �� ������� A
�����@����� ������ �� ���� ����������� ��� ���
������� ������ ��� �� � -&. ������� 2����� ����
�� ������� �� ������� ����� �������� �� ������� ���
-&, �4� �� ��� >33 $ �� 0�� ������� ������
�B������� �� ��� >333$� 5�� �� ��� ������� ���� ������
��������� ������ �� �������� ������ ���������� �� ���
��� � ���� ������ ������ �������
*�6��7���������
��� ������ ����� ���� �� ���� E�� 4������� �� 4���
/����� �2� ������ �� A���� ��������� ��������� ��
:���������/������ /������ :- )#'3;$ ��� �� ����
��� ������ ,8,�� ��� ������ ����� �� ����� ���� ��
���� 4��� /����� ��� �� ���� ��� ,8,� ���� �� ����
�� �������� 1������ ��� ���� ��I��� �� ������� �
��� -������� ,������ �� 1��� �� A���������� 4������
�� ��� ��������� �� :��������J/������ C�����
/������ �� -� C����� ���� ��� ��� �� ��� �� �����
�� ���� ���������
8����
� 1�� ��� ���� ��� ���� �� ���� �� ��� ��� ����� ;3�, �� ���
���� �� � �� 6�� ��� ������ ���� ��� ��� ���� 1�������� ���
���� ��� ��� ��� �� ������ �� ���� �� ���� ��� ������ ������
�������� ��� �����
>� =����� ,8,� �� �������� ���� ������ ������ �� ������ ��
�������� ���� ��/,� !!�1=��F ������1�*�.���������$ ��� ����� �� >+ ����� � #!�,� ��� ������ ,8,�
�� ����� ����� ����� �� ������� ���� ��( *5.5�� =�A�F
������ ��������$ ���� ���� �� �������0���� ���� �����6��
�( �������=�A�F ������ ��������$� ��� �����������
�� �������0���� �������� � 333 � ������� �� ���������� ���� ���
���� �� ������ �� ���������� ���� ��� ,8,� ��� >37>+ ����� �
#!�,� ��� ,8,� �� ����� ����� ����� �� ������� ���� �� ����
�� ������� ���� ��� ����� �� ���������
#� -� ��� �������� ��� ���� ������ ������ �� ���� ��� ���� �������
������ ����� ������ ����
����������
=�2� =������� .������ ���� �� /������� �������� �� 0����� E�(�&���� /�������� �� E�2� =������� ���� �.����� .����� F�� 9����
+ 7;3� !" $�
F�C� ,��� E��� (��� ���E� ,���� *�,� B�������� -�K� C������ 2�E�
=����� �� /�=� :������� ������������� 0�� $� >#+ � !!!$�
4�,� ,���� K� 8���� �� K� F��� A���� 4� ��������� ������� �1�#'7+" � !!)$�
���E� ,���� -� C������ *� B�������� 2� =����� ��/�:������� =�����
�� 4� ��������� 01��� �� $� !; � !!"$�
.�E� 2���0� A������� 4����� �0�� > 7> + � !;)$�
2� 2���� E�,� /������� 8�E�A� ���������� �� C� :����������
A�������� ,������ -���������� ������� �� 5������� �2� ))37)')� !!"$�
*��� � �� "������ ���� ' �� �� � $���� $$3
9� 1���� �� 9� ����� =����� �� 4� ��������� ��� ;;!7;'# � !"3$�-�K� C������ *�,� B�������� 2�E� =����� ���E� ,���� E� (��� F�C�
,��� �� /� :������� *������ -�������� /����� 5�����
����� /����@������� �/// �� ��� %����� /��� �1�)$� )'37)'"
�>33 $�
/� *����� ������� �1�� 3!'7 3!" � !!!$�
=� E�� (�/�&� (��������� K�/� /��������� �� 2�E� =����� E����� ��
/������������������� ������ �� $� ';7" �>333$�
C�*� (��� K� F����� *� K��� /� K������ A� 9������� ��
������ �� �� K����� ,���� 4������ 0�� >$� #>)'7#>;3� !! $�
��.� (����� �� F�(� 1����� =����� �� 4� ��������� ��� #3 7#3"
� !'!$�
A� /������ �� /���� /�E� .����� �� /��� .����� �������������
��� +'>7+") � !!)$�
�� 4�� E�A� 2���� 2�E� =����� ��(� 4�������0�0�� �� /�=� :�������
������������� 00� $� >+ �>333$�
E�E� 4�������� .������ ,����������� �>333$�
C�5� ������� =����� �� 4� ��������� �1� #;7+! � !"#$�
A� ������ ������� �23�/� >+$� ''# � !!)$�
A� ��������� 2� .������� (�E� /������� -� (����� �� 2�K� C������
,������ ����� �� -&/<-&1 �� 5���� ,������ �� *���� �� 1��
A������ ������������� ��� )'7;; � !!+$�
:�*� &������� *� (����� �� :�F� 2����� �������6� A������
�23� $� '37'+ � !!'$�
(� :��� 2�E� =����� A�4� :������� �� K�2� 5���� -555
���������� �� =�������� 5���������� ��� $� >"7 #" � !!'$�
2�.� :���� .������ ���� �� /������� �������� �� 0����� (�
/������� �� E�2� =������� ���� �.����� .����� F�� 9���� "#�
!" $�
4� 9�������� .������ ���� �� /������� �������� �� 0����� (�/������� �� E�2� =������� ���� �.����� .����� F�� 9���� >7
# � !" $�
*�,� B�������� K�4� K���� -�K� C������ �� 4�� /�=� :������� ��
2�E� =����� '���� ��� � �� ���� (���� �K����� A������
.���������� 5�������� ��� F���������� > +7> '� >333$�
$$4 $����� %� �� &���