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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE NICARAGUA Instituto Politcnico de la Salud

Temas:-Generalidades y caractersticas de Enterobacterias. -Pruebas bioqumicas Gram + y Gram -BLEEElaborado por: -Elena Manzanares -Faviola Martnez Carrera: Lic. Bioanlisis Clnico III ao Managua , 24 de Julio de 2009

GENERALIDADES DE ENTEROBACTERIASLas Enterobacterias pueden vivir libres en la naturaleza y habitualmente forman parte de la Flora Normal del Coln Humano, en escaso porcentaje (mas del 98% de la flora intestinal son anaerobios de los gneros Bacteroides y Prevotella). Pueden encontrarse transitoriamente en la piel (especialmente perianal), el tracto genital femenino y muy ocasionalmente, el tracto respiratorio superior de los individuos sanos. Las enterobacterias parecen en una mayor proporcin en la flora de individuos hospitalizados, especialmente en aquellos que sufren enfermedades graves y debilitantes. Taxonmicamente las enterobacterias se le han definido mas de 25 gneros y 110 especies o grupos: sin embargo, las enterobacterias clnicamente significativas comprenden 20 a 25 especies. Entre ellas los gneros mas importaNtes son: Escherichia, Shigella, Salmonella, Klepsiella, Serratia, Enterobacter, Proteus, Morganella, Providencia, Pseudomona, Acinobacter y Yersinia, entre otras.

Las enterobacterias poseen 3 grupos de antgenos que se han usado para su clasificacin: 1) flagelares H que son termolbiles; 2) capsulares K y 3) somticos O.Factores de Patogenicidad: 1) Adhesinas, actividad presente en fimbrias, que se asocian con uropatogenicidad de E. coli y enteropatogenicidad para otros gneros de enterobacterias. Tambin existen adhesinas afimbricas. 2) Pseudocpsula, que permite la adherencia a fmites, como sondas urinarias y catteres. 3) Capsula, se asocia con mayor invasividad, particularmente en la Meningitis por E. coli. 4) Exotoxinas y exoenzimas: especificas para cada gnero y especie. 5) Endotxinas, representada por LPS. Puede provocar el Shock endotoxico. 6) Siderforos. 7) Plsmidos, permiten la transferencia de factores de patogenicidad y genes que otorguen resistencia antibitica a otras bacterias.

CARACTERISTICAS DE ENTEROBACTERIAS- Son bacilos gram (-) dotados por flagelos peritricos o carentes de motilidad.-Crecen sobre peptonas o medios con extracto de carne sin adicin de

cloruro de sodio ni otros suplementos, crecen bien en Agar MacConkey, ASC, Ach.-No forman esporas, Son oxidasa (-), son catalasa (+), reducen los

nitratos, fermentan la glucosa en vez de oxidarla con produccin de gas o sin la misma y son aerobios o anaerobios facultativos.- Crecen a temperaturas de 30-37 grados C excepto Salmonella y

Shigella y Ph de 7.2 a 7.5

Caractersticas en el crecimientoIdentificacin presuntiva rpida, bacterias entricas gram (-) Fermentacin rpida de lactosaEscherichia coli: brillo metalico sobre medio diferencial: dotado de motilidad, colonias no viscosas, aplanadas. Enterobacter aerogenes: colonias elevadas, sin brillo metlico; con frecuencia motiles; crecimiento mas viscoso. Klepsiella pneumoniae: muy viscoso, crecimiento mucoide, no motil.

Fermentacin lenta de lactosaEdwarsiella, Serratia, Citrobacter, Arizona, Providencia, Erwinia.

No fermentacin de lactosaEspecies de Shigella: carentes de motilidad, no forman gas a partir de glucosa. Especies de Salmonella: dotado de motilidad; habitualmente forman acido y gas a partir de glucosa. Especies de Proteus: swarming sobre agar, hidrlisis rpida de la urea (olor amoniacal). Especies de Pseudomonas: pigmentos solubles, fluorescencia azul-verdoza, olr a taml pisque o a uva.

Pruebas Bioqumicas de las EnterobacteriasReaccin bioqumica por enterobacterias comunes de importancia clnicaCitrobacter Enterobacter Escherichia Klebsiella Morganella Proteus Providencia Salmonella Serratia Shigella TSI HS2

K/A +/+ + +/+/+ + +/-

A/A + +/+ + + + + +/-

A/A + + +/+ +/+ -

A/A +/+ +/+

K/A + + + + + + -

K/A + +/+ + +/+/+/+ + -

K/A +/+ + + + +/+ -

K/A +/+/+ + + +/+ +/-

K/A +/+ + + + + + -

K/A +/+/+ -

Gas Lisina Fenilalanina

Motilidad Indol Ornitina Citrato Malonato Ureasa VP Glucosa Arginina

+ -

+ -

Pseudomona auroginosa- Son gram (-),rectos o ligeramente curvos(0.5-1) - Poseen flagelos polares. - No producen fragmentacion. - Emplean pocos hidratos de carbono (glucosa, ribosa, gluconalo), mediante metabolismo oxidativo,. - Citocromo-Oxidasa (+), catalasa +, lactosa - Aerobios obligados. - Algunas cepas son mucoides (capsula polisacrido) en pacientes con fibrosis quistica. -Algunas seudomonas (aeruginosa) producen pigmentos difusibles en el medio de cultivo: a)piocianina(azul) b)Fluoroceina (amarilla) c)Pioverdina (verde) d)Piorrubina (roja-parda) e)Piomelanina (marron o negro) TSI :K/K LIA: K/Ac Crecimiento a 42 grados.

FLUJOGRAMA DEL PROCESAMIENTO DE MUESTRAS BACTERIOLOGICAS PARA IDENTIFICACION DE BACILOS GRAM NEGATIVOS:MUESTRA (medio de trasporte STUART) sembrar en:

ASC/McK

Observar caracteristicas morfologicas del crecimiento, sospechamos de Gram negativo

Fermentador LAC+

No Fermentador LAC-

Pruebas bioquimicas: *TSI, LIA,*MIO,Citrato, Malonato, UREA, VP/RMy y antibiograma

TSI, *LIA,MIO,Citrato, Malonato,UREA, VP/RM y anibiograma

El agar Hierro Tres Azucares (TSI), es un medio slido y diferencial. El fundamento se basa en la capacidad de fermentacin de dos azucares (glucosa Interpretacin del TSI: Interpretacin del TSI:

TSIEl agar Hierro Tres Azucares (TSI), es un medio slido y diferencial. El fundamento se basa en la capacidad de un microorganismo de atacar un hidrato de carbono especifico. Incorporado en un medio de crecimiento bsico, con produccin o no de gas. Junto con la determinacin de posible produccin de acido sulfhidrico H2S.Extracto de carne 3.0 Peptona 20.0 Glucosa 1.0 Citrato frrico a nico 0.5 Extracto de levadura 3.0 Lactosa 10.0 Cloruro sdico 5.0 Tiosulfato sdico 0.5 : fuente de azufre, las bacterias lo reducen produciendo c. sulfhdrico (precipitado negro) edio, si es a arillo indica

Rojo de fenol 0.03 : indicador, si vira a rosceo , indica basicidad del acidificacin (derivada de c. de la fer entacin)

Interpretacin:NC o SC: no ca bio o sin ca bio H2S o subndice s: si produce c. sulfhdrico LC, Alk o K : alcalinidad G: productora de gas edio

Ak/Ac con o sin gas, lo que significa que sola ente hay fer entacin de glucosa. Si ade s se observa ennegreci iento del edio, hay produccin de acido sulfihidrico.1 2 3

Fer entador glucosa, productor c. sulfhdrico y de gas. Fer entador glucosa, lactosa y sacarosa, productor de gas.

A/As indica que es fer entador de glucosa, lactosa y sacarosa, si se observa ennegreci iento del hay produccin de acido sulfhdrico

Este medio pone de manifiesto:descarboxilasa (LDC). el medio contiene como indicador Purpura de Bromocresol, cuando la lisina se descarboxila, el - Si la bacteria posee la enzima - Si la bacteria posee c.enzima descarboxilasa (LDC). el medio contiene como indicador si es LDCdeo -. - Si es productora de la sulfhdrico, en cuyo caso el precipitado negro nos impedir ver Purpura + Bromocresol, cuando la lisina se descarboxila, el - Si es productora de c. sulfhdrico, en cuyo caso el precipitado negro nos impedir ver si es LDC + o -. - Si es productora de gas. - Si es productora de gas.

LIAPrincipio:Medir la capacidad enzimtica de un microorganismo para descarboxilar un aminocido en ambiente anaerobio para formar una amina. Con consiguiente alcalinidad. Junto con la determinacin de posible produccin de cido sulfhdrico (H2S) y la capacidad enzimtica para desminar en ambiente aerobio el aminocido formando un complejo de color anaranjado que al combinarse con el prpura del medio da un color rojo en la parte inclinada del tubo.Este medio pone de manifiesto: - Descarbosilacion de la lisina (K/K o K/N) Si la bacteria posee la enzima descarboxilasa (LDC) el medio contiene como indicador Purpura de Bromocresol, al activarse la lisina s descarboxilasa en un pH acido, el indicador vira a purpura o conserva el color sin inocular. Cualquier cambio de color en el fondo despus de la produccin de acido es una prueba positiva. - Desaminacin de la lisina (R/A): El inclinado del tubo se torna inicialmente alcalino por la utilizacin oxidativa de las peptonas; al activarse la desaminasa. El PH alcalino , el color del medio se torna rojo. El fondo del tubo permanece acido (amarillo) por fermentacin de la glucosa. No utilizacin de la lisina: El color amarillo del fondo del tubo se debe exclusivamente a la utilizacin de la glucosa. Si es productora de c. sulfhdrico, en cuyo caso el precipitado es negro. - Si es productora de gas.

. -, -, + -, R , R , R U R U U R R Y E . .

1.

3.

MIOPrincipio: Es un medio que se utiliza para determinar la presencia de flagelos, as como los enzimas descarboxilasa de ornitina y triptofanasa. Por lo tanto, sirve para determinar la movilidad, descarboxilacin de la ornitina y produccin de Indol. Movilidad: Algunas bacterias poseen flagelos y otras carecen de ellos. Este medo ayuda a diferenciar las bacterias mviles de las no mviles. Produccin de Indol: Si la bacteria posee la enzima triptofanasa, el aminocido triptfano ser degradado en varios productos entre los cuales esta el indol, el cual se hace visible al agregarle el reactivo Kovac (para dimetilaminobenzaldehido), o Erlich con un color rosado intenso. Sin la presencia de la enzima y ausencia del indol, el reactivo se transparente. Descarboxilacion de la Ornitina: Detecta la presencia de la enzima descarboxilasa de la ornitina, que de estar presente desdobla la ornitina en putrescina, un producto con Ph alcalino, lo que hace intensificar el color violeta el medio.

CITRATOSe usa para determinar