iGEM Chiba 2009

E. Coli Time Manager Since 2008

・別々の入力であるため、　同一系内での時間の流れを表現することができない。・１通りの時間差しか生み出せていない。

‘ ０９ CHIBA は流れと精確性のある時間差スイッチをつくる！

’08Chiba

・周期を系全体であわせるため、シンクロシステムを考える必要がある。・ Paris/NYMU/Melbourne 　どのiGEM チームもデバイスができていない。

他チーム周期時計

シンクロシステムが必要ない’ 08Chibaタイマーの計れる時間の種類・正確性を増すことができれば、周期時計を使わなくとも時間の流れを表現できる！

時限装置の集合で流れを作る

直列型並列型

並列・直列の精確性面の特徴

・順番を追い越さない

・１部分に入力が入ることで全てのスイッチが連動する。

・全てのスイッチを初めに起動させる必要がないので、出力の時間間隔が、最初の入力によって左右されることがない。

・順番を追い越す。・入力が全てのスイッチに入らなければ、全てのスイッチが動くということはない。

・初めの入力で全てのスイッチを起動することができれば、出力の時間間隔は一定の時間を保つ事ができる。・逆に初めの入力で全てのスイッチを起動できなかった場合、出力の時間感覚は一定の値を保つことができない。

直列型並列型

並列型： LuxR Mutant

pTet-LuxRpLux-GFP

pTet-LuxRpLux-GFP

pLac-LuxI

◎→ Σ① ！◎→ Σ② ！

◎→

Σ① ！

Σ② ！

並列型： Mutant parts 作成

Wild type よりも 30 分以上蛍光強度上昇の様子が早まった or 遅れたモノだけ PCR で biobrick 仕様の制限酵素サイトをつけ、 p15A のプラスミドにのせる。

P15A

LuxR mutant

↑

◎→ Σ① ！◎→ Σ② ！

直列型： Lux-Las カスケード

Σ① ！→

◎→ Σ② ！

pTet-LuxRpLux-LasI-RFP

pLac-LuxI pTet-LasRpLas-GFP

◎→Σ① ！→ Σ② ！

↑直列型： Las 　 Check

K091118 : 注文中です

　　 　 　　　　　　　　　　　　 LasR 　　 plas 　 　　　　GFP

K091118 : 千葉にあります

Plac 　 　　　　 LasI

◎→Σ① ！→ Σ ② ！

昨年度動作を確認していない Lasの Checkをします。

直列型： パーツ作成実験 ◎ : LuxI(Sender)

① : LuxR(Receiver ) + Reporter + LasI(Sender)

②: LasR(Receiver) + Reporter

plac LuxI

ptet 　 　　　　　　 LuxR plux 　　　 GFP LasI

ptet 　 　　　　　　 LasR 　　　 plas 　 　　　　GFP LasI

BBa_K084012を使用。

作成が必要。

作成が必要。

◎→Σ① ！→ Σ② ！

↑直列型：パーツ① LuxR-pLux-RFP-LasI

初号機 : LuxR(Receiver ) + Reporter + LasI(Sender)

ptet 　 　　　　　　 LuxR plux 　　　 RFP LasI

I731012 : 注文中です

ptet 　 　　　　　　 LuxR 　 　　 plux 　　 RFP

C0178

　 LasI

1, T9002 から PCR でターミネーターを取り除く。（ Reverse プライマーデザイン必要）2, C00178 を作成して完成

◎→Σ① ！→ Σ② ！

↑直列型：パーツ②LasR-pLas-GFP

弐号機 : LasR(Receiver) + Reporter

ptet 　 　　　　　　 LasR 　　　 plas 　 　　　GFP

K091118 : 注文中です

　　 　 　　　　　　　　 LasR 　　　 plas 　 　　　　 GFP

1, R0040 をつなげる。

R0040

pTet

◎→Σ① ！→ Σ② ！

ほしいデータデモンストレーション

• 野澤＆山本がホワイトボードで説明します。

優先順位

1, LuxR Mutant 選別 / データーとり1, LasI-LasR 稼働実験

3, Mutant の Biobrick 化 / データとり4, デモンストレーション用データとり4, 直列型作成

各種〆切日09/18 ・ Jamboree attendance fee due ・ Request for variance due 　　　　　　　　　　　　　・ Track selection due　　　　　　　　　　　　　・ Project abstracts due　　　　　　　　　　　　　・ Team rosters due10/21 ・ Project and part documentation due　　　　　　　　　　　　　・ BioBrick Part DNA needs to be

received 　　　　　　　　　　　　　・ Judging form due　　　　　　　　　　　　　・ Wiki FREEZE

具体的なスケジュール

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