La cromatografiaLa cromatografiaTecnica di separazione basata sulla diversa affinità che i componentip ff mpdi una miscela possono manifestare nei confronti di determinatesostanze o materiali. I vari componenti di una miscela tendono aripartirsi in modo diverso tra due fasiripartirsi in modo diverso tra due fasi.

Una fase rimane fissa (la fase stazionaria), ed è generalmente unsolido o un gel un'altra fase liquida o gassosa (la fase mobile)solido o un gel, un altra fase, liquida o gassosa, (la fase mobile)fluisce su di essa trascinando con sé in quantità maggiore icomponenti della miscela che le risultano più affini.

CROMATOGRAFIACROMATOGRAFIA

SU CARTA

L’eluente si muove dal bassoverso l’alto attraverso unostrato sottile per capillarità

SU STRATO SOTTILE (TLC)

L’eluente si muoveSU COLONNA

mdall’alto verso ilbasso per gravità

Cromatografia su carta e strato sottileCromatografia su carta e strato sottile

La fase stazionaria è costituita da unSU CARTA La fase stazionaria è costituita da unfoglio do carta per cromatografia

SU STRATO SOTTILE (TLC)

La fase stazionaria è generalmente unostrato dallo spessore uniforme di circa1 mm di materiale adsorbente,d it t l t di t IlSU STRATO SOTTILE (TLC) depositato su una lastra di vetro. Ilmateriale adsorbente può essere gel disilice, allumina, cellulosa in polvere op l di di t m tutti m t i lipolvere di diatomee, tutti materialipolari

Cromatografia su carta e strato sottileCromatografia su carta e strato sottileAnalisi dei risultatiAnalisi dei risultati

Nel caso di soluzioni colorate l’analisi deiNel caso di soluzioni colorate, l analisi deirisultati è effettuata con ilriconoscimento delle tracce colorate.

Nell’esempio, la traccia arancione è lasostanza più affine con l’eluente inquanto ha percorso un tragitto più lungo.

La traccia gialla rappresenta unasostanza meno affine all’eluente,infattiha percorso una distanza minore.ha percorso una distanza minore.

Rf = Distanza percorsa dalla sostanzaDi d ll’ l

Rf(traccia viola) =

Distanza percorsa dall’eluente

baa

N.B. OGNI SOSTANZA HA UN Rf DIVERSO

Cromatografia su carta e strato sottileCromatografia su carta e strato sottileAnalisi dei risultatiAnalisi dei risultati

Qualora non sia possibile osservare direttamente le macchie dicampione sulla superficie della lastrina caso molto frequentecampione sulla superficie della lastrina - caso molto frequente- si può ricorrere all'osservazione sotto luce ultravioletta o allareazione con reagenti che sviluppano composti colorati (comenel caso degli amminoacidi)nel caso degli amminoacidi)

Cromatografia su colonnaCromatografia su colonnaCromatografia su colonnaCromatografia su colonna

La cromatografia su colonna è una tecnica analitica per separarespecifiche sostanze in una miscela complessa.

L’efficacia della cromatografia è dovuta al fatto che le separazioni sibasano su interazioni fisico-chimiche a livello molecolare tra il supportocromatografico (fase stazionaria) le sostanze da separare e icromatografico (fase stazionaria), le sostanze da separare e icomponenti del solvente (fase mobile).

Lo strumento utilizzato per attuare questa tecnica è detto colonnaficromatografica

Cromatografia su colonnaCromatografia su colonnagg

La miscela dei composti da separareviene messa in cima ad una colonna divetro cilindrico riempita di gel di siliceo allumina (fase stazionaria).

L’assorbente (fase stazionaria) viene( )continuamente dilavato dal flusso disolvente (eluente, o fase mobile:unliquido organico a bassa viscosità o unasoluzione acquosa) Questo flussosoluzione acquosa). Questo flussocontinuo estrarrà soluti dalla silicetrascinandoli verso il basso con velocitàdiverse in dipendenza dalla loro affinitàprelativa per l’assorbente.

Man mano che i componenti della miscelasi separano, iniziano a formarsi bandepche si spostano verso il basso.

A questa fase segue la fase di eluizione,con questo termine si intendeql’allontanamento dalla colonna e laraccolta delle sostanze separatemediante uno o più solventi.

Cromatografia Cromatografia

PARAMETRI CHE INFLUENZANO LA PREPARAZIONE di una PARAMETRI CHE INFLUENZANO LA PREPARAZIONE di una

cromatografiacromatografia

SceltaScelta dell’dell’ assorbenteassorbente

SceltaScelta delladella polaritàpolarità deldel solventesolvente

DimensioniDimensioni delladella colonnacolonna (lunghezza(lunghezza ee diametro)diametro) inin relazionerelazione

allaalla quantitàquantità didi materialemateriale dada cromatografarecromatografare

V l i àV l i à didi l i il i i dd hh l i àl i à didi flflVelocitàVelocità didi eluizione,eluizione, dettadetta ancheanche velocitàvelocità didi flussoflusso