LA DIAGNOSI DEI LINFOMI MALIGNI

ATTRAVERSO TECNICHE DI

IMMUNOISTOCHIMICA

Dott. Lorenzo Memeo

Anatomia Patologica

Istituto Oncologico del Mediterraneo

Catania

Struttura normale del linfonodo

• I linfonodi normali sono caratterizzati da una zona

corticale, paracorticale e midollare

• L’area corticale contiene follicoli primari e secondari (o

reattivi)

• I follicoli primari appaiono come noduli piccoli, rotondi,• I follicoli primari appaiono come noduli piccoli, rotondi,

con piccolo linfociti

• I follicoli secondari presentano centri germinativi,

circondati dalle cellule mantellari di piccola taglia (zona

mantellare). Fuori dalla zona mantellare si trova la zona

marginale.

• L’area midollare è popolata da plasmacellule

Struttura normale del linfonodo

Classificazione e diagnosi dei linfomi

• Le cellule linfoidi in vari stadi di maturazione dimostrano

differenti profili immunoistochimici e questo si riflette sui

differenti profili della controparte neoplastica.

• La maggior parte dei linfomi vengono diagnosticati sulla

base dei criteri morfologici ed immunoistochimici.base dei criteri morfologici ed immunoistochimici.

• Nel 2008 la classificazione WHO ha classificato i linfomi

maturi in 26 tipi di linfomi a fenotipo B, 17 tipi di linfomi a

fenotipo T e due tipi di linfoma di Hodgkin

Marcatori immunoistochimici

• Diagnosi accurata

• Valutazione della prognosi

• Scelta terapeutica più adeguata

Uso di terapie con target specifici (CD20-Rituximab)• Uso di terapie con target specifici (CD20-Rituximab)

• Follow up con identificazione delle recidive

IHC in diagnosi e trattamento dei

linfomi B: CD20• Marcatore diagnostico: marcatore di elezione perindividuare i linfociti B maturi e le neoplasie B da essiderivate. La sua espressione è modesta o nulla nei linfomilinfoblastici e nei mielomi

• Target molecolare nella terapia: La maggior parte deipazienti affetti da linfomi di tipo B ricevono un trattamentopazienti affetti da linfomi di tipo B ricevono un trattamentocon Rituximab, anticorpo monoclonale anti-CD20. Questopuò provocare cambiamenti di espressione di CD20 checonsistono sia nella perdita e nella riacquisizione dellaespressione.

• Marcatore di follow up: Il patologo deve conoscere il tipodi trattamento ricevuto dal paziente dal momento che lamaggior parte delle diagnosi delle recidive si basa sullavalutazione del CD20.

Linfomi a piccole cellule

Linfoma follicolare

• Neoplasia derivante dalle cellule dei centri germinativi. Le

cellule neoplastiche originano dai centrociti a nuclei

irregolari ed i centroblasti con nucleoli e variabili quantità

di citoplasma

• Mancano di polarità e di macrofagi dai corpi tingibili che• Mancano di polarità e di macrofagi dai corpi tingibili che

sono presenti nei follicoli reattivi.

• Esprime marcatori del centro germinativo CD10 e BCL6

ma il marcatore diagnostico è BCL2 che in condizioni

normali è negativo nei centri germinativi.

• Conferma molecolare BCL2

Bcl-2

• E’ una proteina mitocondriale, ma si trova anche a livellodella membrana nucleare e citoplasmatica

• Induce un blocco della morte cellulare programmataattraverso:

• Inibizione delle caspasi• Inibizione delle caspasi

• Blocco dell’ azione pro-apoptotica svolta dalle molecoleBAX e BAD

• Interazione con la proteina BH3

• La sua aumentata espressione nel linfoma follicolare è ilrisultato delle traslocazione BCL2-JH [t(14;18)] e delconseguente riarrangiamento del gene BCL2

• Alcuni linfomi follicolari mostrano aspetti morfologici oimmunofenotipici atipici (negatività per CD10 e BCL2)

• Sono stati identificati attraverso studi di gene expression profilig 2marcatori immunoistochimici di cellule GC-B : HGAL/GCET2HGAL(Human germinal center–associated lymphoma/germinal center B-cellexpressed transcript 2) e LMO2 (LIM-only transcription factor 2

HGAL e LM02 hanno mostrato una percentuale di positività del 97% e

Linfoma follicolare

• HGAL e LM02 hanno mostrato una percentuale di positività del 97% e93%, rispettivamente, rispetto al CD10 (71%) and BCL6 (72%).

• STATMINA (STMN1) è una proteina regolatrice dei microtubuli ed èfortemente espressa dalle cellule GC-B a livello citoplasmatico.Mostra espressione nel 97% dei linfomi follicolari inclusi BCL2/CD10-,e nei follicolari di alto grado.

• La sua espressione è riportata nei linfomi mantellari, nel primitivo delmediastino ed alcuni diffusi a grandi cellule B (DLBCL)

• Non è riportata nei linfomi marginali.

Linfoma follicolare

BCL-2

SLL/LLC

• Linfoma non Hodgkin a fenotipo B

• Cellule monomorfe, di piccola taglia e piccoli nucleoli.

• Marcatori immunoistochimici: CD5+ e CD23+ CD19+

CD20+ CD79a+

• Espressione di CD200• Espressione di CD200

Linfoma a piccoli linfociti/Leucemia

linfatica cronica

CD200

• CD200 è diffusamente espresso a livello di membrana nel

linfoma linfocitico e nella leucemia a cellule capellute.

• Non è espresso nel linfoma mantellare, marginale, e follicolare

• Tra i linfomi a grandi cellule è espresso da alcuni linfomi

mediastinici, Hodgkin classico e mieloma multiplo.mediastinici, Hodgkin classico e mieloma multiplo.

• Il CD200 è considerato di notevole ausilio diagnostico nei casi

di SLL/CLL e dovrebbe essere incluso nei pannelli

immunoistochimici di routine per escludere il linfoma

mantellare.

• Sono in corso trials clinici per il trattamento di CLL e mieloma

multiplo con un anticorpo umanizzato anti-CD200 e lo spettro

terapeutico potrebbe presto estendersi a altre neoplasia B.

Linfoma mantellare

• Cellule di media-piccola taglia• Pattern di crescita nodulare o diffuso• Marcatori immunoistochimici: CD20+, CD5+, CD43+, CICLINA D1+.

• SOX 11+

Ciclina D1

• Proteina coinvolta nella regolazione

del ciclo cellulare.

• Responsabile della sua

iperespressione è la traslocazione

11-14 (segmento J delle catene

pesanti delle immunoglobuline

(14q32) - bcl-1 (11q13).

• La traslocazione determina

un’aumentata espressione del gene

che codifica per la ciclina D1, situato

120kb a valle di Bcl-1.

SOX11

• Recentemente è stato identificato un nuovo marcatore

nucleare di MCL: SOX 11, membro della famiglia dei SOX

che codifica per un fattore di trascrizione.

• L’espressione è indipendente dall’espressione di ciclina

D1 o dal suo stato mutazionale. D1 o dal suo stato mutazionale.

• Data la sua espressione nei linfomi mantellari a decorso

aggressivo è in corso l’analisi del suo significato

prognostico.

Linfoma marginale

• Il linfoma marginale è una neoplasia delle cellule B dellazona marginale.

• Le cellule neoplastiche mostrano espressione di marcatoriB senza espressione di CD5, CD10, CD23.

• IRTA-1 è espresso in percentuale variabile dallamembrana delle cellule neoplastiche di marginaliIRTA-1 è espresso in percentuale variabile dallamembrana delle cellule neoplastiche di marginaliextranodali (93%), nodali (73%).

• Non distingue però condizioni neoplastiche da quellereattive

• MNDA (Myeloid cell nuclear differentiation antigen) èespresso in MZL nodale, extranodale e splenico. Negativonei follicolari, può essere di ausilio diagnostico per unadiagnosi differenziale (follicolare vs marginale).

Nuovi marcatori immunoistochimici

Linfomi a grandi cellule

Linfoma di Burkitt

• Linfoma di Burkitt è una neoplasia aggressiva a fenotipo

B caratterizzata da una traslocazione cromosomica che

attiva un oncogene (c-myc).

• Pattern di crescita diffuso

• Cellule monomorfe, di media taglia con alto indice • Cellule monomorfe, di media taglia con alto indice

mitotico

• Immunofenotipo: CD20+, CD10+, BCL6+, BCL2-

Linfoma di Burkitt

C-MYC

• Analisi immunoistochimica di c-MYC permette di rilevare

aumentata espressione della proteina sia causata da

traslocazione che da overespressione.

• Potrebbe essere utilizzata per discriminare i casi da testare

con analisi FISH, anche se una reazionecon analisi FISH, anche se una reazione

immunoistochimica negativa non esclude anomalie

genetiche.

• Proteina nucleare ad espressione ubiquitaria

• Fattore trascrizionale

• La sua espressione aumenta quando la cellula passa da

uno stato di quiescenza ad uno stato di attiva proliferazione

C-MYC

Linfoma anaplastico

• Linfoma non Hodgkin a fenotipo T

• Cellule di grossa taglia con nuclei irregolari

• Pattern di crescita diffuso

• Marcatori immunoistochimici: CD30+, CD4+, CD5+

ALK1+ALK1+

Linfoma anaplastico

Linfoma anaplastico

ALK

BRAF in HCL

BRAF in HCL

Linfoma di Hodgkin

CELLULE DI

REED STEMBERG

CD30+ CD15+

• Insulin-like growth factor II mRNA-binding protein 3

(LMP3) è una proteina coinvolta nello sviluppo fetale e

downregolata nei tessuti adulti.

• E’ espressa nel 98,8% dei linfomi di Hodgkin,

rappresentando per questo un valido marcatore in casi in

LMP3

rappresentando per questo un valido marcatore in casi in

cui i marcatori tradizionali (CD30, CD15, PAX 5) risultino

deboli o assenti.