INFORME DE LABORATORIO

PRACTICA N° 10: EXTRACCION Y SEPARACION DE PRINCIPIOS ACTIVOS

EN PLANTAS MEDICINALES APROBADAS EN COLOMBIA MEDIANTE

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA - SAUCO

DAVID STIVEN ESCUDERO AGUDELO

ESTEBAN GONZÁLEZ ACEVEDO

LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA

GLORIA AMPARO VALENCIA P.

V SEMESTRE

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

FACULTAD DE QUIMICA FARMACEUTICA

TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA

OCTIBRE 2012.

OBJETIVO:

Identificar mediante la técnica de cromatografía en capa fina la presencia

de metabolitos secundarios en la parte aprobada de las plantas medicinales

comercializadas en Colombia, teniendo como referencia el metabolito

secundario la rutina.

PRACTICA N° 10: EXTRACCION Y SEPARACION DE PRINCIPIOS ACTIVOS

EN PLANTAS MEDICINALES APROBADAS EN COLOMBIA MEDIANTE

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA – SAUCO

Para el desarrollo de esta práctica se empleo extracto de las flores de sauco para

identificar mediante cromatografía en capa fina la presencia de metabolitos

secundarios, teniendo como referente el metabolito rutina y otros que están

presentes en las flores de la planta.

Los materiales empleados para el desarrollo de la práctica fueron:

Extracto: Flores de Sauco ( Sambucus nigra)

Fase estacionaria: Placa de Silica gel GF-254

Fase móvil: acetato de etilo (100): ácido fórmico (11) : ácido acético (11) :

agua (26)

Revelador Químico: Revelador de productos Naturales: ácido deifenilborico

(solución 1) y polietilenglicol (solución 2).

Revelador físico: Luz UV 365 nm

Luego se procede a realizar el montaje de la prueba, primero se realiza las

medidas de la fase dividiéndola en varios sectores, marcando la línea y los puntos

de siembre del extracto; cuando se tiene todo medido se realiza la siembra de la

muestra y del patrón, en este caso Rutina, de manera simultanea se tiene la fase

móvil en estado de saturación del recipiente donde esta; luego se introduce la fase

estacionaria con la siembra, cuidando siempre que la fase móvil no sobrepase el

punto de siembra. Se tapa y empieza a observar como se hace el desplazamiento

hasta llegar al punto final.

En la siguiente imagen se muestra el proceso de montaje de la prueba

Imagen 1: Montaje Prueba de cromatografía en capa fina.

Fuente: Manual de prácticas de Laboratorio de Farmacognosia. 2009. Luz Mariela Sorza S – Gloria A. Valencia P.

Después de uno minutos de retira la fase estacionaria de la móvil, se deja secar;

luego se observa bajo luz a 254 nm para identificar la rutina. Se marcan los

puntos de referencia donde aparece el patrón de la rutina junto con el del extracto

de las flores de sauco. En la siguiente imagen se muestra los puntos donde

aparece la rutina.

Punto de Siembra

Rutina

3.1 cm

Punto de llegada

1.2 cm

Patrón Ref.

Imagen 2: Rf rutina en extracto de flores de sauco – Patrón de referencia.Fuente: Creación propia

La mancha que corresponde a la rutina se observa (bajo la luz a 254 nm) de color

amarillo – naranja, esta a una distancia de 1.2 cm del punto de siembra; por lo

tanto su Rf para esta muestra es de 0.38, este se cálculo de la siguiente manera:

Rf = DistanciaRecorrida por elmetabolito

Distancia totalrecorrida = 1.23.1 = 0.38

Este calculo aplica también para determinar el Rf de los otros metabolitos.

En la teoría la rutina se debe de notar a un Rf de 0.4; en la práctica apareció un

poco antes, cerca de 0,02 puntos, pero puede deberse a las características

químicas de la fase móvil que pueden haber estado levemente alteradas las

concentraciones.

Dentro de la practica también se identificaron otros metabolitos secundarios

presentes en el extracto de las flores de sauco; para identificarlos el proceso fue el

mismo, solo que se emplearon dos reveladores químicos como el ácido

deifenilborico (solución 1) y polietilenglicol (solución 2) y bajo la presencia de Luz

UV 365 nm para poder identificar con mayor facilidad estos compuestos. Entre

ellos esta: Isoquercitrina, que después de aplicar el revelador quimico y observar

bajo la luz UV presenta un color amarillo, lo que le permite diferenciar de la ruina

que es entre amarillo y naranja; se logra apreciar a 2.3 cm de la siembra y esta por

encima de la rutina. Su Rf en esta práctica fue de 0.73, coincidiendo con el dato

consignado en el manual.

En la siguiente imagen se ilustra la posición en donde aparece la isoquercitrina

Punto de Siembra

3.1 cm

Punto de llegada

2.3 cm

Isoquercitrina

Imagen 3: Rf Isoquercitrina en extracto de flores de sauco

Fuente: creación Propia.

El otro metabolito que se identifico en la practica fue el ácido Caféico, que bajo la

luz UV 365 nm, se observa de un color azul fluorescente y esta mucho mas arriba

que la isoquercitina; su Rf corresponde a 0.9; en la practica de laboratorio se

obtuvo un Rf de 0.90, calculado de la misma forma que se calculo el de la rutina.

En la siguiente imagen se muestra la distancia en la que se halla el acido Caféico.

Punto de Siembra

3.1 cm

Punto de llegada

2.8 cm

Ácido Cafeico

Imagen 4: Rf ácido Caféico en extracto de flores de sauco

Fuente: Creación propia.

Imagen 5: Metabolitos secundarios presentes e identificados en el extracto de

las flores de sauco.

Fuente: Creación propia.

Punto de Siembra

Acido Caféico

Isoquercitrina

Rutina

3.1 cm

Punto de llegada

RESULTADOS OBTENIDOS

En la siguiente tabla se consignan los valores obtenidos durante la práctica de

laboratorio.

Identificación de Metabolitos Secundarios en extracto de flores de sauco

Rf Metabolito Color0.38

RutinaAmarillo – Naranja; se observa una franja grande, tanto en

el patrón como en la muestra

0.7 IsoquercitinaAmarillo, se observa una pequeña línea, esta mas arriba

que la línea de la rutina

0.9 Ácido CaféicoAzul Fluorescente; es una línea muy delgada que se

aprecia al final de la fase estacionaria.

ANALISIS DE RESULTADOS.

Después de realizar la prueba se pudo determinar la presencia de metabolitos

secundarios en el extracto de las flores de sauco como Rutina, Isoquercitina y

ácido Caféico; aunque se tiene una leve variación en el Rf de la Rutina, cerca de

0.02, puede deberse a las características químicas de la fase móvil, que por ser

volátiles se pueden haber perdido pequeñas cantidades durante el proceso de

inmersión y esto influyo en los resultados, pero también cabe anotar que la rutina

no estaba completamente sola o pura en la planta se encontraba en compañía de

otras sustancias químicas.

Los demás Rf de Isoquercitrina y el ácido Caféico si coincidieron con los valores

registrados en el manual, por lo que se puede descartar una alteración en la fase

móvil e inclinarse más por la combinación de sustancias químicas en el extracto

que se estaba estudiando.

CONCLUSIONES

Con el desarrollo de la practica se pudo determinar con que “pureza” se esta

adquiriendo los productos fitoterapéuticos en nuestro país, al realizar pruebas

sencillas como las de cromatografía en capa fina que permiten identificar que el

producto que nos venden si sea el que estamos comprando, y no estemos

poniendo en riesgo nuestra salud.

Las posibles variaciones en los resultados comparadas con las planteadas en los

manuales y demás documentos se puede deber a varias factores como por

ejemplo la presencia de mas sustancias químicas que acompañan el extracto,

alguna modificación genética o factores ambientales que influyeran en la planta

alterando las concentraciones de metabolitos secundarios al momento de su

recolección.

BIBLIOGRAFIA:

SORZA S. Luz Mariela. VALENCIA P. Gloria A. MORA A. Cristina L. Manual de

prácticas de laboratorio de Farmacognosia. Universidad de Antioquia. 2009. Pág.

30 - 32.