RECUENTO MICROBIANO

RECUENTO MICROBIANO

La determinacin del crecimiento microbiano y/o biomasa celular dentro de una muestra clnica, de un bioproceso u otras, constituye una etapa muy importante para la evaluacin de su cintica de crecimiento, de all que el conocimiento de las diferentes posibilidades de cmo ejecutarlas es de sumo inters dentro de la formacin en microbiologa

METODOS DE RECUENTO MICROBIANO

METODOS DIRECTOS

Recuento en Placa

Numero mas probable (NMP)

METODOS INDIRECTOS

Nefelometria

Turbidimetria

Filtracin

Cmara de Neubauer

RECUENTO MICROSCPICO EN CAMARA DE NEUBAUER

El hemocitmetro o cmara de Neubauer

Se introduce la suspensin de clulas en el hemocitmetro

La regin de recuento del hemocitmetro

Si 10 clulas promedio por cuadrcula

En las 25 sern 250 clulas

Si estas 250 en 0.1 mm3 entonces en 1 mm3 habrn 2500 clulas

En con secuencia, en 1000 mm3 (= 1 mL) un total de 2.5 x 106 clulas/mL

Desventajas:

El mtodo no sirve para cultivos poco densos, celulas mviles.

Frecuentemente es necesario teir las clulas.

Se determina el nmero de microorganismos en una muestra en relacin a las colonias que forman, las UFC (Unidades Formadoras de Colonias). Se emplean soluciones diluidas o diluciones de una muestra concentrada para que cada colonia formada provenga de un solo microorganismo aunque algunas agrupaciones no pueden ser separadas por las diluciones. Se utilizan principalmente para la cuantificacin de bacterias, levaduras y hongos filamentosos. Se reporta como:

UFC ****/unidad de volumen o peso

RECUENTO EN PLACA

RECUENTO EN PLACA

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Antes de la siembra, el cultivo debe diluirse para obtener 30-300 UFC en cada placa.

MTODOS DE SIEMBRA

Siembra en superficie o en camada

Siembra por incorporacin o placa vertida

FILTRACIN

La membrana de celulosa retiene a los microorganismos en su malla con poros de 0.25-0.45mm. Esta membrana se transfiere a un medio de cultivo para el desarrollo de colonias.

METODO POR FILTRACION

Mtodo estadstico basado en series de diluciones y calculo estadstico del numero de bacterias presentes en las diluciones mas altas

Tabla NUMERO MAS PROBABLE

METODOS INDIRECTOS

TURBIDIMETRIA

Mediciones del crecimiento microbiano

Medicin de la densidad o masa celular:

- por turbidez, mediante un espectrofotmetro.

Este mtodo requiere la preparacin de un estndard que relacione el nmero de clulas con la turbidez.

Es problemtico para muestras de organismos que forman agregaciones o biofilms. Se suele realizar agitacin.

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SISTEMA NEFELOMTRICO DE MAC FARLAND