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LE LINFOADENOPATIE

IILINFOMILINFOMI

ProfAM Vannucchi-AA2009-10

Organi linfatici primari Organi linfatici periferici

mIg

BM.O.

Sangue RICIRCOLAZIONE

Progenitoref

LinfonodiMilzaTess. linfatico

associato

Cell

linfocitario associatoalle mucose/cute

TTIMO SangueLi fCell.

staminaleLinfon.

TCR

RICIRCOLAZIONE


DISTRIBUTION of B CELLS in the LYMPH NODE CORTEX

GC = germinal center; Mn = mantle, P = paracortex (mainly T cells); SC subcortexProfAM Vannucchi-AA2009-10

B-CELL EVENTS in the GERMINAL CENTER


COSA ESPRIME L’AUMENTO DI VOLUME DEI LINFONODILINFONODI

• RISPOSTA IMMUNE AD AGENTI INFETTIVI (BATTERICI EA )VIRALI)

• INFILTRAZIONE DI CELLULE INFIAMMATORIE IN INFEZIONILOCALIZZATE (linfoadeniti)

• INFILTRAZIONE DI CELLULE NEOPLASTICHE (metastasi)( )

• PROLIFERAZIONE NEOPLASTICA LOCALE (linfomi e leucemie)

• INFILTRAZIONE DI MACROFAGI INFARCITI DI LIPIDI(tesaurismosi)

LinfoadenopatiaLinfoadenopatia < 30 anni = 80% infiammatoria> 50 anni = 60% neoplastica 50 anni 60% neoplastica


Origine delle malattie linfoproliferative


LINFOMILINFOMI

NODALINODALI EXTRANODALIEXTRANODALI


ClassificazioneClassificazione WHOWHO èè basatabasata sullesulle caratteristichecaratteristiche delladella cellulacellulaneoplastica,neoplastica, aa livellolivello::••MorfologicoMorfologico••ImmunofenotipicoImmunofenotipico

M l lM l l LINFOMI••MolecolareMolecolare

LINFOMI NON HODGKIN LINFOMA DI HODGKINLINFOMI NON HODGKIN LINFOMA DI HODGKIN

aggressivi indolentiaggressivi indolenti


EPIDEMIOLOGIA dei LINFOMI

tant

i00

abi

tr

100.

00nz

a pe

rIn

cide

nI

N l ’60 000 l’ d d l f è ù h ddNegli anni ’60-2000, l’incidenza dei linfomi è più che raddoppiataProfAM Vannucchi-AA2009-10

Linfonodi laterocervicali alti e sottomandibolari in mononucleosi


Linfonodi laterocervicali e sottomentonieri in LNHLinfonodi laterocervicali e sottomentonieri in LNH


Pacchetto di linfonodi sottomentonieri con ulcerazionePacchetto di linfonodi sottomentonieri con ulcerazione cutanea in linfoma non HDG


Linfoadenomegalia ascellare in corso di LNH


Linfoadenomegalia ascellare in corso di LLC


Immagine TAC di numerosi linfonodi ingranditi in sedeImmagine TAC di numerosi linfonodi ingranditi in sede addominale in corso di linfoma non HDG


Immagine TAC di imponente adenomegaliaImmagine TAC di imponente adenomegalia mediastinica in corso di linfoma linfoblastico T


Slargamento mediastinico in linfoma non Hdg TSlargamento mediastinico in linfoma non Hdg T


ACCERTAMENTI DI LABORATORIO

non specificinon specifici“specifici”“specifici”

• esame emocromocitometricocompleto, con formula

• VEScomp to, con formu a

• tests sierologici (HIV, EBV,CMV toxoplasmosi)

• LDH

ß2 microglobulinemiaCMV, toxoplasmosi)

• Biopsia osteomidollare

• ß2-microglobulinemia

• Elettroforesi proteine -> IFp

• Biopsia linfonodale NOAGOASPIRATO!!

pse picco monoclonale

• Dosaggio IgAGOASPIRATO!!

• Esami

• Dosaggio Ig

immunofenotipici/citogenetici/molecolari ProfAM Vannucchi-AA2009-10

STADIAZIONE dei LINFOMI (i)

Febbre

Calo ponderale Sudorazioni p> 10 %

Sudorazioni notturne

Esame obiettivo Ricerca dei sintomi B

R TC B Rx toracestandard

TC total body

Biopsia osteomidollareProfAM Vannucchi-AA2009-10

STADIAZIONE dei LINFOMI (ii)STADIAZIONE dei LINFOMI (ii)

A: assenza di sintomi sistemiciB: presenza di sintomi sistemicip


Analisiimmunoistochimica

Esame clinicoimmunoistochimica

Diagnosii t t

Biologia

integratadei linfomiEsame microscopico

morfologico Biologiamolecolare

morfologico


MORFOLOGIA dei LINFOMI (iii)

Espressione di bcl-2 in unlinfonodo normale un linfoma follicolare

p


MECCANISMI di LINFOMAGENESI

EZIOLOGIA PATOGENESI FENOTIPO

?Attivazione di

proto-oncogeniproliferazione

?(90 %)

proto oncogeni

apoptosivirus

(5-10 %)

Inattivazione dii

p p

immunodeficit(1 5 %) geni

onco-soppressoridifferenziazione(1-5 %)

pesticidipesticidi(0.5-1 %)


PRINCIPALI MARCATORI MOLECOLARI NEI LNHPRINCIPALI MARCATORI MOLECOLARI NEI LNH

CARIOTIPO ONCOGENE FUNZIONECARIOTIPO ONCOGENE FUNZIONE

FOLLICOLARE t(14;18) bcl-2 Prevenzione apoptosi

MANTELLARE t(11;14) bcl-1 D1 ciclina

A GRANDI CELLULE B

t(3;14)t(3;2)

bcl-6 Fattore di trascrizione nucleare

t(3;22)BURKITT t(8;14)

t(8;22)c-Myc Fattore di

trascrizione nucleare( ; )t(2;8)

L. ANAPLASTICO

t(2;5) ALK-NPM Fattore di trascri ione n cleareANAPLASTICO trascrizione nucleare

Riarrangiamento geni IgHProfAM Vannucchi-AA2009-10

PROTO-ONCOGENE TRANSLOCATIONS

CRCR

partner genes (Ig or other)proto-oncogene partner genes (Ig or other)proto oncogene

Chromosomal translocation

CRR C

Transcriptional deregulationf hFusion protein of the proto-oncogeneFusion protein

(da, Gaidano G.)ProfAM Vannucchi-AA2009-10

RIARRANGIAMENTO bclRIARRANGIAMENTO bcl--2/IgH2/IgH

18q2118q21 MBR MCR

I≈80% ≈20%

II

14q3214q32 VH DH JH CH

t(14;18)(q32;q21) BCLt(14;18)(q32;q21) BCL--2/IgH2/IgH

MBR JH CHMBR H H


“t(14;18), a journey to eternity”“t(14;18), a journey to eternity”

• BCL-2 è una proteina localizzata a livello delle membrane

t( ; 8), a jou ey to ete tyt( ; 8), a jou ey to ete ty

mitocondriale, reticolo endoplasmico, perinucleare;normalmente espressa nelle cellule emopoietiche

• Interviene nel fisiologico controllo della apoptosi linfocitaria• Interviene nel fisiologico controllo della apoptosi linfocitarianella zona del centro germinativo, sotto forma di uncomplesso eterodimerico con BAX

BAXBCL-2 APOPTOSI BAX

BCL-2BAX

BAX-BAX

BAX-BCL-2

BAX-BAX

BAX-BCL-2

Meijerink JP, Leukemia 1997; 11:2175ProfAM Vannucchi-AA2009-10

RIARRANGIAMENTO bclRIARRANGIAMENTO bcl--2/IgH 2/IgH gg

Analisi cariotipica (>80% casi t(14;18)+)

FISH (≈80-90% casi t(14;18)+)

Southern blotting (>90% casi bcl-2/IgH+)

PCR “convenzionale & nested” (40-80% bcl-2/IgH+)

Con nested PCR, ≅50% di 36 soggetti normali è risultato bcl-2/IgH+ utilizzando 10 μg DNA da g μgsangue periferico


DIAGNOSTICA MOLECOLARE DEL L. FOLLICOLARE

LNH: Istotipo SensibilitàRiarrangiamento Tutte le forme 1 / 100.000IgH

Tutte le forme linfoproliferative B

1 / 100.000

Bcl2/IgH L follicolare 1/ 1 000 000Bcl2/IgH L. follicolare 1/ 1.000.000

18q21 14q32

JHBcl-2

q q

“nested PCR”ProfAM Vannucchi-AA2009-10

102103104105

10

N copieN. copie


RISPOSTA ALLA TERAPIARISPOSTA ALLA TERAPIA

MONITORAGGIO della CONTAMINAZIONE bclMONITORAGGIO della CONTAMINAZIONE bcl--2/IgH2/IgHnelle PREPARAZIONI di CELLULE STAMINALInelle PREPARAZIONI di CELLULE STAMINALI

•Il purging con 3-4 anti-B MoAbp g gseguito dalla separazione immuno-magnetica è più efficace della lisida complemento.

•Frazioni altamente purificate diCD34+ (e CD34+/CD19+) sono

2- BM diagnosi

CD34+ (e CD34+/CD19+) sonouniformemente bcl-2/IgH-

g3,6- BM pre-espianto4,7- CD34-

+5,8- CD34+Negrin RS, JCO 1994;1021-Voso MT, Blood 1997;3763-

Freedman AS, Blood 1999;3325 ProfAM Vannucchi-AA2009-10

BCL-6 E LNH B A GRANDI CELLULE DIFFUSO

• Alterazioni coinvolgenti il gene BCL-6 (3q27) si riscontrano nel 100% dei LNH a grandi cellule diffusi (≈35% per traslocazioni condei LNH a grandi cellule diffusi (≈35% per traslocazioni con cromosomi 14,2,22, più traslocazioni varianti)

• Bcl-6 è una proteina che funge da repressore della trascrizione genica. E’ l tti t l t i ti t è t iE’ espresso selettivamente nel centro germinativo, mentre è assente nei linfociti B “vergini” (pre-GC) e nelle cellule B memoria e plasmacellule (post-GC).

PROMOTER PARTNER(35% casi)

5’ 3’1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

MUTAZIONI(65% i)(65% casi)


BCL-1 E LNH MANTELLARE

• 65% casi di LNH-mantellare è positivo con l’esame citogenetico[ (11 14)] 100% è i i l’ l l [BCL 1][t(11;14)], 100% è positivo con l’esame molecolare [BCL-1]

• Giustapposizione della regione joining del gene IgH sulcromosoma 14 con una regione 11q13 corrispondente al genecromosoma 14 con una regione 11q13 corrispondente al geneBCL-1

• ≈ 60% casi riarrangiamento sono localizzati in una corta regione• ≈ 60% casi riarrangiamento sono localizzati in una corta regione(Major Translocation Cluster, MTC) , 10-20% più distali

• Ciclina D1 non è normalmente espressa nei linfociti o nelle celluleCiclina D1 non è normalmente espressa nei linfociti o nelle cellulemieloidi, mentre risulta costantemente espressa nei LNHmantellari, in rari casi di mieloma multiplo (<5%), e in rari casi diLLC con decorso aggressivo

• La ciclina D1 interviene nella regolazione del ciclo cellulare, nelpassaggio dalla fase G1 alla fase S


“The t(14;18) defines a unique subset of diffuse large B“The t(14;18) defines a unique subset of diffuse large B--cell cell lymphoma with a germinal center Blymphoma with a germinal center B cell gene expression profile”cell gene expression profile”lymphoma with a germinal center Blymphoma with a germinal center B--cell gene expression profilecell gene expression profile

Germinal center B-cell like

L.GCBD

PB activated B cell likeB-cell like

Huang JZ, Blood 2002; 99:2285 – Alizadeh AA, Nature 2000; 403: 503ProfAM Vannucchi-AA2009-10

Immunotherapy of Non Hodgkin’s lymphomas

•Monoclonal antibodies as single agents

•Monoclonal antibodies combined with chemotherapy

•Radioimmunotherapy

A ti i th•Active immunotherapy


Rit i b h i d ti CD20 hi i M AbRituximab: a humanized anti CD20 chimeric MoAb


Therapeutic vaccination for lymphoid malignanciesp y p gusing an idiotype-KLH strategies

Levy et al., ASH 2001 ProfAM Vannucchi-AA2009-10

Vaccinazione terapeutica per neoplasie linfoididi i idi i KLHmediante strategie con idiotipo-KLH

80

100

tà (%

)

60

80

Pro

babi

li

Responders (n=14)

Non - Responders (n=18)p < 0.000140

20

0

Tempo (anni)

0 2 4 6 8 100

p ( )

Levy et al., ASH 2001ProfAM Vannucchi-AA2009-10

le linfoadenopatie i linfomi - unità funzionale di … · linfomi non hodgkin linfoma di hodgkin...

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